全 文 ：第一军医大学学报 1白 8 6年第 6卷第 2期 19 1
小鼠胸腺细胞刀豆素 A受体研究
五、 刀豆素 A潇导受体帽形成的动力学扫描电镜观察
王金锐 王香云 刘连璞 .安连兵 .
(微生物学教研室 )
提 要 用扫描电镜观察了刀豆素 A诱导小鼠胸腺细胞成帽的形貌特征及动力学变化 。 经 F一 C o n A孵有后的
胸腺细胞有三种类型 :微聚 集型 , 可能为配体 (C o n A ) 与受体结合后在细胞上的早期表现 ; 块状聚集型 , 可能为过
渡型 ; 帽型 , 有乳头状 、 锥状和盔状三种 。 F一 C on A与胸腺细胞孵 育 10 m i m成帽率达 到高 峰 ( 3 0 . 3肠 ) , 但 Z m i m
亦有 1 6 . 9肠的细胞成 帽 , 说 明成帽速度是很快的 . 经秋 水仙硷处 理的胸腺细胞 , 成帽率明显增高 , 且在 Z m i m 达
到高峰 ( 50 肠 ) , 说明微管的破坏既提高了成帽率又加快了成帽速度 。 秋水仙硷处理 的胸腺 细 胞 与 F一C o n 孵育
Z m in 后 , 随 时间的推移 , 成帽率呈递减趋势 , 其原因有待于进一步探讨 。
关键词 刀 豆素 A 刀豆索 A受体 胸腺细胞 受体帽 扫描 电镜 秋水仙硷
我 们 在 应 用 国 产 荧 光一刀 豆 素 A一 ( F -
C o n A ) 诱导小鼠胸腺细胞成帽的研 究中 , 观
察到细胞荧光着色有四种类型 , 可能反映了细
胞成帽的动力学变化 ( ` ) 。 为了 更 直观地研究
成帽过程的微细变化 , 我们应用扫描电镜观察
了正常小鼠胸腺细胞和经秋水仙硷处理的细胞
同F 一 C o n A孵育不同时 间后细胞形貌特征 。
F o r m ay
r膜的铝盘上 , 经临界点干燥 , 离子溅
射喷镀后上镜 , 用 日立 S一 45 。扫描 电 镜观察 。
结 果
材料和方法
动物 IC R J/ C l近 交小鼠 , 6 、 8 周龄 。
试剂 异 硫 氰 酸 荧光黄一刀 豆 素 A ( F -
C on A )
,
J一州医药工业研究所研制并提供 。
秋水仙硷 F eu k a , 瑞士分装 。
F 一 C o n A 诱导成帽扫描电镜观 察 制备小
鼠胸腺细胞 P B S悬液 ( 8 X 10 ” 细胞 / m l ) , 取
o
.
s m l与等量 F 一 C o n A ( 2 0 0拼g / m l ) 混合 , s 7 oC
孵 育一定 时 间 ( Z m i n 、 6 m i n 、 l o m i n 和 2 0
m i n )
,
2
.
5 肠戊二醛固定 Z o m i n , P B S洗涤 2
次 , l 肠饿酸处理 20 m il ,再经 P B S洗 涤 2 次 ,
依 次 经 5 0 肠 、 6 0% 、 7 0 % 、 9 0 % 和 一0 0 肠丙酮
脱水后醋酸异戊酚置换 3 o n : i n , 离心后弃 去部
分上清 , 其余部分再成忌液 , 取少许滴于被有
. 电子显微镜宝
一 、 正常小 鼠胸腺细 胞及经 F 一 C o n A 处理
后细胞形貌特征
正常小鼠胸腺细胞呈球形 , 表面较光滑 ,
微绒毛呈波浪状 , 其间散在微绒毛样突起 ( 图
1 )
。
经 F 一 C o n A处理的胸腺细 胞有三种类型 。
1
. 微聚集型 波浪状微绒 毛消失 或明显
减少 , 表面略见粗糙 , 布有斑状聚集颗粒 ( 图
2 )
。
2
. 块状聚集型 表面粗糙 , 布 有 多个大
聚集斑 , 呈块状 , 丛状 ( 图 3 ) 。
3
. 帽型 聚集块集于细胞一极 成 帽状 。
帽状结构有乳头状 ( 图 4 ) 、 锥状 ( 图 5 ) 和
盔状 ( 图 6 ) 。
上述各型在经 F 一 C o n A 孵育不同时 间的各
组 中均可见到 : Z m in 者 , 以微聚集 型和块状
聚集型为多 , 帽型较少 ; 6 m in 以上者 , 帽 型
增多 , 微聚集型减少 。 ` 二

娜 (
50
1
和 3 0 2
26, 0 2 0
图 7 F一 C o n A 与胸腺 细胞 孵育不 同时间 C a p肠变化
联 , 使微小的聚集拉在一起而形成 大 的 聚 集
块 , 呈块状或丛状物 , 即本文所见 的 块 聚 集
型 。 上述变化是非能量依赖的过 程 ( “ ) , 在 此
基础上 , 借助于微丝的收缩 ( “ ’ ` ) , 使复 合 物
在膜上主动集于一极而成帽 , 这种帽状结构 ,
于扫描电镜下清晰可见 , 并呈不同形状 。
二 、 从图 7 可见 , 成帽率具有时间的依赖
性 , 孵育 2 m i n 为 16 . 9肠 , 6 m i n 达 2 4 . 1肠 ,
l o m i n达高峰 50 . 3 % , 而 Z o m i n C a p 肠即不再升
高 。 这表明配体一受 体 在膜上结合后到帽状结
构的形成需一定时间 。 从本文结果看 , 这一过
程是很快的 ; 10 m in 成帽率达到高峰 , 此点 与
光镜下观察的结果相一致 。 但在扫描电镜下观
察到 的成帽率较之光镜下要高得多 。
