全 文 ：2. 7 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液 10μL，连续进
样 6 次，测定芍药苷的峰面积 ＲSD = 0. 8%，结果表明精密度
良好。
2. 8 重复性试验 取样品共 6 份，按上述方法处理分别制备
供试品溶液，进样测定，测定芍药苷的峰面积 ＲSD = 1. 3%，结
果表明重复性良好。
2. 9 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于 0、2、4、8、12h
进样，测定芍药苷的峰面积 ＲSD = 1. 6%，表明供试品溶液在
12h内稳定。
表 1 芍药苷的加样回收率试验结果
编号
样品中芍
药苷的量
(mg)
加入芍药
苷的量
(mg)
测得芍药
苷的量
(mg)
回收率
(%)
1 10. 44 10. 20 20. 64 99. 02
2 10. 44 10. 20 20. 48 98. 45
3 10. 44 10. 20 20. 65 100. 12
4 10. 44 10. 20 20. 47 98. 34
5 10. 44 10. 20 20. 56 99. 25
6 10. 44 10. 20 20. 67 100. 32
2. 10 加样回收试验 精密量取样品 6 份(批号 201203011，
已测芍药苷含量为 3. 48mg·mL －1) ，各 3mL，分别置于 100mL
量瓶中，再分别加入芍药苷对照储备液(浓度为 1. 02mg·
mL －1)10mL，用甲醇定容，摇匀，经 0. 45μm 的微孔滤膜过滤，
取续滤液作为供试品溶液。按拟定色谱条件，分别吸取供试
品溶液与对照品溶液各 10μL，注入液相色谱仪(见表 1)。芍
药苷的平均回收率为 99. 3%，ＲSD = 0. 83%(n = 6)。
3 讨论
参考文献〔1 ～ 5〕对流动相进行不同的选择，以甲醇-
0. 05mol·L －1磷酸二氢钾(40∶ 65)、甲醇-水(30∶ 70)、甲醇-乙
腈-0. 025mol·L －1磷酸溶液(1. 5 ∶ 13. 5 ∶ 85)分别作为流动相
进行比较，结果以甲醇-水(30∶ 70)为流动相，出峰时间适宜，
峰形较好，无干扰，适用乳核内消液的质量控制。本品为液体
制剂，分别采用乙醇、甲醇、稀乙醇直接对样品进行稀释的方
法，发现用甲醇处理样品效果更好，测定结果稳定，重复性好。
参考文献
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北京:中国中医药科技出版社，2010，147.
〔2〕国家药典委员会编 . 2010 年版中华人民共和国药典(一部)〔S〕.
北京:中国中医药科技出版社，2010，1049.
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的含量〔J〕. 西北药学杂志，2009，24(6) :436-437.
〔5〕张芳向，林朝霞，邱双凤 . 乳核内消液的质量标准〔J〕. 中国药师，
2010，13(7) :963-965.
