全 文 ：中 国 南 方 果 树 ２０１２年　第４１卷　第２期
９个葡萄柚品种与曼赛龙柚嫁接生理酶活性研究
严　毅１，何承忠１，李贤忠１，高　柱２，张南新１
（１西南林业大学林学院，昆明，６５０２２４；２江西省科学院生物资源研究所）
　收稿日期：２０１２－０１－０４；修回日期：２０１２－０１－３１
基金项目：国家林业局推广项目（２０１０－２０１２［２０１０］４７号）；云南省重点学科资助项目（ｘｋｚ２００９０６）资助。
作者简介：严毅（１９８６－），女，硕士生，主要从事果树生物技术研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｙｉｏｋ＠ｙｅａｈ．ｎｅｔ
通信作者：李贤忠（１９６３－），男，教授，从事经济林、果树引种及丰产、优质、高效栽培技术研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｘｉａｎｚｈｏｎｇ＠ｓｅｆｃ．ｅｄｕ．ｃｎ．
摘　要：以云南本地曼赛龙柚Ｃｉｔｒｕｓ　ｍａｘｉｍａ　ｃｖ．Ｍａｎｓａｉｌｏｎｇ为砧木，取引进的９个葡萄柚Ｃ．
ｐａｒａｄｉｓｉ　Ｍａｃｆ．品种为接芽，采用带木质部“Ｔ”形芽接法嫁接，研究了接穗和砧木枝条愈伤组织及
嫁接后接口愈伤组织过氧化物酶（ＰＯＤ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、多酚氧化酶（ＰＰＯ）和过氧化氢酶
（ＣＡＴ）活性的变化规律。结果表明，在曼赛龙柚上，火焰、亨路比、瑞路比和里德马叙等４个葡萄柚
嫁接愈合最好，矮化和哈路比愈合最差，ＰＯＤ、ＳＯＤ和ＣＡＴ三种酶的活性与葡萄柚嫁接愈合密切
相关，且其活性差异程度可以作为葡萄柚嫁接亲和性的预测酶，ＰＰＯ活性与嫁接亲和性间无明显
规律。
关键词：葡萄柚；嫁接亲和性；生理酶活性；愈伤组织
中图分类号：Ｓ　６６６．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００７－１４３１（２０１２）０２－００５０－０４
　　云南省２００２年从美国引进９个葡萄柚Ｃｉｔｒｕｓ
ｐａｒａｄｉｓｉ　Ｍａｃｆ．品种接穗，分别嫁接于７～８年生的
本地曼赛龙柚Ｃ．ｍａｘｉｍａｃｖ．Ｍａｎｓａｉｌｏｎｇ树上进行
种穗保存，２００４年开始挂果，９个品种的果实品质有
较大差异［１－２］。不同砧穗组合对葡萄柚生长势、产
量、果实大小、果汁品质等均有显著影响［３－５］。嫁接
亲和性在植株外部症状显露很早以前就有了生理上
的反应［６］。酶作为植物基因的直接产物，已在很多
植物嫁接领域作为嫁接亲和力的预测指标［７－８］。本
试验就９个葡萄柚品种与曼赛龙柚嫁接生理酶活性
方面进行研究，探寻不同嫁接组合生理酶活性大小
及变化规律，从而找到葡萄柚嫁接亲和关联酶，为嫁
接愈合生理酶研究及生产提供理论依据。
１　材料与方法
试验地位于云南省西双版纳州普文镇试验林
场，海拔８４０ｍ，属低山河谷地貌，有明显的干、湿季
之分，全年降水量１　６５５．３ｍｍ，５—１０月降水占
８０％，年均气温２０．１℃，月平均气温最低为１３．９
℃，最高为２３．９℃，土壤为由紫色沙岩发育而来的
赤红壤。以２年生曼赛龙柚营养袋苗为砧木，分别
从引进的９个葡萄柚品种母树树冠上部外围１年生
