全 文 ：第 27卷 第 7期
2 0 1 0 年 7 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.27 　No.7
Jul.2010 p.516
收稿日期:2009-11-20
作者简介:李倩(1984-), 女(汉族),辽宁沈阳人 , 硕士研究生 , E-mailliqian sy@sina.com;孙启时(1945-), 男(汉
族),吉林松源人 , 教授 ,主要从事中药资源开发和利用的研究 , Tel.024-23986468, E-mailsunqishi@sina.com。
文章编号:1006-2858(2010)07-0570-04
HPLC法同时测定白鲜皮中 γ-崖椒碱和
白鲜碱的含量
李　倩 , 贾凌云 , 孙启时
(沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立同时测定白鲜皮药材中 2种生物碱含量的 HPLC方法 ,并测定不同产地白鲜皮药
材中生物碱的含量 , 为白鲜皮药材质量控制提供科学依据。 方法 色谱柱:DiamonsilC18柱
(200 mm×4.6 mm, 5μm),流动相:乙腈-水(体积比为 40∶60),流速:1.0 mL·min-1 ,检测波长:240
nm。结果 γ-崖椒碱和白鲜碱能够达到基线分离。γ-崖椒碱质量浓度在 2.4 ～ 72.0 mg·L-1(r=
0.999 8)内 ,白鲜碱质量浓度在 7.2 ～ 216.0 mg·L-1(r=0.999 7)内与峰面积呈良好的线性关系;
γ-崖椒碱和白鲜碱的回收率分别为 100.2%、99.9%, RSD分别为 1.7%、1.5%。结论 所建立的方
法可用于白鲜皮的质量控制 。
关键词:高效液相色谱法;白鲜皮;γ-崖椒碱;白鲜碱;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　白鲜皮为芸香科植物白鲜(Dictamnusdasy-
carpusTurcz.)的干燥根皮 。白鲜具有浓烈特殊
气味 ,有祛风除湿 、清热解毒的功效 ,临床用于治
疗湿热疮毒 、黄水淋漓 、湿疹 、风疹 、风湿热痹 、黄
疸尿赤等症[ 1-2] 。白鲜皮产于黑龙江 、吉林 、辽
宁 、内蒙古 、河北 、山东 、安徽 、湖北等地 [ 3] ,其所
含有的主要化学成分为生物碱和柠檬苦素 。
白鲜皮中所含的生物碱为呋喃喹啉类生物
碱 ,主要有白鲜碱 、γ-崖椒碱 、茵芋碱等 [ 4 -5] ,其中
白鲜碱为白鲜皮所含指标成分之一。近年来研究
表明[ 6-8] ,白鲜皮中所含的生物碱具有强心 、收缩
血管平滑肌 、抗炎 、抗病原微生物的作用 ,但未见
同时测定其生物碱含量的报道 [ 9 -10] 。本文作者
研究采用 RP-HPLC法同时测定白鲜皮中 γ-崖椒
碱和白鲜碱的含量 ,为评价药材内在质量提供依
据 。γ-崖椒碱和白鲜碱的化学结构式见图 1。
1　仪器与材料
HPLC仪(L-7100泵 , L-7420紫外 -可见检测
器 ,日本 Hitachi公司),福利 9500色谱工作站(浙
江福利分析仪器有限公司), DL-360A超声波清
洗器(上海之信仪器有限公司), PHS-2FPH计
(上海精密科学仪器有限公司), ES-J型电子分析
天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限公司),数显恒
温水浴锅(国化电器有限公司)。
Fig.1　Structuresofγ-fagarine(a)anddictamnine(b)
　　γ-崖椒碱 、白鲜碱对照品(质量分数均大于
98%,自制),乙腈(色谱纯 、天津康科德科技有限
公司),水(纯净水 ,杭州娃哈哈集团有限公司),
其余试剂(分析纯 ,市售)。
不同产地白鲜皮药材购于各地药材市场 ,经
沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为芸香科
植物白鲜(DictamnusdasycarpusTurcz.)的干燥根
皮 。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　混合对照品溶液
分别精密称取 γ-崖椒碱和白鲜碱 2.0 mg和
6.0 mg,置 25 mL量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 , 制成质量浓度分别为 80.0 mg·L-1和
DOI :10.14066/j.cnki .cn21-1349/r.2010.07.009
240.0 mg·L-1对照品溶液 ,备用。
2.1.2　供试品溶液
取白鲜皮药材粉末 5.0 g, 精密称定 , 置
100 mL具塞锥形瓶中 ,加乙酸乙酯 100 mL,超声
提取 30 min,滤过 ,乙酸乙酯润洗残渣 ,滤液挥干。
用乙酸乙酯 10 mL溶解残渣 , 加入体积分数为
2%的盐酸溶液萃取得酸水层 ,再用体积分数为
5%的氢氧化钠溶液调节 pH=10,最后用乙酸乙
酯萃取 [ 9] ,挥干溶剂 ,残渣用甲醇溶解并定容到
