全 文 ：·科研简报·
余甘子抗脂质过氧化和保护血管
内皮的实验研究
王绿娅1 ,王大全1 ,秦彦文1 ,荆涛2 ,张娟1 ,潘晓冬1 ,
杜兰平1 ,石风茹1 ,张兰珍2(1.北京市心肺血管疾病研究所 ,
北京 100029;2.北京中医药大学 ,北京 100029)
中图分类号:R96 文献标识码:A 文章编号:
1001-2494(2003)10-0805-02
基金项目:国家自然科学基金项目(39970939) 作者简介:王绿娅 ,女 ,副研究员
大戟科植物余甘子又称油柑 , 作为鲜果食用或药用 , 有
清热 、解毒 、保健强身等功效 ,早为中医文献收载 ,亦为藏族
习用药材。笔者通过观察分析余甘子果汁粉对实验性高胆
固醇血症家兔血脂 、丙二醛水平 、动脉粥样斑块形成及内皮
素-1 表达的影响 , 探讨余甘子抗动脉粥样硬化的作用及其机
制 ,旨在为余甘子药物开发提供实验研究资料 。
1 材料与仪器
A-6Ⅱ型半自动生化分析仪(北京松上技术有限公司),
SH-801γ放免计数仪(北京二六二厂), CIMAS 多功能真彩
色病理图像分析系统(北京航空航天大学图像中心)。
余甘子果汁粉(中国林业科学院昆明资源昆虫研究所刘
凤书 、李绍家教授提供)。总胆固醇 、三酰甘油 、高密度脂蛋
白试剂盒(北京中生生物工程技术公司), 丙二醛和总抗氧化
力测定试剂盒(南京建成生物公司), 内皮素放射免疫测定试
剂盒(解放军总医院科技开发中心), 内皮素基因探针(武汉
博士德生物工程有限公司), 地高辛探针标记试剂盒(德国宝
灵曼公司)。
纯种新西兰家兔 , ♂, 体重 2 ～ 2.5 kg(中国药品生物制
品鉴定所实验动物繁育场 , 2002第 017 号 , 一级)。
2 方法与结果
2.1 调节血脂和减少组织脂质沉积的作用
2.1.1 调节血脂 选取家兔 24 只 ,随机分为 3 组 , 每组 8
只 ,对照组(喂普通饲料), 高脂组(高脂饲料含 0.5%总胆固
醇), 给药组(喂高脂饲粒和余甘子粉 4 g·d-1)。饲料每只限
80 g·d-1 , 自由饮水 ,分笼喂养 8 周。 由于腹泻感染等原因 ,
实验结束时动物存活 20 只(对照组 7 只 , 高脂组 6 只 , 给药
组7 只)。于实验前及实验 4 , 8 周 , 清晨从兔耳缘静脉取空
腹 12 h血 2 mL ,分别采用氧化酶法测定血清总胆固醇和三
酰甘油 ,磷钨酸镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇 , 低密度
脂蛋白-胆固醇用 Friedew ald 公式计算。
结果表明 ,实验 8 周后高脂组 、给药组总胆固醇分别为
(44.32±2.22),(11.70±1.73)mmol·L-1 ,三酰甘油分别为
(1.45±0.22),(0.74±0.11)mmol·L -1 , 低密度脂蛋白-胆
固醇分别为(13.85±1.57),(9.90±1.47)mmol·L-1 , 比对
照组(1.94±0.26),(0.61±0.07),(1.40±0.23)mmo l·L-1
明显升高(分别为 P<0.01 , P <0.05 和 P <0.05), 表明模
型复制成功 , 给药组上述血脂指标显著低于高脂组(P <
0.05),提示余甘子能明显抑制上述血脂成分升高。 给药组
高密度脂蛋白-胆固醇(1.65±0.16)mmol·L-1显著高于高
脂组(1.18±0.14)mmol·L -1(P<0.01), 提示余甘子具有
良好的调节血脂紊乱的作用。
2.1.2 减少组织脂质沉积 实验 8 周后处死家兔 , 取整条
主动脉(从根部至双侧髂总动脉分叉下 1 cm 处)剥离内膜和
中膜 ,滤纸吸干后称重剪碎;氯仿-甲醇(2∶1)浸泡 24 h 量瓶
定容至 25 mL , 60℃水浴干燥 24 h;加入 1 mL 无水乙醇溶
解;胆固醇试剂盒测定单位动脉组织胆固醇含量。肝组织胆
固醇测定步骤同动脉。结果显示 ,给药组主动脉和肝脏胆固
