全 文 ：RP-HPLC法测定余甘子中诃黎勒酸 、没食子酸 、
粘酸 -2-O-没食子酸酯的含量＊
沙磊 ,张兰珍＊＊,徐义侠 ,郭亚健
(北京中医药大学 中药学院 ,北京 100102)
摘要　目的:建立 RP-HPLC法同时测定余甘子(PhylanthusemblicaL.干燥成熟果实)中诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-
没食子酸酯含量。方法:采用 DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm, 5 μm),以甲醇 -0.2%醋酸水溶液(19∶81, v/v)为流动相;检
测波长为 275 nm;流速为 1 mL· min-1;柱温为 30 ℃。结果:诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没食子酸酯线性范围分别为
0.235 ～ 1.176 μg、0.185 ～ 0.924 μg、0.418～ 2.09 μg;平均回收率(n=6)分别为 101.5%, 99.20%, 101.5%。结论:建立的方
法简便 , 重现性好 ,可用于余甘子中诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没食子酸酯的含量测定。
关键词:余甘子;诃黎勒酸;没食子酸;粘酸 -2-O-没食子酸酯;高效液相色谱
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2011)02-0293-03
RP-HPLCdeterminationofchebuligicacid, galicacid,
mucicacid2-O-galateinFructusPhylanthi＊
SHALei, ZHANGLan-zhen＊＊ , XUYi-xia, GUOYa-jian
(SchoolofChinesePharmacology, BeijingUniversityofChineseMedicine, Beijing100102, China)
Abstract　Objective:ToestablishanRP-HPLCmethodfortheassayingofthecontentofchebuligicacid, galic
acid, mucicacid2-O-galateinFructusPhylanthi.Method:TheanalyteswereseparatedonaDiamonsilC18 col-
umn(250mm×4.6mm, 5μm)andcolumntemperaturewas30℃.Themobilephasewasthesystemofmethanol-
0.2% aqueousaceticacid(19∶81, v/v)withflowrateof1mL·min-1 , theUVdetectionwassetat275nm.Results:
Theanalyteswerewelseparatedwiththelinearrangeof0.235-1.176μgforchebuligicacid, 0.185-0.924μgfor
galicacid, and0.418-2.09 μgformucicacid2-O-galate.Theaveragerecoveries(n=6)ofchebuligicacid,
galicacidandmucicacid2-O-galatewere101.5%(RSD=2.4%), 99.20% (RSD=2.6%), 101.52% (RSD
=2.0%), respectively.Conclusion:Themethodestablishedissimpleandreproducible, andcanbeusedfordetermi-
nationofchebuligicacid, galicacid, andmucicacid2-O-galateinFructusPhylanthi.
Keywords:FructusPhylanthi;chebuligicacid;galicacid;mucicacid2-O-galate;HPLC
　　余甘子为大戟科植物余甘子 Phylanthusembli-
caL.的干燥成熟果实 ,系藏族习用药。能清热凉
血 ,消食健胃 ,生津止咳。用于血热血瘀 ,消化不良 ,
腹胀 ,咳嗽 ,喉痛 ,口干等 [ 1] 。余甘子主要含鞣质 、
酚酸 、粘酸 、黄酮 、多糖等化学成分 [ 2 ～ 4] 。质量控制
方法目前主要有 HPLC法测定余甘子中没食子酸含
量和槲皮素含量 ,分光光度法测定总黄酮和多糖含
量 [ 5 ～ 8] 。本项研究建立了反相高效液相色谱(RP-
HPLC)法同时测定余甘子中 3个主要成分诃黎勒
酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没食子酸酯的含量 ,为
余甘子的质量控制提供科学依据 。
1　仪器与试药
余甘子药材购自北京藏医院(产地尼泊尔)、河
