全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(6)∶709 ～ 712
基金项目:贵州高层次人才科研条件特助经费项目(TZJF － 2011 － 55)
作者简介:彭梅(1985—) ，女，从事天然药物化学的研究工作。Email:pengmei520@ 163． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:little_zhy@ 163． com
铁包金的 HPLC指纹图谱研究
彭 梅，肖 雄，唐健波，杨 娟，朱海燕*
(贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 建立不同产地铁包金药材的 HPLC指纹图谱。方法 色谱柱为 Boston C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相为
甲醇 －乙腈 － 0． 1%磷酸溶液，梯度洗脱，流速 1． 0 mL·min －1，检测波长 260 nm，柱温 37 ℃。结果 建立了铁包金药材的指纹
图谱，确定了 12 个共有特征峰，标定了其中的 2 个峰，并对不同产地铁包金的指纹图谱进行了相似度比较。结论 所用方法
可用于铁包金药材的质量评价。
关键词:铁包金;高效液相色谱法;指纹图谱;共有峰;相似度;聚类分析;芦丁;槲皮素
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)06 － 0709 － 04
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 06． 027
Study on the HPLC fingerprint of Berchemiae lineata Ｒadix
PENG Mei，XIAO Xiong，TANG Jian － bo，YANG Juan，ZHU Hai － yan*
(The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences，Guiyang，Guizhou，550002
P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC fingerprint analysis method for Berchemiae lineatae Ｒadix from the different habitats．
METHODS The HPLC analysis was carried out on a Boston C18(250 mm × 4． 6mm，5 μm)chromatographic column with mobile
phase of methanol － acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid in gradient elution． The flow rate was 1． 0 mL·min －1 with the ultraviolet
detection wavelength of 260 nm and the column temperature of 37 ℃ ． ＲESULTS The fingerprints of B． lineatae Ｒadix from the
different habitats were established． Twelve common peaks were demarcated and two peaks were identified． Comparison of similar degree
to the medicinal materials from other areas was carried on． CONCLUSION This method is available for the quality evaluation of B．
lineata Ｒadix．
Key words:Berchemiae lineatae Ｒadix;HPLC;Fingerprint application;Common peak;Similar degree;Clustering analysis;Ｒutin;
Quercetin
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2015)06 － 0709 － 04
铁包金 Berchemiae lineatae Ｒadix为鼠李科勾儿
茶属细叶勾儿茶 Berchemia lineata (L．)的干燥根，
别名老鼠耳、米拉藤、小叶黄鳝藤等，具有祛风利湿、
止咳祛痰、活血止痛等作用，可用于治疗跌打损伤、
痈肿疮毒、肿瘤、毒蛇咬伤等［1 － 3］。铁包金为常用
壮药，同属多种植物均可作为铁包金药材入药。中
药的疗效是多种活性成分共同协同作用的结果，单
一成分难以全面衡量生药及其制剂的质量和效果。
鉴别生药的质量常采用 HPLC法测定药材的指纹图
谱。关于铁包金指纹图谱的研究较少，对多产地多
品种的铁包金指纹图谱的研究尚未见报道。现采用
