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高效液相色谱法测定四川粉葛中葛根素的含量



全 文 :2009 年 6月第 6卷第 18期·药品鉴定·
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
粉葛为豆科植物甘葛藤(Pueraria thomsonii Benth.)的干
燥根,自古与野葛同作中药葛根用,也是 2005 版《中国药典》
一部新单列品种[1]。粉葛主含异黄酮成分葛根素、葛根素木糖
苷、大豆黄酮、大豆黄酮苷及大量淀粉等,具有解肌退热、生
津、透疹、生阳止泻之功效。葛根素是粉葛药材中的主要活性
成分之一,具有扩张冠状动脉、降低血压、减少心肌耗氧量、
抗心率失常、降血糖、降血脂、抗动脉硬化、改善微循环、抗肿
瘤等多种药理作用[2-3],为此,粉葛越来越受到人们的重视。以
往文献研究大多以野葛为主,而四川省内常用的葛根基本为
粉葛[4]。本文按照 2005 版《中国药典》一部粉葛项下供试品溶
液的制备进行提取,通过 HPLC 法对四川不同来源粉葛进行
葛根素含量测定, 可较为全面地评价四川粉葛药材质量,为
四川粉葛药材的开发和应用提供实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
惠普 1100 型高效液相色谱仪(惠普化学工作站,DAD 检
测器);德国塞多利斯 BP211D 型电子天平。
1.2 试药
葛根素对照品(中国药品生物制品检定所,批号为110752-
200511,供含量测定用);粉葛(成都 A 药房、广汉 B 医院、成
都 C 大药房、绵阳 D 医院、成都 E 研究院、成都 F 医院;其中
成都 C 大药房 5 批,批号为 070126、070601、070421、070703、
070902)经成都中医药大学中药鉴定教研室鉴定为豆科植物
甘葛藤(Pueraria thomsonii Benth.)干燥根炮制品;甲醇为色谱
纯,水为重蒸馏水,其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为依利特 C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相
为甲醇-水(25∶75),流速为 0.8 ml/min,检测波长为 250 nm,
柱温为 25℃。 理论塔板数按葛根素峰计应不低于 4 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品 4.40 mg,
置 25 ml 容量瓶中,加 30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即
得,葛根素对照品含量为 0.176 0 mg/ml。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约 0.8 g,
精密称定,置锥形瓶中,精密加入 30%乙醇 50 ml,称定重量,
加热回流 30 min,放冷,再称定重量,用 30%乙醇补足减失重
量,摇匀,滤过,滤液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液作
为供试品溶液。
2.3 系统适用性实验
在“2.1”项色谱条件下,葛根素与相邻峰可达到基线分
离,分离度大于 2.0,理论塔板数以葛根素计算为 5 118, 葛
根素对照品及粉葛药材色谱图见图 1。
2.4 线性关系考察
精密称取葛根素对照品 4.40 mg,置 25 ml 容量瓶中,加
30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得,葛根素对照品含量
为 0.176 0 mg/ml。精密吸取葛根素对照品溶液(0.176 0 mg/ml)
高效液相色谱法测定四川粉葛中葛根素的含量
刘 宁 1,盛 蓉 2,谈 静 2
(1.西南交通大学生物工程学院,四川成都 610031;2.成都中医药大学附属医院,四川成都 610072)
[摘要] 目的:采用 HPLC 法测定四川粉葛中葛根素的含量。方法:色谱柱为依利特 C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流
动相为甲醇-水(25∶75),流速为 0.8 ml/min,检测波长为 250 nm,柱温为 25℃。 结果:葛根素在 0.088 0~0.704 0 μg范
围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,回归方程为 A=336.35X-1.771 6,r=1.000 0,其平均回收率为 100.01%,RSD
为 0.14%(n=6)。 结论:该方法简便易行,结果准确,可用于四川粉葛药材的质量控制。
[关键词] 四川粉葛;葛根素;高效液相色谱法;含量测定;质量控制
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2009)06(c)-050-02
Content determination of puerarin in Sichuan Radix thomsonii puerariae by
HPLC
LIU Ning 1, SHENG Rong 2, TAN Jing2
(1.College of Bioengineering, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, China; 2.The Hospital Affiliated to Chengdu
University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China)
[Abstract] Objective: To determine the content of puerarin in Sichuan Radix puerariae thomsonii by HPLC. Methods:
The C18 column(4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used with a mobile phase consisted of methanol-water(25 ∶75) at the flow rate
of 0.8 ml/min, the detection wavelength was 250 nm and the column temperature was 25℃. Results: The content of puer-
arin showed good linearity in the rage of 0.088 0-0.704 0 μg, the regression equation was A=336.35X-1.771 6, r=1.000 0,
and the average recovery was 100.01% with a RSD of 0.14%(n=6). Conclusion: The method is simple, accurate and can
be used to control the quality of Sichuan Radix puerariae thomsonii.
