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HPLC色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中和厚朴酚的含量



全 文 :— 68 — 现代中药研究与实践2011年第25卷第2期Chin Med J Res Prac,2011 Mar.,Vol.25 No.2
批样品按照“2.2” 项下方法平行制备 3 份供试品溶
液,在上述色谱条件下分别进样测定 , 记录色谱图,
以峰面积按标准曲线法计算样品中甘草酸含量。结果
见表 2。

5 讨论
5.1 色谱柱的选择 本实验对 3 种不同厂家的色谱
柱 :Waters Symmetry C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)、
Phenomenex Luna C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm) 和
Agilent Zorbax SB C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm) 进行
试验筛选 , 比较分离度、峰形和柱效 , 结果 Waters
Symmetry C18 较为适合。
5.2 提取方法的选择 通过比较甲醇 - 磷酸溶液
(0.017 mol/L)(13 : 7) 溶液 (10,20,30 mL),浸泡时
间(0.5,1,1.5 h)及超声时间(20,30,40 min)
考察最佳的提取方法。结果 :加提取溶液 30 mL,室
温放置 1.5 h,超声 30 min 后,测得甘草酸含量最高,
因此本试验最终采用此方法制备供试品溶液。
5.3 流动相的选择 实验中参考多篇文献也曾考察
流动相为乙腈 - 冰醋酸 [2-4] 或甲醇 - 醋酸铵溶液 - 冰
醋酸 [5] 不同的比例,但均不能将供试品中的甘草酸
峰与杂质峰分开,因此本实验最终选择流动相为乙腈 -
磷酸溶液 (0.017 mol/L)(40 : 60)。
参考文献
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华西药学杂志 , 2009, 24(4):394.
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分析杂志 2009,29(4):653.
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[5] 全艳晖 , 冯 川 .HPLC 法测定糖并消丸中甘草酸的含量 [J]. 实用药物与
临床 ,2008,11(1):52.
表2  样品中甘草酸含量测定结果  (n=3)
Tab.2 Result of glycyrrhizic acid in sample
批号 含量/(mg•g-1) 平均含量/(mg•g-1)
9011457 1.129 1.122 1.125 1.125
0010580 1.124 1.123 1.126 1.124
116433 1.039 1.037 1.041 1.039
116435 1.036 1.038 1.037 1.037
HPLC色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中和厚朴酚的含量
冯 华 1,王样培 2,申桂霞 1,邹孔强 1,王小东 1
(1. 遵义市药品检验所,贵州 遵义 563002 ;2,贵州贵阳中医学院 , 贵州 贵阳 553002)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中和厚朴酚的含量。方法  色谱条件 : 色谱
柱为 Diamonsil C18,以甲醇 - 水 (78 : 22) 为流动相 ;流速为 1.0 mL/min ;柱温 25 ℃ ;检测波长为 294 nm。
结果 和厚朴酚线性范围为 0.278 4 μg~0.649 6 μg,r=0.999 5;本品的平均回收率为 102.12%,RSD 为 1.3%。
结论 本法简便、灵敏、准确。
关键词 高效液相色谱法 ;黔北凹叶厚朴 ;和厚朴酚 ;含量测定
中图分类号:S567.1+1 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2011)02-0068-03
Content Determination of Honokiol in QianBeis Magnolia officinalis by HPLC
FENG Hua1, WANG Xiang-pei2, SHEN Gui-xia1, ZOU Kong-qiang1, WANG Xiao-dong1
(1. Zunyi Institute for Drug Control, Zunyi 563002,China; 2. Guiyang College of Traditional Chinese
Medicine, Guiyang 550002,China)
Abstract: Objective To establish a method for the content determination of honokiol in QianBeis
Magnolia officinalis by HPLC. Methods A Diamonsil C18 column was used with mobile phase of methanol-
water(78 : 22), the detection wavelength was 294nm, the flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration
curve showed a good linearity with the range of 0.627 2~1.164 8 μg,r=0.999 4. The average recovery was
102.12% and RSD was 1.3%. Conclusion The method is simple, sensitive and accurate.
