全 文 ：中华临床医师杂志(电子版)2013年 12月第 7卷第 23期 Chin J Clinicians(Electronic Edition),December 1,2013,Vol.7,No.23 
 
·10766·
·基础论著·
蝉翼藤有机酸提取物抑制鸭体内乙型肝炎
病毒复制及保肝作用的研究
张连涛 梁贤栋 周文亮 任志强
【摘要】 目的 研究蝉翼藤有机酸类提取物（CYTYJS）对鸭乙型肝炎病毒（DHBV）复制的抑制作
用与保肝的作用。方法 将 DHBV DNA阳性的广西麻鸭，随机分成 5组，分别为 CYTYJS高、中、低剂
量组，模型组和拉米夫定（3TC）组。于用药前（T0）、用药 7 d（T7）、14 d（T14）、21 d（T21）及停药
后 3 d（P3）分别采血，检测血清中 DHBV DNA的滴度、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转
移酶（AST）的含量，实验结束时，取肝组织做病理学检查。结果 与模型组比较，CYTYJS 各剂量组用
药后血清 DHBV DNA滴度显著降低（P＜0.05或 P＜0.01），停药 3 d后，CYTYJS各剂量组 DHBV DNA、
ALT 和 AST 仍在较低水平（P＜0.05）而阳性组则有明显回升现象；镜下观察各组肝脏组织切片，与模型
组比较 CYTYJS 高、中、低剂量组肝脏的病理改变有明显改善。结论 CYTYJS 可能有一定的抗乙型肝炎
病毒和保肝的作用。
【关键词】 蝉翼藤属； 肝炎病毒，乙型，鸭； 拉米夫定

The organic extract from the Securidaca inhibits duck hepatitis B virus replication in vivo and hepatoprotective
effect ZHANG Lian-tao, LIANG Xian-dong, ZHOU Wen-liang, REN Zhi-qiang. Henan Shangqiu First Peoples
Hospital Branch (Shangqiu Infectious Disease Hospital), Shangqiu 476100, China
Corresponding author: ZHANG Lian-tao, Email: 415684970@qq.com
【Abstract】 Objective To study the effects of organic acid from the on anti- DHBV and protecting the
liver activity. Methods the DHBV-DNA positive ducks from GuangXi Zhuang Autonomous Region were
randomly divided into five groups: model group, positive group, CYTYJS-H, CYTYJS-M, CYTYJS-L group. The
before and at the 7 th, 14 th, 21 th day during treatment, and at the 3 th day after finishing the treatment blood was
collected to determined the serum content of DHBV-DNA, ALT, AST. The histopathological changes of liver were
examined finally. Results compared to the model group, After treatment CYTYJS each group serum DHBV
DNA titer decreased significantly (P＜0.05 or P＜0.01). And at the 3 th day after withdrawal the DHBV DNA,
ALT and AST level of CYTYJS each group still kept on lower level, showed certain inhibiting effect on the
DHBV but the positive group rebounded quickly. The liver biopsy was observed under the light microscope, the
pathological changes in the CYTYJS treatment group and the positive group had more improvement than that in
model group. Conclusion CYTYJS maybe have some anti-hepatitis B virus and hepatoprotective effects.
【Key words】 Securidaca; Hepatitis B virus, duck; Lamivudine

乙型肝炎是感染乙型肝炎病毒（HBV）引起的一
种常见传染病和多发病，易转化为慢性，甚至发展为
肝硬化、肝癌[1]。目前研究表明，乙型肝炎的发病主要
与免疫力低下、病毒持续感染以及进行性肝细胞损伤
有关，而某些中药提取物可三方面并重，从而提高疗
效[2-3]。蝉翼藤（Securidaea inappendicula Hasskd.）为
远志科、远志族蝉翼藤属攀援灌木，分布于广西、广
东、海南和云南，味酸涩，性凉，有祛风湿、清热利
 
DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2013.23.086
作者单位：476100 河南省商丘市第一人民医院分院(商丘市传染病医院)
通讯作者：张连涛，Email: 415684970@qq.com
尿、活血化瘀、消肿止痛等功效，现代药理学研究显
示其具有较强的抗菌消炎、抗癌、抗病毒、抗 HIV、
免疫增强等多种活性，主要用于治疗急慢性肝炎，黄
疸，跌打损伤、风湿骨痛等[4-5]。本课题组通过鸭乙型
肝炎模型，首次观察了蝉翼藤有机酸类提取物
（CYTYJS）对鸭乙型肝炎病毒（DHBV）复制的抑制
作用与保肝的作用。
材料与方法
一、实验动物与试剂
广西麻鸭，体重 40～50 g，1日龄，雌雄兼用，100
中华临床医师杂志(电子版)2013年 12月第 7卷第 23期 Chin J Clinicians(Electronic Edition),December 1,2013,Vol.7,No.23 
 
·10767·
只，由桂林畜牧种苗场提供（动物生产许可证号：SYKG
桂 2003-0003）。DHBV DNA阳性血清采自广西桂林
麻鸭，经 4000 r/min离心分离所得，并于－20 ℃保存。
该血清经 PCR检测，证实其含有 DHBV DNA，并以
此血清作为实验毒种。
蝉翼藤（购自广西玉林药材市场，经广西医科大
学李梅教授鉴定为远志科、五味藤属蝉翼藤），蝉翼
藤有机酸提取物（本教研室自行提取与鉴定）；拉米
夫定[3TC，贺普丁片，葛兰素-史克制药（苏州）有限
公司产品，批号：09010007]；谷丙转氨酶（ALT），
谷草转氨酶（AST）检测试剂盒（南京建成生物工程
研究所）；荧光定量 PCR检测试剂盒（北京爱德莱生
物科技有限公司）。
根据GenBank鸭HBV基因序列（登录号：M32990）
和 参 照 文 献 [5] ， 设 计 引 物 序 列 （ FP ：
5-AACCATTGAAGCAATCACTAGAC-3 ， RP ：
5-ATCTATGGTGGCTGCTCGAACTA-3），扩增片段
大小为 218 bp，引物由上海基康生物技术有限公司合
成。
二、方法
1. 蝉翼藤有机酸提取物的制备：蝉翼藤根皮粗粉，
用石油醚 30～60 ℃回流提取脱醋，残渣用乙醇加热回
流提取，滤过，取滤液减压浓缩至无醇味，加水适量
使溶解，通过大孔树脂柱，相继用水、乙醇适量洗脱，
收集 60%乙醇洗脱液，减压浓缩至干，残渣用甲醇使
溶解，活性炭脱色，加入倍量乙醚，置于 5～8 ℃冷藏
12 h以上，滤过，残渣以甲醇-乙醚重结晶，得到一白
色无定形结晶，经鉴定为有机酸类化合物。
2. 动物模型的构建：给健康成年广西麻鸭产的蛋
孵化 1日龄雏鸭，颈静脉注射 0.1 ml DHBV DNA阳性
病毒血清。接种 3 d后分别从胫静脉采血 0.2～0.3 ml，
分别装入一次性 Eppendoff 管中，整个过程避免交叉污
染。14 000 r/min离心 3 min，取血清，PCR法检测筛选
出阳性感染鸭（血清病毒负荷 106～108copies/μl）。PCR
扩增条件：94 ℃预变性，10 min；94 ℃变性，30 s；
58 ℃退火，30 s；72 ℃延伸，30 s。共反应 25个循环。
最后一个循环后 72 ℃延伸 10 min。
3. 实验分组及用药：经 PCR法检测筛选出阳性感
染鸭共 50 只，作为实验动物。将 50 只鸭随机分为 5
