全 文 ：民族药余甘子对D-半乳糖胺致
小鼠急性肝损伤的影响
李　萍　谢金鲜　林启云
(广西中医学院药理教研室 , 广西　南宁　530001)
摘　要　方法:本实验利用 D-半乳糖胺 (D-Gal-N)一次性腹腔注射 (ip)诱发小白鼠急性肝损伤模型 ,
通过测定血清谷丙转氨酶 (ALT)、 谷草转氨酶 (AST)、 碱性磷酸酶 (ALP)、 超氧化物歧化酶 (SOD)、 丙二醛
(MDA)及肝糖元 、 肝脏系数 , 观察余甘子水提醇沉物对肝损伤的保护作用。结果:余甘子水提醇沉物各剂量组
成均降低血清ALT、 AST、 ALP、 MDA 含量和肝脏系数 , 提高血清 SOD活性及促进肝糖元合成 , 并可改善肝脏组
织病理损伤 , 其作用呈剂量依赖性。结论:余甘子水提醇沉物有一定程度抗自由基与抗脂质过氧化作用 , 对 D-
Gal-N所致的急性损伤具有明显的保护作用。
关键词　余甘子　D-Gal-N造模　护肝作用
　　余甘子 (Phyllan thusemblic-
ah L.)为药食两用佳品 , 具有
清热凉血 、消食健胃 、生津止咳
之功效 , 是联合国卫生组织指定
在全世界推广种植的植物 , 世界
上有 17个国家及民族在自己的
医疗实践中使用余甘子 , 其中较
多用于消化不良 , 腹泻 , 咳嗽 ,
肝炎 , 腹水 , 便秘 , 肿瘤 , 发
热 , 皮肤病 , 高血压 , 胆囊炎及
癌症等疾病〔1〕。迄今为止 , 国内
外现代药理学研究已从抗炎 、 抗
菌 、 抗病毒 、抗衰老 、抗癌 、 抗
肿瘤 、抗突变 、 抗高血压 、降低
血脂 、解毒〔2～ 4〕等方面验证了余
甘子的治疗功效 , 但尚未见有余
甘子护肝作用实验研究的文献报
道。因此我们对此药进行了抗小
鼠D-Gal-N 实验性肝损伤的
研究 , 并与联苯双酯进行对照 ,
探讨其抗肝损伤作用及其机理 。
1　材料与方法
1.1　动物　昆明种小白鼠 , 体
重 20 ～ 25g , 雌雄兼用 , 由本院
动物实验中心提供 , 桂医动字第
11004号 。
1.2　药物　新鲜余甘子 , 清水
洗净 , 去核取肉加 10 倍果肉量
蒸馏水浸泡 30min , 煎煮 2 次 ,
过滤 , 合并滤液 , 浓缩至小体
积 , 加入 4%明胶水溶液 , 不断
搅拌 , 加热 , 过滤 , 去渣 , 用 3
倍 95%乙醇沉淀 24h , 过滤 , 过
渣 , 浓缩至 2g/ml分装备用 , 临
用前用蒸馏水稀释至所需浓度 。
联苯双酯滴丸:山东省德州制药
厂 , 批号 20000309。
1.3　试剂　D-Gal-N , 广州市
医药工业研究所 , AR , 批号
951206。ALT 试剂盒 、 AST 试剂
盒 、 ALP试剂盒 , 上海申能生物
技术有限公司 , 批号分别为
980903 、 980712 、 980525。 SOD
试剂盒 、 MDA 试剂盒 , 南京建
成生物工程研究所 , 批号分别为
970520 、 961203。
1.4　分组及给药方法〔5〕　取小
鼠 60只 , 随机分为 6 组 , 每组
10只 , 设 ①～ ③组为余甘子水
提醇沉物高 、 中 、 低剂量 组
(7.0 , 3.5 , 1.8g/kg);④组为联
苯双酯阳性对照组 (45mg/kg);
⑤组为 D-Gal-N 模型组对照
组 (蒸馏水 , 20ml/kg);⑥组为
正常对照组 (蒸馏水 , 20ml/
kg)。每日灌胃 1次 , 连续给药
10d , 于末次给药后 1h后 , 除正
常对照组外 , 其他各组小鼠均
ip10%D-Gal-N 溶液 (600mg/
kg), 禁食不禁水 , 24h 后摘眼
球采血 , 取肝备检 。
1.5　检测项目
1.5.1　肝糖元测定:按蒽酮法
进行〔6〕。
1.4.2　血清 ALT 、 AST 、 ALP 活
性测定:分别按照 ALT 试剂盒 、
AST试剂盒 、 ALP 试剂盒使用说
明书操作 , 用 TBA-120型全自
动生化分析仪测定 。
1.5.3　血清 SOD 、 MDA 含量测
