全 文 ：红蓼槲皮素含量分析
刘程诚1，刘 娟2* ，关 力1
1. 黑龙江农业职业技术学院( 黑龙江 佳木斯 154007) ;2. 佳木斯大学药学院( 黑龙江 佳木斯 154002)
摘 要 目的:建立了高效液相色谱法同时测定黑龙江五个地区 －佳木斯市四丰山、桦南驼腰子镇、汤原汤旺
河、伊春市南岔县和申家店的花前期、花中期及花后期槲皮素含量的分析。采用 C18 －色谱柱，甲醇 － 0. 3%磷酸为流
动相、梯度洗脱，检测波长 310nm。五个地区均有较好的线性范围和良好的线性关系。回收率 99. 3 － 103. 9，RSD 为
2. 2% － 4. 3%。
关键词:槲皮素;高效液相色谱法;测定
表5 水苏糖对H22荷瘤小鼠瘤重的影响(x ±s，n =10)
组别 平均瘤重(g) 抑瘤率(%)
正常对照组 2． 07 ± 0． 13 —
阴性对照组 1． 91 ± 0． 16 —
环磷酰胺组 0． 89 ± 0． 16* 53． 40
水苏糖 低 0． 81 ± 0． 14* 57． 59
+ 中 0． 61 ± 0． 08＊△ 68． 06
环磷酰胺 高 0． 45 ± 0． 11＊△ 76． 44
注:与生理盐水组比较，* P ＜ 0． 05; 与环磷酰胺组比
较，△P ＜ 0． 05
3 讨论
本实验采用醇沉法提取地黄中的水苏糖，不仅可以有
效的减少地黄中的水溶性杂质，还可以有效的抑制地黄中
酶的活性，防止水苏糖水解，也能避免大量多糖和蛋白质等
水溶性成分的溶出，有利于水苏糖的分离纯化。实验结果
表明地黄经炮制后对水苏糖的含量影响很大，说明水苏糖
在地黄炮制过程中被水解。研究表明鲜地黄烘焙过程中，
水苏糖以脱半乳糖为主，生成棉子糖，而在生地黄蒸制过程
中，以脱果糖为主，生成甘露三糖［10］，因而造成了不同地黄
炮制品中水苏糖含量发生改变。
研究表明地黄中含有多种化学成分，包括苷类、糖类及
氨基酸等，苷类中的梓醇、糖类成分均具有抗肿瘤作
用［11］［12］。地黄寡糖是继苷类、地黄多糖之后发现的地黄又
一糖类活性组分，属于低聚糖，具有补血，降血糖，抗肿瘤，
增强免疫等药理活性［1］。地黄通过离子交换树脂分离的中
性组份占 74． 4%，在中性组份中糖类占 90． 9%，包括葡萄
糖、半乳糖、果糖、甘露糖、蔗糖、棉子糖、甘露二糖、水苏糖
和毛蕊糖等寡糖，其中水苏糖所占比例最高，达 64． 9%。以
往对地黄寡糖抗肿瘤活性的研究以其混合物为主，水苏糖
在寡糖中所占比例之高是否是地黄或地黄寡糖发挥抗肿瘤
活性的主要成分之一? 因此，本实验以研究地黄寡糖中水
苏糖的抗肿瘤活性为目的，通过采用 MTT 法和台盼蓝法探
讨其对人肝癌 HepG － 2 细胞和人胃癌 SGC － 7901 细胞生长
的影响，实验结果表明水苏糖可以明显抑制肿瘤细胞的增
殖。采用体内联合环磷酰胺对 H22荷瘤小鼠瘤重的影响，结
果显示水苏糖可剂量依赖地增强环磷酰胺的肿瘤抑制作
用。综上所述，在本实验条件下水苏糖体内外均具有抗肿
瘤作用，但水苏糖的抗肿瘤机制尚不明确，需要进一步实验
研究。
参考文献
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收稿日期:2012 － 07 － 09
·415· 黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 4 2012
DOI:10.14035/j.cnki.hljyy.2012.04.022
中图分类号:R284;R927. 7 文献标识码:A 文章编号:1006 － 2882(2012)04 － 514 － 04
Polygonum Quercetin Content Analysis
Liu Chengcheng1，et al
Heilongjiang Agricultural Vocational and Technical College，Jiamusi of Heilongjiang Province(154007)
Abstract:To establish a high performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of five areas
in Heilongjiang － Jiamusi city Feng four hill，camel，near the town of Tangyuan Tangwang River birch，Yichun City Branch
County and store flowers，flowers and flower early metaphase late quercetin content analysis. Using C18 column chromatography，
methanol － 0. 3% phosphoric acid as mobile phase，gradient elution，detection wavelength 310nm. The five regions have good
linear range and good linear relationship. The recovery rate of99. 3 － 103. 9，RSD for2. 2% － 4. 3% .