UPLC法测定千里香胶囊中 3 种黄酮含量
唐建兰1，魏伟峰2，杨中林1* ，石心红1，2* (1. 中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室 南京
210009;2. 华润三九医药股份有限公司 深圳 518029)
摘要:目的 建立超高效液相色谱( UPLC) 法测定千里香胶囊中 3 种黄酮的含量。方法 采用 Waters Acquity UPLC 系统，Waters Acquity BEH
C18色谱柱( 2. 1mm ×50mm，1. 7μm) ，流动相为乙腈-0. 2%甲酸，流速为 0. 5mL·min －1，柱温 35℃，检测波长 337nm。结果 5，6，7，3，4-五甲
氧基黄酮、5，6，7，3，4，5-六甲氧基黄酮、5，7，3，4-四甲氧基黄酮在 0. 0025 ～ 0. 025mg·mL －1浓度范围内均具有良好的线性关系 ( Ｒ2≥
0. 999) ;平均回收率在 96% ～99%，ＲSD ＜ 2. 0%，精密度良好。结论 本方法分离效果及重复性好，且快速、简便，有机溶剂的消耗少，可作为
该制剂的质量控制方法。
关键词:超高效液相色谱法;千里香;四甲氧基黄酮; 五甲氧基黄酮;六甲氧基黄酮
中图分类号:Ｒ927. 2;Ｒ282. 71 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2012)-10-0062-04
作者简介:唐建兰，女(1988 －)。硕士研究生。中国药科大学中药制剂专业。主要从事中药制剂研究。联系电话:13915926137，E-mail:nan-
jingtjl@ 163. com
通讯作者:杨中林，女(1950 －)。现任中国药科大学中药学院教授。职称:博士生导师。主要从事中药炮制与制剂研究工作。E-mail:nanjingyzl
@ sina. com
Determination of 3 flavonoids in Murraya paniculata capsule by UPLC
TANG Jian-lan1，WEI Wei-feng2，YANG Zhong-lin1* ，SHI Xin-hong1，2* (1. State key laboratory of Natural
Products and Functions，China Pharmaceutical University. Nanjing 210009，China;2. San Jiu Medical＆
Pharmaceutical co. ，LTD. ，Shenzhen 518029，China)
·26·
海峡药学 2013 年 第 25 卷 第 10 期
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish an ultra performance liquid chromatography(UPLC)method for simulta-
neous determination of 3 flavonoids in Murraya paniculata capsule. METHODS The analyses were performed on
Waters Acquity UPLC system. An Acquity UPLC BEH C18 column(2. 1mm ×50mm，1. 7μm)was used for all analy-
ses. The investigated compounds were separated with gradient mobile phase consisting of 0. 2% formic acid and ace-
tonitrile. The flow velocity was 0. 5mL·min －1 . The temperature of sample manager was set at 35℃. The detection
wavelength was 337nm. ＲESULTS The investigate compounds including 5，6，7，3，4-pentamethoxyflavone、5，6，
7，3，4，5-hexamethoxyflavone、5，7，3，4-tetramethoxyflavone has a good linerarity(Ｒ2≥0. 999)over the tested
ranges of 0. 025 ～ 0. 25mg·mL －1 . The average recovery was 96% ～ 99% with ＲSD ＜ 2. 0%，and good preci-
sion. CONCLUSION The method is not only simple，sensitive and accurate with good repeatability，but also reduc-
ing solvent consumption and analysis time，which is available for quality control of this dosage form.
KEY WOＲDS:Ultra performance liquid chromatography(UPLC) ;Murraya paniculata;Tetramethoxyflavone;Pentamethoxyflavone;
Hexamethoxyflavone