健壮枝条上取饱满芽为接芽进行嫁接。接穗品种分
别为火焰（Ｆｌａｍｅ）、矮化（Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｄｗａｒｆ）、亨路比
（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ　Ｒｕｂｙ）、哈路比（Ｈｕｄｓｏｎ）、帕利斯（Ｐｅｒｌ－
ｉｓｔ）、瑞路比（Ｒａｙ　Ｒｕｂｙ）、里德马叙（Ｒｅｅｄ　Ｍａｒｓｈ）、
瑞红（Ｒｉｏ　Ｒｅｄ）、星路比（Ｓｔａｒ　Ｒｕｂｙ）。
砧穗愈伤组织诱导：２０１１年３月１日进行愈伤
诱导，在各个砧、穗品种中分别选择２株树体健康、
长势良好的树，在东、南、西、北４个不同方位选择健
壮１年生枝条，在其１０ｃｍ处剪成１～２ｃｍ长的斜
口，用薄膜绑扎好。
　　嫁接愈伤组织诱导：２０１１年３月６日，采用带
木质部“Ｔ”形芽接法将９个葡萄柚品种接芽分别嫁
接在曼赛龙柚上，一个葡萄柚品种为１个处理，每处
理嫁接３０个芽，设３次重复。嫁接后第１５天接口
已能完全愈合［９］，解开绑扎带调查记录愈合情况。
　　愈伤组织采集：距愈伤部５ｃｍ处剪取砧、穗愈
伤组织和嫁接愈伤组织枝段，每个处理取３个单株，
液氮速冻后带回实验室，用小刀将愈伤组织轻轻刮
下，在－８０℃冰箱中保存备用。
酶活性测定：称取愈伤组织样品０．１ｇ，放入研
０５
DOI:10.13938/j.issn.1007-1431.2012.02.019
　２０１２年　第４１卷　第２期 中 国 南 方 果 树
钵，加入适量液氮和石英砂后研磨，研细后加入２
ｍＬ磷酸缓冲液（０．１ｍｏｌ·Ｌ－１，ｐＨ 值６．０）研磨成
匀浆，转入离心管，再分别用１ｍＬ磷酸缓冲液冲洗
研钵两次，合并液体，以１０　０００转·分－１冷冻离心
１５分钟，上清液即为酶粗提液，４℃冰箱储存备用。
过氧化物酶（ＰＯＤ）活性测定采用愈创木酚法［１０］，
４７０ｎｍ下测定吸光度值，酶活性以每克样品每分钟
吸光度变化值表示。超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性测
定采用氮蓝四唑（ＮＢＴ）光还原法［１１］，５６０ｎｍ下测
定吸光度值，酶活性以每克样品酶单位表示。多酚
氧化酶（ＰＰＯ）活性测定采用邻苯二酚法［１２］，４６０ｎｍ
下测定吸光度值，以每克样品每分钟吸光度增加０．１
为１个酶活性单位。过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性测定采
用 Ｈ２Ｏ２法［１３］，２４０ｎｍ下测定吸光度值，酶活性以
每克样品每分钟内吸光度变化值表示。
２　结果与分析
２．１　嫁接愈合情况　愈合是嫁接亲和的必要条件
之一，可作为嫁接亲和性的早期预测指标。嫁接１５
天后调查结果显示，在曼赛龙柚上愈合良好的葡萄
柚品种有火焰、亨路比、瑞路比、里德马叙和星路比，
愈合一般的有矮化和帕利斯，愈合较差或者芽片坏
死的有哈路比和瑞红。
２．２　酶活性　ＰＯＤ活性：试验结果显示，曼赛龙柚
砧木ＰＯＤ活性高于所有组合的嫁接愈合部，低于接
穗品种矮化、亨路比、哈路比和瑞红，高于其余接穗
品种。火焰、瑞路比和里德马叙在曼赛龙柚上嫁接
后，嫁接愈合部 ＰＯＤ活性略高于接穗，最大相差