HPLC法对 11 批来自 3 个省 11 个产地的 6 个品种
铁包金药材进行指纹图谱的比较研究，以评价不同
产地铁包金药材质量的差异，可为完善铁包金的质
量标准提供依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
1200 高效液相色谱仪(美国 Agilent)。芦丁、槲
皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别
为 100080 － 200707、100081 － 200406，纯度分别为
99． 0%、95． 0%) ;11 批铁包金药材分别采自贵州的
贵阳、清镇、黔东南凯里、黔西南州、毕节、广州广东、
广西宜州等地，经贵阳中医学院孙庆文副教授鉴定
(表 1) ;乙腈、甲醇为色谱纯;水为纯净水;其余试剂
为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 采用 Boston C18 色谱柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 －乙腈 －
0． 1%磷酸溶液，梯度洗脱程序见表 2，柱温 37 ℃，
表 1 铁包金药材的采集信息
Table 1 Sample information of B． lineatae Ｒadix
No． 产地 品种 拉丁学名 有效部位 采集时间 方式
S1 贵阳市白云区 牯岭勾儿茶 B． kulingensis Schneid 全株 2013 － 01 采集
S2 贵州毕节市织金县 光枝勾儿茶 B． polyphylla 全株 2012 － 08 采集
S3 广东广州 细叶勾儿茶 B． lineata(L．) 根、茎 2012 － 08 购买
S4 贵州省清镇市 光枝勾儿茶 B． polyphyua Wall． ex Lawson 全株 2012 － 09 采集
S5 贵州省黔南州龙里县 光枝勾儿茶 B． polyphyua Wall． ex Lawson 全株 2012 － 08 采集
S6 贵州省黔南州惠水县 多花勾儿茶 B． floribunda 茎、叶 2012 － 08 采集
S7 广西宜州 多花勾儿茶 B． floribunda 全株 2012 － 10 购买
S8 贵州黔南州荔波县 光枝勾儿茶 B． polyphyua Wall． ex Lawson 茎、叶 2012 － 11 采集
S9 贵州黔南州罗甸县 牯岭勾儿茶 B． kulingensis Schneid 全株 2012 － 11 采集
S10 贵州凯里市雷公山 多叶勾儿茶 B． Polyphyua Wall． ex Laws 茎、叶 2012 － 11 采集
S11 贵州省凯里市 薄叶鼠李 B． sinica Schneid 茎、叶 2012 － 11 采集
表 2 梯度洗脱程序表(%)
Table 2 Table of gradient elution program(%)
t /min 甲醇 乙腈 0． 1%磷酸溶液
0 － 17 10 － 22 0 90 － 78
17 － 35 35 5 60
35 － 45 0 25 75
45 － 65 0 35 65
65 － 75 20 20 60
75 － 80 10 0 90
进样量 20 μL，流速 1 mL·min －1，检测波长 260 nm。
1． 2． 2 溶液的制备 分别精密称取槲皮素、芦丁对
照品 2． 5、2． 0 mg，用甲醇溶解并定容至 10 mL 量瓶
中，得槲皮素、芦丁对照品溶液。将不同产地的铁包
金药材粉碎，称取粉末 10 g，置煮锅中，加入 300 mL
蒸馏水，在电磁炉上先猛火煮沸后再文火煎煮 40
min，趁热过滤。滤渣中再加入等量水煎煮 2 次，合
并滤液，减压蒸干，加入乙腈 － 甲醇 － 水(7∶8∶
15)定容至 25 mL，经 0． 45 μm 微孔滤膜过滤，即得
供试品溶液。
1． 2． 3 精密度、稳定性与重复性试验 取 S1 号
(表 1)供试品溶液，按“1． 2． 1”项下色谱条件连续
进样 6 次，记录色谱图。以 4 号峰为参照峰，计算各
主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积。各共有
峰相对保留时间的 ＲSD均 ＜ 0． 30%，相对峰面积的
ＲSD均 ＜ 2. 06%，说明仪器精密度良好，符合指纹图
谱要求。取 S1 供试品溶液，分别于 0、6、12、18、24、
30 h 时进样，记录色谱图，同法计算各共有峰的相
对保留时间和相对峰面积。计算得各共有峰的相对
保留时间的 ＲSD 均 ＜ 0． 45%，相对峰面积的 ＲSD
均 ＜ 1． 08%，表明供试品溶液在 30 h 内稳定。取 5
份 S1 样品，分别按“1． 2． 2”项下方法制备供试品溶
液，进样测定，记录色谱图。计算得到各共有峰相对
保留时间的 ＲSD 均 ＜ 0． 51%，相对峰面积的 ＲSD
均 ＜ 3. 10%。
1． 2． 4 指纹图谱的建立及共有峰的确定 取 11 批
不同来源的铁包金药材粉末 10 g，按“1． 2． 2”项下
方法制备供试品溶液，分别进样测定，记录色谱图。
将色谱图导入中华人民共和国药典委员会《中药色
谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)》软件中。软
件设置采用的对照图谱生成法是中位数法，时间窗
是 0． 3 min，系统自动匹配，得出相应的对照图谱，标
定了 12 个共有指纹峰(图 1、图 2)。
0 20 40 60 80
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
t/min
图 1 不同产地铁包金药材的指纹图谱
Figure 1 HPLC fingerprint chromatogram of B． lineatae Ｒadix
from the different habitats
0 20 40 60 80
t/min
图 2 铁包金药材的典型图谱及共有峰
Figure 2 Typical fingerprint chromatogram and common peaks of
B． lineatae Ｒadix
将 4 号色谱峰定为内参比峰，计算各色谱峰与
参照峰的相对保留时间(表 3)及相对峰面积(表
4) ，非共有峰占总峰面积 ＜ 17． 50%，符合指纹图谱
的要求。经对照品验证，8 号共有峰为铁包金的主
要成分，鉴定为芦丁;11 号峰鉴定为槲皮素。11 个
不同品种及来源的铁包金指纹图谱的 12 个共有峰
017 华 西 药 学 杂 志 第 30 卷
的相对保留时间大致相同，但相对峰面积差异很大;
同一品种不同产地样品的共有峰相对峰面积也存在
很大差异，芦丁的差异尤为明显，说明品种、产地对
铁包金样品中化学成分的含量影响较大。
表 3 不同产地铁包金药材共有峰的相对保留时间
Table 3 Ｒelative retention times of the common peaks in the fingerprint of B． lineatae Ｒadix
No． 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
S1 0． 388 0． 464 0． 958 1． 000 1． 188 1． 398 1． 503 1． 590 1． 648 1． 836 2． 012 2． 247
S2 0． 384 0． 463 0． 957 1． 000 1． 181 1． 396 1． 500 1． 597 1． 648 1． 810 2． 008 2． 242
S3 0． 388 0． 464 0． 959 1． 000 1． 193 1． 402 1． 516 1． 588 1． 646 1． 840 2． 016 2． 248
S4 0． 389 0． 464 0． 957 1． 000 1． 188 1． 395 1． 502 1． 594 1． 642 1． 831 2． 008 2． 243
S5 0． 389 0． 464 0． 957 1． 000 1． 187 1． 393 1． 511 1． 586 1． 644 1． 832 2． 005 2． 241
S6 0． 388 0． 463 0． 957 1． 000 1． 195 1． 398 1． 515 1． 592 1． 649 1． 845 2． 021 2． 240
S7 0． 388 0． 463 0． 957 1． 000 1． 192 1． 390 1． 505 1． 590 1． 642 1． 830 1． 999 2． 243
S8 0． 388 0． 463 0． 957 1． 000 1． 191 1． 391 1． 507 1． 592 1． 643 1． 822 2． 012 2． 243
S9 0． 388 0． 463 0． 957 1． 000 1． 194 1． 399 1． 506 1． 591 1． 644 1． 843 2． 007 2． 242
S10 0． 388 0． 464 0． 958 1． 000 1． 194 1． 397 1． 504 1． 592 1． 647 1． 835 2． 012 2． 244
S11 0． 388 0． 464 0． 959 1． 000 1． 194 1． 394 1． 511 1． 591 1． 647 1． 834 2． 023 2． 243
ＲSD /% 0． 34 0． 11 0． 08 0 0． 36 0． 25 0． 35 0． 18 0． 15 0． 53 0． 34 0． 10
表 4 不同产地的铁包金药材共有峰的相对峰面积
Table 4 Ｒelative peak areas of the common peaks in the fingerprint of B． lineatae Ｒadix
No． 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
S1 0． 470 0． 933 1． 158 1． 000 1． 117 1． 049 1． 200 1． 195 0． 879 0． 258 1． 299 0． 203
S2 0． 213 1． 276 1． 472 1． 000 1． 145 1． 825 1． 806 2． 661 3． 915 1． 751 4． 809 0． 424
