全 文 ：　　　　　　 天然产物研究与开发　 　　　　　
2005　Vol.17　No.3 NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT　 　　　　　　　　
　
　
　
　
　　收稿日期:2005-01-06　　　接受日期:2005-01-31
　＊通讯作者 Tel:86-772-2506054;E-mai l:lshaohua18@yahoo.com.cn
HPLC法测定广西十个不同产地两面针中
新棒状花椒酰胺的含量
刘绍华1＊ ,覃青云1 ,唐献兰1 ,方　 1 ,杨卫豪1 ,张祥民2
(1.柳州两面针股份有限公司博士后工作站 ,柳州 545001;2.复旦大学化学系 ,上海 200433)
摘　要:分析并比较了广西十个不同产地的两面针中具有镇痛 、抗炎和止血活性的新棒状花椒酰胺的含量。 采
用HPLC 法 , 色谱柱为 HYPERSIL BDS C18 , 流动相为乙腈:水(50:50), 流速为 1.0 mL/ min , 柱温 40 ℃, 检测波长
268 nm ,进样量为 20.0 μL。发现不同产地的两面针中新棒状花椒酰胺的含量差别较大 , 金秀样品含量最高 , 为
0.468%;桂林样品含量最低 ,为 0.009%。本研究将为两面针在镇痛 、抗炎和止血等方面的开发利用提供了可靠
的科学依据 ,具有重要的应用前景。
关键词:高压液相色谱;两面针;新棒状花椒酰胺;α-山椒素
中图分类号:R284.1　　　
Determination of the Neoherculin of Zanthoxylum nitidum (Roxb.)
DC Growing in the Ten Areas of Guangxi
LIU Shao-hua1＊ , QIN Qing-yun1 ,TANG Xian-lan1 ,FANG Kun1 ,YANG Wei-hao1 ,ZHANG Xiang-min2
(1.Workstation of Postdoctor of Liuzhou Liangmianzhen Co.Ltd., Liuzhou 545001 , China;
2.Department of Chemistry , Fudan University , Shanghai 200433 , China)
Abstract:Analysed and compared the content of the active compound of antinociceptive , anti-infla mmatory and stop bleeding
effects in Zanthoxylum nitidum at 10 different growing areas of Guangxi.High performance liquid chromatography(HPLC)was
utilized for this purpose with the column of HYPERSIL BDS C18 and the mobile phase containing acetonitrile and water(50:
50), the detection wavelength was 268 nm , flow rate was 1.0 mL/ min , column temperature was 40 ℃, sample injection was
20.0μL.The content of neoherculin was more different in the 10 different growing areas of Guangxi.The highest content of the
neoherculin in Zanthoxylum nitidum was 0.468% of Jinxiu;the lowest was 0.009% of Guilin.This study will supply a reli-
able theoretic direction to develop and make useful of Zanthoxylum nitidum in antinociceptive , anti-infla mmatory and stop
bleeding and so on.
