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飞龙掌血多糖清除自由基活性的研究



全 文 :106
田春莲1,蒋凤开2,文赤夫2
(1.林产化工工程湖南省重点实验室,湖南张家界 427000;
2.吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首 416000)
摘 要:目的:研究飞龙掌血多糖的抗氧化活性。方法:采用 Fenton 法、DPPH 法测定飞龙掌血多糖清除羟基自由基
(·OH)、二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)的能力,以 VC 为对照。结果:质量浓度在 0.2~0.4mg /mL范围内,飞龙掌血
多糖随浓度增大,清除·OH 能力增强,且 0.4mg /mL 时清除率高达 73.7%;质量浓度在 5 × 10 -3 ~ 5 × 10 -1 mg /mL 时,
对 DPPH·的清除率为 13.5% ~79.5%,清除作用与浓度呈正相关,当浓度为 0.5mg /mL时,清除率高达 79.5%。结论:
飞龙掌血多糖具有较强的体外抗氧化性能,对·OH、DPPH·具有明显的清除作用。
关键词:飞龙掌血多糖,羟基自由基,DPPH,抗氧化活性
Study on free radical scavenging efficency of
Toddalia asiatica polysaccharides
TIAN Chun- lian1,JIANG Feng-kai2,WEN Chi-fu2
(1.Key Laboratory of Forest Products and Chemical Industry Engineering,Zhangjiajie 427000,China;
2.College of Biology and Environmental Sciences,Jishou University,Jishou 416000,China)
Abstract:Objective:To study the antioxidant activity of polysaccharides from Toddalia asiatica. Methods:The
research adopted Fenton method and DPPH method to determine the scavenging ability of Toddalia asiatica
polysaccharides to ·OH and DPPH· by comparing with VC.Results:In the concentration of 0.2~0.4mg /mL,the
scavenging ability to ·OH was a positive correlation with the concentration of Toddalia asiatica polysaccharides,
when the concentration was 0.4mg /mL,the clearance rate of ·OH was 73.7% .In the concentration of 5 × 10 -3~5 ×
10 -1mg /mL,the clearance rate of DPPH· was 13.5%~79.5%,the scavenging ability to DPPH· was also positively
correlated with the concentration of Toddalia asiatica polysaccharides,when the concentration was 0.5mg /mL,the
clearance rate of DPPH· was 79.5% . Conclusions:Toddalia asiatica polysaccharides had strong antioxidant
properties and possessed a clear scavenging effect to ·OH and DPPH·.
Key words:Toddalia asiatica polysaccharides;hydroxy radical;DPPH;antioxidant activity
中图分类号:TS201.2 + 3 文献标识码:A 文 章 编 号:1002-0306(2011)11-0106-03
收稿日期:2011-08-11
作者简介:田春莲(1970-) ,女,副教授,硕士,主要从事资源植物保护
与利用研究工作。
基金项目:湖南省科技计划资助项目(2010TP4007-1) ;湖南省高校
“林产资源化学与林化产品开发”科技创新团队支持计划资
助(湘教通(2010)212 号)。
飞龙掌血(Toddalia asiatica Lam)为芸香科植
物,别名勒沟、血见飞、散血丹。主要分布在湖南、四
川、贵州等地。传统医学认为其具有舒筋通络、活血