Key words:Quercetin;HPLC;Determination
红蓼为较常用中药，用药历史悠久，具有散血消症，消
积止痛，胃脘胀痛等功效。近年的药理研究发现，红蓼具有
良好的抑菌作用、抗肿瘤作用、提高免疫力、利尿作用等。
黄酮类化合物［1，2］主要包括牡荆素、异牡荆素、荭草素、异荭
草素、槲皮苷、异槲皮苷［3，4］。木犀草素、芹菜素。花旗松
素、山柰素、柯伊利素。芦丁、木犀草素、儿茶素、原儿茶酸、
没食子酸［5］。还含有 3 个木脂素类化合物［6］，分别是牛蒡
子苷、拉帕酚 B和红蓼脂素以及从红蓼植物根茎中分离出 2
种甾体皂苷化合物［7］。《中国药典》2010 年版未收录红蓼
中药根、茎、叶的测定方法。本研究在文献的基础上，优化
色谱条件，建立了利用高效液相色谱测定黑龙江五个地区
红蓼根、茎、叶槲皮素的含量。该方法简便可行、快速准确。
1 仪器与试剂
Agilent － ll00 型高效液相色谱仪( 安捷伦公司) ，槲皮素
对照品( 中国药品生物制品检定所) ，甲醇为色谱纯，水为重
蒸水，样品采自佳木斯市四丰山、桦南县驼腰子镇、伊春市
南岔县、汤原县汤旺河、申家店境内野生全株红蓼。经鉴定
为红蓼科植物红蓼(Polygonum orientale Linn) 干燥根、茎、
叶。
2 方法与结果
2. 1 溶液配制
对照品溶液的制备:精密称定槲皮素对照品8 mg，置于
50mL容量瓶中，加入甲醇溶液进行溶解，稀释至刻度，震荡
摇匀，即得 0. 15mgmL －1的槲皮素对照品溶液。
供试品溶液制备:取黑龙江5 个不同地区生长的，且不
同生长时期(5 月，7 月，9 月) 的红蓼的根、茎、叶各约
0. 25g，精密称定，置于 20mL 容量瓶中，加入甲醇约 18mL，
进行超声处理 30min后取出，放置至室温，加甲醇至刻度，摇
匀，过滤，取续滤液，即为供试品溶液。
2. 2 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相 A为甲醇，
B为 0. 3%磷酸水溶(v /v) ，按表中数值梯度进行洗脱，流速
1. 0ml /min，检测波长 310nm，柱温 20℃，样品的进样量均为
10μg，红蓼根、茎、叶的流动相梯度分别( 见表1 － 3)。
表 1 红蓼根流动相梯度
时间(min)
根
流动相(%) 流动相(%)
0 30 70
10 40 60
40 50 50
55 80 20
表 2 红蓼茎流动相梯度
时间(min)
茎
流动相(%) 流动相(%)
0 30 70
10 35 65
30 25 75
50 50 50
60 60 40
表 3 红蓼叶流动相梯度
时间(min)
叶
流动相(%) 流动相(%)
0 20 80
10 20 80
20 40 60
50 40 60
60 80 20
2. 3 线性试验
精密吸取 30、60、90、120、150μg 槲皮素对照品溶液，进
样，以峰面积积分值为纵坐标，槲皮素的进样量为横坐标绘
制此标准曲线，计算得 y = 1038. 4x + 0. 3786，r2 = 0. 999。结
果表明槲皮素在 30 － 150μg之间呈良好的线性关系( 见表4
和图 1)。
表 4 槲皮素线性关系考察
进样量(μL) 30 60 90 120 150
峰面积 315. 231 632. 556 924. 874 1225. 69 1576. 225
图 1 槲皮素标准曲线
·515·黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 4 2012
2. 4 精密度试验
取对照品溶液 30μL，重复进样 5 次，按上述色谱条件进
行测定，其相对保留时间稳定，分别记录峰面积，平均峰面
积为 312. 29，RSD为 0. 9%(n = 5) ，表明仪器精密度良好
( 见表5)。
表 5 精密度试验考察
测定次数 1 2 3 4 5 x RSD%