５８．５９Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１；其余６个品种则是嫁接愈
合部ＰＯＤ活性明显低于接穗，最小相差４６２．１２Ｕ
·ｇ－１·ｍｉｎ－１。供试葡萄柚在曼赛龙柚砧木上嫁
接后愈合部ＰＯＤ活性与砧穗ＰＯＤ活性差值的绝对
值之和，以火焰、瑞路比和里德马叙较小，在３２０～
３３１Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１之间，矮化、哈路比均超过４
０００Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１，变异性较大，其余品种介于两
组之间（见表１和表２）。
ＳＯＤ活性：接穗和砧木ＳＯＤ活性均高于嫁接
愈合部；除亨路比、帕利斯和里德马叙外，其余品种
接穗ＳＯＤ活性高于砧木。供试葡萄柚在曼赛龙柚
上嫁接后，接穗与嫁接愈合部间ＳＯＤ活性差值以亨
路比和帕利斯较小，嫁接愈合部与砧木间ＳＯＤ活性
差值以瑞路比最低，嫁接愈合部ＳＯＤ活性与砧、穗
ＳＯＤ活性差值的绝对值之和从高到低依次为亨路
比＞帕利斯＞矮化＞里德马叙＞哈路比＞瑞路比＞
火焰＞星路比＞瑞红（见表１和表２）。
　　ＰＰＯ活性：接穗ＰＰＯ活性均高于嫁接愈合部
和砧木，嫁接愈合部和砧木非常接近。嫁接愈合部
ＰＰＯ活性与砧、穗ＰＰＯ活性差值的绝对值之和，依
次为瑞红＞星路比＞亨路比＞瑞路比＞哈路比＞矮
化＞里德马叙＞火焰＞帕利斯（见表１和表２）。
ＣＡＴ活性：火焰、亨路比接穗ＣＡＴ活性低于砧
木，其他品种接穗高于砧木。矮化、哈路比、帕利斯、
瑞路比和星路比嫁接愈合部ＣＡＴ活性低于砧木，
且活性较接近；火焰、亨路比、里德马叙、瑞红的嫁接
愈合部ＣＡＴ活性高于砧木，且高低差值大。火焰、
亨路比、里德马叙的接穗ＣＡＴ活性低于嫁接愈合
部，其余品种接穗均高于嫁接愈合部（见表１和表
２）。接穗间ＣＡＴ活性的变异系数为０．２６，嫁接愈
合部间ＣＡＴ活性的变异系数为０．４２。接穗与嫁接
表１　９个葡萄柚品种及曼赛龙柚（砧木）枝条
愈伤组织的酶活性
品　种 ＰＯＤ　 ＳＯＤ　 ＣＡＴ　 ＰＰＯ
火　焰 ３　８２３．１８　 ５５６．１６　 ７８６．０４　 ０．５８
矮　化 ４　７１３．４３　 ５４１．２２　１　３４９．３２　 ０．５９
亨路比 ４　３６２．５２　 ２１６．５７　 ７３３．２２　 ０．５８
哈路比 ４　７１４．２０　 ６１７．３６　１　４４２．２２　 ０．６０
帕利斯 ２　９４４．８５　 ２１４．６５　１　１６８．４９　 ０．５２
瑞路比 ３　８２５．３０　 ７６２．６８　１　０４８．７２　 ０．６１
里德马叙 ３　８３３．１９　 ４０６．３１　 ９７６．１５　 ０．５４
瑞红 ５　０７４．７２　 ８９０．９５　１　６２６．９４　 ０．６５
星路比 ３　４９１．８７　 ６３２．６４　１　３３９．３１　 ０．５６
砧　木 ４　１５４．０５　 ５１２．１８　 ９５７．７１　 ０．４５
　注：ＰＯＤ、ＣＡＴ、ＰＰＯ的单位为 Ｕ·ｇ－１·ｍｉｎ－１；ＳＯＤ
的单位为Ｕ·ｇ－１。表２同。
表２　９个葡萄柚品种在曼赛龙柚上嫁接后
接合部愈伤组织的酶活性
品　种 ＰＯＤ　 ＳＯＤ　 ＣＡＴ　 ＰＰＯ
