全 文 ：紫外分光光度法测定黑面神药材中总三萜类成分含量
王英晶，彭伟文，曾聪彦，戴卫波
（广州中医药大学附属中山市中医院，广东 中山５２８４０１）
摘　要：目的：运用紫外分光光度法测定黑面神药材中总三萜类成分的含量，从而为有效控制药材质量
提供依据。方法：以药材中主要成分三萜类的熊果酸为考察指标，以５％香草醛－冰乙酸及高氯酸为显
色剂，采用紫外分光光度法在５４７ｎｍ波长处测定样品的吸光度。结果：总三萜类成分在８．２８～４９．６８μｇ
范围内呈良好线性关系，其回归方程为Ｙ＝１０．５０７Ｘ＋０．００７７，ｒ＝０．９９９５，黑面神中总三萜类成分的含
量约为３．８９％。结论：紫外分光光度法适合黑面神药材中总三萜类成分的含量测定，该方法操作简便，
结果稳定，重现性好。
关键词：紫外分光光度法；黑面神；熊果酸；总三萜
中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１３）０６－００５５－０２
收稿日期：２０１３－０３－０５
基金项目：广东省中医药局立项资助项目（Ｎｏ．２０１００７３）；广东省中山市科技局立项资助项目（Ｎｏ．２０１０２Ａ０３３）
作者简介：王英晶（１９８８－），女，广州中医药大学硕士研究生，研究方向为中药制剂研发。
通讯作者：彭伟文（１９６７－），男，广州中医药大学教授，硕士生导师，研究方向为中药制剂研发。电话：０７６０－８８８１５１０６。
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　Ｔｒｉｔｅｐｅｎｏｉｄｉｃ　ｉｎ　Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａｂｙ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
Ｗａｎｇ　Ｙｉｎｇｊｉｎｇ，Ｐｅｎｇ　Ｗｅｉｗｅｎ，Ｚｅｎｇ　Ｃｏｎｇｙａｎ，Ｄａｉ　Ｗｅｉｂｏ
（Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２８４０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｐｅｎｏｉｄｉｃ　ｉｎ　Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｐｅｎｏｉｄｉｃ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ
ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ｕｓｉｎｇ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｓ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｎｄ　５％ｖａｎｉｌｉｎ－ｇｌａｃｉａｌ　ａｃｅｔｉｃ　ａｎｄ　ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｓ　ｃｏｌｏｒ－ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ
ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ（ｒ＝０．９９９５）ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　８．２８～４９．６８μｇ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　Ｙ＝１０．５０７Ｘ＋０．００７７，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ａ－
ｂｏｕｔ　３．８９％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｐｅｎｏｉｄｉｃ　ｆｒｏｍ　Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ．
Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｅｌｙ，ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ，ａｎｄ　ｈａｓ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　Ｍｅｔｈｏｄ；Ｂｒｅｙｎｉａ　Ｆｒｕｔｉｃｏｓａ；Ｕｒｓｏｌｉｃ　Ａｃｉｄ；Ｔｏｔａｌ　Ｔｒｉｔｅｐｅｎｏｉｄｉｃ
　　黑面神系属大戟科黑面神属植物Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ（Ｌ．）
Ｈｏｏｋ．ｆ．的干燥嫩枝叶，主产于广东、广西等地，具“清湿热、
化瘀滞”之功效。黑面神用途广泛，可用于湿疹、皮肤瘙痒等
多种皮肤病的治疗；在广东和广西地区以黑面神合剂入药
用，用于治疗慢性支气管炎，疗效显著；此外，黑面神还作为
湛江蛇药的一种重要成分治疗毒蛇咬伤［１］。经研究发现黑面
神药材中主要含有三萜类、黄酮类、生物碱类、酚类和鞣质等
成分［２］。三萜类成分广泛存在于自然界中，且具有广泛的生
物活性，如抗炎、抗肿瘤、抗菌和抗病毒活性，降低胆固醇、降