色谱峰面值 325. 782 312. 425 307. 789 298. 582 316. 748 312. 29 0. 9
2. 5 重复性试验
取汤旺河野生红蓼 7 月份根的样品，按供试品溶液的
制备方法平行制备 5 份，按上述色谱条件进行测定，分别记
录峰面积，并计算其槲皮素含量，结果平均含量为 0. 055%，
RSD为 2. 5%(n = 5) ，表明该方法重复性良好( 见表6)。
表 6 重复性试验考察
编号 峰面积 槲皮素(%) x(%) RSD(%)
1 287. 584 0. 056
2 268. 695 0. 051
3 308. 145 0. 059 0. 055 2. 5
4 294. 952 0. 057
5 276. 458 0. 053
2. 6 加样回收率试验
精密称取 5 份已知含量的样品粉末 5g，分别准确加入
适量槲皮素对照品，按供试品溶液的制备方法处理并进行
测定，结果平均回收率为 99. 884%，RSD = 3. 0%(n = 5)。
按上述色谱条件测定，计算回收率，本方法回收率较好，方
法可行( 见表7)。
表 7 加样回收率试验考察
样品号 取样量/ g
含量
/mg
加入量
/mg
测得总
含量 /mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 5. 1536 0. 6369 0. 640 1. 3264 103. 87
2 4. 9738 0. 6103 0. 591 1. 1804 98. 26
3 5. 0894 0. 6162 0. 650 1. 2567 99. 25 99. 884 3. 0
4 5. 0954 0. 6078 0. 617 1. 2058 98. 45
5 5. 1032 0. 6344 0. 635 1. 2646 99. 59
2. 7 稳定性试验
吸取对照品溶液 30μg，分别于 0，2，4，6，8h 进样测定，
记录峰面积，平均峰面积为 312. 801，RSD 为 2. 7%(n = 5) ，
表明样品溶液在 8h内基本是稳定。可满足实验要求( 见表
8)。
表 8 稳定性试验考察
时间(h) 峰面积 x RSD
0 315. 792
2 324. 526
4 297. 626 312. 801 2. 7
6 308. 479
8 317. 584
2. 8 样品测定
取黑龙江省佳木斯市四丰山、桦南县驼腰子镇、伊春市
南岔县、汤原县汤旺河、申家店野生红蓼在不同月份(5 月、7
月、9 月) 根、茎、叶的药材，按供试品溶液制备方法制得供试
品溶液，精密吸取供试品溶液 30μL，按上述色谱条件测定，
根据峰面积计算样品中槲皮素的含量，结果表明，五个地区
红蓼药材中槲皮素的含量均大于 0. 40%，其中以四丰山地
区野生红蓼中槲皮素的含量为最高( 见表9 － 14、图 2 － 7)。
表 9 5 月份各地区根茎叶峰面积比较
组别 根峰面积(x ± S) 茎峰面积(x ± S) 叶峰面积(x ± S)
四丰山 401. 6948 ± 2. 9561＊＊＊ 213. 8802 ± 3. 4269＊＊＊ 199. 4698 ± 2. 4682＊＊＊
驼腰子镇 287. 4643 ± 0. 6589＊＊＊ 177. 3210 ± 1. 5006＊＊＊ 164. 4326 ± 1. 4230＊＊
南岔县 228. 3087 ± 0. 2443 152. 5110 ± 2. 0001 150. 1910 ± 2. 1788
汤旺河 239. 7393 ± 0. 9171＊＊＊ 152. 6906 ± 2. 1177 150. 3650 ± 2. 2455
申家店 315. 3600 ± 1. 9360＊＊＊ 162. 2913 ± 3. 6646* 154. 1283 ± 4，1525
注:与南岔县根、茎、叶峰面积相比:* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜
