全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·685·
介质，实验证明，用60g／L甘露醇水溶液作分散介
质室温放置3个月无明显变化，而用生理盐水则很
快混浊、分层，表明药物大量泄漏，磷脂凝聚。原因可
能是电解质的加入改变了各种粒子间电荷的相互作
用，促进了磷脂晶型的转变。
References：
图2 齐墩果酸固体脂质纳米粒透射电镜照片 EliLiuHJ，SunHN，Inhibitioneffect8ofoleanolicac dfro“
Fig·2TEMicrographofoleanolicac d Pharmt，吼锄；工A(解放军磊学学报)，2002，1(5)：。；毳一
solidlipidnanoparticles 274．
包封率，药物浓度也是影响包封率的一个因素。在 E2-1PattarinoFM，IgnoniT·Stabilityofdrug—carrieremulsions
预试验中发现，药物浓度过高，会影响包封率，提示 菱轰：，’尝掣a5t3id(y41)c：h20。13in．e“m””u上风rJ确4⋯
包封率具有饱和性¨]。 [3]XueKC，GuY，ZhangSQ，et口1．Preparationofl m vudyl
通过预试验，确定影响固体脂质纳米粒包封率、palmi．t．ateso．1id．粤8．?：翼particl8[J]·JF“一^胁。胁du
形态、均匀度、粒径分布的3个主要因素，即齐墩果 [。]=‘竺i要嚣慧黧i箸。,h。24。。(。1。0)。ffi,8。9i。0。-。8，92。．“，。。。。。
酸与大豆磷脂的比例、60g／L甘露醇用量和超声时 usingsephadexcolumnchromatographyEJ]·C inPharmJ
间，设计了3因素3水平的正交试验，结果表明超声 [5]篡曼拳繁毫’二．22。3rch8(7)。。：d5=二。。。。。。。“dlipid
时间越长，包封药物量越多；大豆磷脂用量不能过 。。noparti。le。[J]．Foreig。MedSci：S 以Ph。。(国外医
多，说明齐墩果酸固体脂质纳米粒包封有饱和性； 学：药学分册)2002，29(4)：241—245·
60g／L甘露醇用量不能过多，否则包封率降低。 ‘6|M(suLlNler)RforH。,。羔怒Kd，,。。Godelhl，a。。S，．一S。ol。id篡?：；：竺1薹
本实验选用生理盐水、60g／L甘露醇作为分散theart[J]．EurJPharmBiopharm，2000，50：161．
化学发光法测定白果白蛋白的体外抗氧化活性
邓乾春1，陈春艳2，田斌强1，谢笔钧1+
(1．华中农业大学食品科技学院，湖北武汉，430070；2．湖南科技学院化学与生物工程系，湖南永州，425006)
摘要：目的研究白果白蛋白的体外抗氧化活性、对DNA损伤的保护作用及其作用机制。方法以莲房原花青
素和小牛血清蛋白为对照，分别采用邻苯三酚一鲁米诺化学发光体系测定了白果白蛋白对超氧阴离子的清除作用，
硫酸铜一邻菲l罗啉一抗坏血酸一双氧水、硫酸亚铁一鲁米诺一双氧水和硫酸亚铁一鲁米诺3个体系测定了白果白蛋白对羟
自由基的清除作用，双氧水一鲁米诺体系测定了白果白蛋白对体外双氧水的清除作用，采用硫酸铜一邻菲哕啉一抗坏
血酸一双氧水一脱氧核糖核酸体系测定了白果白蛋白对体外DNA损伤的保护作用。结果白果白蛋白具有较好的
体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性，但在硫酸亚铁一鲁米诺一双氧水和双氧水一鲁米诺化学发光体系中表现出
“促氧化”作用。结论 采用化学发光体系衡量白果白蛋白的抗氧化活性具有选择性。
关键词：白果白蛋白；化学发光法；体外抗氧化活性
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0685一06
Investigationofinvitroantioxidantactivityofginkgoalbuminbychemiluminescencem thod
DENGQian—chunl，CHENChun—yen2，TIANBin—qian91，XIEBi—junl
(1．CollegeofFoodScienceandTechnology，HuzhongAgricultureU iv rsity，Wuhan430070，China；2．Department
ofChemistryandBioengineering，HunanInstit teofScienceandTechnology，Yongzhou425006，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethescavengingab litiesofginkgoalbumintoreactiveoxygenin
