全 文 ：mg/g。野生四叶参样品中各氨基酸的含量见表 3。
表 3　野生四叶参样品中各种氨基酸测定结果
组分 含量 /(mg· g-1) RSD/%
天冬氨酸 3.42 5.10
谷氨酸 16.60 8.02
丝氨酸 2.39 9.13
组氨酸 3.52 9.04
甘氨酸 15.48 9.61
苏氨酸 0.64 3.84
丙氨酸 0.54 6.52
牛磺酸 2.57 7.16
缬氨酸 2.51 2.88
苯丙氨酸 1.15 3.90
异亮氨酸 0.81 6.19
亮氨酸 1.86 7.07
3　讨论
作者采用反相高效液相色谱法测定野生四叶参
中氨基酸 ,实验中用无水乙醚对样品进行脱脂 ,以减
少脂肪成分对氨基酸分离时可能产生的干扰。用盐
酸水解样品中蛋白质时加入了一定量新蒸馏的苯
酚 ,可防止苯丙氨酸和酪氨酸分子中的苯环卤化 ,同
时苯酚的加入还有利于防止丝氨酸和苏氨酸的分
解 。醋酸盐 -醋酸 -甲醇溶液采用梯度洗脱方式 ,使
各组分都能在合适的极性条件下流出色谱柱而得到
较好的分离并得到较完整的色谱图 ,与混合氨基酸
标准样的分离色谱图相比 ,各氨基酸的保留时间彼
此接近 。本研究建立的分析方法具有分离效能高 ,
分析速度快 ,准确度高等特点 ,适用于野生四叶参样
品中氨基酸含量的分析。
氨基酸广泛应用于化学 、生物 、医药 、农业 、食品
等领域 ,是动植物体内合成生物蛋白质的主要原料 ,
某些氨基酸还能够参与机体内的代谢 ,同时在基因
表达控制方面和激素一样起着重要的作用。河南省
信阳市信阳县大别山野生四叶参中含有的氨基酸种
类至少有 12种 ,含量为 51.49 mg/g,其中包括 5种
人体必需氨基酸 ,其含量 6.95 mg/g。该分析结果
为河南省野生四野参开发为新资源食品提供了科学
的依据。
参考文献
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(2007-05-16收稿　责任编辑徐春燕)
＊河南省科委攻关基金资助项目　0224630011;0624420031
雀儿舌头中多糖含量测定＊
侯钦东 1)　陈彦君 2)　龙　跃 1)#
1)郑州大学化学系 郑州 450001　2)焦作大学生环系 焦作 457102
#通讯作者 ,男 , 46岁 ,硕士 , 教授 ,研究方向:天然产物化学研究
　　关键词　雀儿舌头;紫外分光光度;多糖
　　中图分类号　O637.32
·104· 郑州大学学报(医学版)　2008年 1月　第 43卷　第 1期DOI :10.13705/j.issn.1671-6825.2008.01.009
　　摘要　目的:测定雀儿舌头中多糖的含量。方法:根据苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖 、多糖中的己糖 、戊糖及
其糖醛和糠醛酸起显色反应 ,采用紫外分光光度法测定雀儿舌头中多糖的含量。结果:该法的线性范围为 40 ～ 320
μg, r=0.997 7,平均回收率为 102.5%, RSD为 1.48%。结论:该法简便 、快速 、准确 、重现性好 ,可作为雀儿舌头中
多糖含量的测定方法。
DeterminationofthecontentofthedeoxidizesugarinLeptopusChinensis
(Bunge)Pojark
HOUQindong1), CHENYanjun2), LONGYue1)
1)DepartmentofChemistry, ZhengzhouUniversity, Zhengzhou450001　2)DepartmentofBiology, Chem-
istryandEnvironment, JiaozuoUniversity, Jiaozuo457102
　　Keywords　LeptopusChinensis(Bunge)Pojark;ultravioletspectrophotometric;deoxidizesugar
　　Abstract　Aim:TodeterminethecontentofthedeoxidizesugarinLeptopusChinensis(Bunge)Pojark.Methods:
ThecontentofthedeoxidizesugarinLeptopusChinensis(Bunge)Pojarkwasdeterminedusingsulfuricacid-carbolicacid
method.Results:Thelinearrangewas40 ～ 320 μg(r=0.997 7).Theaveragerecoveryratewas102.5%.RSDwas
1.48%.Conclusion:Thismethodissimple, quick, accurateandreproducible, thuscanbeusedfordeterminingthecon-
tentofthedeoxidizesugarinLeptopusChinensis(Bunge)Pojark.