0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001
表 10 7 月份各地区根茎叶峰面积比较
组别 根峰面积(x ± S) 茎峰面积(x ± S) 叶峰面积(x ± S)
四丰山 410. 5246 ±1. 18455＊＊＊ 218. 8778 ±1. 6865＊＊＊ 208. 3874 ±1. 3627＊＊＊
驼腰子镇 329. 6736 ±1. 4417＊＊＊ 183. 4033 ±0. 7611＊＊＊ 180. 2873 ±0. 8983＊＊＊
南岔县 236. 4466 ±1. 6885 164. 2970 ±2. 9646 158. 3150 ±2. 1034
汤旺河 236. 1926 ±1. 0331 163. 5060 ±0. 7925 158. 4560 ±3. 1018
申家店 334. 7010 ±2. 2092＊＊＊ 178. 3453 ±2. 1567＊＊＊ 168. 2126 ±1. 1365＊＊
注:与南岔县根、茎、叶峰面积相比:＊＊P ＜ 0. 01，＊＊＊P
＜ 0. 001
表 11 9 月份各地区根茎叶峰面积比较
组别 根峰面积(x ± S) 茎峰面积(x ± S) 叶峰面积(x ± S)
四丰山 410. 8042 ± 4. 3786＊＊＊ 202. 9658 ± 2. 2977＊＊＊ 191. 1344 ± 2. 3993＊＊＊
驼腰子镇 328. 4790 ± 1. 0650＊＊＊ 171. 6430 ± 2. 1370* 178. 4690 ± 0. 6803＊＊＊
南岔县 234. 5063 ± 0. 7276 163. 2200 ± 2. 9216 157. 2936 ± 2. 1873
汤旺河 234. 4596 ± 1. 6217 162. 9826 ± 2. 6270 159. 2920 ± 0. 8056
申家店 330. 7793 ± 2. 8663＊＊＊ 178. 3196 ± 2. 4344＊＊＊ 157. 3970 ± 1. 8444
注:与南岔县根、茎、叶峰面积相比:* P ＜ 0. 05，＊＊＊P ＜
0. 001
表 12 5 月份各地区根茎叶槲皮素含量比较
组别 根槲皮素含量/mg(x ± S)
茎槲皮素含量
/mg(x ± S)
叶槲皮素含量
/mg(x ± S)
四丰山 0. 3700 ± 0. 0383＊＊＊ 0. 2056 ± 0. 0025＊＊＊ 0. 1903 ± 0. 0070＊＊＊
驼腰子镇 0. 2770 ± 0. 0020* 0. 1700 ± 0. 0040＊＊＊ 0. 1573 ± 0. 0015
南岔县 0. 2166 ± 0. 0032 0. 1460 ± 0. 0030 0. 1436 ± 0. 0035
汤旺河 0. 2190 ± 0. 0020 0. 1483 ± 0. 0031 0. 1470 ± 0. 0020
申家店 0. 3030 ± 0. 0010＊＊ 0. 1563 ± 0. 0031* 0. 1480 ± 0. 0060
注:与南岔县根、茎、叶槲皮素含量相比:* P ＜ 0. 05，＊＊P
＜ 0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001
表 13 7 月份各地区根茎叶槲皮素含量比较
组别 根槲皮素含量/mg(x ± S)
茎槲皮素含量
/mg(x ± S)
叶槲皮素含量
/mg(x ± S)
四丰山 0. 4013 ± 0. 0176＊＊＊ 0. 2110 ± 0. 0045＊＊＊ 0. 1993 ± 0. 0040＊＊＊
驼腰子镇 0. 3180 ± 0. 0020＊＊＊ 0. 1760 ± 0. 0020＊＊＊ 0. 1723 ± 0. 0021＊＊＊
