全 文 ：第 26卷第 6期
2 00 9年 6月
精 细 化 工
FINECHEMICALS
Vol.26, No.6
June2 0 0 9
中药现代化技术
粘毛蓼的抗氧化活性＊
常　星 ,魏金凤 ,刘瑜新 ,康文艺＊
(河南大学 药学院 天然药物研究所 , 河南 开封　475004)
摘要:用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基 、清除 [ 2, 2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐 ] (ABTS)
自由基和铁离子还原 /抗氧化能力 (FRAP)测定法 ,对粘毛蓼体外总抗氧化活性进行了评价 ,结果与 6-羟基-2,
5, 7, 8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸(Trolox)及阳性对照丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)比较发
现 ,粘毛蓼提取物有很好的体外抗氧化活性。乙酸乙酯提取物清除 DPPH自由基 (IC50 =7.89 mg/L)的能力比
BHT清除能力(IC50 =18.71mg/L)强 ,比 BHA(IC50 =3.20mg/L)清除能力略弱;清除 ABTS自由基能力 (IC50
=6.67 mg/L)比 BHT(IC
50
=7.72mg/L)清除能力强 , 比 BHA(IC
50
=1.88 mg/L)清除能力弱;还原 Fe3+的能
力〔FRAP=(1362.55±47.22)μmolTE/g〕比 BHT〔FRAP=(1581.68±97.41)μmolTE/g〕略低。在 3种提取物
中 ,乙酸乙酯提取物具有最高的抗氧化能力 , 甲醇提取物次之。 3种方法中 , DPPH方法和 ABTS方法相关性最
高(R=0.993)。
关键词:粘毛蓼;体外抗氧化活性;DPPH;ABTS;FRAP;中药现代化技术
中图分类号:R282.7　　文献标识码:A　　文章编号:1003-5214(2009)06-0550-04
AntioxidantActivityofExtractsfromPolygonumviscosum
Buch.-Han.exD.Don
CHANGXing, WEIJin-feng, LIUYu-xin, KANGWen-yi＊
(InstituteofNaturalProducts, HenanUniversity, Kaifeng475004, Henan, China)
Abstract:ThetotalantioxidantactivityoftheextractsfromPolygonumviscosumBuch.-Han.exD.
Donwasassayedbythreemethods, namely, 1, 1-diphenyl-2-picryl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radical
scavenging, 〔2, 2′-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid〕diammoniumsalt(ABTS)radical
scavenging, andfericreducingantioxidantpower(FRAP)assay.Theresultswerecomparedwith6-
hydroxy-2, 5, 7, 8-tetramethylchroman-2-carboxylicacid(Trolox)andpositivecontrolbutylated
hydroxyanisole(BHA), 2, 6-di-tert-butyl-4-methylphenol(BHT).TheresultsshowedthatP.viscosum
Buch.-Han.exD.Donhadagoodtotalantioxidantactivityinvitro.TheethylacetateextractfromP.
viscosumBuch.-Han.exD.DonshowedDPPHradicalscavengingactivitywithIC50valueof7.89mg/L
higherthanthatofpositivecontrolBHTwithIC50valueof18.71 mg/L, andslightlylowerthanthatof
BHAwithIC50valueof3.20mg/L.ItshowedABTSradicalscavengingactivitywithIC50valueof6.67
mg/L, higherthanthatofBHTwithIC50 valueof7.72 mg/L, andlowerthanthatofBHAwithIC50
valueof1.88mg/L.ItexhibitedthefericreducingantioxidantpowerwithFRAPvalueof(1362.55±
47.22)μmolTE/g, slightlylowerthanthatofBHTwithFRAPvalueof(1581.68 ±97.41)μmol
TE/g.AmongthethreeextractsofP.viscosumBuch.-Han.exD.Don, theethylacetateextractshowed
thehighestantioxidantactivity, whichwashigherthanthemethanolextract.Theresultsamongthethree
＊ 收稿日期:2009-02-26;定用日期:2009-04-09
基金项目:河南省教育厅基础研究计划(2008A360002);河南省教育厅青年骨干教师资助计划 (2008)
作者简介:常　星(1986-),女 ,河南洛阳市人,硕士 ,主要从事天然产物化学研究 ,电话:13619816210, E-mail:starfly016@ 163.com。
联系人:康文艺(1971-),男 ,教授 ,研究方向为中药活性成分及新药研究 ,电话:0378-3880680, E-mail:kangweny@hotmail.com。
DOI :10.13550/j.jxhg.2009.06.028
methodswereconsistent, andthevaluesobtainedbyABTSassaywerecorrelatedthebestwiththose
obtainedbyDPPHassay(R=0.993).