组，每组 10只。各组动物在同样条件下饲养，均按下
列药物以每日 2 次（早、晚各 1 次），空腹灌胃给药
21 d。模型组：等量的生理盐水； 3TC 组：
20.0 mg·kg-1·d-1；蝉翼藤有机酸高、中、低剂量
（CYTYJSH、CYTYJSM、CYTYJSL）组：20.0、10.0、
5.0 mg·kg-1·d-1。
4. FQ-PCR检测鸭血清中 DHBV DNA的滴度：于
用药前（T0）、用药 7 d（T7）、用药 14 d（T14）、用
药 21 d（T21）及停药 3 d（P3），分别无菌采取鸭胫静
脉血，每只采血 1.5 ml左右，4000 r/min离心分离血清，
分装于 A、B 两管备用，－20 ℃保存，备用。A 管血
清以 DNA抽提试剂盒（SK1252，上海生工）提取 DNA，
进行 PCR扩增；扩增条件：94 ℃预变性 10 min；95 ℃
变性 10 s，55 ℃退火 20，72 ℃延伸 30 s，共反应 40
个循环；72 ℃延伸 10 min。将扩增产物用 DNA 片段
玻璃奶快速纯化回收后，以核酸蛋白测定仪
（BioPhotometer plus，德国艾本德）测定浓度。各步骤
严格按照荧光定量 PCR 检测试剂盒（SPL-9，杭州谱
镭光电技术有限公司）要求操作。
5. 肝功能的测定：用全自动生化分析仪测各组鸭
血清中 ALT 和 AST 的含量，方法按试剂盒说明书进
行。
6. 各组鸭肝脏组织病理（HE 染色）的检测：停
药 3 d 后，剖杀各组麻鸭，取小块肝组织固定于 10%
甲醛溶液中，石蜡包埋并切片，HE染色，光镜下观察
各组肝组织病理学变化。
三、统计学分析
应用 SPSS 17.0软件进行统计学处理，计量资料均
采用均数±标准差（ x±s）表示，治疗前后比较采用
配对资料 t检验，组间比较采用方差分析，各均数两两
比较。P＜0.05为差异具有统计学意义。
结 果
1. 鸭血清中 DHBV DNA的滴度变化：各组鸭血
清中DHBV DNA的滴度变化结果见表 1。结果显示模型
组用药前后血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。3TC
组用药 7 d后血清中 DHBV DNA滴度显著降低（P＜
0.01），但停药 3 d后有显著的反跳现象。CYTYJSH、
CYTYJSM、CYTYJSL分别于第 7 天（T7）、第 14 天
（T14）、第 21天（T21）开始出现 DHBV DNA滴度降
低（P＜0.05或 P＜0.01），停药 3 d DHBV DNA滴度
仍在较低水平，反跳现象不显著。见表 1，图 1A。
2. CYTYJS 对鸭肝损伤的保护作用：各用药组与
模型组比较，用药前（T0）AST和 ALT含量无差别，
用药第 14天（T14）、第 21天（T21）后，AST有下降
趋势，而 ALT含量只有在 3TC组、高剂量组和中剂量
组中才出现下降趋势，且 3TC与 CYTYJS高剂量组有
统计学差异（P＜0.01）。见表 2，3，图 1B，1C。
3. 各组鸭肝脏组织病理的检测结果：模型组（图
2A），肝细胞重度水样变和气球样变，弥漫性重度脂
变；3TC（图 2B），正常；CYTYJSL（图 2C），肝细
中华临床医师杂志(电子版)2013年 12月第 7卷第 23期 Chin J Clinicians(Electronic Edition),December 1,2013,Vol.7,No.23 
 