火　焰 ３　８３３．２６　 １３８．３９　 １　４３６．９０　０．４６
矮　化 ２　１４１．８８　 ３０５．２６　 ６５１．３０　０．４５
亨路比 ２　６６８．３４　 １５７．９０　 １　５２７．２２　０．４４
哈路比 ２　２９１．４５　 ２４１．９２　 ６８６．１５　０．４８
帕利斯 ２　４８２．７３　 １４５．５９　 ５１３．４４　０．４５
瑞路比 ３　８８３．８９　 ３１０．９６　 ７０４．６５　０．５２
里德马叙 ３　８４７．８６　 ２２５．４１　 １　２３７．１１　０．４３
瑞红 ２　７２４．７３　 ２６４．４７　 １　０６８．２１　０．４７
星路比 ２　６８０．５７　 １４６．７８　 ５３３．３５　０．４１
１５
中 国 南 方 果 树 ２０１２年　第４１卷　第２期
愈合部间ＣＡＴ活性差值以里德马叙最低，嫁接愈
合部与砧木间ＣＡＴ活性差值以瑞红最低，嫁接愈
合部ＣＡＴ活性与砧、穗ＣＡＴ活性差值的绝对值之
和依次以里德马叙、瑞路比和瑞红最低。
３　小结与讨论
３．１　ＰＯＤ活性与嫁接亲和力的关系
过氧化物酶广泛存在于植物体中，是一种活性
较高的酶。在嫁接体发育过程中主要作用有参与清
除多余 Ｈ２Ｏ２、催化木质素合成和氧化吲哚乙酸，调
节嫁接体内激素水平促进嫁接愈合［１４］。ＰＯＤ在嫁
接愈合过程中参与木质素的合成，愈合部位酶活性
越高，嫁接体越容易愈合，过氧化物酶与嫁接亲和力
有关，可作为嫁接亲和力早期的预选指标［１５－１７］。本
试验认为葡萄柚嫁接过程中，接穗、嫁接愈合部和砧
木三者之间的ＰＯＤ活性越接近，嫁接愈合部ＰＯＤ
活性越高，嫁接愈合也较好，砧穗亲和力越强。这与
杨瑞［１８］在葡萄上的研究结果相似。因此，在葡萄柚
嫁接砧木选配上，以砧穗ＰＯＤ活性相近为宜。
３．２　ＳＯＤ活性与嫁接亲和力的关系
植物在逆境下受到的伤害以及植物对抗逆境的
能力往往与体内的ＳＯＤ活性水平有关［１９］。嫁接能
影响植物体活性氧代谢系统的动态平衡，增加活性
氧如超氧化物自由基、氢氧自由基、单线态氧等，破
坏或降低活性氧清除剂ＳＯＤ活性。大扁杏嫁接愈
合部ＳＯＤ活性低促进愈伤组织形成，从而提高嫁接
成活率［２０］。在本试验中，接穗和砧木ＳＯＤ活性明
显高于嫁接愈合部，且差值越大愈合越好，说明葡萄
柚嫁接愈合同样需要较低的ＳＯＤ活性；葡萄柚嫁接
愈合部、接穗与砧木ＳＯＤ活性差值的绝对值之和
低，同样有利于愈合。
３．３　ＰＰＯ活性与嫁接亲和力的关系
多酚氧化酶是植物体内的保护酶，当植物受到
伤害时，多酚氧化酶与多酚类化合物相互作用，产生
黑色和褐色物质，并形成隔离层，起到抑制嫁接成活
的作用［１８］。在嫁接亲和性研究中，通常嫁接不亲和
组合ＰＰＯ活性比嫁接亲和组合高，持续时间长。而
曲云峰［２０］在大扁杏嫁接愈合过程中认为较高的
ＰＰＯ活性有利于木质素的合成，从而促进导管的分
化和形成。可见，ＰＰＯ活性与嫁接亲和力之间关系
较复杂。本试验中，葡萄柚接穗ＰＰＯ活性与嫁接愈
合部同步，与代丽等［２１］的研究结论相似，即接穗
ＰＰＯ活性高则嫁接愈合部酶活性也高；葡萄柚嫁接
愈合情况与各部位ＰＰＯ活性及相互差值之间无明
显规律，有关机理有待研究。
３．４　ＣＡＴ活性与嫁接亲和力的关系
过氧化氢酶作为一种内源活性氧清除剂，在逆
境胁迫式衰老过程中能够清除植物体内过量的活性
氧，维持氧代谢平衡，保护膜结构，从而延缓褐