[Key words] Radix puerariae thomsonii; Puerarin; HPLC; Content determination; Quality control
[作者简介] 刘宁(1984-),女,硕士研究生。
[通讯作者] 盛蓉(1967-),女,副主任药师,硕士研究生,主要从事中药制
剂与新药研发工作。
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2009 年 6月第 6卷第 18期 ·药品鉴定·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
5 ml,定容至 10 ml,稀释成浓度为 0.088 mg/ml 的标准溶液,
分别进样 1、2、4、6、8 μl,按上述色谱条件测定峰面积,并以
峰面积积分值 A 为纵坐标,进样量 X 为横坐标,得回归方程
A=336.35X-1.771 6,r=1.000 0。 结果表明 , 葛根素含量在
0.088 0~0.704 0 μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取“2.4”项下对照溶液 10 μl,按上述色谱条件,
重复进样 6 次,测定每次进样峰面积值,结果葛根素峰面积
的 RSD 为 0.35%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
取成都 C 大药房样品 5份,按“2.2.2”项下的方法制备供
试品溶液,分别进样 10 μl,测定峰面积值,计算含量及相对
标准偏差,结果葛根素含量的 RSD 为 1.43%(n=6),相对标准
偏差小于 2.0%,表明本方法重现性良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液,按上述色谱条件于 0、2、4、6、8、10 h
分别进样 10 μl,测定样品中葛根素的峰面积值,结果葛根素
峰面积的 RSD 为 0.79%(n=6),表明供试品溶液在 10 h 内基
本稳定。
2.8 回收率试验
取已知含量同一批粉葛药材约 0.25 g(葛根素含量为
6.169 6 mg/g),精密称定,共 6 份,分别添加葛根素对照品溶
液(1.315 7 mg/ml)各 1 ml,按前述方法制备供试品溶液,测
定,计算回收率,结果见表 1。
2.9 样品含量测定[5-6]
分别对 11 个样品按“2.2.2”项下的方法制备,按“2.1”项
下色谱条件进行含量测定。①不同来源粉葛药材葛根素含量
测定,见表 2。 ②同一来源不同批号粉葛药材葛根素含量测
定,见表 3。 均购于成都 G 中药饮片有限公司。
3 讨论
由表 2 可以看出,不同来源的粉葛中葛根素含量存在较
大差异,且 B、D医院的葛根素含量未达到药典的要求(≥0.3%);
由表 3也可以看出,同一来源不同批号的粉葛中葛根素含量
也存在较大的差异, 其中批号为 070126 的粉葛葛根素含量
未达到药典要求(≥0.3%),其原因可能与粉葛药材的炮制方
法等因素有关,产生含量差异的因素还有待进一步研究。 为
确保临床用药疗效,对四川粉葛的研究是非常必要的 [7-8]。
本文对四川不同来源的粉葛进行研究, 实验结果表明,
在临床应用中应严格控制其质量,以确保药效,本实验方法
有效可行,可为粉葛的进一步研究提供依据。
[参考文献]
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[8] 黄丽霞,贾晓斌,陈彦,等.HPLC 法测定不同产地夏枯草中熊果酸的含
量[J].中国药房,2008,19(12):910-911.
(收稿日期:2008-12-30)
070126
070601
070421
070703
070902
2.839 0
6.855 7
3.533 1
5.743 8
6.934 8
批号 含量(mg/g)
含量(mg/g)
3.208 2
2.548 8
3.715 8
2.711 2
3.511 4
6.169 6
1
2
3
4
5
6
成都 A 药房
广汉 B 医院
成都 C 大药房
绵阳 D 医院
成都 E 研究院
成都 F 医院
编号 来源
样品中含
量(mg)
1.556 6
1.580 7
1.565 8
1.586 8
1.572 6
1.574 5
1
2
3
4
5
6
0.252 3
0.256 2
0.253 8
0.257 2
0.254 9
0.255 2
编号
样品量
(g)
对照品加
入量(mg)
1.315 7
1.315 7
1.315 7
1.315 7
1.315 7
1.315 7
实测总
量(mg)
2.870 3
2.900 1
2.880 1
2.903 6
2.887 1
2.891 5
回收率
(%)
99.87
100.23
99.91
100.07
99.92
100.08
平均回收
率(%)
100.01
RSD
(%)
0.14
图 1 HPLC 色谱图
[A.葛根素对照品;B.粉葛药材(成都 C 大药房)]
表 1 粉葛中葛根素的加样回收试验结果
表 2 不同来源粉葛药材葛根素含量测定结果
表 3 同一来源不同批号粉葛药材葛根素含量测定结果
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