·10768·
表 1 蝉翼藤有机酸成分对鸭血清 DHBV DNA滴度的影响（×108， sx  ，n＝10）
组别 T0 T7 T14 T21 P3
模型组 1.50±0.77 1.44±0.80 1.40±0.91 1.45±0.81 1.42±0.74
3TC 1.51±1.07 0.61±0.34b 0.47±0.24b 0.38±0.32b 1.20±0.71
CYTYJSH 1.48±0.76 0.88±0.48a 0.63±0.40b 0.57±0.52b 0.68±0.21b
CYTYJSM 1.46±0.75 1.11±0.27 0.79±0.57a 0.72±0.59a 0.85±0.31a
CYTYJSL 1.47±0.54 1.17±0.48 0.89±0.64a 0.81±0.51a 1.01±0.69
注：与模型组比较，aP＜0.05，bP＜0.01
表 2 CYTYJS对鸭血清 ALT的影响（U/L， sx  ）
组别 T0 T7 T14 T21 P3
模型组 17.58±3.44 28.30±5.41 41.74±3.33 47.45±4.21 55.20±3.89
3TC 16.11±2.23 26.18±3.22 19.27±1.13b 17.34±1.45b 41.76±7.65b
CYTYJSH 16.85±2.12 21.14±3.44a 16.53±1.23b 15.67±2.22b 47.51±4.45a
CYTYJSM 15.08±2.34 26.48±5.11 23.48±3.44b 19.84±4.22b 50.20±3.21
CYTYJSL 17.58±2.33 27.30±2.11 23.48±3.44b 43.67±2.11 53.85±6.22
注：与模型组比较，aP＜0.05，bP＜0.01
表 3 CYTYJS对鸭血清 AST的影响（U/ml， sx  ）
组别 T0 T7 T14 T21 P3
模型组 12.13±4.11 41.75±5.23 42.20±3.66 44.36±7.11 45.51±4.89
3TC 9.66±4.55 35.94±6.44 28.90±5.22b 20.70±4.54b 36.10±7.32a
CYTYJSH 10.95±7.33 31.35±6.33a 25.38±6.44b 20.81±8.11b 41.67±4.44
CYTYJSM 13.82±4.55 33.09±6.57a 27.46±7.33b 25.45±5.33b 42.56±7.44
CYTYJSL 14.37±6.44 35.23±8.33 30.43±4.33b 28.52±7.44b 47.92±5.33
注：与模型组比较，aP＜0.05，bP＜0.01

胞水样变和气球样变，弥漫性中度脂变；CYTYJSM（图
2D），肝细胞轻度水样变和气球样变，弥漫性轻度脂变；
CYTYJSH（图 2E），已基本恢复正常。
讨 论
本课题组一直致力于广西特色中草药用于抗炎免
疫的研究。蝉翼藤广泛分布于广西各地，是广西特色
中草药，也是正骨水、消肿止痛精的主要成分。在广
西民间有用于治疗肝炎的习惯，现有的药理学研究表
明，蝉翼藤具有较强的抗菌消炎、抗癌、抗病毒、抗
HIV、免疫增强等多种活性，具有较好的研究价值和广
阔的开发前景。广西麻鸭乙型肝炎模型具有病程规律、
稳定，无自然转阴、结果可靠等优点[6-8]，本研究主要
是利用广西麻鸭乙型肝炎动物模型，观察蝉翼藤有机
酸成分在体内的抗 HBV作用及保肝作用。
肝脏感染 HBV 后最主要的病理组织学表现为肝
细胞的水样变和气球样变，水样变和气球样变的程度
与肝细胞的损伤程度呈正相关，与血清中 ALT、AST
的含量呈正相关[9-12]。与模型组比较，蝉翼滕有机酸成
分高、中、低剂量组肝细胞的水样变和气球样变均有
不同程度的改善，高、中剂量组血清中 ALT、AST的
含量与模型组有统计学差异（P＜0.05或 P＜0.01），
提示蝉翼滕有机酸成分具有较好的保护肝细胞的作用。
本实验结果显示，蝉翼滕有机酸成分在携带
DHBV的麻鸭体内具有抑制 DHBV复制的活性，其疗
效与用药剂量与给药时间呈正相关。第 7 天时，蝉翼
滕有机酸成分各组均呈现出抑制 DHBV复制的作用，
高剂量组效果最为明显，与模型组相比较差异明显，
低、中剂量虽然降低但无统计学意义。在第 14天及第
21天时，蝉翼滕有机酸成分高、中、低剂量组均呈现
出抑制 DHBV复制的作用，与模型组相比差异明显，
均有统计学意义。拉米夫定在整个用药期间均明显抑
制 DHBV复制，使病毒水平处于较低水平，效果比蝉
翼滕有机酸高剂量组好，但在停药后的第 3天检测时，
拉米夫定组病毒含量出现较快反弹回升。虽然在停药
后第 3 天，蝉翼滕有机酸各组病毒含量也有所回升，
而其回升速度较拉米夫定组慢，显示出其抑制病毒复
制活性较为恒定持久的特点。这是否预示着其具有独
特的作用机制？本次仅观察蝉翼藤有机酸提取物的药
效学，回答这个问题尚需要进一步的深入研究。
中华临床医师杂志(电子版)2013年 12月第 7卷第 23期 Chin J Clinicians(Electronic Edition),December 1,2013,Vol.7,No.23 
 