　　雀儿舌头是大戟科黑钩叶属植物 (Leptopus
Chinensis(Bunge)Pojark),别名黑钩叶 、草桂花 、黄
杨皮(湖北)、一叶秋(神农架),为一年生草本植物 ,
广泛分布于吉林 、湖北 、河南 、陕西 、山西 、甘肃 、山
东 、湖北 、四川 、云南 、西藏等地。其根性温 ,中医认
为具有理气止痛 ,治疗胃病 、腹泻下痢等作用。民间
还用来治疗黄疸 、胃炎 、水肿等多种疾病 [ 1-2] 。雀儿
舌头中的主要化学成分之一为多糖。本研究中作者
采用改良的苯酚-硫酸法 [ 3]对雀儿舌头中所含的多
糖进行了测定。
1　材料 、方法与结果
1.1　试剂与仪器　7230G分光光度计(上海精密科
学仪器有限公司),电热真空干燥箱(上海市实验仪
器总厂), SH2 -D(Il1)循环水式真空泵(巩义市英峡
予华仪厂),旋转蒸发仪(德国 BǜCHIRotavaporR-
200), SartoriusBS210S电子天平(北京塞多利斯天平
有限公司), SK250H超声清洗器(上海科导超声仪
器有限公司), HH-4型数显恒温水浴锅 , CS-101-2
型真空干燥箱。铝片 ,无水碳酸钠 ,苯酚 ,蒽酮 ,体积
分数 95%的乙醇 , 硫酸 、氢氧化钠 、盐酸均为分析
纯 。标准品为药用纯葡萄糖。
1.2　雀儿舌头中多糖含量的测定　采用苯酚-硫酸
法 。称取 100 g苯酚 , 0.05 g碳酸氢钠和 0.1 g铝
片 ,置圆底烧瓶中加热蒸馏 ,收集 182℃的馏分 。冷
却后取苯酚馏分 5.00 g,加蒸馏水 100 mL溶解 ,置
棕色瓶中保存备用。
1.2.1　标准曲线的绘制:精密吸取浓度为 200 g/L
的葡萄糖标准溶液 0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、 0.8
mL、1.0mL、1.2 mL、1.4 mL,分别置于 10 mL试管
中 ,加 2mL蒸馏水 ,摇匀 ,另取 2 mL蒸馏水作空白
对照 。各管分别加入 1.0 mL苯酚溶液 ,混匀 ,迅速
加入浓硫酸 5mL,摇匀后放置 30 min,取出 ,置冷水
中冷却 ,于 490 nm处测定吸光度 。
　　以葡萄糖的体积为横坐标 ,吸光度值为纵坐标 ,
作图得到标准曲线 ,其回归方程为:Y=0.248 6X+
0.039 3, R2 = 0.997 7 ,表明葡萄糖在 40 ～ 320 μg
范围内呈良好线性关系 。
1.2.2　加样回收率实验:精密吸取 0.1 mL样品溶
液 ,加入葡萄糖标准液 0.1 mL,置于 10 mL带塞试
管中 ,加 2 mL蒸馏水 ,摇匀 ,再加入 1.0 mL苯酚溶
液 ,混匀 , 迅速加入浓硫酸 5 mL, 摇匀后放置 30
min,取出 ,置冷水中冷却 ,于 490 nm处测定吸光度 ,
代入回归方程计算加样回收率 ,得出平均回收率为
102.5%, RSD=1.48%。
1.2.3　样品中总糖[ 4]及还原糖含量测定:称取雀
儿舌头多糖 10.00 mg,溶解后移至 100 mL容量瓶
中定容备用。精密吸取 0.4mL苯酚 ,加水 1.6 mL,
按 1.2.1中方法测定吸光度 ,依回归方程求出多糖
中葡萄糖浓度 ,按公式 f=W/(C×D)计算 ,式中 W
为多糖质量 , C为多糖中测量出的葡萄糖浓度 , D为
多糖的稀释因素 ,得出 f=1.229。
精密称取雀儿舌头样品粉末 6.0 g,置于烧瓶
中。采用热水浸提法:不经乙醇脱脂 ,直接于 90 ℃
·105·JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences)　Jan.　2008　Vol.43　No.1