Keywords:PolygonumviscosumBuch.-Han.exD.Don;antioxidantactivity;DPPH;FRAP;ABTS;
modernizationtechnologyoftraditionalChinesemedicines
Foundationitems:SupportedbyFoundationResearchPlanofHenanProvinceEducationCommision
(2008A360002)andHenanProvincialOficeofEducationYouthBackboneTeachersSupportScheme
(2008)
　　粘毛蓼 (别名香蓼 , PolygonumviscosumBuch.-
Han.exD.Don)为蓼科蓼属 PolygonumL.植物 。茎
叶入药 ,全草可提取芳香油;种子可酿酒 [ 1] 。味辛 ,
性平。具有理气除湿 ,健胃消食之效 。主治胃气痛 ,
消化不良 ,小儿疳积 ,风湿疼痛 [ 2] 。
国内外对粘毛蓼化学成分和药理活性的报道较
少 。文献研究发现 , Data等从粘毛蓼得到 5个黄酮
类成分 , 6个倍半萜类化合物 [ 3 ～ 7] 。倍半萜类成分
显示对中枢神经系统(CNS)有抑制活性 、抗炎活性
和止痛作用 [ 8] 。研究大多集中在其挥发性成分上 ,
如刘群等首次对花期粘毛蓼的地上部分的精油及从
该精油中分离出的含氧部分的化学成分进行了研
究 [ 9] ;孙慧玲等首次对粘毛蓼的脂溶性成分进行了
报道等 [ 10] 。对粘毛蓼其他生物活性 ,如抗氧化作用
研究较少。
随着自由基医学和抗氧化剂理论研究工作的不
断深入 ,天然抗氧化剂的开发与应用越来越为人们
所重视 ,特别是一些人工合成的抗氧化剂在使用中
发现存在一些毒性后 ,对天然抗氧化剂人们越来越
重视。研究证明 ,传统中草药和天然植物中含有许
多自由基清除剂 (如黄酮类 、萜类 、酚类 、生物碱 、
VitE、VitC等),均有较强的抗氧化作用 [ 11] 。
为开发天然抗氧化剂 ,作者用目前普遍采用的
清除 DPPH自由基 、清除 ABTS自由基和 FRAP方
法 ,对粘毛蓼提取物总的体外抗氧化活性进行了考
察 。
1　仪器 、材料和试剂
1.1　主要仪器
UV-2000型紫外可见分光光度计(上海尤尼
可仪器有限公司);旋转蒸发仪(日本东京理化公
司);电子天平(美国 Metler-Toledo仪器有限公司);
CS-H1型混合器(北京博励阳科技公司)。
1.2　材料
粘毛蓼于 2006年 7月采集于河南省栾川 ,经河
南大学天然药物研究所袁王俊博士鉴定 ,为蓼科蓼
属植物 P.viscosumBuch.-Han.exD.Don,标本现存
于河南大学天然药物研究所 。
1.3　试剂
二苯代苦味酰基自由基(DPPH,日本东京化成
工业株式会社);Fe3 +-三吡啶三哑嗪(TPTZ,比利时
Acrosorganics公司);[ 2, 2′-连氨 -(3-乙基苯并噻唑
啉-6-磺酸)二氨盐 ] (ABTS,美国 Fluka公司);6-羟
基-2, 5, 7, 8-四甲基苯并二氢吡喃 -2-羧酸(Trolox,美
国 Aldrich公司);丁基羟基茴香醚 (BHA, 比利时
Acrosorganics公司);二丁基羟基甲苯(BHT, 比利
时 Acrosorganics公司)。
2　实验方法
2.1　粘毛蓼活性成分的提取
粘毛蓼全草阴干 ,粉碎 ,石油醚浸泡 12 h后 ,于