变［２２］。嫁接愈合过程中ＣＡＴ活性越高，嫁接越容
易成活，ＣＡＴ活性差异程度可以作为葡萄砧穗组合
嫁接亲和力早期的预选指标［１８］。葡萄柚不同嫁接
组合中，嫁接愈合部ＣＡＴ活性较高则愈合也较好，
且愈合较好组合的嫁接愈合部与接穗、砧木 ＣＡＴ
活性差值绝对值之和最低，因此，认为ＣＡＴ活性差
异程度同样可作为葡萄柚嫁接早期亲和力预选
指标。
参　考　文　献
［１］　姜超强，刘惠民．云南引进葡萄柚品种果实品质评价
［Ｊ］．西南林学院学报，２００７，２７（１）：３０－３２
［２］　李贤忠，刘惠民，姜超强，等．引进葡萄柚营养状况与
果实品质的相关性［Ｊ］．经济林研究，２００８，２６（２）：
１７－２２
［３］　谭　晓．凤凰柚砧木比较试验［Ｊ］．中国柑桔，１９９４，２３
（４）：２０
［４］　张展伟，谢细东，徐社金，等．葡萄柚砧穗组合试验
［Ｊ］，福建果树，２００６（１）：２６－２７
［５］　郭林榕，陈文光，熊月明，等．葡萄柚的产销及发展前
景［Ｊ］．福建果树，２００２（３）：３４－３５
［６］　仁藤伸昌．接き木の亲和、不亲和性［Ｊ］．化学与生物，
１９９３，２７（２）：８７
［７］　陈　红，王永清，袁　媛，等．茄子／番茄嫁接体发育
过程中的蛋白质含量、ＰＯＤ、ＣＡＴ和ＳＯＤ活性及其
同工酶研究［Ｊ］．四川农业大学学报，２００６，２４（２）：
１４４－１４７
［８］　张红梅，黄丹枫，丁　明，等．不同苗龄接穗的西瓜嫁
接体愈合过程中的３种酶活性变化［Ｊ］．植物生理学
通讯，２００５，４１（３）：３０２－３０４
［９］　王　瑶，刘惠民，何承忠，等．葡萄柚不同品种砧穗愈
合进程初步观测［Ｊ］．西南林学院学报，２００７，２７（１）：
４１－４４
［１０］张治安．植物生理学实验技术［Ｍ］．长春：吉林大学出
版社，２００８
［１１］刘　萍．植物生理学实验技术［Ｍ］．北京：科学出版
社，２００７
［１２］章金明．ＭｅＳＡ、叶蝉为害和机械刺伤对茶芽挥发物及
ＰＡＬ、ＰＰＯ 酶活性影响［Ｄ］．北京：中国农业科学
院，２００６
［１３］朱丽丽．柑桔应答低温胁迫的生理生化变化［Ｄ］．武
２５
　２０１２年　第４１卷　第２期 中 国 南 方 果 树
汉：华中农业大学，２００８
［１４］杨冬冬，黄丹枫．西瓜嫁接体发育中木质素合成及代
谢相关酶活性的变化［Ｊ］．西北植物学报，２００６，２６
（２）：２９０－２９２
［１５］陶金刚．“富有”甜柿砧穗组合嫁接亲和力及生态适宜
性研究［Ｄ］．雅安：四川农业大学，２００４
［１６］张玉兰，崔瑞雷，尹玉和，等．山楂枝皮过氧化物酶同
功酶及嫁接亲和力初探［Ｊ］．内蒙古农牧学院学报，
１９９３，１４（３）：１２－１８
［１７］肖　艳，黄建昌，高平飞，等．龙眼砧穗过氧化物酶同
工酶及嫁接亲合力初探［Ｊ］．西南农业大学学报，
２００１，２３（１）：７０－７２
［１８］杨　瑞．葡萄砧穗组合筛选及嫁接早期亲和力研究
［Ｄ］．兰州：甘肃农业大学，２００７
［１９］胡艳青，苏　媛，韩风叶，等．嫁接黄瓜在愈合过程中
的解剖观察和抗氧化酶活性的变化研究［Ｊ］．内蒙古
农业大学学报，２００７，２８（３）：２２４－２３０
［１９］汪宇立，刘晓忠，李建坤，等．玉米的涝渍伤害与膜脂
过氧化物和保护酶活性的关系［Ｊ］．江苏农业学报，