千里香胶囊由千里香提取大孔吸附树脂纯化后制成，其
主要成分是甲氧基黄酮〔1〕，具有广泛的生物活性，包括抗炎、
抗氧化、抗菌、抗癌、抗动脉粥样硬化等〔2〕，可以开发研究成
药品、保健品、食品添加剂等，具有很好的市场前景。目前为
止学者多研究千里香中 5，7，3，4-四甲氧基黄酮(九里香酮)
的含量测定方法〔3〕，单用一种成分作为质量控制标准，并不
能全面反映该药材或含药制剂质量的好坏。且采用传统的
HPLC法分析时，检验周期长，溶剂耗量大。因此本文拟采用
UPLC法，建立同时测定千里香胶囊中 3 种黄酮含量的方法。
1 材料与仪器
1. 1 材料 千里香药材(经华南植物所叶华谷教授鉴定为千
里香) ，千里香胶囊 (自制，批号:20110601，20110701，
20110801) ;5，6，7，3，4-五甲氧基黄酮(P1)、5，6，7，3，4，5-
六甲氧基黄酮(P2)、5，7，3，4-四甲氧基黄酮(P3)对照品(自
制，纯度均达到 99. 0%) ，乙腈为色谱纯(Merck 公司) ，水为
Millipore超纯水，其他试剂为分析纯。
1. 2 仪器 超高效液相色谱仪(UPLC，Waters 公司) ，
BP211D电子天平(广州市越秀区万诚科器销售行) ，
KQ500DE台式数控超声波清洗机(广州志轩贸易有限公司) ，
Millipore超纯水机(法国 Millipore公司)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱为Waters Acquity BEH C18柱(2. 1mm
× 50mm，1. 7μm) ;流动相 A为乙腈，B为 0. 2%甲酸-水溶液，
梯度洗脱，0 ～ 23min，21% ～ 40% A;23 ～ 24min，40% ～ 100%
A) ;流速:0. 5mL·min －1;检测波长:337nm;柱温:35℃;进样
量:1μL。结果表明该条件下 P1、P2、P3 均得到良好的分离，3
种成分的理论塔板数均不低于 2000(见图 1)。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备:分别精密称取 3 种对照品适量，
加甲醇超声处理(功率 300W，频率 40KHz)30min，定容配制
成 0. 025mg·mL －1的溶液，经 0. 22μm微孔滤膜过滤，即得。
2. 2. 2 供试品溶液的制备:取胶囊内容物约 0. 3g，研细，精密
称定，置 20mL容量瓶中，加入甲醇，超声处理(功率 300W，频
率 40KHz)30min，冷却至室温，定容至刻度，经 0. 22μm 微孔
滤膜过滤，即得。
图 1 胶囊阴性(A)、对照品
(B)、供试品(C)
1. 5，6，7，3，4 －五甲氧基黄酮
(P1) ;2. 5，6，7，3，4，5 － 六甲
氧基黄酮(P2) ;3. 5，7，3，4 －
四甲氧基黄酮(P3)
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 线性关系考察:精密
吸取“2. 2. 1”项下的 P1 对照
品溶液 1、2、3、5mL置 10mL容
量瓶中，加甲醇定容配制成 4
种不同浓度的对照品溶液，分
别吸取以上浓度对照品溶液
及“2. 2. 1”项下的 P1 对照品
溶液 1μL，进样，按“2. 1”项下
色谱条件测定峰面积。P2、P3
同 P1 操作，以峰面积 Y 对其
浓度 X(mg·mL －1)进行线性
回归，计算 P1、P2、P3 的回归
方程为:Y = 5 × 106X + 29606
(Ｒ2 = 0. 999) ;Y = 5 × 106X-
15701(Ｒ2 = 0. 999) ;Y = 8 × 106X-28065(Ｒ2 = 1)。结果表明
P1、P2、P3 在 0. 0025 ～ 0. 025mg·mL －1范围内，峰面积与浓度
均呈现良好的线性关系。
2. 3. 2 精密度实验:精密吸取“2. 2. 1”项下的 P1 对照品溶液
连续进样 6 次，按“2. 1”项下色谱条件测定峰面积。计算
ＲSD，P2、P3 同法操作，结果 P1、P2、P3 的 ＲSD 分别为
0. 13%、0. 14%、0. 18%，表明该方法的精密度良好。
2. 3. 3 重复性实验:取同一批胶囊内容物(批号:20110601) ，
研细，同“2. 2. 2”项下条件制备供试品溶液，共 6 份。并按
“2. 1”项下色谱条件测定峰面积，计算各成分含量，结果 P1、
P2、P3 的 ＲSD 分别为 1. 90%、1. 71%、1. 83%，表明该方法的
·36·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 25 No. 10 2013
重复性良好。
2. 3. 4 稳定性实验:取一批胶囊内容物(批号:20110701) ，研
细，同“2. 2. 2”项下条件制备供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、
12、24h进样，按“2. 1”项下的色谱条件测定峰面积。结果
P1、P2、P3 的 ＲSD 值分别为 1. 83%、1. 45%、1. 96%，表明该
方法稳定性良好。
2. 3. 5 回收率实验:精密称取已知含量的胶囊内容物(批号:
20110601)6 份，研细，加入相当于样品量 100%的对照品，同
“2. 2. 2”项下条件制备供试品溶液，并按“2. 1”项下条件测定
计算含量。结果 P1、P2、P3 的平均回收率分别为 98. 72%、