南岔县 0. 2280 ± 0. 0010 0. 1580 ± 0. 0020 0. 1530 ± 0. 0020
汤旺河 0. 2263 ± 0. 0025 0. 1580 ± 0. 0020 0. 1533 ± 0. 0015
申家店 0. 3223 ± 0. 0025＊＊＊ 0. 1723 ± 0. 0015＊＊ 0. 1616 ± 0. 0015*
·615· 黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 4 2012
注:与南岔县根、茎、叶槲皮素含量相比:* P ＜ 0. 05，＊＊P
＜ 0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001
表 14 9 月份各地区根茎叶槲皮素含量比较
组别 根槲皮素含量/mg(x ± S)
茎槲皮素含量
/mg(x ± S)
叶槲皮素含量
/mg(x ± S)
四丰山 0. 3980 ± 0. 0043＊＊＊ 0. 1933 ± 0. 0047＊＊＊ 0. 1840 ± 0. 0010＊＊＊
驼腰子镇 0. 3123 ± 0. 0035＊＊＊ 0. 1650 ± 0. 0030 0. 1706 ± 0. 0015＊＊＊
南岔县 0. 2243 ± 0. 0015 0. 1566 ± 0. 0025 0. 1553 ± 0. 0031
汤旺河 0. 2243 ± 0. 0031 0. 1570 ± 0. 0020 0. 1516 ± 0. 0021
申家店 0. 3163 ± 0. 0021＊＊＊ 0. 1700 ± 0. 0010＊＊ 0. 1533 ± 0. 0020
注:与南岔县根、茎、叶槲皮素含量相比:＊＊P ＜ 0. 01，＊＊
＊P ＜ 0. 001
图 2 五个地区根峰面积对比
图 3 五个地区根茎面积对比
图 4 五个地区叶峰面积对比
图 5 五个地区根槲皮素对比
图 6 五个地区茎槲皮素对比
图 7 五个地区叶槲皮素对比
3 讨论
3. 1 样品处理处理过程中，参照中国药典 2010 年版中水红
花子( 红蓼干燥果实) 含量测定项下的样品处理方法，比较
了 90%甲醇、50%甲醇和水等加热回流提取的效果，结果表
明 90%甲醇为最佳提取溶媒;分别考察了用90%甲醇的 5、
6和 7 倍量的提取效果，结果表明 5 倍和 7 倍量提取效果无
明显差别，故选择以 90%甲醇的 6 倍量进行提取;分别考察
了浸泡时间 1、2 和 3h的提取效率，结果表明浸泡时间 2 和
3h效果无明显增加，故选择浸泡时间为 1h; 分别考察了蒸
馏时间为 3、4 和 5h，结果表明 3 和 4h 无明显现象，故选择
蒸馏时间为 5h提取。
3. 2 本实验是分析中药的根、茎、叶，检测组分较多，采用等
度洗脱法难以有效分离，故采用梯度洗脱。另外比较了甲醇
－水、乙腈 －水、甲醇 －磷酸和乙腈 －磷酸等洗脱系统。结果
表明，以甲醇 －磷酸洗脱分析效果最好。分别比较了甲醇 －
0. 3%磷酸和甲醇 －0. 5%磷酸洗脱系统。结果显示两者无明
显差别，故选用甲醇 －0. 3%磷酸做为流动相。
3. 3 红蓼根、茎、叶成分较复杂，适当升温可提高分离效
率。在确定固定相和流动相的情况下，分别考察了柱温为
25、30、35、40℃的分离情况，结果表明 30℃时各峰峰形及分
离度较好。
3. 4 红蓼具有清肺化痰、散血、消积等功效，治疗消化不良
和腹胀胃痛等症状。本研究对各地区样品中红蓼在花前
期、花中期、花后期的根、茎、叶的槲皮素的利用高效液相色
谱法进行含量分析，方法简便易行，灵敏度高，重现性好，结
果准确可靠。
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收稿日期:2012 － 05 － 11
·715·黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 25 No. 4 2012