全 文 ：　182　
高效液相色谱法同时测定蝙蝠葛酚性碱片中
蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱含量
马丹凤1 , 王运君2 , 赵怀清1＊ (1.沈阳药科大学药学院 , 沈阳　110016;2.辽河油田中心医院药剂科 , 辽宁 盘锦　
124010)
摘要:目的　建立同时测定蝙蝠葛酚性碱片中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱含量的 HPLC 法。方法　采用 Diamonsil
C18色谱柱 (4.6 mm × 200 mm , 5 μm);流动相:乙腈-4%冰醋酸-三乙胺 (40 ∶ 220∶1.5);流速:1.0 mL ·
min -1 , 检测波长:282 nm;柱温:30 ℃。结果　蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的线性范围分别为 9.28 ～ 92.8 μg ·
mL-1 (R=0.999 9)和 2.8 ～ 28.0 μg·m L-1 (R=0.999 9)。平均回收率分别为 97.7%(RSD=1.1%)和 99.4%
(RSD=2.0%)。结论　本方法简便 、 准确 、 灵敏度高 、 重现性好 , 可作为蝙蝠葛酚性碱片的质量控制方法之一。
关键词:高效液相色谱法;蝙蝠葛酚性碱片;蝙蝠葛碱;蝙蝠葛苏林碱
中图分类号:R927.2 , R917　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)03-0182-03
Simultaneous determination of dauricine and daurisoline in
phenolic alkaloids of menispermum dauricum tablets by HPLC
MA Dan-fe ng 1 , WANG Yun-jun2 , ZHAO Huai-qing 1＊ (1.S chool of P harmacy , Shenyang Pharmaceutical Uni-
versity , Shenyang 110016;2.Department of Pharmacy , L iaohe Youtian Central Hospital , Panj in L iaoning
124010)
Abstract:Objective　 To establish an HPLC method fo r the simultaneous de te rmination of dauricine and dauriso line in
phenolic alkaloids of menispermum dauricum table ts.Methods　The sam ples w as separated on a Diamonsil C18 column
(4.6 mm×200 mm , 5 μm)a t 30 ℃.The mobile phase consisted of acetonitrile-4% g lacial acetic acid-trie thy lamine
(40∶ 220∶1.5).The flow rate w as 1.0 m L·min-1 and the detective wavelength was 282 nm.Results　The ca libra-
tion curves of dauricine showed good linea rity ove r 9.28-92.8 μg· mL-1 (R=0.999 9).The ave rage recove ry was
99.4%, and RSD was 2.0%.The calibr ation curve s o f daurisoline showed good linearity o ver 2.8-28.0 μg ·m L-1
(R=0.999 9).The ave rage recovery w as 97.7%, and RSD was 1.1%.Conclusion　The method is simple , accurate
and sensitive w ith good reproducibility.I t can be used to contr ol the quality of phenolic alkalo ids o f menispe rmum dau-
ricum tablets.
Key words:HPLC;pheno lic alka loids of menispermum dauricum table ts;dauricine;dauriso line
　　蝙蝠葛酚性碱片是由蝙蝠葛 Menispemum dauricum
DC.干燥根茎中提取的酚性总碱为原料制成的片剂。具有
活血化瘀 , 行气止痛等功效[ 1] 。用于治疗房性早搏 , 阵发性
室上性心动过速 , 阵发性心房颤动 , 频发性房室结性早搏及
频发性室性早搏等心率失常病症[2-4] 。其中蝙蝠葛碱和蝙蝠
葛苏林碱为主要有效成分[5] 。蝙蝠葛酚性碱片未收载于药典
中 , 文献[ 6-10]报道了不同产地药材和不同剂型中蝙蝠葛碱和
蝙蝠葛苏林碱的含量测定方法 , 但未见同时测定两者含量的
文献报道 , 本实验建立了同时测定蝙蝠葛酚性碱片中蝙蝠葛
碱和蝙蝠葛苏林碱含量的高效液相色谱法 , 以期为建立该
制剂科学合理的质量控制方法提供依据。
1　仪器与试药
LC-10AT VP-UV 高效液相色谱仪 (日本岛津),
SPD-10A VP紫外检测器 (日本岛津), SEPU2010 色谱工
作站 (浙江大学);BS-124S 电子分析天平 (北京塞利多斯
仪器系统有限公司);KQ-400KDE 型高功率数控超声波清
洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。蝙蝠葛酚性碱片 (规格:
100 mg·片-1 , 批号:070501、 070502 、 070505 , 伊春药业
有限公司);蝙蝠葛碱 、 蝙蝠葛苏林碱对照品 (纯度:98%,
深圳市美荷生物科技有限公司);乙腈 (色谱纯 , 天津市康
科德科技有限公司);其他试剂均为分析纯;水为双蒸馏水
(实验室自制)。
　　作者简介:马丹凤 , 女 , 硕士研究生 , 主要从事中药质量控制方法与药动学研究 , Tel:15840268389 , E-mail:xiaofengfeng307@
126.com　　＊通讯作者:赵怀清 , 男, 教授 , 主要从事中药质量控制方法与药动学研究 Tel:(024) 23986250 Email:zhaohq1955@si-
na.com
Cen t ral South Pharmacy.March 2010 , Vol.8 No.3　中南药学 2010年 3月第 8卷第 3期
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2　方法与结果
