全 文 ：《 食品与发酵工业 》 F o o d& F e rm n et a t i o n I n du 3 t ri s e9 9 1 1N o . 1
. , `曰口 . . . . . . . . . . . 门. . .口 . . , . 闷 ` 胭. . . . .口 . . . . . . . . . . . . . ` . 口. 曰 . . . 门自 . . 口. 月 . . . . , , , . .目
高效液相色谱法分离测定贩柑中的黄酮苦味成分
徐远 张月华
( 上海 医药工业研究院 中药室 )
毗才}十〔 S u a v i “ ” i m a ( T a n a k a ) H . H .
H u 〕 是浙江省温州地区特产柑桔 之 一 , 食
之略带苦味。 民间常用于退热及 治 疗 高 血
压 , 贮至端午节 , 苦味降低 , 认为其药用价
值更佳 。 为了了解其苦味成分含量与贮存期
的关系 , 本文采用高效液相色谱法 , 测定了
欧柑中的黄酮苦味成分。 并将其与温州蜜柑
( e
.
u n s h i n M a r e ) 进行了比较。
既柑中的苦味成分主要有柏皮普 ( N a 卜
i n g i n ) 和新橙皮 书: ( N e o h e s P e r i d i n ) 。 另
含有非苦味成分橙皮朴 ( 1 ) ( ’ ) ( ’ )。
关于袖皮节的含量测定有 D a vi “法 (魂 ) 。
此法是用碱作用于黄酮化合物 , 新橙皮昔和
橙皮普同时参加反应 , 故测定结果偏高 ( 5 ) 。
F’i s h e r报道了 i沉效液相色谱法 ( ” ) 。 对 新 橙
皮普的含量测定方法尚未见报道。 本文将顾
柑中的柏皮节和新橙皮普这二种苦味成分及
橙皮普进行了反相高效液相色 谱 分 离 。 以
2 , 4 一二硝墓氯苯为内标 , 对袖皮昔 和 新
橙皮昔进行了定量测定 。
波长 : 2 8 o n m o
二 、 试剂 :
甲醇 ( 分析纯 ) , 蒸馏水 。 标准品 : 抽
皮普 、 新橙皮仆均为本实验室提供 。 内标 :
2 , 4 一二硝基氯苯 (化学纯 ) 。
三 、 样品预处理 :
取欧柑去皮 , 压榨出果汁 , 经冷冻千燥
成粉末 (以下称果汁 ) 。 另取欧柑去皮 , 将
果 肉以 95 %乙醇冷浸 24 小时 , 重复二次 。 合
并乙醇液 , 浓缩至干 (以下称果肉提取物 ) 。
另将欧柑皮 , 以 95 %乙醉冷浸 24 小时 , 重复
二次 , 合并乙醇液浓缩至千 (以下称果皮提
取物 ) 。
四 、 供试样 ,钻制备 :
分别将以上果汁 , 果肉提取物 ; 果皮提
取物研细 , 精密称取。 。 g8 , 置 10 m l 容 量 瓶
中用 8 0% 甲醉溶解 , 用 0 . 4 5林m 滤膜过 滤 ,
取滤液 0 . 60 m l , 置于 l m l容量 瓶 中 , 加 人
5 0 ;` l内标液 ( 8 . 6 m g / n 、 1甲 醉 ) , 然 J污 Jll
8 0% 甲醉定容 , 备用 。
如
入
材 料 和 方 法
一 。 仪器和色谱条件 :
w a t e
r , A L e / 2 4 4
, 高效液相色谱仪 ;
平l三: C Y Q G c , : . 8 ! . ( 4 1, ; n 、 又 2 5 o m n 、 ) , 流
动相 : 甲醉 : 水 ( 3 5 : 6 5 ) , 使用前以 0 . 45 ,:
滤膜过滤 , 脱气。 流 员 : 2 . 2 m ] / m in 。 纸
速 : 4 m m / m i n 。 本1三压 : 2 5 0 0 P s i 。 紫外检钡l!
.
7夕 .
结 果 和 讨 论
1
. 内标及其稳定性 :
通过筛选 , 本文采川 2 , 4 一二硝 华 氛
苯为内标 , 共与前述的三种黄酮体化合物的
紫外吸光谱图如图 1 ( 光谱图系川岛津 C s -
93 0薄层扫描仪测定 ) 。
协
DOI : 10. 13995 /j . cnki . 11 -1802 /ts . 1991. 02. 014
,
.