醇均显著低于高脂组(均为 P<0.05), 提示余甘子粉能减少
主动脉壁和肝脏胆固醇沉积。
2.2 抗氧化作用
2.2.1 抗脂质过氧化 实验前及实验 4 周 、8 周 , 清晨兔耳
缘静脉取 2 m L , EDTA 1∶50抗凝 , 采用试剂盒用硫代巴比妥
酸反应法测定血浆丙二醛。结果表明 , 实验前各组无明显差
异 ,实验 8 周后给药组与高脂组血浆丙二醛含量分别为
(3.88±0.51),(6.29±1.43)mmol·L-1(P<0.01), 提示余
甘子粉具有较强的抗脂质过氧化作用。
2.2.2 提高机体抗氧化能力 血浆总抗氧化能力测定按照
试剂盒提供比色法 ,取血方法同丙二醛。 结果表明 , 实验前
各组总抗氧化能力无明显差异 ,实验 8 周后给药组与高脂组
相比 ,血浆总抗氧化能力显著提高(P<0.05), 提示余甘子粉
具有提高机体抗氧化能力的作用。
2.3 抗动脉粥样硬化作用
2.3.1 降低主动脉斑块面积 实验 8 周后 , 处死家兔取胸
主动脉 ,透明纸描绘内膜斑块病变图形及整条主动脉轮廓 ,
图像分析仪测量斑块面积的百分比。结果显示 , 肉眼可见对
照组家兔主动脉内膜表面光滑 ,高脂组主动脉内膜可见广泛
的乳白色脂质条纹和明显突出的粥样硬化斑块形成 , 约 50%
的内膜被粥样硬化斑块覆盖;给药组 7 只中 2 只病变较重 ,
其余 5 只病变明显减轻 ,粥样硬化斑块比较局限且薄。图像
分析仪测量斑块面积 ,给药组与高脂组比较斑块面积占主动
脉面积比值显著降低(P<0.05)。
2.3.2 减少斑块厚度 定位切取胸主动脉上段 2 cm , 常规
石蜡切片 ,HE 染色 ,图像分析仪测量内膜斑块最大厚度及内
膜与中膜厚度之比值。光镜观察可见高脂组内膜明显增生
及大量泡沫细胞形成 , 给药组主动脉病变明显减轻 , 脂质浸
润明显少于高脂组。图像分析仪测量内膜斑块厚度及内膜/
中膜厚度比值。给药组与高脂组斑块面积分别为(39.46±
·805·中国药学杂志 2003年 10月第 38卷第 10期 Chin Pharm J , 2003 October , Vol.38 No.10
6.53)%,(50.69±12.36)%(P<0.05),内膜/中膜厚度比分
别为(0.62±0.32),(1.38±0.38)(P <0.01),提示余甘子可
减少实验性高脂血症所诱发的动脉内膜增生。
2.4 抑制内皮素作用
2.4.1 降低血浆内皮素-1 水平 取血方法同丙二醛另加入
抑肽酶 ,采用放射免疫非平衡法测定内皮素-1 , γ计数仪测定
计算结合百分率。结果显示 ,实验前各组血浆内皮素-1 水平
无显著差异;实验后 4 周 、8 周高脂组分别为(152.03 ±
47.70),(205.31±26.96)ng·L-1 ,给药组分别为(147.22±
28.20),(168.48±32.70)ng·L -1 , 显著低于高脂组(P <0.
05 , P<0.01), 提示余甘子具有保护内皮功能的作用。
2.4.2 降低主动脉内皮素-1 表达 8 周处死家兔进行原位
杂交 ,取主动脉标本冰冻切片 , 加入胃蛋白酶暴露 mRNA 片
段 ,地高辛标记试剂盒标记内皮素-1 基因探针 , 对各组家兔
血管壁 mRNA 进行预杂交 、杂交及显色 , 乙醇脱水 、二甲苯
透明 、中性树胶封片。结果表明 ,高脂组家兔血管壁内皮素-
1的 mRNA 呈高表达 ,阳性颗粒主要分布于增生的内皮细胞
胞浆胞核中 ,呈棕黄色或棕色 , 在内膜斑块下层的增生平滑
肌细胞中也可以见到;给药组家兔血管壁阳性颗粒明显减
少 ,提示余甘子粉有一定的抑制内皮素-1 基因表达的作用。
(收稿日期:2002-11-07)
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·806· Chin Pharm J , 2003 October , Vol.38 No.10 中国药学杂志 2003年 10月第 38卷第 10期