Key words:HPLC; QianBeis Magnolia officinalis;honokiol;determination
收稿日期:2010-02-23
基金项目:遵义市中药现代化科技产业研究开发专项项目课题(项目编号:市科合中药专字〔2008〕2号)
作者简介:冯 华,硕士,主要从事新药研究及药品检验工作
DOI:10.13728/j.1673-6427.2011.02.012
— 69 —现代中药研究与实践2011年第25卷第2期Chin Med J Res Prac,2011 Mar.,Vol.25 No.2
厚朴为木兰植物厚朴 Magnolia officinalis Rehd.et
Wils. 或凹叶厚朴 Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.
biloba Rehd.et wils 的干燥干皮、根皮及枝皮。苦、
辛、温,具有燥湿消痰、下气除满功效 [1]。本文采用
高效液相色法测定贵州黔北凹叶厚朴中和厚朴酚的
含量,并以此对其药用价值进行考察和评估,为黔北
凹叶厚朴 GAP 基地开发及质量控制提供一定的科学
依据。
1 仪器与试药
Waters1525 型高效液相色谱仪,KQ-300DE 超
声 仪, 色 谱 柱 :Diamonsil C18(5 µm,250 mm×4.6
mm)。和厚朴酚对照品(中国药品生物制品检定
所,批号 :0730-200206),厚朴药材(采集于习水县
GAP 厚朴药材基地,经邓顺超副主任中药师鉴定为
木兰科植物凹叶厚朴的干燥干皮)。甲醇色谱纯,水
为纯净水。
2 方法和结果
2.1 对照品溶液制备 精密称取和厚朴酚对照品
11.60 mg,置 50 mL 量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇
匀,精密吸取 5 mL 置 25 mL 量瓶中加甲醇至刻度,
即为对照品溶液。。
2.2 供试品溶液制备 精密称取厚朴药材粉末(过
三号筛)约 0.2 g,置带塞的锥形瓶中,加甲醇 25
mL,称重,超声 40 min,用甲醇补足重量,滤过,
滤液置 50 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,制得供试品
溶液,图谱见图 1。

2.4 线性关系的考察 精密吸取以上对照品溶液,
分别进样 6、8、10、12、14 μL,测定峰面积,以和
厚朴酚浓度 (X) 为横坐标,峰面积积分值 (Y) 为纵坐
标,计算和厚朴酚回归方程为 :Y=6.0E+5X+5.8E+5,
r=0.999 5。结果表明和厚朴酚在 0.278 4~0.649 6 μg
范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密吸取和厚朴酚对照溶液 10
μL,注入高效液相色谱仪中,测定 5 份,平均峰面
积 3 164 384,求出相对标准偏差,RSD=1.1%,结果
表明精密度良好。,
2.6 稳定性试验 取本品研细,取约 0.2 g,精密称
定,按 “2.2” 项下方法制备供试品溶液,吸取供试品
溶液,分别在 0、4、8、16、24 h 测定一次。平均峰
面积为 3 262 084, 结果表明,RSD 为 0.9%,供试品
在 24 h 内基本稳定,稳定性好。
2.7 重复性试验 精密取本品约 0.2 g 5 份,照前述
供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液。精密吸
取供试品溶液各 10 µL,测定和厚朴酚峰面积积分
值,平均峰面积为 3 302 481,计算含量,平均含量
为 1.61%,求相对标准偏差,RSD=1.2%。表明重复
性良好。
2.7 加样回收试验 取已知含量 (1.62%) 的样品 5
份,每份约为 0.1 g,精密称定,分别精密加入和
厚 朴 酚 对 照 品(0.80 mg/mL)2 mL, 按 文 中 含 量
测定项下的方法操作,计算回收率 , 平均回收率为
102.12%,RSD 为 1.3%,说明回收率好。结果见表 1。
2.8 含量测定 分别测定厚朴药材 3 批样品,平均
含量为 1.62%。结果见表 2。
3 讨论
3.1 对贵州黔北凹叶厚朴药材中和厚朴酚提取条件
的优选,用甲醇 25 mL,超声 40 min,药材中和厚
A(对照品)
B(样品)
图1  HPLC色谱图
Fig.1 HPLC Chromotogram of reference (A) and sample (B)
表1  加样回收率测定 
Tab.1 Results of recovery test
样品含量
(mg)
1.625
1.618
1.632
1.629
1.640
加入量
(mg)
1.60
1.60
1.60
1.60
1.60
回收量
(mg)
3.269
3.240
3.282
3.221
3.302
回收率
(%)
102.75
101.38
103.12
99.50
103.87
平均回收率
(%)
102.12
RSD(%)
1.3
表2  样品含量测定结果 (n=3) 
Tab.2 Results of sample content determination(n=3)
样品编号 和厚朴酚含量(%) (% ) RSD(% )
1 1.61
2 1.64 1.62 0.82
3 1.62
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朴酚提取完全,选用甲醇为溶剂比较好 ;对色谱条
件进行选择,以甲醇 - 水 (78 : 22) ;流速为 :1.0 mL/
min ;柱温 25 ℃ ;检测波长为 294 nm,各组分峰达
到完全分离。
3.2 本文采用高效液相色谱法测定贵州黔北凹叶厚
朴药材中和厚朴酚的含量,并对测定方法进行方法学
研究。色谱条件如正文所述,和厚朴酚与其它组分分
离度好,重现性好,回收率高,专属性强。
3.3 优选的色谱条件可行,稳定,省时,可以对黔
北凹叶厚朴 GAP 基地开发利用及质量控制提供一定
的参考依据。
参考文献
[1] 国家药典委员会 .《中国药典》( 一部 )[S]. 北京 :中国医药科技出版社,
2010,235.