一 抽 皮了下
声
2UO 2 5廿 3 0 0 3 5 U r ’、 ’
纵座标 : 吸收值 横座标 : 波长
图 1 三种黄酮体 的紫外光谱 图
取抽皮普 , 新橙皮昔和内标的混和液 ,
连续四天进样 , 共测得七次响应因子 。 结果
见表 1 。
抽皮昔响应因子的标准偏差为 0 . 01 2 ,
变异系数 C V = 0 。 9% 。 新橙皮昔响应因子 的
标谁偏差为 0 . 0 1 5 , 变异系数 C v = 1 . 16 % 。
表 1 结果说明内标物在混和溶 液 中稳
定 。
甄柑
图 2 欧柑的分离色谱图
峰 1 : 抽皮普
峰 2 : 橙皮普
峰 3 : 新橙 皮普
峰 4 : 内标
表 1 。 不同时间的响应因子比较
响应 因子
抽皮普 新橙皮普落ù
第 l 天
第 1 天
第 1 天
第 1 天
第 2 天
第 3 天
第 4 天
1
。
2 7 4
1
。
2 9 5
1
。
2 6 5
1
。
2 6 6
1
。
2 6 8
1
。
2 7 7
1
。
2 8 8
1
。
2 8 0
1
。
2 4 7
1
。
2 5 1
1
。
2 7 3
1
。
2 4 3
1
。
2 6 4
1
。
2 7 3
2
. 定性分析 :
定性分析是以待测组分的保留时间 ( R )t
与标准 .话进行对照 。 图 2 为欧柑的色谱分离
图。 图 3 为温州蜜柑的色谱分离 图。
2 5 , 2 0
,
1 5
户
1 0 , 5 , 0
,
图 3 温 州蜜柑的分离
娜
对上述色谱图进行比较 , 表明蜜柑中无
袖皮普和新橙皮普。
3
. 标堆曲线的制备
精确称取抽皮普及新橙皮普 , 用甲醇制
备成浓度分别相当于 1 . s m g / m l的混和液 。
分别吸取相当于 0 . 0 6 1 n g ~ 0 . 6 m g的 混 和 液
置 l m l容量瓶中 , 各加人 5 0林 l内标 液 ( 8 . 6
n l g / m l甲醇 ) , 定容 。 分别进样 1 0卜 l 。 将
所得结果计算回归方程得 :
抽皮昔 : y : 二 1 . 2 7 8 x l 一 0 . 0 4 6 8
r l “ 0 。 9 9 9 1 n = 1 0
新橙皮甘: : y 。 二 i . 2 6 s x Z 一 0 . 0 3 8 8
r : “ 0 。 9 9 9 3 n = 1 0
这表明在上述浓度范围内峰面积 一与浓度
有良好线性关系 。
4
. 加样回收率和精密度 :
分别称取一定量袖皮普和新橙皮普标淮
品 , 加人果汁中 , 按上述样品预处理及分析
方法操作 , 重复三次 。 柏皮普的平均回收率
为 9 4 . 7 % , 变异系数 C v = 1 . 24 % 。 新 橙 皮
一梦的平均回收率为 9 4 . 8 % , 变异 系 数 C V “
1
.
8 5%
。
结 论
采用本方法对温州欧柑不同贮存期和不
同部分的苦味成分及其含量进行分析 , 结果
如表 2 。
翔
表 2 。 不同采集期的欧柑和蜜柑的不同部分抽皮昔和新橙皮昔含且比较。
抽皮等 ( p P m ) 新橙皮普 ( P p m )
样 品 果汁 果 肉提取物
果皮
提取物 果汁
果肉 果皮提取物 提取物 果汁
橙皮普
果肉 果皮
提取物提取物
/牛+十十8 年 n 月禾集欧柑
8 9年 1 月 米集队柑
89 年 l 月米集贮存至
89 年端午欧柑
温州蜜柑
2 2 0
1 2 6
/
1 2 7 0
6 3 8
3 8 7
1 4 7 5
1 2 1 0
/
5 0 2 0
9 0 { 3 5 0 13 6 0
,
1 9 5 0
`
6 7 2 0 + + +
,.OQ0ùb性UO口
, 卜 + 十 十 入
, 橙皮普仅作定性分析 。 + 表示可 以检 出 , 一 表示未检出 。
由表 2 可见 , 新橙皮昔在既柑果皮提取
物中含量较高 。 欧柑因同时含有袖皮普和新
橙皮普 , 因此带有苦味 。 威柑贮存至端午节
时果 肉和果皮中的新橙皮昔含量增高 , 而袖
皮普的含量则 卜降 。 本方法快速 、 灵敏 、 准
确 、 稳定 。 与 D o vi s法相比 , 更为合理 。 本方
法能同时对欧柑中主要的三种黄酮成分进行
定性 、 定量 , 也可用于其它柑桔类的黄酮成
分测定 , 或者在综合利用柑桔时 , 对其黄酮
产品进行含认测定 。
参 考 文 献
〔 1 〕 章恢志等 ; 华中农业 大学 ( 内部参考 )
〔 2 〕虞炳钧 ; 食品与发酵工业 , 1 9 8 3 , ( 4 ) ,
P
。
4 9 ~ 6 5
〔 3 〕张敦鹏等 ; 队柑苦味 成分的研究 ( 内
部参考 )
〔 4 〕成凤沉等 ;食品与发酵工业 , 1 9 8 2( 2) ,
P
。
1 ~ g
〔 5 〕 J a m e s F . F i s l、 e r ; J . A g r i e . F o o d
C h e m
。 , V o l
.
2 4 , X ( )
.
4 , 1 9 7 6
-
林