Key words:high performance liquid chromatography(HPLC);Zanthoxylum nitidum ;neoherculin;α-sanshool
　　两面针[ Zanthoxylum nitidum(Rox.)DC.]系芸香
科花椒属植物 ,别名上山虎 、入地金牛 、两背针 ,主要
分布于我国广西 、广东 、云南 、贵州 、四川 、浙江 、福
建 、江西 、台湾等省 ,生于山野坡地灌木丛中。中药
两面针具有悠久的药用历史 ,其根和茎皮具有驱风
化湿 、消肿止痛 、行气之功效 ,民间用中药两面针水
煎服或研粉冲服 ,广泛用于镇痛 、抗炎和麻醉 ,主治
风湿关节痛 、跌打扭伤肿痛 、神经痛 、牙痛 、肠胃绞
痛 、胆道蛔虫症引起的疼痛及疡病等[ 1～ 3] 。早在
1982年曾报导从中药两面针中分离出来一种木脂
素化合物叫两面针结晶-8(结构未确定)具有解痉 、
镇痛和镇静等作用[ 4] 。1983 年洪等还报导了两面
针结晶-8镇痛作用机理[ 5] 。但这种具有解痉 、镇痛
和镇静等活性作用化合物的结构还不清楚 ,作者为
了进一步地研究中药两面针中具有解痉 、镇痛和镇
静等活性的化合物 ,从两面针中分离出来一种具有
镇痛 、抗炎和止血活性作用的化合物 ,经鉴定为新棒
状花椒酰胺 ,又名α-山椒素 。本研究首次采用HPLC
337
法测定两面针中的新棒状花椒酰胺的含量 ,并对广
西十个不同产地的两面针进行了含量分析的比较 ,
为具有镇痛 、抗炎和止血活性作用的两面针的开发
应用提供可靠的理论依据 。
1　仪器 、药材和试剂
1.1　仪器
　　日本岛津 UV-2201紫外分光光度计 ,日本岛津
高效液相色谱仪(LC-10A高压泵 ,SPD-10A紫外检测
器 ,GS-light色谱数据处理软件)。
1.2　药材
　　新棒状花椒酰胺对照品由本研究小组分离和鉴
定。两面针样品采自广西的金秀 ,百色 ,北流 ,钦州 ,
苍梧 ,天峨 ,桂平 ,邕宁 ,桂林 ,龙州十个不同产地 。
样品由柳州两面针股份有限公司黄光伟高级工程师
鉴定 ,并保存在柳州两面针股份有限公司。
1.3　试剂
　　乙腈:HPLC级色谱纯
甲醇:HPLC级色谱纯
2　实验方法
2.1　色谱条件
　　大连依利特公司HYPERSIL BDS C18高效液相色
谱柱(5 μm , 4.6 mm ×250 mm),C18保护柱 ,检测波
长:268 nm ,柱温:40 ℃,流动相:乙腈-水(50:50),流
速:1.0 mL/min ,进样量:20.0μL ,外标法定量。
2.2　求标准曲线和线性回归方程
　　准确称取 0.0100 g 新棒状花椒酰胺对照品 ,用
HPLC级甲醇溶解后定容于 50 mL容量瓶中 ,摇匀后
作为对照品贮备液。
准确量取对照品贮备液 0.50 mL 、1.00 mL 、2.00
mL 、5.00 mL 和 8.00 mL 于 10.00 mL 容量瓶中 ,以
HPLC级甲醇定容至标线 ,摇匀 ,得对照品溶液。
表 1　对照品新棒状花椒酰胺的浓度和峰面积
Table 1　The concentration and the peak area of neoherculin as ref-
erence substance
浓度 Concent ration
(mg/ mL)
峰面积 Peak area
1 2 3 平均值 Mean value
0.01 1827982 1800490 1812791 1813754
0.02 3533157 3623940 3590684 3582594
0.04 7190406 7267511 6955398 7137772
0.10 17708280 17344473 17501177 17517977
0.16 27819836 28257756 28336358 28137983
　　取各浓度对照品溶液 20.0 μL 进样测定 ,每个
浓度进样3次 ,以平均峰面积为纵坐标 ,对应的浓度
c(mg/ mL)为横坐标作标准曲线和线性回归方程 ,在
0.01 ～ 0.16 mg/ mL范围内的线性关系良好 ,见表 1
和图1 。
图 1　对照品新棒状花椒酰胺的标准曲线和线性回归方程
Fig.1　The standard curve and the linear regression equation of
neoherculin as reference substance
2.3　样品测定
　　取广西十个不同产地两面针根的干燥横切薄片
约 0.55 g ,精密称定 ,置于 100 mL圆底烧瓶中 ,加 45
mL HPLC级甲醇 ,于 68 ℃水浴中加热回流 2 h ,冷却
后用甲醇定容至 50.00 mL ,摇匀 ,用 0.45μm有机相
滤膜过滤 , 取 20.0 μL 进样测定 , 每个样品进样 3
次 ,以平均峰面积根据线性回归方程计算其浓度
(mg/ mL),然后计算药材中新棒状花椒酰胺的含量
(%)。
对照品溶液与两面针原根药材中的色谱图见图
2和图 3。
图 2　对照品溶液色谱图(3:新棒状花椒酰胺)