水中提取 2h,趁热过滤 ,滤饼用热水洗涤(30 mL×
3),洗液并入滤液 ,合并滤液 ,减压浓缩后定容备
用 。按 1.2.1中方法测定吸光度 ,依回归方程计算
待测样品溶液中葡萄糖的浓度 ,按下式计算样品中
总糖的含量:总糖含量 =(C×D×f/W)×100%。
经 5次平行实验测得雀儿舌头中总糖的平均含量为
1.465%。
精密称取雀儿舌头样品粉末 6.0 g,置于烧瓶
中 ,不经乙醇脱脂 ,直接于 90 ℃水中提取 2 h,趁热
过滤 ,滤饼用热水洗涤(30 mL×3),洗液并入滤液 ,
合并滤液 ,减压浓缩至 10mL,加入无水乙醇使乙醇
含量达 80%,静置过夜 ,多糖沉淀 ,过滤除去沉淀 ,
将乙醇除去后 ,加水溶解至 100 mL,摇匀。精密量
取 1.0mL,按 1.2.1中方法测定吸光度 ,依回归方
程计算待测样品溶液中葡萄糖的浓度 ,按下式计算
样品中还原糖的含量:还原糖含量 =(C×D×f/W)×
100%。经 5次平行实验测得雀儿舌头中还原糖含量
为 0.728%,计算得出多糖含量为 0.737%。
2　讨论
苯酚-硫酸法测定多糖含量为一经典方法 [ 5] ,但
文献报道的多糖测定实际为总糖的测定 ,而且苯酚-
硫酸法需要使用沸腾的水浴反应 10 ～ 15 min后才
能进行测定 ,步骤繁琐 、速度慢 。对此作者进行了一
些改进 ,即沉淀并分离多糖再以同法测定溶液中的
还原糖;由于硫酸和水发生水合作用释放出大量的
热量 ,使反应系统自行升温 ,达到充分显色 ,故可免
去水浴加热步骤 ,在室温下直接显色 。实验证明该
法可行。另外 ,作者在预实验中对多糖的 5种提取
方法:醇提取法 、水浸提取法[ 6] 、碱浸提取法 、酸浸
提取法及超声提取法 [ 7]进行了比较 ,结果显示 ,碱
液所提取的多糖含量明显高于其余几种 ,推测与该
植物体内存在的大量酸性物质有关 ,所提取的物质
应不仅仅是多糖 ,说明该数据不可信 。其余 4种方
法相比 ,以热水提取多糖的收率最高 ,说明在提取雀
儿舌头中的多糖时 ,应该用热水浸提法 。
参考文献
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(2007-05-14收稿　责任编辑徐春燕)
＊贵州省科技攻关基金资助项目　983055
人甲状腺肿瘤组织中 c-MetmRNA和蛋白的表达＊
尚立芝 1, 2)　李德祥 1)　王建人 2)#　崔明霞 3)
1)遵义医学院病理学教研室 遵义 563003　2)河南中医学院生理学科 郑州 450008　3)河南省胸科医院 B超科 郑州 450008
#通讯作者 ,女 , 55岁 ,副教授 , 研究方向:肿瘤分子生物学 , E-mail:jrwang2004@126.com
　　关键词　甲状腺肿瘤;c-Met;原癌基因
　　中图分类号　R730.23
　　摘要　目的:检测甲状腺良恶性肿瘤组织中 c-MetmRNA和蛋白的表达。方法:应用原位杂交技术和免疫组织
化学 SP法检测 50例甲状腺腺癌(甲状腺乳头状腺癌 20例 , 滤泡状腺癌 20例和嗜酸细胞腺癌 10例)、50例甲状腺
腺瘤(甲状腺乳头状腺瘤 20例 , 滤泡状腺瘤 20例和嗜酸细胞腺瘤 10例)及 10例瘤旁上皮组织中 c-MetmRNA及
蛋白的表达。结果:甲状腺腺癌组织中 c-MetmRNA(78%)和蛋白(84%)阳性表达率均明显高于腺瘤组织(48%,
60%)(P<0.01), 且滤泡性腺癌组织中(70%)均明显高于滤泡性腺瘤组织(30%)(P<0.05)。 结论:甲状腺癌组
·106· 郑州大学学报(医学版)　2008年 1月　第 43卷　第 1期