·10769·

参 考 文 献
[1] 刘颖, 徐莹, 李芸, 等. 亚太地区慢性乙型肝炎治疗共识 (2012 最新
版). 临床肝胆病杂志, 2012, 28: 641-661.
[2] 林兴, 黄权芳, 张士军, 等. 山芝麻抗鸭体内乙肝病毒及保肝作用的
实验研究. 华西药学杂志, 2012, 27: 134-137.
[3] 聂红明, 董慧琳, 高月求, 等. 治疗慢性乙型肝炎的中药新药临床研
究设计要点. 中药新药与临床药理, 2012, 23: 486-489.
[4] 李丽, 李勇文, 唐爱存. 蝉翼藤氯仿提取物的抗炎和免疫增强作用.
中药药理与临床, 2011, 27: 62-64.
[5] 李勇文, 李丽. 蝉翼藤对大鼠免疫功能的调节作用(英文). 中国组织
工程研究与临床康复, 2008, 12: 10579-10582.
[6] 黄权芳, 韦刚, 林兴, 等. 山芝麻对鸭乙型肝炎动物模型体内血清超
氧化物歧化酶等 3项指标的影响. 时珍国医国药, 2011, 22: 2683-2684.
[7] 黄权芳, 杨辉, 韦刚, 林兴, 等. 山芝麻抗鸭乙型肝炎病毒 1 作用. 中
国实验方剂学杂志, 2011, 17: 179-181.
[8] 潘琪, 王玲, 王俊俊, 等. 拉米夫定与原儿茶酸药物组合体内抗鸭乙
肝病毒. 中华中医药杂志, 2011, 26: 2500-2504.
[9] Reaiche-Miller G, Thorpe M, Jilbert A, et al. Duck hepatitis B virus
covalently closed circular DNA appears to survive hepatocyte mitosis in
the growing liver. Virology, 2013, 446: 357-364.
[10] Diang X, Ma L, Ren H, et al. Association between serum platelet-derived
growth factor BB and degree of liver damage, fibrosis and hepatitis B e
antigen (HBeAg) status in CHB patients. Hepato-Gastroenterology, 2012,
59: 2357-2360
[11] Zheng R, Chen J, Zhuang Q, et al. Clinical and virological characteristics
of chronic hepatitis B patients with hepatic steatosis. Int J Med Sci, 2013,
10: 641-646.
[12] Ying R, Yang Z, Fan H, et al. Differential liver histopathological features
of chronic HBV infection patients with normal and mildly elevated serum
ALT. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi, 2012, 20: 585-588.
（收稿日期：2013-11-11）
（本文编辑：马超） 
张连涛，梁贤栋，周文亮，等. 蝉翼藤有机酸提取物抑制鸭体内乙型肝炎病毒复制及保肝作用的研究［J/CD］. 中华临床医师杂志：电子版，2013，7（23）：
10766-10769.