索氏提取器中连续回流提取 ,提取 3次 ,每次 1h,浓
缩 ,得石油醚提取物 (PVPE)。挥干溶剂后 ,依次用
乙酸乙酯 、甲醇浸泡 12h,回流提取 3次 ,每次 1 h,
得乙酸乙酯提取物(PVEE)和甲醇提取物(PVME)。
2.2　抗氧化活性筛选
2.2.1　DPPH方法
按照文献 [ 12] ,将样品用甲醇配制成一系列质
量浓度 ,取 0.1 mL样品加入 3.5 mLDPPH甲醇溶
液(0.06 mmol/L),混合 30 min后测定 515nm处吸
光度 。每份样品平行操作 3次 ,取算术平均值 ,计算
出清除率及半数抑制率 IC50值 。
2.2.2　ABTS方法
按照文献 [ 13] ,配制 ABTS自由基工作液。将
样品用甲醇配制成一系列质量浓度 ,取 0.15 mL样
品加入 2.85 mLABTS自由基工作液 ,混合 ,放置 10
min后 ,在 734 nm处测定吸光度 。每份样品平行操
作 3次 ,取算术平均值 ,计算出清除率及半数抑制率
IC50值。
2.2.3　FRAP方法
按照文献 [ 14] ,将样品用甲醇配制成一系列质
量浓度 ,取 0.2 mL样品加入 3.8 mL新鲜配制的
·551·第 6期 常　星 , 等:粘毛蓼的抗氧化活性
TPTZ工作液 ,混匀后 37 ℃反应 30 min后测定 593
nm处吸光度 。每份样品平行操作 3次 ,取算术平均
值 ,计算出清除率 ,结果以 Trolox当量(即每克样品
的自由基清除能力相当于 Trolox的自由基清除能力
的微摩尔数)表示 。
3　结果与讨论
3.1　对 DPPH自由基的清除作用
结果见表 1。
表 1　粘毛蓼不同溶剂提取物的抗氧化活性
Table1　AntioxidantactivityofthedifferentextractsofP.
viscosumBuch.-Han.exD.Don
样品 DPPH方法IC50 /(mg/L)
ABTS方法IC50 /(mg/L)
FRAP方法/(μmolTE/g)
PVPE — — 54.46±1.07
PVEE 7.89 6.67 1362.55±47.22
PVME 9.63 7.13 1076.35±13.53
BHA① 3.20 1.88 6633.04±114.04
BHT① 18.71 7.72 1581.68±97.41
　　①BHA和 BHT为阳性对照品。
表 1显示 ,粘毛蓼乙酸乙酯提取物 PVEE和甲
醇提取物 PVME均有很好的清除 DPPH自由基的能
力 。PVEE清除 DPPH自由基的能力 (IC50 =7.89
mg/L)远远超过阳性对照 BHT(IC50 =18.71 mg/L)
的能力 ,约为 BHT能力的 2.37倍 ,低于 BHA(IC50
=3.20 mg/L)的作用 ,约为 BHA的 1/2.47;PVME
清除 DPPH自由基的能力 (IC50 =9.63 mg/L)比
BHT的能力强 ,约为其 1.94倍 ,比 BHA的能力略
弱 ,约为其 1/3。其中石油醚提取物 PVPE清除
DPPH自由基的 IC50值未测定 。
图 1显示 ,在实验的质量浓度范围内 ,质量浓度
在 3.47mg/L时 , BHT、乙酸乙酯提取物 PVEE和甲
醇提取物 PVME对 DPPH自由基的清除率都较低 ,
分别是 18.72%、22.93%、16.41%。随其质量浓度
的增加 ,清除率也增大 。当质量浓度增加到 13.89
mg/L时 , 三者的清除率分别增大到 39.31%、