散瘀、消肿止痛的作用,常用于治疗风湿痹痛、胃痛、
痛经、跌打损伤[1]。现代医学研究表明,其具有镇痛
抗炎、抗心肌缺血、治疗家畜胃肠炎等作用[2-4]。目
前国内对飞龙掌血的化学成分[5-8]、飞龙掌血提取物
的抑菌作用[9]、飞龙掌血多糖提取工艺[10]已有报道,
但对飞龙掌血多糖的体外抗氧化活性未曾深入研
究。因此,本实验以飞龙掌血为原料提取多糖,利用
紫外分光光度计,研究飞龙掌血多糖对活性氧自由
基如羟基自由基(·OH)、DPPH·的清除作用,以期
为飞龙掌血多糖药物及功能性食品开发提供理论
依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
飞龙掌血(Toddalia asiatica Lam) 于 2009 年采
于张家界,经廖博儒研究员鉴定,取其根洗净,60℃
烘干,粉碎,过 40 目筛,于干燥器中保存备用;DPPH
紫色结晶,上海华蓝化学科技有限公司;其他试剂
为 AR。
UV-160 型紫外可见分光光度计 日本岛津;
BM400 型数显电热恒温水浴锅 日本 YAMATO;
AED-220 型电子天平 日本 SHIMADZU。
1.2 实验方法
1.2.1 飞龙掌血多糖的提取 参照文献[10]的方法
提取。称取一定量的飞龙掌血粉末,按料水比为
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2011.11.009
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1∶20,在 60℃下浸提 2h,抽滤,浓缩,醇沉,离心,冷冻
干燥得飞龙掌血粗多糖。
1.2.2 羟基自由基(·OH)清除率的测定 采用邻
二氮菲 Fe2 +-H2O2 法
[11-12],按下列公式计算清除率。
清除率(%)=
(A4-A3)-(A2-A0[ ])
(A1-A2)
× 100%
其中:A0 为空白参比的吸光值;A1 为未损伤管
的吸光值;A2 为损伤管的吸光值;A3 为样品参比的
吸光值;A4 为样品管的吸光值。
1.2.3 DPPH自由基(DPPH·)清除率的测定 参照
文献[14]的操作,分别吸取 2mL 一定浓度的飞龙掌
血多糖、VC、茶多酚溶液,各加入 2 × 10
-4 mol /L 的
DPPH·溶液 2mL,无水乙醇 2mL,混匀后 25℃水浴
30min,以溶剂为空白,在 517nm处测吸光度 Ai,同时
测定 2mL上述溶液与 2mL溶剂混合后的吸光度 Aj,
再测定 DPPH·溶液 2mL与 2mL溶剂混合后的吸光
度 Ac,平行测定 3 次,计算清除率。
清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]× 100%
2 结果与分析
2.1 羟基自由基(·OH)清除率
从图 1~图 2 可知,所选浓度范围内,VC、飞龙掌
血多糖对·OH均有较强的清除作用,且清除率与物
质的质量浓度呈正相关。两种物质对·OH 清除率
的强弱为:VC >飞龙掌血多糖。
图 1 VC 对羟基自由基清除能力的影响
图 2 飞龙掌血多糖对羟基自由基清除能力的影响
2.2 DPPH自由基(DPPH·)清除率
DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其
孤对电子在 517nm 附近有强吸收(呈深紫色) ,当有
机清除剂存在时,孤对电子被配对,吸收消失或减
弱,通过测定吸收减弱的程度,可评价自由基清除剂
的活性。从图 3~图 4 可知,两种物质对 DPPH·均
有良好的清除作用,且在实验浓度范围内,清除率与
浓度呈线性关系。清除 DPPH·的能力大小为:VC >
飞龙掌血多糖。
3 结论
飞龙掌血多糖对不稳定自由基·OH 和稳定性
图 3 VC 对 DPPH自由基清除能力的影响
图 4 飞龙掌血多糖对 DPPH自由基清除能力的影响
自由基 DPPH·均具有较强的清除活性,尽管比 VC
稍差一些,但 VC 在水溶液中易被空气中的氧所氧
化,在碱性介质或受热情况下很不稳定,且在植物体
内含量较低。飞龙掌血是湘西地区广泛分布且功能
独特的药用植物,从飞龙掌血中提取的多糖作为天
然自由基清除剂具有潜在的开发价值。
参考文献
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唐忠厚,朱晓倩,李 强,李洪民,徐 飞
(中国农业科学院甘薯研究所,江苏徐州 221121)
摘 要:研究快速测定甘薯淀粉中直链淀粉含量的方法,分析不同基因型甘薯直链淀粉含量差异。结果显示,该法测
定直链淀粉与表观直链淀粉呈高度相关性(r = 0.9992) ,在取样 0.50g、不脱脂的情况下,5 份甘薯样品的直链淀粉含量
与脱脂后的测定结果相比,误差小于或接近 2%,接近国标允许的误差范围(GB8648-87) ,表明该法适合于甘薯直链淀
粉含量测定。不同品种甘薯直链淀粉含量存在一定差异,变幅为 14.22%~35.12%,其中以黄心型变异系数最大,最有
可能筛选到高直链淀粉品种或低直链淀粉品种。