S3 0． 154 0． 514 1． 138 1． 000 0． 892 2． 133 2． 802 5． 392 3． 091 0． 376 1． 096 0． 951
S4 0． 179 0． 973 0． 866 1． 000 0． 398 0． 621 0． 480 6． 360 0． 820 0． 262 0． 185 1． 245
S5 0． 111 0． 847 0． 436 1． 000 0． 239 1． 114 2． 621 11． 566 2． 317 0． 952 0． 530 1． 172
S6 0． 234 0． 877 0． 409 1． 000 0． 311 0． 546 0． 964 8． 902 1． 379 1． 136 0． 048 0． 296
S7 0． 113 0． 217 0． 128 1． 000 0． 095 0． 274 0． 401 4． 980 0． 368 0． 559 0． 021 0． 550
S8 0． 216 0． 667 0． 247 1． 000 0． 212 0． 437 0． 196 8． 517 0． 479 0． 021 0． 101 0． 481
S9 0． 958 0． 326 0． 339 1． 000 0． 836 0． 451 1． 073 46． 623 2． 620 0． 552 0． 234 2． 632
S10 0． 801 0． 526 0． 777 1． 000 1． 238 1． 640 2． 628 17． 859 1． 640 2． 265 0． 306 2． 265
S11 0． 058 0． 409 0． 090 1． 000 0． 114 0． 264 0． 228 3． 102 0． 681 0． 013 0． 048 0． 035
ＲSD /% 93． 74 46． 79 72． 99 0 74． 74 70． 38 76． 56 120． 34 71． 31 97． 91 177． 71 90． 82
1． 2． 5 指纹图谱相似度的评价及聚类分析 分别
将 11 个不同产地的铁包金样品的色谱峰导入《中药
色谱相似度评价系统》软件中，进行相似度评价。不
同产地的铁包金样品的指纹图谱相似度存在差异，但
特征峰的指纹图谱除贵阳白云区的以外，其他 10 个
产地的特征峰的保留时间基本一致。11 个产地的样
品中有 8个相似度 ＞ 0． 827(表 5)。通过指纹图谱及
相似度的比较发现:不同产地的铁包金样品的指纹图
谱之间差异较大，表明该方法能很好地鉴别不同产地
的铁包金药材。将各共有峰的相对峰面积对称样量
进行量化，应用 SPSS 17． 0 软件对其进行系统聚类分
析，采用组间均联法，以夹角余弦作为样品相似度测
度。聚类分析以遗传距离为 5，将 11 批样品分为 3
类，以遗传距离为 10，将 11批样品分为 2类(图 3)。
表 5 不同产地铁包金药材的指纹图谱的相似度
Table 5 Ｒesults of the similarity analysis in the fingerprint of B． lineatae Ｒadix
No． S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 Ｒ
S1 1． 000 0． 268 0． 234 0． 230 0． 288 0． 164 0． 164 0． 125 0． 111 0． 161 0． 181 0． 181
S2 0． 268 1． 000 0． 488 0． 597 0． 497 0． 443 0． 302 0． 249 0． 284 0． 308 0． 441 0． 467
S3 0． 234 0． 488 1． 000 0． 680 0． 597 0． 488 0． 868 0． 884 0． 898 0． 878 0． 883 0． 970
S4 0． 230 0． 597 0． 680 1． 000 0． 488 0． 751 0． 538 0． 489 0． 500 0． 544 0． 573 0． 690
S5 0． 288 0． 479 0． 597 0． 488 1． 000 0． 897 0． 865 0． 887 0． 892 0． 881 0． 885 0． 970
S6 0． 164 0． 443 0． 488 0． 751 0． 897 1． 000 0． 828 0． 853 0． 856 0． 856 0． 827 0． 908
S7 0． 164 0． 302 0． 868 0． 538 0． 865 0． 828 1． 000 0． 916 0． 916 0． 899 0． 853 0． 887
S8 0． 125 0． 249 0． 884 0． 489 0． 887 0． 853 0． 916 1． 000 0． 979 0． 967 0． 882 0． 916
S9 0． 111 0． 284 0． 898 0． 500 0． 892 0． 856 0． 916 0． 979 1． 000 0． 943 0． 915 0． 921
S10 0． 161 0． 308 0． 878 0． 544 0． 881 0． 856 0． 899 0． 967 0． 943 1． 000 0． 903 0． 926