91.89%、 83.92%。说明粘毛蓼提取物清除 DPPH
自由基的能力与其质量浓度呈正量效关系 ,即随着
提取物用量的增加 ,对 DPPH自由基的清除率也增
大 。这两个提取物在质量浓度为 13.89 mg/L以下
时 ,清除率几乎是随其质量浓度增大而线性增加 ,当
质量浓度在 27.78 mg/L以上时 ,清除率几乎不变 ,
说明抗氧化作用已接近饱和 ,再增加提取物的用量 ,
清除率变化不大 。
图 1　抗氧化剂质量浓度对 DPPH自由基的清除作用
Fig.1　EfectofmassconcentrationofantioxidantonDPPHfree
radical
表 1表明 , 粘毛蓼 3种提取物和阳性对照
BHA、BHT对 DPPH自由基的清除能力顺序为:BHA
>PVEE>PVME>BHT>PVPE。
3.2　对 ABTS自由基的清除作用
表 1显示 ,粘毛蓼乙酸乙酯提取物 PVEE和甲
醇提取物 PVME对 ABTS自由基的清除能力较强
(IC50 =6.67 mg/L和 7.13 mg/L), 超过阳性对照
BHT(IC50 =7.72 mg/L)的清除能力;两者比 BHA
(IC50 =1.88mg/L)的作用弱 ,分别为 BHA作用的
1/3.55, 1 /3.80。其中石油醚提取物 PVPE清除
ABTS自由基的 IC50值未测定 。
粘毛蓼的 3个提取物和阳性对照 BHA、BHT对
ABTS自由基的清除能力顺序为:BHA>PVEE>
PVME>BHT>PVPE。
3.3　对 Fe3 +的还原能力
表 1显示 , 3个提取物中 ,粘毛蓼乙酸乙酯提取
物 PVEE和甲醇提取物 PVME还原 Fe3+的能力较
强 〔FRAP=(1362.55 ±47.22)μmolTE/g和
(1076.35±13.53)μmolTE/g〕, 比阳性对照 BHT
〔FRAP=(1581.68±97.41)μmolTE/g〕略低 ,分别
约为 BHA〔FRAP=(6633.04 ±114.04)μmolTE/
g〕的 1/4.87和 1/6.16。乙酸乙酯提取物 PVEE还
原 Fe3 +的能力约为石油醚提取物 PVPE还原能力的
25倍。
粘毛蓼 3个提取物和阳性对照 BHA、BHT对
Fe3+的还原能力顺序为:BHA>BHT>PVEE>
PVME>PVPE。
3.4　3种方法的相关性分析与比较
粘毛蓼具有很好的总的抗氧化作用 ,其强弱程
度取决于提取溶剂 。 3个方法对粘毛蓼的研究结果
显示 , 3个提取物的总的体外抗氧化能力的顺序为:
PVEE>PVME>PVPE。其中乙酸乙酯提取物 PVEE
·552· 精 细 化 工　FINECHEMICALS　　　　　　　　　　　　　　第 26卷　
和甲醇提取物 PVME总的抗氧化能力比阳性对照
BHT的能力强。
将 3种抗氧化方法测定的结果分别进行相关性
分析。由图 2 ～ 4可知 , DPPH方法和 FRAP方法 、
DPPH方法和 ABTS方法 、ABTS方法和 FRAP方法
的相关系数分别为 0.950、0.993、0.981。分析结果
显示 , DPPH方法和 ABTS方法相关性最高。
4　结论
研究发现 ,粘毛蓼具有较好的总抗氧化作用 ,其
强弱程度取决于提取溶剂 。乙酸乙酯提取物清除
DPPH、ABTS自由基及还原 Fe3+的能力最强 ,强于
阳性对照 BHT的抗氧化能力 ,可采用活性追踪的方
法进行活性成分的追踪 。
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