10 mL量瓶中 ,摇匀 ,微孔滤膜滤过后 ,取续滤液
为供试品溶液。
2.2　色谱条件系统适用性试验
色 谱 柱:DiamonsilC18 柱 (200 mm ×
4.6 mm),流动相:乙腈-水(体积比 40∶60),流速:
1.0 mL·min-1 ,检测波长:240 nm,进样量:20 μL。
在此条件下以 γ-崖椒碱和白鲜碱计 ,理论塔
板数不低于 3 000,且 γ-崖椒碱和白鲜碱与其他
峰达到基线分离 。对照品及供试品溶液色谱图见
图 2。
1— γ-Fagarine;2— Dictamnine
Fig.2　chromatogramsofstandards(a)andsample(b)
2.3　线性关系考察
精密量取混合对照品溶液 0.3、 1.0、 1.5、
3.0、6.0、9.0 mL分别置 10 mL量瓶中 ,加甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,制得系列对照溶液。以色谱峰面
积(A)为纵坐标 ,以质量浓度(ρ)为横坐标绘制标
准曲线并计算回归方程。 γ-崖椒碱的回归方程为
A1 =2.945 ×108ρ1 +1.067 ×105(r=0.999 8),白
鲜碱的回归方程为 A2 =3.611 ×108ρ2 +9.178 ×
10
5(r=0.999 7)。 γ-崖椒碱质量浓度在 2.4 ～
72.0 mg·L-1内 ,白鲜碱质量浓度在 7.2 ～ 216.0
mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系 。
2.4　精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 3.0 mL,置 10 mL
量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。按 “2.2”条色
谱条件进样测定 ,重复 6次 。 γ-崖椒碱和白鲜碱
色谱峰面积的 RSD分别为 1.2%和 1.7%(n=
6),表明仪器精密度良好。
2.5　重复性试验
取白鲜皮供试品 6份 ,按 “ 2.1.2”条方法制
备供试品溶液 ,按 “ 2.2”条色谱条件进样测定。
γ-崖椒碱和白鲜碱含量的 RSD分别为 1.8%和
1.3%(n=6),表明方法重复性良好。
2.6　稳定性试验
取白鲜皮供试品 1份 ,按 “ 2.1.2”条方法制
备供试品溶液 ,按 “ 2.2”条色谱条件于 12 h内重
复进样 6次进样测定。 γ-崖椒碱和白鲜碱峰面积
的 RSD分别为 2.0%和 2.2%,表明 γ-崖椒碱和
白鲜碱在 12 h内稳定。
2.7　加样回收率试验
取已知含量的白鲜皮(辽宁 ,沈阳)粉末供试
品 9份各 2.5 g,精密称定 ,分别加入质量浓度为
80.0 mg·L-1和 240.0 mg·L-1对照品溶液 1、1.3、
1.6 mL,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制备低 、中 、高
3种质量浓度的供试溶液 ,每个质量浓度制备 3
份样品 。按 “ 2.1.2”条方法制备供试品溶液 ,按
“ 2.2”条色谱条件测定 ,计算回收率 ,结果见(表
1)。
2.8　供试品含量测定
取各产地的白鲜皮药材粉末各 5.0 g,精密称
定 ,按 “2.2.2”条方法操作 ,在 “2.1”条色谱条件
下测定 ,计算 2种生物碱的含量 ,测定结果见表
(表 2)。
3　讨论
a.流动相和检测波长的选择。通过实验发
现 ,乙腈 -水系统对 γ-崖椒碱和白鲜碱及其附近的
峰分离效果较好 ,而甲醇-水对 γ-崖椒碱和白鲜碱
及其附近的峰分离效果不好 ,所以选择乙腈 -水作
为本实验的流动相。同时 ,通过紫外全波长扫描
测定 γ-崖椒碱和白鲜碱的最大吸收波长分别为
244 nm和 236 nm,所以紫外检测波长确定为 240
nm。
571第 7期 李　倩等:HPLC法同时测定白鲜皮中 γ-崖椒碱和白鲜碱的含量
Table1　Resultofrecoverytest
Component moriginal/mg madded/mg mfound/mg Recovery/% x/% RSD/%
γ-Fagarine 0.108 0.080 0.187 98.8
0.103 0.080 0.185 102.5
0.097 0.080 0.178 101.3
0.100 0.104 0.202 98.1 100.2 1.7
0.101 0.104 0.204 99.0
0.105 0.104 0.210 101.0
0.096 0.128 0.227 102.3
0.098 0.128 0.227 100.8
0.103 0.128 0.229 98.4
Dictamnine 0.319 0.240 0.563 101.7
0.321 0.240 0.559 99.2
0.327 0.240 0.564 98.8
0.330 0.312 0.633 97.1
0.328 0.312 0.643 101.0 99.9 1.5
0.325 0.312 0.638 100.3