vitro．aswellastheprotectionandmechanismofginkgoalbuminondamagedDNA．MethodsL tus
收稿日期：2006—09—21
基金项目：湖北省“十五”攻关资助项目(2001AA204802)
作者筒介：邓乾春(1979一)，男，湖北黄石人，博士生在读，从事天然产物化学和食品蛋白质化学研究。
Tel：(027)87283201E—mail：sprin9332288@yahoo．com．an
*通讯作者谢笔钧
万方数据
·686· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
SeedpodProcyanidin(LSPC)andbovines rumalbumin(BSA)wereusedascontrolsample，theeffectof
ginkgoalbuminonremovalofsuperoxidean onwasdeterminedbyPyrogallol—Luminolsystem．Scavenging
abilityofginkgoalbuminonhydroxidefreeradicalw sdeterminedbyCuS04一Phen—Vc—H202，FeS04一Lumi—
nol—H202，andFeS04一Luminolsystems．Luminol—H202systemwasusedtOmeasurethescavengingeffect
onhydrogenperoxide．Pre、ventiveeffectofginkgoalbuminoni vitrodamagedDNAwasdeterminedby
CuS04一Phen—Vc—H202一DNAsystem．ResultsGinkgoalbuminpossessedagoodscavengingpotencyon
reactiveoxygenandprotectionondamagedDNA，butpromotedoxi ationintheFeS04一Luminol—H202and
Luminol—H202chemiluminescencesy t ms．ConclusionNoteverychemiluminescence
7
Ssystemissuitable
forinvestigatingtheantioxidantactivityofginkgoalbumin．
Keywords：ginkgoalbumin；chemiluminescencemethod；invitroa tioxidantactivity
白果为银杏科植物银杏GinkgobilobaL．的种
仁，主要成分为蛋白质、碳水化合物、脂肪、磷、铁、胡
萝卜素、核黄素和多种氨基酸等。味甘苦涩平，有小
毒，入肺、肾经，敛肺气，定喘嗽，止带浊，缩小便等。
本实验室采用盐溶盐析法从白果中得到一种具有较
好抗衰老和免疫调节活性的白果白蛋白(ginkgoal—
bumin)，动物体内实验表明其能有效清除体内自由
基，保护细胞膜结构和功能的完整，避免细胞受损
伤[1]。生化比色法采用单一体系测定表明其具有较
强的体外清除羟自由基和超氧阴离子活性，但其灵
敏度不高，操作步骤相对较为烦琐[2]。化学发光法作
为一种灵敏的测定方法被广泛用来检测酶、细胞及
生物机体中产生的自由基及反应代谢物，其氧化产
物和代谢产物所发出的光可用各种光度计检测[3“]。
由于化学发光法具有灵敏、快速、操作简单和价格低
廉等特点，而被广泛用于抗氧化剂的筛选和研究，如
多酚、多糖、黄酮类、蒽醌类活性物质等等，但在蛋白
类抗氧化剂的筛选中应用很少。为了进一步评价和
了解白果白蛋白在不同体系中的抗氧化活性及其作
用机制，并监测白果白蛋白在提取过程中抗氧化活
性的变化，本实验采用化学发光法测定了白果白蛋
白在体外对活性氧自由基的清除作用以及对DNA
损伤的保护作用，且以小牛血清蛋白和强抗氧化活
性物质莲房原花青素[s]作为对照，以探讨化学发光
体系在测定蛋白类物质的抗氧化活性中的应用及其
可能存在的作用机制。
1仪器与试剂
BPCL型超微弱化学发光测量仪(中国科学院
生物物理研究所)，测试条件：Hi—V800；Kv～1；记
录的波长范围：180～800nm；温度30oC。
白果购自江苏泰兴，经中国林学会银杏分会顾
问刘燕君鉴定；白果白蛋白为本实验室自制，在白果
总蛋白中占41．99％，其化学成分为蛋白85．2％，多
糖3．6％，核酸10．3％；莲房原花青素(10tusseed—
podprocyanidin，LSPC)为本实验室自制，质量分数
大于98％，其中低聚原花青素质量分数为85％，产
品为浅黄色粉末，得率15％左右；小牛血清蛋白
(bovineserumalbumin，BSA)、小牛胸腺DNA、鲁
米诺，邻苯三酚、双氧水、硫酸亚铁、邻菲哕啉、抗坏
血酸、三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠和过硫酸