2.1　色谱条件
Diamonsil C18 (4.6 mm × 200 mm , 5μm);流动相:乙
腈-4%冰醋酸-三乙胺 (40 ∶220 ∶1.5);检测波长:282
nm;流速:1.0 m L · min -1 ;柱温:30 ℃, 进样量:20
μL。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取蝙蝠葛碱对照品 5.8 mg , 蝙蝠葛苏林碱对照
品 3.5 mg , 分别置于 10 mL量瓶中 , 加 50%甲醇超声溶解
并稀释至刻度 , 摇匀 , 得 0.58 mg · mL -1蝙蝠葛碱对照品
和 0.35 mg·m L-1蝙蝠葛苏林碱对照品溶液。精密量取蝙
蝠葛碱 、 蝙蝠葛苏林碱对照品溶液 4.0 mL 和 2.0 mL , 置于
25 mL 量瓶中 , 加 50%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得混合对
照品储备液 (含蝙蝠葛碱 92.8 μg · mL -1 , 蝙蝠葛苏林碱
28.0 μg·m L-1)。
2.3　供试品溶液的制备
取本品 10 片 , 精密称定 , 研细 , 取约 0.1 g , 置于
100 mL 量瓶中 , 加流动相适量 , 超声处理 30 min , 放至室
温 , 加流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 弃去初滤液 , 取续滤
液 2 m L置于 10 mL 量瓶中 , 加流动相稀释至刻度 , 摇匀 ,
过 0.45 μm 微孔滤膜 , 取续滤液 , 作为供试品溶液。
2.4　阴性样品溶液的制备
按蝙蝠葛酚性碱片的制备方法制备不含蝙蝠葛酚性总碱
的阴性样品 , 并按 “ 2.3” 供试品溶液的制备项下操作 , 即
得。
2.5　色谱系统适用性试验
在 “2.1” 项色谱条件下 , 理论塔板数按蝙蝠葛碱 、 蝙
蝠葛苏林碱计 , 均≥4 000。蝙蝠葛碱 、 蝙蝠葛苏林碱与相
邻组分峰的分离度均>1.5 , 拖尾因子均在 0.95 ～ 1.05 , 阴
性样品无干扰 (见图 1)。
图 1　对照品 (A)、 样品 (B)和阴性样品 (C)色谱图
Fig 1　HPLC of references (A), sam ple (B), and negative sam ple (C)
1.蝙蝠葛苏林碱 (dauris oline);2.蝙蝠葛碱 (dauricine)
2.6　标准曲线制备
依次精密量取混合对照品储备液 1.0、 2.0 、 4.0、 6.0 、
8.0 m L , 置 10 mL 量瓶中 , 用 50%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,
制成系列标准混合对照品溶液。分别取上述溶液和混合对照
品储备液 20 μL 注入高效液相色谱仪 , 以峰面积 Y 为纵坐
标 , 蝙蝠葛碱 、 蝙蝠葛苏林碱浓度 X (μg ·m L-1)为横坐
标 , 分别绘制标准曲线 , 得回归方程分别为:Y =1.276×
104 X +1.643 ×104 , r=0.999 9;Y =8.569 ×103 X -
3.134×103X , r=0.999 9 , 结果表明蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏
林碱在 9.28 ～ 92.8 μg ·m L-1和 2.8 ～ 28.0 μg · mL-1与峰
面积线性关系良好。
2.7　精密度试验
取混合对照品溶液 , 重复进样 5 次 , 测定峰面积 , 结果
蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱峰面积的 RSD 分别为 0.65%和
0.47%。
2.8　重复性试验
取蝙蝠葛酚性碱片 (批号:070501)约 0.1 g , 共 6 份 ,
按 “ 2.3” 项下方法制备供试品溶液 , 进样测定 , 按外标法
计算蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱质量分数的 RSD 分别为
0.4%和 0.27%。
2.9　稳定性试验
取供试品 (批号:070501)溶液分别在 0 、 1 、 2 、 4 、
6、 8 h 精密吸取 20 μL 注入液相色谱仪中测定。结果表明 ,
供试品溶液在 8 h 内稳定性良好 , 其中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏
林碱峰面积的 RSD 分别为 0.44%和 0.37%。
2.10　回收试验
精密称取样品 (批号:070501)0.05 g , 共 9 份 , 分别
加入低 、 中 、 高 3 个浓度对照品溶液 , 按 “ 2.3” 项下制得
供试品溶液 , 进样测定 , 计算回收率 , 结果见表 1。
表 1　回收试验结果 (n=3)
Tab 1　Recovery(n=3)
化合物
(com pound)
原有量
(o riginal
conten t)
/mg
加入量
(added
content)
/mg
检得值
(detected
content)
/m g
回收率
(recovery)
/ %
平均值
(average
recovery)
/ %
RSD
/ %
蝙蝠葛苏林碱 2.949 1.472 4.419 99.9 97.7 1.1
2.942 1.472 4.398 98.9
2.934 1.472 4.353 96.4
2.938 2.944 5.789 96.8
2.945 2.944 5.823 97.8
2.941 2.944 5.815 97.6
2.948 4.416 7.230 97.0
2.942 4.416 7.221 96.9
2.944 4.416 7.259 97.7
蝙蝠葛碱 9.765 4.880 14.53 97.6 99.4 2.0
9.658 4.880 14.58 100.9
9.760 4.880 14.58 98.8
9.755 9.759 19.70 101.9
9.692 9.759 19.42 99.7
9.765 9.759 19.76 102.4
9.882 14.64 24.09 97.1
9.760 14.64 24.13 98.2
9.758 14.64 24.07 97.8
2.11　样品测定
取各批蝙蝠葛酚性碱片约 0.1 g , 精密称定 , 按 “ 2.3”
项下方法制备供试品溶液 , 在 “ 2.1” 项色谱条件下进样 ,
测定 , 按外标法计算 , 结果见表 2。
中南药学 2010年 3月第 8卷第 3期　Cent ral Sou th Pharmacy.March 2010, Vol.8 No.3
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表 2　样品含量测定结果
Tab 2　Determination of sample (n=3)
批号
(Lot No.)