北安国药材市场(产地云南)和安徽亳州药材市场
(产地印度 、福建 、广西 、广东 、四川),经北京中医药大
学生药系阎玉凝教授鉴定为大戟科植物 Phylanthus
emblicaL.的干燥果实;诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2
-O-没食子酸酯对照品自制 ,纯度均大于 98.5%。
—293—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(2)
＊
＊＊
国家自然科学基金资助(39970939);北京中医药大学自主选题资助
通讯作者　Tel:(010)84738629;E-mail:zhanglanzhen01@sina.com
Waters1525型 HPLC仪;Waters2996型 PAD
检测器;Empower软件;25 μL可调进样器;KQ-
500DE超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司 ,功
率 300W,频率 100MHz);SartoriousBT25S十万分
之一电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。
色谱纯甲醇 (FisherScientific);蒸馏水 (屈臣
氏);其他试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备
分别精密称取诃黎勒酸 2.94 mg、没食子酸对
照品 2.31 mg,置 25mL量瓶中 ,加 50%甲醇溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,作为诃黎勒酸 、没食子酸对照品
溶液。
精密称取粘酸 -2 -O-没食子酸酯对照品
2.09mg,置 10 mL量瓶中 ,加 50%甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,作为粘酸 -2 -O-没食子酸酯对照
品溶液 。
2.2　供试品溶液的制备　取余甘子药材粉末(过
60目筛)约 200 mg,精密称定 ,精密加入 50%甲醇
50 mL,称重 ,超声(功率 300 W,频率 100 MHz)30
min,放冷 , 60min,补足原重量 ,滤过 ,取续滤液 2 mL
置 10mL量瓶中 ,加 50%甲醇至刻度 ,摇匀 ,备用 ,
进样前经 0.45 μm微孔滤膜滤过 。
2.3　色谱条件　色谱柱:DiamonsilC18(250 mm×
4.6mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.2%醋酸水溶液
(19∶81, v/v);流速:1 mL· min-1;检测波长:275
nm;柱温:30℃。色谱图见图 1。
2.4　线性关系考察　分别精密吸取诃黎勒酸对照
品溶液(浓度为 0.1176 mg· mL-1)、没食子酸对照
品溶液(浓度为 0.0924mg·mL-1)、粘酸 -2-O-
没食子酸酯对照品溶液(浓度为 0.209 mg· mL-1)
2, 4, 6, 8, 10 μL注入 HPLC仪 ,按上述色谱条件测
定色谱峰面积。以对照品进样量 X(μg)为横坐标 ,
相应色谱峰峰面积 Y为纵坐标进行线性回归处理 ,
得诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2 -O-没食子酸酯
的回归方程分别为:
Y=1.482×106X-6.018×103　r=0.9998
Y=2.412×106X-2.961 ×104　r=0.9996
Y=7.555×105X-2.516 ×104　r=0.9996
表明诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2 -O-没食子酸
酯分别在进样量 0.235 ～ 1.176 μg、0.185 ～ 0.924
μg、0.418 ～ 2.09μg范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　精密吸取 “2.2”项下供试品溶
液 20μL,连续进样 5次 ,分别测定诃黎勒酸 、没食
图 1　样品(A)与对照品(B, C, D)色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofsample(A)andreferencesubstance
(B, C, D)
1.诃黎勒酸(chebuligicacid)　 2.没食子酸(galicacid)　3.粘酸 -2
-O-没食子酸酯(mucicacid2-O-galate)
子酸 、粘酸 -2 -O-没食子酸酯色谱峰峰面积 ,计
算 RSD分别为 2.0%, 1.2%, 0.85%,表明仪器精密
度良好。
2.6　稳定性试验　精密吸取 “ 2.2”项下供试品溶
液 20 μL,分别于制备后 0 , 2, 4, 6, 8, 10 , 12 h进样 ,