96. 25%、97. 34%;ＲSD 分别为 1. 94%、1. 22%、1. 21%，表明
该方法的回收率良好(见表 1)。
表 1 回收率实验结果
P1 取样量(g)
含量
(mg·g － 1)
样品含量
(mg) 测得峰面积
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) ＲSD%
1 0． 3001 0． 72 0． 2158 2434888 0． 2501 0． 4562 96． 14
2 0． 3003 0． 72 0． 2159 2459411 0． 2501 0． 4608 97． 92
3 0． 3004 0． 72 0． 2160 2461706 0． 2501 0． 4612 98． 07 98． 72 1． 94
4 0． 3100 0． 72 0． 2229 2500706 0． 2501 0． 4685 98． 23
5 0． 3008 0． 72 0． 2163 2501988 0． 2501 0． 4688 100． 97
6 0． 3010 0． 72 0． 2164 2503411 0． 2501 0． 4690 101． 02
P2 取样量(g)
含量
(mg·g － 1)
样品含量
(mg) 测得峰面积
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) ＲSD%
1 0． 3001 0． 46 0． 1383 1233120 0． 1264 0． 2585 95． 05
2 0． 3003 0． 46 0． 1384 1240093 0． 1264 0． 2599 96． 14
3 0． 3004 0． 46 0． 1385 1242986 0． 1264 0． 2605 96． 58 96． 25 1． 22
4 0． 3100 0． 46 0． 1429 1253012 0． 1264 0． 2626 94． 74
5 0． 3008 0． 46 0． 1386 1249120 0． 1264 0． 2618 97． 45
6 0． 3010 0． 46 0． 1387 1250120 0． 1264 0． 2620 97． 54
P3 取样量(g)
含量
(mg·g － 1)
样品含量
(mg) 测得峰面积
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) ＲSD%
1 0． 3001 0． 28 0． 08 1192575 0． 07554 0． 1561 97． 26
2 0． 3003 0． 28 0． 08 1182575 0． 07554 0． 1548 95． 45
3 0． 3004 0． 28 0． 08 1202801 0． 07554 0． 1575 98． 92 97． 34 1． 21
4 0． 3100 0． 28 0． 09 1212632 0． 07554 0． 1588 97． 12
5 0． 3008 0． 28 0． 08 1192901 0． 07554 0． 1562 97． 06
6 0． 3010 0． 28 0． 08 1200001 0． 07554 0． 1571 98． 21
2. 4 样品测定 取本品 3 批样品各 3 份，按照“2. 2. 2”项下
所述方法制备供试品溶液，并按“2. 1”色谱条件进样(见表
2)。
表 2 样品测定结果
批次 化合物 平均含量(mg·g － 1) ＲSD(%)
20110601 P1 0． 72 1． 10
P2 0． 46 1． 94
P3 0． 28 1． 30
20110701 P1 0． 71 1． 66
P2 0． 46 1． 78
P3 0． 28 1． 83
20110601 P1 0． 73 1． 99
P2 0． 49 1． 94
P3 0． 28 1． 98
3 讨论
3. 1 美国 Waters 公司于 2004 年推出了最新研制的 ACQU-
ITY超高效液相色谱(UPLC) ，造就了液相色谱性能上的飞跃
和进步并形成分离科学的一个新兴领域〔4〕。UPLC 作为一种
新型液相色谱技术，以超强分离能力和速度、超高灵敏度、与
HPLC简单方便的方法转换等特点为现代色谱分析开创了广
阔的前景〔5〕。
笔者以 HPLC法分析时，P2 和 P3 在 130min 内分离度为
1. 03，但是 P1 分离度不理想;UPLC 法分析时，P2 和 P3 在
25min内的分离度为 2. 32，同时 P1 达到基线分离，较 HPLC
法分析速度提高了 6 倍。充分证实，UPLC法在保证含量测定
结果准确的前提下，大大提高分析速度、减少溶剂耗损、降低
分析成本，为复杂体系中药分离分析提供良好平台。但与
HPLC法比较，仪器成本较高。
3. 2 千里香胶囊为自主研发，其主药为千里香，2010 版药典
标准中仅有性状和薄层色谱鉴别，没有相关指标成分的含量
测定，难以控制其质量。为了提高药材质量控制标准，本实验
进行了化学成分的研究，从中分离提取出含量较高的 3 种甲
氧基黄酮类成分，并以此作为质量控制指标，提高了药材的质
量标准，更能客观地评价药材的质量，并为多指标控制成品的
质量提供了技术基础。
参考文献
·46·
海峡药学 2013 年 第 25 卷 第 10 期
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领域中的应用〔J〕. 药物分析杂志，2008，28(11) :1970.