蝙蝠葛碱 (dauricine)
含量
(content)
/mg· g -1
RSD
/ %
蝙蝠葛苏林碱 (dau ri soline)
含量
(content)
/mg· g -1
RSD
/%
070501 195.19 0.45 58.87 0.28
070502 195.48 0.14 57.49 0.39
070505 195.42 0.28 58.22 0.29
3　讨论
3.1　流动相的选择
本文曾考察乙腈-磷酸二氢钾系统 , 乙腈-磷酸系统[ 11]和
乙腈-冰醋酸系统。乙腈-磷酸二氢钾系统不但配置麻烦 , 柱
效和峰形也不理想;乙腈-磷酸系统有拖尾现象 , 乙腈-冰醋
酸系统分离情况较为理想 , 柱效也符合要求。但试验中发
现 , pH 对各待测组分的保留行为 、 峰形以及柱效影响较
大。在确定了流动相组成的基础上 , 又考查了 pH 在 2.5 ～
9.0 , 待测物质的峰形和柱效变化情况。结果表明:乙腈-冰
醋酸系统在 pH=3.5 时 , 峰形较好 , 柱效较高 , 而当 pH>
5时 , 待测物质不出峰。因此 , 最后确定流动相为乙腈-4%
冰醋酸-三乙胺 (40∶220∶1.5)。
3.2　提取溶剂及方法的选择
考察提取溶剂时 , 曾对 50%甲醇 、 乙酸乙酯[12] 、 乙酸
乙酯-氨水 、 氯仿 、 氯仿-氨水[13] 和流动相进行了比较 , 在超
声处理条件一致的情况下 , 用 50%甲醇和流动相作提取剂 ,
色谱峰分离情况较好 , 样品峰峰面积较大。又由于用流动相
作提取溶剂时 , 溶剂峰较小故选用流动相为提取溶剂。曾用
流动相为提取溶剂考察了超声和加热回流两种提取方法 , 超
声处理效果较好。本文还对超声时间进行了考察 , 结果表明
超声 30 min 基本可以将待测组分提取完全且组分含量稳定。
3.3　检测波长的选择
据相关文献报道 , 蝙蝠葛碱最大吸收波长约为 280 nm ,
蝙蝠葛碱与蝙蝠葛苏林碱结构相似 , 故选用 282 nm 作为测
定波长。
3.4　小结
本文所建方法简单易行 、 重现性好 , 尤其是对流动相的
考察方面较为全面。采用了乙腈-冰醋酸系统 , 测定蝙蝠葛
酚性碱片中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱 , 具有很强的实用性 ,
为蝙蝠葛酚性碱片质量控制提供了一个可靠的方法。
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(收稿日期:2009-12-31;修回日期:2010-01-26)
不同炮制方法对知母中多糖含量的影响
李习平1 , 杨梓懿2 , 彭一波2 , 余林岚1 (1.岳阳职业技术学院药学与检验系 , 湖南 岳阳　414000;2.湖南中医药大
学药学院 , 长沙　410208)
摘要:目的　比较不同炮制方法对知母中多糖含量的影响。方法　采用苯酚-硫酸法测定各供试样品中知母的多糖
含量。结果　不同炮制方法处理后知母中多糖含量高低依次为盐炙品>清炒品>酒炙品>麸炒品>生品。结论　知
母经炮制后均有利于多糖的溶出 , 其中以盐炙品含量最高。
　　基金项目:湖南省教育厅科研项目 (编号 09c1301)。
作者简介:李习平 , 女 , 硕士 , 主要从事中药炮制理论与饮片质量控制的研究, T el:(0730) 8677349 , E-mail:w aw j2008ggg @
163.com.cn
Cen t ral South Pharmacy.March 2010 , Vol.8 No.3　中南药学 2010年 3月第 8卷第 3期