关键词:甘薯,直链淀粉含量,测定方法,基因型差异
Genotype variation in amylose content of sweetpotato
TANG Zhong-hou,ZHU Xiao-qian,LI Qiang,LI Hong-min,XU Fei
(Sweetpotato Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Xuzhou 221121,China)
Abstract:To study on rapid determination of amylose content in sweetpotato starch,the difference were assayed
for genotypes variation in amylose content of sweetpotato.The results showed that it was highly correlated between
true amylose and apparent amylose using the method(r = 0.9992) ,the error of five various samples of sweetpotato
amylose content using degreasing were less than or near 2% of samples by using 0.50g,non-degreasing,which
was accepted according to GB8648-87,indicated it was fit to the determination of amylose content in sweetpotato
starch .There were some differences of amylose content among 50 sweetpotato varieties,which ranged from
14.22%~35.12%,the largest coefficient of variation from yellow- flesh varieties,which was the most likely to be
screened with high or low amylose varieties.
Key words:sweetpotato;amylose content;determination;genotype variation
中图分类号:TS235.2 文献标识码:A 文 章 编 号:1002-0306(2011)11-0108-03
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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[14]许申鸿,杭瑚 .一种筛选自由基清除剂的简便方法[J].
中草药,2000,31(2) :96-97.
甘薯是世界上最重要的粮食、饲料和工业原料
作物之一,也是我国最大的地下根茎淀粉作物,我国
每年种植面积约 600 万 hm2,约占世界甘薯种植面积
的 66%,年产量约 1.002 亿 t,占世界甘薯总产量的
85%[1]。目前甘薯作为新能源作物倍受世人关注,其
淀粉特性研究日益受到重视,而直链淀粉含量是决
定甘薯淀粉品质优劣的重要因素,是淀粉最重要的
品质性状之一[2]。近年,甘薯直链淀粉含量的重要性
已被人们所认识,国内外学者进行诸多研究[3-14],但
其测定存在前预处理复杂、污染重、误差大、测定成
本高以及应用性差等问题。本文针对甘薯淀粉特
性,在实践中综合考虑复杂性、准确性、实用性等多
种因素,以国标 GB8648-87 为基础[15],从取样量、样
品预处理过程及测定条件等方面探索适合甘薯直链
收稿日期:2010-07-12 * 通讯联系人
作者简介:唐忠厚(1976-) ,男,助研,主要从事甘薯功能物质提取及
品质分析。
基金项目:农业部行业计划项目(NYHYZX07-012-01C)。
淀粉含量测定的方法,研究不同基因型甘薯直链淀
粉的含量差异,以期提供快速、简便、微量的甘薯直
链淀粉测定方法,为甘薯品质育种提供实验方法和
理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
50 份甘薯样品 材料根据不同肉色、生物特性
等,选择来自甘薯鉴定圃、国家区试、北方区试、省区
试及国家甘薯资源库,由中国农业科学院甘薯研究
所提供;直链淀粉,支链淀粉标样 购自 SIGMA 公
司;2%碘试剂 称取碘化钾 1.0g,溶于少量蒸馏水,
再加碘 0.1g,待溶解后用蒸馏水稀释定容至 50mL,现
配现用,避光保存;其它试剂均为分析纯。
UV- 2450 型分光光度计 日本岛津公司;
AB204 - E 型电子分析天平 瑞士 METTLER
TOLEDO;SHZ-82 型恒温振荡器 国华企业。
1.2 实验方法
1.2.1 标准曲线绘制 直链淀粉标准溶液:称取