血糖活性等［３］。目前已从黑面神药材中分离鉴定了多个三萜
类化合物，包括熊果酸［４］、木栓醇、无羁萜、β－乔木萜醇、乔木
萜酮等［５］。紫外分光光度法广泛用于黄酮类［６］、萜类化合
物［７－８］等的含量测定。本实验采用紫外分光光度法首次测定
了黑面神药材中总三萜类成分的含量。
１　仪器与试药
ＢＳ２２４Ｓ型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司
ｄ＝０．０００１ｇ）；ＵＶ－２５５０型紫外－可见分光光度计（日本岛
津）；ＫＱ３２００Ｅ医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公
司）；ＨＨ－Ｓ４数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；ＲＥ－
２０００Ｂ型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ＳＨＢ－Ⅲ型循
环水真空泵（巩义市英峪华中仪器厂）。
熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：７４２－
９４０５）；黑面神药材购自广州至信药业有限公司，经广州中
医药大学中药鉴定教研室黄海波教授鉴定为大戟科黑面神
属植物Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ（Ｌ．）Ｈｏｏｋ．ｆ．的干燥地上部分；香
草醛；冰乙酸；高氯酸；无水乙醇；蒸馏水。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液制备
精密称取熊果酸对照品２．５ｍｇ，加无水乙醇定容于
１０．０ｍＬ容量瓶中，摇匀，再精密量取１．８ｍＬ所得溶液，加无
水乙醇定容于５．０ｍＬ容量瓶中，摇匀，即得０．０８２８ｍｇ／ｍＬ
的熊果酸对照品溶液。
—５５—
２．２　供试品溶液制备
取黑面神药材粗粉１．０ｇ，加４０．０ｍＬ　９５％乙醇，置
２５０ｍＬ圆底烧瓶中，水浴回流提取１ｈ，滤过，滤液加９５％乙
醇定容于５０ｍＬ容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。
２．３　波长的选择
取０．５ｍＬ熊果酸对照品溶液于５ｍＬ容量瓶中，水浴蒸
干，加入０．２ｍＬ　５％香草醛－冰乙酸溶液和０．６ｍＬ高氯酸，
６０℃反应１０ｍｉｎ，取出，放冷至室温，加冰乙酸定容至５ｍＬ，
摇匀。同时取０．５ｍＬ无水乙醇于５ｍＬ容量瓶中，同法制得
空白对照。用 ＵＶ－２５５０紫外－可见分光光度计在４００～
７００ｎｍ波长范围内扫描，确定最大吸收波长。结果显示，熊
果酸在５４７ｎｍ处有最大吸收，且空白对照无干扰。
２．４　显色剂使用条件选择
２．４．１　５％香草醛－冰乙酸用量考察　精密吸取熊果酸对
照品溶液０．５ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，６份，水浴蒸干后各加
５％香草醛－冰乙酸溶液０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、
０．５ｍＬ、０．６ｍＬ，然后再各加高氯酸０．６ｍＬ，于６０℃水浴加
热１０ｍｉｎ，取出，放冷至室温，加冰乙酸定容至５．０ｍＬ，摇匀，
于５４７ｎｍ处测定吸收值，结果见表１。实验结果表明，５％
香草醛－冰乙酸溶液用量为０．４ｍＬ最佳。
表１　不同香草醛用量的考察结果
５％香草醛－冰乙
酸溶液用量Ｖ（ｍＬ）
吸光度值 ５％
香草醛－冰
乙酸溶液用量Ｖ（ｍＬ）
吸光度值
０．１　 ０．３３２　 ０．４　 ０．４２１
０．２　 ０．３６３　 ０．５　 ０．４０２
０．３　 ０．３９４　 ０．６　 ０．３９４
２．４．２　高氯酸用量考察　精密吸取熊果酸对照品溶液
０．５ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，６份，水浴蒸干后各加５％香草醛－
冰乙酸溶液０．４ｍＬ，再分别加高氯酸０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、
０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、１．０ｍＬ，于６０℃水浴加热１０ｍｉｎ，取
出，放冷至室温，加冰乙酸定容至５．０ｍＬ，摇匀，于５４７ｎｍ处
测定吸收值，结果见表２。实验结果表明，高氯酸用量为
０．８ｍＬ最佳。
表２　不同高氯酸用量的考察结果
高氯酸用量Ｖ（ｍＬ） 吸光度值 高氯酸用量Ｖ（ｍＬ） 吸光度值
０．５　 ０．２８４　 ０．８　 ０．４３２
０．６　 ０．３５２　 ０．９　 ０．４２２
０．７　 ０．４１３　 １．０　 ０．３９６
２．４．３　水浴时间考察　精密吸取熊果酸对照品溶液
０．５ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，６份，水浴蒸干后分别加０．４ｍＬ
５％香草醛－冰乙酸溶液，再分别加０．８ｍＬ高氯酸，于６０℃水
浴分别加热５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、２５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ，取