铵为中国国药(集团)上海化学试剂公司产品，其余
试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 白果白蛋白对超氧阴离子的清除作用：用邻苯
三酚一鲁米诺化学发光体系[6]。鲁米诺用0．05mol／L
Na0H溶液配成浓度为0．05mol／L的溶液，在避光
处保存，临用前用双蒸水稀释成1mmol／L的溶液。
邻苯三酚用1mmol／LHCl配成0．01mol／L的溶
液，4℃冰箱中保存，用前用双蒸水稀释成6．25×
10叫mol／L的溶液。0．05mol／LpH10．2Na2C03一
NaHCO。缓冲液(含0．1mmol／LEDTA)用前现配，
试验前与1mmol／L鲁米诺按照体积比2：1混合成
鲁米诺一碳酸盐缓冲液。测定时，向发光池中注入
10．0肛L不同浓度的样品(以样品缓冲液为对照)，然
后注入6．25×10叫mol／L邻苯三酚0．05mL，最后
加入鲁米诺一碳酸盐缓冲液0．94mL启动反应(30
℃)，间隔2S记数发光强度，测定300S的总发光积
分强度，本底发光强度为未加邻苯三酚时的发光值。
实验均重复3次，曲线面积积分表示相对发光强度，
计算抑制率，以Origin7．0软件统计数据，各组数据
用五±s表示。
抑制率=丛垡[≤是∑；譬掣×100％
＼u12 u10／
式中C1。为空白对照组的相对发光强度，Cl。为本底组相对
发光强度，Clz为样品组相对发光强度
邻苯三酚在碱性条件下自氧化产生超氧阴离
子，以鲁米诺为发光剂，超氧阴离子激发鲁米诺，鲁
米诺由激发态返回到基态时产生化学发光。实验结
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·687·
果表明本化学发光体系启动后，化学发光强度上升
迅速，在22S左右时就达到最大值，随后开始缓慢
下降，在300S附近各发光曲线开始重叠。0．8～500
pg／mL白果白蛋白对超氧阴离子的清除作用见图
1。可见体系加入白果白蛋白后，发光曲线峰值降低，
曲线面积减少，且呈剂量一效应关系，表明，白果白蛋
白能清除体系中的超氧阴离子；在白果白蛋白从
0．8,ug／mL上升到4btg／mL时，抑制率的增加趋势
缓慢，当质量浓度大于4btg／mL后，抑制率近乎呈
直线上升趋势，白果白蛋白质量浓度为500,ug／mL
时，抑制率达90．3％，其对超氧阴离子的抑制作用
的IC。。值为40．I,ug／mL；莲房原花青素表现出对抑
制该体系的发光强度更为明显的趋势(图未给出)，
其质量浓度为100p．g／mL时，抑制率就达97．8％，
莲房原花青素的IC。。值为6．1p．g／mL，要小于白果
白蛋白的IC。。值。
。l
6
翌
鬈o．8
羚。
O
1
掌
＼
槲
妊
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O 100 200 300
t／s p／(ug·mL。)
0-0pg／mL1-0．8pg／mL2-4pg／mL3-20pg／mL
4-100pg／mL5-500肛g／mL
A一化学发光曲线B-剂量一效应关系
A-·chemiluminescencecurveB——dos ——effectrelationship
图1 白果白蛋白对邻苯三酚一鲁米诺化学发光体系
产生超氧阴离子的清除作用
Fig·1Scavengingeffectofginkgoalbuminonsuper—
oxideanioni ducedbychemiluminescence
ofPyrogallol—Luminolsystem
2．2 白果白蛋白对羟自由基的清除作用[7~93
2．2．1CuS04一Phen—Vc—H202化学发光体系：取50
弘L样品于样品池(以样品缓冲液为对照)中，分别加
入1．0mmol／LCuS04溶液50肛L，1mrnol／L邻菲
I!罗啉溶液50弘L和0．05mol／L硼砂溶液700肛L
(pH9．0)，充分混匀，然后再加入100肛L1mmol／L
抗坏血酸溶液和50弘L0．15％H。O。溶液(本底不加
双氧水)，立即启动化学发光系统，间隔3S记数，记
录400S内化学发光动力学曲线。试验均重复3次，
曲线面积积分表示相对发光强度，计算抑制率，以
Origin7．0软件统计数据，各组数据用x+s表示。
在本体系中，Cu2+被Vc还原成Cu+，Cu+与
H202在Fenton反应中产生·OH，·OH氧化Phen
使Phen激发，Phen退激时产生化学发光。试验结果
(图2)表明，发光动力学曲线在40S左右迅速增加
到最大发光强度，然后发光值开始较缓慢的下降，到
300S左右时各发光曲线开始重叠。观察了4～500
}tg／mL白果白蛋白对羟自由基的清除作用。随着白
果白蛋白质量浓度的增加，对羟自由基的清除作用
增强；在20～500弘g／mL白果白蛋白的抑制率从
17．90％增加到74．75％，呈直线上升。莲房原花青