测定诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没食子酸
酯的峰面积 ,计算 RSD分别为 2.3%, 2.7%, 2.3%,
表明供试品溶液在 12 h内稳定性良好。
2.7　重复性试验　取同一批余甘子药材粉末 6份 ,
按照 “2.2”项下方法制备供试品溶液 ,测定诃黎勒
酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没食子酸酯的含量 ,计
算 RSD分别为 1.4%, 1.6%, 1.9%,表明该方法重
复性良好 。
—294— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(2)
2.8　回收率试验
分别精密称取诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-
O-没食子酸酯对照 30.49, 33.53, 91.02 mg,置 10
mL量瓶中 ,加 50%甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,
作为混合对照品溶液 。
精密称取已知 3个成分含量 (诃黎勒酸
2.75%,没食子酸 3.33%,粘酸 -2-O-没食子酸
酯 9.16%)的余甘子药材粉末约 100 mg,共 6份 ,分
别精密加入上述诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O
-没食子酸酯对照品混合溶液各 1.0 mL, 50%甲醇
49 mL,按 “2.2”项下方法制备供试溶液并测定 ,计
算诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没食子酸酯
平均回收率 (n=6)分别为 101.5%, 99.20%,
101.5%;RSD分别为 2.4%, 2.6%, 2.0%。
2.9　样品的测定　精密称取尼泊尔 、云南 、印度 、福
建 、广西 、广东 、四川产余甘子药材粉末 200mg,各 3
份 ,按照 “ 2.2”项下方法制备供试品溶液 ,精密吸取
20 μL注入 HPLC仪 ,测定各色谱峰面积 ,计算不同
产地余甘子诃黎勒酸 、没食子酸 、粘酸 -2-O-没
食子酸酯含量 ,结果见表 1。
表 1　样品含量测定结果 (n=3)
Tab1　Resultsofcontentdeterminationofsamples
样品产地
(habitatofsample)
诃黎勒酸(chebuligicacid) 没食子酸(galicacid) 粘酸-2-O-没食子酸酯(mucicacid2-O-galate)
含量(content)/% RSD/% 含量(content)/% RSD/% 含量(content)/% RSD/%
尼泊尔(Nepal) 2.74 0.81 3.33 1.1 9.18 0.41
云南(Yunnan) 3.78 1.4 1.70 1.2 9.56 1.1
印度 (India) 4.25 1.6 0.81 2.0 8.86 1.6
福建 (Fujian) 2.73 0.89 1.01 1.1 6.54 0.69
广西 (Guangxi) 1.97 0.87 0.81 0.98 7.86 0.77
广东(Guangdong) 5.78 0.95 1.07 0.55 8.94 0.98
四川 (Sichuan) 2.66 1.9 1.21 1.5 5.93 1.6
3　讨论
3.1　根据 3种成分的溶解性和药材质地 ,考察了 3
种提取方法 ,冷浸 12 h后超声 30 min(300 W, 100
kHz),超声 60 min, 50℃温浸 12 h。含量测定结果
表明诃黎勒酸和没食子酸用 3种方法提取没有明显
差异 ,粘酸 -2-O-没食子酸酯 ,超声 60 min和 50
℃温浸 12h提取率较高 ,因此选用超声提取法 。比
较了超声提取 40 min、60min和 80min的含量测定
结果 ,选取 60 min为超声提取时间 。考察 30%甲
醇 , 50%甲醇 , 70%甲醇 3种浓度提取结果 , 50%甲
醇对 3种成分的提取效率均高于 30%甲醇和 70%
甲醇 ,故选取 50%甲醇为提取溶剂 。
3.2　方法学考察结果表明 ,该方法稳定 、简便 、可
靠 ,可作为余甘子药材中诃黎勒酸等 3个成分的含
量测定方法 。诃黎勒酸为鞣质 ,没食子酸为简单酚
酸类 ,粘酸 -2-O-没食子酸酯为粘酸 ,这 3个成
分在余甘子药材 3个类型成分中含量较高 。在 7个
不同产地余甘子药材中诃黎勒酸含量最高的是广东
产余甘子 ,没食子酸含量最高的是尼泊尔产余甘子 ,
粘酸 -2-O-没食子酸酯含量最高的是云南产余
甘子 , 3个成分总和含量最高的是广东产余甘子。
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(本文于 2010年 6月 15日收到)
—295—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(2)