出，放冷至室温，加冰乙酸定容至５．０ｍＬ，摇匀，于５４７ｎｍ处
测定吸收值，结果见表３。实验结果表明，显色后水浴加热
２０ｍｉｎ最佳。
表３　不同水浴时间的考察结果
水浴时间ｔ（ｍｉｎ） 吸光度值 水浴时间ｔ（ｍｉｎ） 吸光度值
５　 ０．２９６　 ２０　 ０．４４８
１０　 ０．３５２　 ２５　 ０．３９９
１５　 ０．４１２　 ３０　 ０．３６０
２．４．４　水浴温度考察　精密吸取熊果酸对照品溶液
０．５ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，６份，水浴蒸干后分别加０．４ｍＬ
５％香草醛－冰乙酸溶液，再分别加０．８ｍＬ高氯酸，分别置于
４０、５０、６０、７０、８０、９０℃水浴加热２０ｍｉｎ，取出，放冷至室温，
加冰乙酸定容至５．０ｍＬ，摇匀，于５４７ｎｍ处测定吸收值，结
果见表４。实验结果表明，水浴温度为６０℃为最佳。
表４　不同水浴温度的考察结果
水浴温度Ｔ（℃） 吸光度值 水浴温度Ｔ（℃） 吸光度值
４０　 ０．３４４　 ７０　 ０．４４１
５０　 ０．４０５　 ８０　 ０．４１３
６０　 ０．４５２　 ９０　 ０．３８２
２．５　标准曲线绘制
精密吸取熊果酸对照品溶液（０．０８２８ｍｇ／ｍＬ）０．１，０．２，
０．３，０．４，０．５，０．６ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，水浴蒸干后分别加
０．４ｍＬ　５％香草醛－冰乙酸溶液，再分别加０．８ｍＬ高氯酸，于
６０℃水浴加热２０ｍｉｎ，取出，放冷至室温，加冰乙酸定容至
５．０ｍＬ，摇匀，于５４７ｎｍ处测定吸收值，结果见表５。
表５　不同熊果酸标准品用量的测定结果
熊果酸对照
品用量Ｖ（ｍＬ）
吸光度值
熊果酸对照
品用量Ｖ（ｍＬ）
吸光度值
０．１　 ０．０９６　 ０．４　 ０．３５９
０．２　 ０．１８６　 ０．５　 ０．４４６
０．３　 ０．２７３　 ０．６　 ０．５２１
　　以熊果酸的毫克数为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图
得到标准曲线，其回归方程为：ｙ＝１０．５０７ｘ＋０．００７７，ｒ＝
０．９９９５。结果见图１。结果表明，熊果酸在８．２８ ～ ４９．
６８μｇ范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
图１　熊果酸标准曲线
２．６　样品含量测定
取黑面神药材粗粉约１．０ｇ，３批，精密称定，置２５０ｍＬ
圆底烧瓶中，分别加４０ｍＬ９５％乙醇，水浴回流提取１ｈ，滤
过，滤液加９５％乙醇定容于５０ｍＬ容量瓶中，摇匀，作为待
测样品溶液。按“２．４”项下确定的方法准确测定，计算含
量。结果见表６。测定结果表明，３批黑面神药材中总三萜
成分的含量约为３．８９％。
表６　黑面神总三萜含量测定结果
生药量（ｇ） 吸光度值
总三萜含量
（ｍｇ）
平均含量
（ｍｇ）
总三萜百
分含量（％）
１．００２５　 ０．４１５　 ０．０３８８
１．００６２　 ０．４１９　 ０．０３９１　 ０．０３８９　 ３．８９
１．００３５　 ０．４１５　 ０．０３８８
２．７　精密度试验
精密量取待测样品溶液０．５ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，平行
６份，按上述“２．６”项的方法测定，总三萜含量在３８．８～
３９．２μｇ之间，Ｘ±ＳＤ 为（０．０３８８±０．０００７），ＲＳＤ 值为
１．８０％。结果表明本方法的精密度良好。
２．８　稳定性试验
精密量取待测样品溶液０．５ｍＬ于５ｍＬ容量瓶中，平行
６份，按上述“２．６”项的方法测定，测定时间为１２０ｍｉｎ，测定
间隔时间为１０ｍｉｎ。结果表明：平均含量为３．８８％，ＲＳＤ＝
１．１３％（ｎ＝６）。供试品溶液中总三萜成分在０～１２０ｍｉｎ内
稳定性良好。
—６５—
ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定椰露止咳合剂中浙贝母含量
聂聪珍，冯沣彬，利国恩，戴慧贤
（深圳惠民制药有限公司，广东 深圳５１８１１７）
摘　要：目的：建立浙贝母的 ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ含量测定方法，完善椰露止咳合剂的质量标准。方法：采用
ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定贝母素甲、贝母素乙的含量。色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＺＯＲＢＡＸ　ＳＢ－Ｃ１８柱；流动相：乙睛－
０．１％二乙胺溶液（７０∶３０）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测器：蒸发光散射检测器。结果：贝母素甲在０．１０１～
２．５１３ｇ范围内呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９　４），平均加样回收率为９８．８％（ｎ＝９）；贝母素乙在０．０５０～１．
９９８ｇ范围内呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９　０），平均加样回收率为９７．６％（ｎ＝９）。结论：该方法操作简单、