0.322 0.384 0.701 98.7
0.325 0.384 0.712 100.8
0.320 0.384 0.709 101.3
Table2　Contents(w)oftwocomponentsinCortexDictamnisamples(n=3)
Region w/%(×10
-3)
γ-Fagarine Dictamnine Totalamount
Haerbin, Heilongjiang 2.4 10.4 12.8
Yanji, Jilin 4.8 12.0 16.8
Shenyang, Liaoning 4.0 13.0 17.0
Chengde, Hubei 5.5 25.2 30.7
Zhengzhou, Henan 2.1 10.9 13.0
Qingdao, Shandong 2.5 15.3 17.8
Datong, Shanxi 2.0 6.9 8.9
Neimenggu 0.6 3.4 4.0
Shanghai 4.3 16.0 20.3
Wuhan, Hubei 3.6 6.1 9.7
Zhangzhou, Fujian 2.0 6.1 8.1
Wusu, Xingjiang 3.0 13.1 16.1
Bozhou, Anhui 3.0 3.8 6.8
Qianshan, Liaoninga 9.5 28.6 38.1
Chengdeng, Hebeic 3.6 1.8 5.4
Zhengzhou, Henanc 2.4 5.6 8.0
Shenyang, Liaoningd 5.6 13.8 19.4
Shenyang, Liaoningb 10.7 32.4 43.1
Shenyang, Liaoningbd 14.3 36.8 51.1
Shenyang, Liaoningbd 13.8 5.6 19.4
　　a— Wild;b— Plant;c— Core;d— Rootlet
　　b.提取方法的考察 。采用超声提取 ,发现除
白鲜碱外 ,梣酮和黄柏酮同时被提取出来 ,干扰生
物碱成分的含量测定 ,所以 ,采取酸提碱沉富集生
物碱 ,同时还可去除白鲜皮中的指标成分梣酮和
572 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 27卷　
黄柏酮 。
c.本实验中 ,作者除测定了不同产地白鲜皮
中 γ-崖椒碱和白鲜碱外 ,还测定了木心和须根中
所含两种生物碱的含量 ,发现木心和须根中同时
含有生物碱 。须根中生物碱含量与根皮相当 ,可
考虑白鲜须根的药用价值 ,但木心中测得两种生
物碱的含量明显低于其根皮中所含生物碱的含
量 ,故白鲜木心不宜作为药用。
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Determination ofγ-fagarine and dictamnine in
DensefruitPittanyRoot-barkbyHPLC
LIQian, JIALing-yun, SUNQi-shi
(SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016,
China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodtodeterminesimultaneouslyγ-fagarineanddictamninebyHPLC
andprovidebasisforthequalitycontrolofDensefruitPitanyRoot-bark.MethodsTheseparationwasper-
formedwithaDiamonsilC18 column(200 mm×4.6 mm, 5 μm)withmobilephaseconsistedofCH3CN-
H2O(V∶V=40∶60)anddetectionat240 nm.Theflowratewas1.0 mL·min-1.Resultsγ-fagarineanddict-
amnineshowedgoodseparationwithabovemethod.Thelineatrangeswas2.4 -72.0 mg·L-1 (r=
0.999 8)forγ-fagarineand7.2 -216.0 mg·L-1(r=0.999 7)fordictamnine.Therecoveriesforthosetwo
standardsubstanceswere100.2% and99.9% withRSD1.7% and1.5%.ConclusionsTheestablished
methodcanbeusedtocontrolthequalityofDensefruitPitanyRoot-bark.
Keywords:HPLC;DensefruitPitanyRoot-bark;γ-fagarine;dictamnine;contentdetermination
573第 7期 李　倩等:HPLC法同时测定白鲜皮中 γ-崖椒碱和白鲜碱的含量