Fig.2　The chromatogram of neoherculin as reference substance
(3:Neoherculin)
2.4　精密度试验
　　在十个不同产地两面针样品中 ,精密吸取试样
溶液20.0 μL ,连续进样 3次 ,计算 RSD。
2.5　加标回收率的测定
338 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　 　　　2005　Vol.17　No.3
图 3　两面针根提取液色谱图(27:新棒状花椒酰胺)
Fig.3　The chromatogram of neoherculin in root of Zanthoxylum
nitidum extract(27:Neoherculin)
　　准确量取已经过测定 、含量已知的百色两面针
横切片 ,准确加入一定量的新棒状花椒酰胺对照品 ,
依2.3法提取 ,测定并计算加标回收率 。
3　实验结果
3.1　新棒状花椒酰胺的含量(%)和 RSD(见表2)
表 2　广西十个不同产地两面针中新棒状花椒酰胺含量
Table 2　The content of neoherculin in Zanthoxylum nitdine root
that from10 different growing areas at Guangxi province
产 地
Growing areas
平均含量(%)
Mean content(%)
标准偏差
RSD
金秀 0.468 0.016
百色 0.156 0.004
北流 0.135 0.006
钦州 0.083 0.002
苍梧 0.018 0.001
天峨 0.078 0.004
桂平 0.084 0.004
邕宁 0.026 0.001
桂林 0.009 0.002
龙州 0.079 0.004
3.2　加标回收率实验结果(见表 3)
表 3　加标回收率实验结果(n=3)
Table 3　Recovery rate of the samples(n=3)
加入量
Sample
(mg/ mL)
测得量
Recovery sample
(mg/ mL)
回收率
Recovery
rate(%)
平均回收率
Mean recovery
rate(%)
标准偏差
RSD(%)
0.02763 0.02837 102.7
0.08364 0.08453 101.1 101.4 1.14
0.1482 0.1489 100.5
4　讨论
　　本研究小组在对两面针有效成分的研究中发
现 ,两面针中的新棒状花椒酰胺(又名 α-山椒素)
具有镇痛 、抗炎和止血生物活性。现对广西十个不
同产地两面针根中的新棒状花椒酰胺进行了含量测
定 ,结果发现采自广西金秀的样品含量最高 , 为
0.468%,其次是百色样品 ,为 0.156%,含量最低的
是桂林样品 ,为 0.009%。这为两面针在镇痛 、抗炎
和止血等方面的开发利用提供了可靠的科学依据 ,
具有重要的应用前景。
参考文献
1　 Jiangsu New Medical College(江苏新医学院).Chinese Tra-
ditional Medicine Dictionary (中药大词典上册).People s
Publishing House of Shanghai(上海人民出版社), 1977.40
2　 Yang CL(杨仓良).The Poisonous Herbs of Ben Cao(毒药
本草).Beijing:Chinese Medicine Press RR(中国中医药出
版社), 1993.431
3　 The Pharmacopoeia Commission of PRC(国家药典委员会).
Pharmacopoeia of The Peoples Republic of China(中华人民共
和国药典).Edition 2000 , Vol.I , herbal medicine volume.
Beijing:Beijing Chemical Industry Press(化学工业出版社),
2000.133
4　 Zeng XY(曾雪瑜), Chen XF(陈学芬),He XQ(何兴全), et
al.Studies on the antispasmodic and analgesic actions of crys-
tal-8 isolated from Zanthoxylum nitidum (ROXB.)DC.Acta
Pharmacol Sin(药学学报), 1982 , 17:253-258
5　 Hong GX(洪庚辛), Zeng XY(曾雪瑜).Studies on the
mechanism of analgesic action of crystal-8 isolated from Zan-
thoxylum nitidum(ROXB.)DC.Acta Pharm Sin(药学学报),
1983 , 18:227-230
3392005　Vol.17　No.3 刘绍华等:HPLC法测定广西十个不同产地两面针中新棒状花椒酰胺的含量