重现性好、结果准确可靠，可用于椰露止咳合剂的质量控制。
关键词：贝母素甲；贝母素乙；椰露止咳合剂；高效液相色谱－蒸发光散射检测法；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１３）０６－００５７－０３
收稿日期：２０１３－０３－１０
作者简介：聂聪珍（１９５５－），男，深圳惠民制药有限公司主管中药师，研究方向为中药制剂。
　　椰露止咳合剂由鱼腥草、浙贝母、苦杏仁等八味中药组
成，具有清肺化痰、止咳利咽的功效，用于肺热久咳挟风所
致的咳嗽痰稠、咽痒、喉痛、口干。原质量标准采用薄层扫
描法对浙贝母中的贝母素甲进行含量测定，操作较为繁琐，
误差较大。本实验采用 ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定浙贝母中的贝
母素甲、贝母素乙的含量，检验结果更准确。
１　仪器与试药
１．１　仪器
高 效 液 相 色 谱 仪：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ 系 列，ＡＬＬＴＥＣＨ
２０００ＥＳ 蒸 发 光 散 射 检 测 器，电 子 分 析 天 平 Ｓａｒｔｏｒｉｕ
ＣＰ２２５Ｄ。
１．２　试剂及试药
贝母素甲对照品（批号：１１０７５０－２００３０５），贝母素乙对照
品（批号：１１０７５１－２００７０９，含量为９９．８％），均购自中国药品
生物制品检定所。供试品：椰露止咳合剂（本厂产品），批号：
１１０６０１、１１０６０２、１１０６０３（规 格 为 １０ｍＬ），１１０６０１、１１０６０２、
１１０６０３、１１０６０４、１１０７０１、１１０７０２、１１０７０３（规格为１８０ｍＬ）。阴
性样品：按处方（缺浙贝母）制法制备，即得（本厂自制）。乙
腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯

。
２．９　加样回收率试验
精密量取供试品溶液０．５ｍＬ于５．０ｍＬ容量瓶中，６份，
按低、高浓度分别加入熊果酸对照品溶液０．２、０．４ｍＬ。按上
述“２．６”的方法加入显色剂并测定吸光度。结果表明：平均回
收率为９７．８６％，ＲＳＤ值为０．６７％（ｎ＝２／６），结果见表６。
表６　回收率试验结果
样品中总三
萜含量（μｇ）
加入标准
品量（μｇ）
吸光
度值
总三萜测
得量（μｇ）
回收率
（％）
平均回
收率（％）
０．５８６　 ５５．０３９　 ９７．４６
３８．９　 １６．５６　 ０．５８５　 ５４．９４４　 ９６．８９
０．５８８　 ５５．２３０　 ９８．６１ ９７．８６
０．７５８　 ７１．４１０　 ９８．１６
３８．９　 ３３．１２　 ０．７５６　 １．２１９　 ９７．５８
０．７５９　 ７１．５０５　 ９８．４４
３　讨论
黑面神药材中主要含有三萜类、黄酮类、生物碱类、酚
类和鞣质等成分。查阅相关文献，已有报道从黑面神中分
离鉴定了５个三萜类化合物，且均为五环三萜类。黑面神
中总三萜含量的测定未见文献报道。本课题以熊果酸作为
对照品，采用常规方法５％香草醛－冰醋酸和高氯酸显色法
进行总三萜成分的含量测定，其含量达３．８９％。实验过程
通过单因素实验优选显色剂用量、反应时间及温度等影响
因素，其结果较稳定，简便快速，重现性较好，可作为黑面神
药材中总三萜的快速检测方法。
参考文献：
［１］　《广东中药志》编辑委员会．广东中药志（第一卷）［Ｍ］．广州：
广东科技出版社，１９９０：３６２．
［２］　ＨＩＲＯＹＵＫＩ　Ｍ，ＲＹＯＪＩ　Ｋ，ＨＩＤＥＡＫＩ　Ｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｅｒｐｅｎｉｃ　ａｎｄ
ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｒｅｙｎｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ［Ｊ］．
Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ，２００４，５２：１０８６－１０９０．
［３］　姚新生，吴立军．天然药物化学［Ｍ］．第４版．北京：人民卫生
出版社，２００３：３０６．
［４］　毛华丽．黑面神化学成分的分离及结构鉴定［Ｄ］．浙江：浙江
工业大学，２００９．
［５］　浮光苗，徐增莱，余伯阳，等．民间药物黑面神化学成分研究
［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（１１）：１０５２－１０５４．
［６］　黄林芳，万德光．川产苦丁茶中总黄酮的含量测定［Ｊ］．时珍
国医国药，２００４，１５（６）：３２７．
［７］　皮文霞，蔡宝昌，郭胜伟，等．分光光度法测定山茱萸制剂中
总三萜酸的含量［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００３，１９（２）：９９．
［８］　张雁冰，王克让，刘宏民，等．马桑叶中总三萜酸的含量测定
［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（４）：５２９－５３０．
（责任编辑：王尚勇）
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