HPLC法测定止咳药品中的橙皮苷含量
兰瑞芳1，黄丽梅2，马传振2，马秀玲2(1. 福建师范大学环境科学与工程学院 福州 350007;2. 福建师范大学化
学与化工学院 福州 350007)
摘要:目的 高效液相色谱( HPLC) 实验法测定止咳药品中橙皮苷的含量。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱: phenomenex C18柱( 4. 6mm
×250mm，5μm) ;检测波长: 283nm;流动相:乙腈-2%冰醋酸( 25∶ 75) ;流速: 1. 0mL·min －1 ;柱温: 25℃。结果 橙皮苷线性范围为 2 ～ 80μg·
mL －1 ( r = 0. 9992) 。结论 该方法简便快捷精密度高准确性好，可以作为止咳药品含量的测定方法。同时，用数学统计方法对药品进行分析比
较:实验测定的几种药品中橙皮苷含量有极显著差异。
关键词:高效液相色谱;止咳药品;橙皮苷;含量测定
中图分类号:Ｒ969. 4 文献标识码:B 文章编号:1006-3765(2013)-10-0065-04
作者简介:兰瑞芳，女(1966 －)。职称:高级工程师。主要从事化学
分析工作。E-mail:mxlabc@ qq. com
Determination of Hesperidins in Medicine by HPLC
LAN Ｒui-fang1，HUANG Li-mei2，MA Chuan-zhen2，MA Xiu-ling2(1. Environmental Science and engineering
College of Fujian Teachers College，Fuzhou 350007，China;2. Chemistry ＆ chemicals College，Fuzhou
350007，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE High Performance Liquid Chromatography(HPLC)is one of the most important meth-
ods in modern chemical analysis. The content of Hesperidins in cough medicine was determined. METHODS The
HPLC method was used. The analytical column was C18 column(4. 6mm ×250mm，5μm)and the UV detector wave-
length was 283nm. The mobile phase consist of acetonitrile-2% -glacial acetic acid(25 ∶ 75) ，the flow rate was
1. 0mL·min －1，the column temperature was 25℃. ＲESULTS The calibration curve was linear in the range of 2-
80μg·mL －1(r = 0. 9992). CONCLUSION Concthe method is simple，accurate，reliable and can be used for the
quality control of Environmental medicine. At the same time，using mathematical statistical methods for analysis and
comparison of the drugs，it was showed that the contents of Hesperidins in the drugs show significant difference.
KEY WOＲDS:HPLC;medicine;Hesperidins;Determination
橙皮苷(Hesperidins，结构式见图 1)是一种二氢黄酮衍生
物，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌、调节免疫力、防辐射、保护
心血管系统等药理活性〔1〕。越来越多的研究表明，黄酮类化
合物具有抗氧化和促进氧化的双重作用。橙皮苷是黄酮类化
合物中促进氧化作用最强的物质之一，对人体基因具有诱导
毒害作用〔2〕。为了更有效控制药品质量，有必要测定特定药
物中橙皮苷的含量。目前，关于橙皮苷的测定主要有分光光
度法〔3〕、高效液相色谱法〔4 ～ 9〕。
图 1 橙皮苷的分子结构
·56·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 25 No. 10 2013