定:按照 SOD 试剂盒 、 MDA 试
剂盒的使用说明书操作 。
1.5.4　计算肝脏系数:取肝脏
称重 , 肝脏系数 =(肝脏重量/
体重)×100%。
1.5.5　肝组织病理学检查:取
经中性福尔马林溶液固定的肝组
织标本 , 石蜡包埋 , 超薄切片厚
5μm , 作HE染色 , 光镜下观察。
1.6　数据处理　实验数据以 X
±S表示 , 两组间均数差异采用
161中国民族民间医药杂志 2003年总第 62期
t检验。
2　结果
2.1　余甘子水提醇沉物对 D-
Gal-N 所致急性肝损伤小鼠血
清中 ALT 、 AST 、 ALP 活性的影
响:模型组 ALT 、 AST 、 ALP 明
显高于正常组 (P <0.01), 说
明造模成功 。与模型组比较 , 余
甘子各剂量组均能显著降低小鼠
血清中 ALT 、 AST (P <0.05 ～
0.01);高 、 中剂量组可明显降
低小鼠血清中 ALP 活性 (P <
0.05 ～ 0.01), 而低剂量组则无
显著性差异 (P <0.05)。见表
1。
表1　各组小鼠血清中 ALT、 AST、 ALP 活性检测结果比较 (X±s , n=10)
组　别 剂　量(g/ kg)
ALT
(U/ dl)
AST
(U/ dl)
ALP
(U/dl)
正常对照 — 38.5±8.3 107.7±15.1 16.7±2.0
模型对照 — 386.1±67.7■ 218.2±53.3■ 25.3±5.9■
联苯双酯 0.045 259.1±34.8★ 117.7±18.6★ 17.6±3.3★
余甘子 7.0 279.0±39.9★ 121.0±23.9★ 17.6±3.4★
余甘子 3.5 299.4±46.9◇ 140.1±27.6★ 19.5±4.7◇
余甘子 1.8 324.4±47.0◇ 173.4±28.2◇ 20.8±5.1
　　注:与正常组比较 , ■P <0.01;与模型组比较 , ★P<0.01　◇P <0.05
2.2　余甘子水提醇沉物对 D-
Gal-N 所致急性肝损伤小鼠肝
糖元及肝脏系数的影响:与正常
组比较 , 模型组小鼠肝糖元含量
明显降低 , 肝脏系数明显提高
(P<0.01)。与模型组比较 , 余
甘子各剂量组均能明显提高小鼠
肝糖元的含量 (P <0.05 ～
0.01);高 、 中剂量组能明显降
低肝脏系数 (P <0.05 ～ 0.01),
但小剂量组则无明显差异 (P >
0.05)。见表2 。
表 2　各组小鼠肝糖元衣肝脏系数检测结果比较 (X±s , n=10)
组　别 剂　量(g/ kg)
肝糖元
(g/100g 肝组织) 肝脏系数
正常对照 — 0.0875±0.011 4.29±0.33
模型对照 — 0.0550±0.022■ 6.19±0.54■
联苯双酯 0.045 0.1254±0.040★ 5.05±0.33★
余甘子 7.3 0.1228±0.042★ 5.16±0.37★
余甘子 3.6 0.1086±0.033★ 5.59±0.47◇
余甘子 1.8 0.0834±0.035◇ 6.07±0.44
　　注:与正常组比较 , ■P <0.01;与模型组比较 , ★P<0.01　◇P <0.05
2.3　余甘子水提醇沉物对 D-
gal-N所致急性肝损伤小鼠血清
中 SOD 、 MDA 活性的影响:模
型组 SOD 明显低于正常组 , 而
MDA 明显高于正常组 (P <
0.01)。与模型组比较 , 余甘子
各剂量组均能明显提高小鼠血清
SOD活性 , 并能显著低 MDA 含
量 (P <0.05 ～ 0.01)。见表3 。
2.4　病理学检查:正常组镜下
可见肝细胞索结构清晰 , 肝小叶
结构正常 , 未见肝细胞变性 、 坏
死等病理变化。模型组肝细胞弥
漫性坏死 , 肝细胞境界不清楚 ,
呈水样变性 , 有明显的点 、灶状
坏死 , 严重的呈带状坏死 , 间质
内可见淋巴细胞和单核细胞的浸
润 。余甘子低剂量组肝细胞损伤