三 、 用秋水仙硷处理细胞后 , 成帽率 明显
高于对照 , 且成帽速度加快 , 在 Z m in 内即 达
50 0/
, 这说明微管对 帽形成具有制约作用 , 这
一作用的解除 , 促进了帽的形成 。 值得注意的
是 , 成帽率在 2 m in 后逐渐下降 , 而我们在 报
告 I 中所见 ( ` ) F 一 c o n A孵育 40 m in 其成帽 率亦
未下降 。 可见 , 成帽率在 Z m in 后 的 下 降 趋
势 , 似乎与微管 的破坏有关 。
( 1 9 8 5年 1 2月 2 日收稿 )
3021
2 6 , 0 2 0
11 1 I n
图 8 秋水仙硷处理胸腺 细 胞 后 F一 C o o A诱导 C a p肠的
变化
△一一△秋 水仙硷处 理的胸 腺细胞
· 一一 · 未经秋 水仙俭处理的细胞
后 , 再与 F 一 C o n A 孵育不同时间 , 细胞成 帽率
与未经秋水仙硷处理的细胞成帽率 比较 , 结果
见 (图 8 ) 。 秋水介l[硷处理的细胞 成帽有 以下特
点 : ①细胞成帽率 明显高于对照组 ; ②成帽速度
快 , 孵育 Z m i n) 戊帽率 即达 50 % ; ③ Z m in 以后
成帽率递降 。
参 考 文 献
讨 论
一 、 本文认为 经 F 一co n A 处理 的小 鼠 胸
腺细胞所呈现的三种 类 型 形 貌 , 可能反映了
帽形成过程的动力学变化 。 微聚集型可能是配
体一受 体 膜上结合的早期表现 。 C o n A 是:四 价
的多聚体 , 一个分子可同时与多个膜 受 体 结
合 , 它们彼此交联 即形成微沉 淀 ( M ic r .。 p r e -
c i iP t at io n)
, 它在膜上的表现可能 就 是 本 文
所 见的微聚型 。 块状聚集型 , 可能代表 由微聚
集向帽发展的过渡型 。 微沉淀的颗粒进一步交
1
. 王金貌 , 等 。 小鼠胸腺细 饱刀豆 素A 受体研 究 卜 荧
光刀豆素A染色及受体帽形成初探 。 第一军医大学学报
1 0 5 6 ; 6 ( 2 )
: 1 1 5
2
. 王祖武译 。 生物科学 动态 ; 增 刊 。 重 庆 : 科学 文 献 出
版社 。 10 7 5 , 6 了一了6
3
.
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,
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r a t e o f e a p f o r m i n g w a s f a s t
.
A f t e r t h e t h 了m o e v t e s w e r e t r e a -
t e d w i t lz e o l e l z i e i n e
,
t h e p e r e e n t a g e o f e a p f o r : I l a t i o n w a s s i g n i f i e a n t l y i n e r e a s e d
a n d t h e p e a k ( 5 0 肠 ) w a s r e a e h e d a t t w o n l i n u t e s , I t w a s s u g g e s t e d t h a t t il e d e s t r u -
e t i o n o f m i e r o t u b u l e s e o u l d p r o m o t e t l i e e a p 一 f o r m i n g s p o e d a n d i n e r e a s e t h e p e r e e n -
t a g e o f e a p f o r m a t i o n
.
l t w a s a l s o f o u n d t h a t t h e e a p f o r 扭 a t i o n t e n d e d t o 9 0 d o w n
a 5 t 1m e w e n t o n a f t e r t h o t h y m o e j t o s w h i e h h a d b e e n t r e a t e d b丁 e o l e h i e i n e w a s
i n e u b a t e d w i t h F
一 e o n A f o r t w o r n i n u t e s
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T h e e a u s e o f t h i s p h e n o m e n o n a w a i t s
f u r t l i e r i n v e s t i g a t i o n
.
k e y w o r d 5 t h y m o e j t o
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