S11 0． 181 0． 441 0． 883 0． 573 0． 885 0． 827 0． 853 0． 882 0． 915 0． 903 1． 000 0． 905
Ｒ 0． 181 0． 467 0． 970 0． 690 0． 970 0． 908 0． 887 0． 916 0． 921 0． 926 0． 905 1． 000
117第 6 期 彭 梅，等。铁包金的 HPLC指纹图谱研究
华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(6)∶712 ～ 714
０ ５ １０ １５ ２０ ２５
遗传距离
S8
S9
S10
S7
S11
S5
S6
S4
S3
S2
S1
图 3 铁包金样品的聚类分析结果
Figure 3 Ｒesults of the hierarchical cluster analysis of B． lineatae
Ｒadix
2 讨论
在制备供试品溶液时，曾考察了以甲醇、75%乙
醇、水作提取溶剂，用加热回流、超声提取及水煎煮
等方法提取样品，结果水煎煮提取液中样品峰的个
数最多。综合考虑铁包金样品在民间的用法(多用
水煎煮或者酒浸泡) ，最终确定用文中的方法来制
备供试液。比较了波长为 260、280 nm［4］时的色谱
图，在这两种波长处，色谱图中样品峰的个数基本一
致，但 260 nm时峰的响应值较高，基线也较平整，故
采用 260 nm 作为检测波长。通过铁包金药材
HPLC指纹图谱发现其主要成分芦丁的相对峰面积
存在差异较大，说明铁包金的质量可能受到产地、品
种因素的影响较大。建议在临床应用中根据具体适
应症选用固定产地、品种的铁包金药材。中药指纹
图谱能够全面反映中药的质量［5］，文中建立了铁包
金药材的指纹图谱，确立了 12 个共有峰，并指认了
其中 2 个色谱峰(芦丁、槲皮素) ，方法准确、可靠，
可作为铁包金药材质量判断的依据。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会． 中国植物志［M］． 第 48
卷．第一分册．北京:科学出版社，1982:106 － 127．
［2］ 梁启成，钟鸣． 中国壮药学［M］． 南宁:广西民族出版社，
2005:432．
［3］ 张国利，滕红丽，陈科力，等． 壮药铁包金的化学成分及药理
作用研究进展［J］．中国医药导报，2011，8(6) :5 － 8．
［4］ 滕红丽，郭力城，李鑫，等． 光枝勾儿茶高效液相色谱指纹图
谱研究［J］．时珍国医国药，2012，22(5) :1233 － 1235．
［5］ 黄立兰，程文胜，陈耀娣，等．人参指纹图谱的研究进展［J］．
中草药，2013，44(2) :241 － 246．
收稿日期:2014 － 05 － 22
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:81473140)
作者简介:杨波(1988—) ，男，硕士，从事药物的研发工作。Email:964883171@ qq． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:ysylilinli@ sina． com
HPLC测定新型抗三阴性乳腺癌药物 ZCH646 的含量
杨 波，王江红，李琳丽*
(四川大学华西药学院，四川 成都 610041)
摘要:目的 采用 HPLC法测定新型抗三阴性乳腺癌(TNBC)药物 ZCH646 原料药的含量，并考察其稳定性。方法 色谱柱
为 Phenomenex Gemini C18(150 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为 10 mmol·L
－1乙酸铵缓冲盐 －乙腈(45∶55，三乙胺调 pH9． 0) ，
检测波长 272． 4 nm，流速 1． 0 mL·min －1，柱温 25 ℃。结果 ZCH646 能与相邻杂质完全分离，1 ～ 100 μg·mL －1 ZCH646 与峰
面积的线性关系良好(r = 0． 9995) ，检测限为 20 ng·mL －1;低、中、高浓度的平均回收率和 ＲSD 分别为 100． 1%、99． 7%、
101. 6%和 0． 81%、0． 51%、1． 24%;ZCH646 在高温、高湿条件下稳定，强光照射条件下颜色略有变化。结论 所用方法简便
快速、专属性强、精密度高，适用于 ZCH646 的含量测定和稳定性研究。
关键词:三阴性乳腺癌;ZCH646;高效液相色谱法;含量测定;稳定性;影响因素试验
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)06 － 0712 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 06． 028
Determination of a novel anti － triple negative breast cancer drug ZCH646 by HPLC
YANG Bo，WANG Jiang － hong，LI Lin － li*
(West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610041 P． Ｒ． China)