程度较模型组略轻 , 仍有点状及
带状坏死 , 并伴有间质炎;中剂
量组肝细胞无明显带状坏死 , 但
有轻度点 、 灶状坏死和间质炎;
高剂量组的肝脏病变明显减轻 ,
无明显的点 、 灶状坏死 , 肝细胞
较正常。见表 4。
162 中国民族民间医药杂志 2003年总第 62期
表 3　各组小鼠血清 SOD、 MDA 检测结果比较 (X±s , n=10)
组　别 剂　量(g/ kg)
SOD
(nmol/ ml)
MDA
(nmol/ml)
正常对照 — 47.20±3.11 5.19±1.23
模型对照 — 29.05±8.72■ 14.77±4.22■
联苯双酯 0.045 44.13±5.64★ 6.26±2.24★
余甘子 7.3 43.81±5.83★ 7.75±3.48★
余甘子 3.6 39.56±6.13★ 9.89±3.12★
余甘子 1.8 36.88±5.25◇ 11.01±2.76◇
　　注:与正常组比较 , ■P <0.01;与模型组比较 , ★P<0.01　◇P <0.05
表 4　各组小鼠肝脏病理改变比较 (n=10)
肝细胞变性 肝细胞坏死 炎症反应
- + ++ +++ - + ++ +++ - + ++ +++
正常对照组 10 0 0 0 10 0 0 0 8 2 0 0
模型对照 0 1 5 4 0 1 4 5 0 4 3 3
联苯双酯 1 7 2 0 1 6 3 0 2 7 1 0
余甘子高剂量组 1 6 3 0 1 5 4 0 1 8 1 0
余甘子中剂量组 0 4 5 1 0 5 4 1 1 6 3 0
余甘子低剂量组 0 2 7 1 0 3 6 1 0 5 4 1
　　注:-表示肝组织无肿胀 、 坏死及炎性细胞浸润;+表示轻度肝细胞肿胀 , 单个肝细胞坏死 , 或少许炎性细胞浸润;++表示中度肝
细胞肝胀 , 或肝细胞灶性坏死 , 或明显炎性细胞浸润;+++表示重度肝细胞肝胀 , 或肝组织片状坏死 , 或大量炎性细胞浸润。
3　讨论
血清ALT 、ALP 水平的高低
可灵敏反映肝细胞变性 、 坏死的
程度 , 其大部分存在于细胞浆
中。AST 主要位于线粒体 , 少部
分位于细胞浆。当肝脏轻度受
损 , 细胞膜通透性开始增加时 ,
胞浆内 ALT 、 AST 、 ALP 释放入
血 , 而线粒体内 AST 则不释放 ,
只有肝细胞严重受损时才释放入
血〔7〕 。从实验结果看余甘子水提
醇沉物能明显抑制 D-Gal-N
所致动物肝损伤后血清中的
ALT 、AST 和 ALP 的升高 , 说明
余甘子能较好的保护肝细胞 , 防
止细胞膜损伤 , 从而阻止 ALT 、
AST 和 ALP逸出细胞外 。
肝损伤时 , 肝糖元合成减
少 , 同时肝细胞弥漫性肿胀 , 肝
脏体积增大 、加重 , 肝脏系数显
著增加。实验结果表明 , 余甘子
水提醇沉物能明显提高 D-Gal
-N所致肝损动物肝糖元含量 ,
显著降低肝脏系数;明显减轻肝
细胞变性 、 坏死以及炎症反应 。
本实验研究证明余甘子对 D -
Gal所致急性肝损伤有较好的防
护作用 , 能改善肝功能 、 促进肝
糖元合成及改善肝组织病理状
态 , 为临床治疗病毒性肝炎提供
了实验依据 。
本实验还作了余甘子抗肝损
伤的机理探讨———抗脂质过氧化
(LP)。D-Gal-N 是肝细胞的磷
酸尿嘧啶核苷的干扰剂 , 可造成
肝弥漫性坏死和炎症 , 与临床病
毒性肝炎的病理变化相似 , 且有
较好的重现性。其致毒机理是在
代谢过程中与体内尿苷二磷酸
(UDP)大量结合形成稳定的尿
苷衍生物 , 造成体内 UDP 耗竭 ,
从而导致依赖磷酸尿苷进行生物
合成的核酸 、 糖蛋白 、 糖元等物
质合成减少和受阻 , 最终导致肝
损伤甚至死亡〔8〕;另外 , D-Gal
-N还可以引起肝细胞内 Ca2++
增多和 Mg2++减少 。Ca2++增多
会抑制线粒体的呼吸功能 , 激活
磷酯酶 , 分解膜磷脂 , 破坏溶酶
体膜 , 使蛋白水解酶释放 , 并使
黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化
酶 , 加速氧自由基 (OFR)产
生 , OFR与肝细胞膜上的不饱和
脂质共价结合 , 导致 LP 反应 ,
产生酯质过氧化物如 MDA , 造
成肝细胞损伤加剧。因而 MDA
的量常常可反映机体内 LP 的程
度 , 间接地反映出细胞受损的程
度〔9〕 。在生理状态下 , 人体也有
OFR的产生 , 但体内存在抗氧化
酶系统 , 能清除之 , 不致于引起
组织细胞出现过氧化导致损伤 ,
SOD是抗氧化酶系统的主要代
163中国民族民间医药杂志 2003年总第 62期
表 , 它是超氧阴离子 [O2-] 的
清除剂 , 可抑制黄嘌脱氢酶转化
为黄嘌呤氧化酶 , 减少 OFR产
生 , 从而抑制 LP反应〔10〕。实验
结果表明 , 余甘子水提醇沉物通
过提高 SOD 活性 , 清除 OFR ,
降低 MDA 水平 , 对 D-Gal-N
所致急性肝损伤具有明显的保护
作用 , 提示其护肝机理可能与促
进肝细胞修复 , 抑制 LP 反应 ,
清除OFR有关。
参考文献
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用机理的研究概况.中西医结合肝病杂
志 , 1994;4 (4):50
(收稿日期:2002年 11月 26日)
黔产苦丁茶氨基酸和微量元素的分析
罗迎春
(贵州民族学院化学系 , 贵州　贵阳　550014)
摘　要　测定和分析了川滇腊树 (苦丁茶)枝叶的氨基酸 、 微量元素和天然化合物类型 , 结果表明:川滇
腊树含 11种类型的天然化合物和 18 种微量元素 , 其中有人体所需的氨基酸 17 种。
关键词　苦丁茶　川滇腊树　天然化合物　微量元素　分析
　　在贵州 , 民间常用的苦丁茶
来源于木樨科 (Oleaoeae)女贞
属 (Ligustrum)植物 , 主要是用
粗壮女贞 (L.robustum Bl.)和
川滇腊树 (L.delavayanum Hari-
ot)两种植物的叶子加工而成。
苦丁茶在我国许多地区作茶饮用
已有悠久的历史 。《中药大辞典》
记载 , 苦丁茶具有 “散风热 、 清
头目 、 除烦渴 、 去油腻 、 治头
痛 、 齿痛 、 耳赤” 等作用;目
前 , 民间还认为苦丁茶对高血脂
和高血压病有缓解作用 , 因此一
直深受广大人民群众的喜爱。但
不同地区苦丁茶的来源是不一样
的 , 如云南省用紫茎女贞和序梗
女贞 , 而四川省则用长叶女贞 。
为了开发贵州贫困山区的经
济建设 , 充分合理利用我省丰富
的植物资源 , 以及研究与其它地
区苦丁茶的异同 , 我们对川滇腊
树枝叶的氨基酸 、微量元素和天
然化合物类型进行了测定和分
析 。
1　实验部分
1.1　样品
从贵州省威宁县采集到的新
鲜枝叶 , 贵州省中医药研究院陈
德媛 教授 鉴 定为 川 滇 腊 树
(L.delavayanum Hariot), 叶子晒
干 , 碎成粉末。
1.2　氨基酸的测定
LC-3A高效液相色谱仪测
定 , 准确移取试样 , 加 6NHCl
于 100±1℃下水合 24h , 样品经
中和 、 过滤 、定容得供试液。用
微量注射器定量吸取供试液和
POA衍生试剂 , 充分混合并进行
衍生化反应;定量吸取衍生试液
注入 LC-3A 系统 , 以线性梯度
洗脱方式和 DDS 柱过实行色谱
分离并用荧光检测器进行测定。
1.3　微量元素的测定
PE5100PC原子吸收光谱仪:
上海 721 分光光度计;JP -1A
型极谱仪 。称取 5g 试样于 100ml
瓷钳锅中 , 加 5ml硝酸 , 加热蒸
发至干 , 500℃～ 6000℃下灰化 ,
残渣转入铂器中加氢氟酸 、 高氯
酸至冒烟 , 加 8ml (1∶1)盐酸
溶解 , 用水转移 , 原子吸收法测
定:铜 、 铅 、 锌 、 铬 、 铝 、 铁 、
锰 、 钾 、 钠 、 钡 、 钙 、 镍;钒钼
黄比色法测定磷;砷斑法测定
164 中国民族民间医药杂志 2003年总第 62期