１９８８，４（３）：１－８
［２０］曲云峰．大扁杏嫁接成活生理生化特性研究［Ｄ］．杨
凌：西北农林科技大学，２００７
［２１］代　丽，宫长荣，史　霖，等．植物多酚氧化酶研究综
述［Ｊ］．中国农学通报，２００７，２３（６）：３１２－３１６
［２２］赵　霞，郑　谊，黄雪梅，等．低温贮藏对黄藤笋３种
酶活性的影响［Ｊ］．食品与发酵工业，２００９，３５（９）：
１９８－２００
（责任编辑：李治飞）
赤霉 酸 乳 油 对 脐 橙 着 果 及 果 实 品 质 的 影 响
刘浩强１，２，张云飞３，江高飞３，李鸿筠１，２，冉 春１，２，胡军华１，２，姚廷山１，２
（１中国农业科学院柑桔研究所，重庆，４００７１２；２国家柑桔工程技术研究中心；３西南大学植物保护学院）
　收稿日期：２０１１－１２－０５；修回日期：２０１１－１２－２５
作者简介：刘浩强（１９７８－），男，硕士，助理研究员，从事植物源农药的研究。电话：（０２３）６８３４９００５，
Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｈｑｑ２０００＠１２６．ｃｏｍ
摘　要：以脐橙为材料，用４％赤霉酸乳油和８５％赤霉酸结晶粉不同浓度处理幼果，研究其对着果
与果实品质的影响。结果表明，赤霉酸乳油与结晶粉一样，可显著提高前期着果率，使果实增大、增
重，且对果实品质无影响，但使用更方便、可靠。推荐剂量为３０～４０ｍｇ／ｋｇ。
关键词：４％赤霉酸乳油；脐橙；着果率；果实品质
中图分类号：Ｓ　６６６．４　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００７－１４３１（２０１２）０２－００５３－０２
　　赤霉素是植物体内重要的激素之一，对种子萌
发、茎伸长、花诱导及果实发育等具有重要作用［１］。
赤霉酸（ＧＡ３）是赤霉素的一种，ＧＡ３采后处理可抑
制杧果、李、杏、番茄和柿［２－８］等多种果实转色和硬度
下降，延缓后熟衰老进程，因此，可用于果蔬贮藏保
鲜及果实采后病害控制［９－１０］。
脐橙花量大，着果率低，生产上为提高其着果
率，常用赤霉酸结晶粉保果，在谢花７０％～８０％时
喷第一次，谢花后３～４周喷第二次。但使用赤霉酸
结晶粉时，需要用酒精溶解并添加展着剂才有较好
效果，操作较麻烦，生产中常因配制方法不当致使无
保果效果或效果差。４％赤霉酸乳油为液态制剂，直
接加水即可使用。笔者就４％赤霉酸乳油用于脐橙
保果的效果及其对果实品质的影响进行了研究。现
将结果报道如下。
１　材料与方法
２００７年在中国农业科学院柑桔研究所内进行
试验，试材为１１年生枳砧纽荷尔脐橙。设４％赤霉
酸乳油１　０００倍液（处理１）、１　３３３倍液（处理２）、
２　０００倍液（处理３），８５％赤霉酸结晶粉（上海市沪江
生化厂生产）２８　３３３倍液（处理４），共４个药剂处
理，以清水为对照。每小区１０ｍ２（２株树），随机区
组排列，４次重复，共２０个小区。４月１９日谢花
９０％以上时喷第一次药，５月８日幼果期喷第二次
药，６月２８日果实膨大期（第二次生理落果结束）喷
第三次药。每次用“ＭＡＴＡＢＩ”超绿１６型背负式喷
雾器（工作压强约３００ｋＰａ，每分钟喷水量０．５Ｌ）向
每株树喷洒１．５ｋｇ药液。
每株树在东南西北中各固定１个枝条，分别于
３５