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[3] 孟超,吴 丰,马 林 . 厚朴类中药和厚朴酚及和和厚朴酚的含量测定 [J].
天然产物研究与开发 ,2007,19 :1024-1026.
湿毒清胶囊为中药保护品种,收载于《中华人
民共和国卫生部药品标准》第十六册,由地黄、当归、
丹参、蝉蜕、苦参、白鲜皮、甘草、黄芩、土茯苓等
9 味中药组成,具有养血润燥、化湿解毒、祛风止痒
功效,临床上用于皮肤瘙痒症属血虚湿蕴皮肤证者。
苦参碱为制药中主要有效成分之一,本文对湿毒清胶
囊中苦参碱的含量进行测定方法研究,制定本品中苦
参碱的 HPLC 测定方法。
HPLC测定湿毒清胶囊中苦参碱的含量
冯新刚 1,李钦青 2,代 龙 2*
(1. 中国中医药科技开发交流中心,北京 100027 ;2. 山东中医药大学,山东 济南 250355)
摘要:目的 建立湿毒清胶囊中苦参碱含量的 HPLC 测定法。 方法 C18 柱(4.6 mm×250 mm,5
μm);乙腈 -0.02% 三乙胺溶液(25 : 75),流速为 1 mL•min-1,检测波长为 220 nm。 结果 测得线性范围 0.300
2 µg~2.401 6 μg (r=0.999 9),平均回收率为 97.79%,RSD 为 1.69%(n=5)。结论 本方法简便可行,重现性好,
结果可靠,可用于湿毒清胶囊的质量控制。
关键词:HPLC ;湿毒清胶囊 ;苦参碱
中图分类号:S567 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2011)02-0070-03
Determination of Matrine in Shiduqing Capsule by HPLC
FENG Xin-gang1,LI Qin-qing2,DAI Long2
(1. Nation Center for the Development of Traditional Chinese Medicine Technology, Beijing 100027,China;
2. Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)
Abstract: Objective To establish an HPLC method for the determination of matrine in Shiduqing
capsule. Methods The separation was performed on a C18 analysis column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with
acetonitrile-triethylamine(25 : 75)as the mobile phase. Flow rate was 1 mL•min-1. The wavelength was 220 nm.
Results There was a good linearity within the range of 0.300 2µg~2.401 6 μg(r=0.999 9). The average recovery
was 97.79%, RSD=1.69%( n=5). Conclusion This method was proved to be simple, accurate and can be used
for quality control of Shiduqing Capsule.
Key words: HPLC; Shiduqing capsule; matrine
1 仪器与试药
LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津公
司);AB135-S电子天平(瑞士梅特勒-托利多公
司);苦参碱对照品(110805-200507,购自中国药
品生物制品检定)所;乙腈(美国TEDIA公司)为
色谱纯;三乙胺(美国TEDIA公司)为色谱纯;水
为二次重蒸水;其他试剂均为分析纯;湿毒清胶囊
(广西玉林制药有限责任公司生产)。
2 方法与结果
2.1 色 谱 条 件 岛 津 C18 柱(4.6 mm×250 mm,5
μm);乙 腈 -0.02% 三 乙 胺 溶 液(25 : 75), 流 速 为 1
mL•min-1,检测波长为 220 nm。
收稿日期:2010-04-01
*通讯作者:代 龙,硕士研究生导师,从事中药制剂及新药开发研究。
E-mail:dailongdailong@263.net