素(图未给出)同样表现出较为显著的抑制该体系发
光的趋势，在质量浓度为100／tg／mL时，抑制率达
88．43％，莲房原花青素和白果白蛋白的IC。。分别为
20．32弘g／mL和115．11／_￡g／mL。
。1
茭，
划
蓁。
越
o lOO200300400500
p／(ug．mL41)
0—0／“g／mL1—4t“g／mL2-20,ug／mL
3-100pg／mL4—500btg／mL
A一化学发光曲线B一剂量一效应关系
A—-chemiluminescencecurveB--dose—-effectrela ionship
图2 白果白蛋白对CuS04Phen—Vc—H：02化学发光体
系产生羟自由基的清除作用
Fig．2Scavengingeffectofginkgoalbuminonhy—
droxidefr eradicalinducedbyCuS04-Phen—
Vc—H202chemiluminescencesy t m
2．2．2FeS04一Luminol—H202化学发光体系：在样
品池中依次加入0．4mmol／LFeSO。50肛L，1．5％
H20250．0pL，50．0弘L样品或样品缓冲液(对照)，
最后加入pH7．40．05mol／L碳酸盐缓冲液配制成
的0．1mmolTL鲁米诺液0．6mL，立即混匀，测定
发光强度。反应温度30℃，间隔1S记数，测定60S
的总发光积分强度，本底发光强度为未加H：O。时
的系统发光值。试验均重复3次，曲线面积积分表示
相对发光强度，计算抑制率，以Origin7．0软件统计
数据，各组数据用z士s表示。
本体系为典型的Fenton反应产生羟自由基，羟
自由基再激发鲁米诺，鲁米诺由激发态返回到基态
时产生化学发光。该体系在启动发光装置后5S内
发光强度迅速达到最大值，然后开始衰减，30S内发
光曲线接近下降至稳定水平。分别观察了白果白蛋
白、小牛血清蛋白和莲房原花青素对化学发光曲线
的影响。其中白果白蛋白和小牛血清蛋白(图未给
出)分别加入体系后，发光曲线峰值增加，曲线面积
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
增大，且均随蛋白质量浓度的增大而增大，表现出 9
“促氧化”作用；在o～0．16tLg／mL时，“促氧化”作 暑。
用较小，从0．16ttg／mL增加到8p．g／mL或更高的 馨
质量浓度时，促氧化作用显著。莲房原花青素在此体 米3
系中仍表现出抗氧化作用(图未给出)，其IC。。值为
shJ
7．43p．g／mL，结果见图3。
釜o．8
螽
憩
蠢o。
O
o 10 20 30 40 50 60
f／s
O一0pg／mL1-0．16pg／mL2-0．8／*g／mL3-4,ug／mL
图3 白果白蛋白对FeS04-Luminol—H202化学发光体系
产生羟自由基的清除作用
Fig．3Seavengingeffectofginkgoalbuminonhy—
droxidefr eradicalinducedbyFeS04一
Luminol—H205chemiluminescencesy t m
2．2．3FeSO。一Luminol化学发光体系：取50肛L样
品(以样品缓冲液为对照)于样品池，分别加入750
弘LpH7．410mmol／L磷酸盐缓冲液(含有150
mmol／LNaCl)和100pL2．5mmol／L鲁米诺溶液，
最后加入100弘L400nmol／LFeS04溶液(含有
0．9％NaCl)后立即启动发光系统，反应温度37℃，
间隔2S计数，测定60S内的化学发光动力学曲线。
实验均重复3次，曲线面积积分表示相对发光强度，
计算抑制率，以Origin7．0软件统计数据，各组数据
用；±s表示。
该体系通过反应[10]产生羟自由基攻击鲁米诺发
光，但发光强度较弱。为便于观测，将Hi—V调到950。
其发光动力学曲线同FeSO。一Luminol—H。O。类似。结
果表明白果白蛋白在实验质量浓度范围内能较好的
抑制该体系发光，其抑制率均随样品质量浓度的增大
而增大，其IC。。值为0．21mg／mL，要远远大于其他
化学发光体系。而小牛血清蛋白即使在很高质量浓度
下也只能轻微抑制该体系的发光(图未给出)，在质量
浓度为6．25mg／mL时其抑制率仅为18．22％。莲房
原花青素则作用显著(图未给出)，其IC。。值低达
0．26t-g／mL。结果见图4。
2．3 白果白蛋白对双氧水的清除作用：采用H。O。一
Luminol化学发光体系口0|。取待测样品各50弘L于
水
＼
．I}《L
*
嚣
0 1 2 3 4 5 6
p／(“g．mL1)
0-0mg／mL1-0．01mg／mL2-0．05mg／mL
3-0．25mg／mL4-1．25mg／mL5-6．25mg／mL
A一化学发光曲线融剂量效应关系
A—-chemiluminescencecurveB—-dos —-effectrela ionship
图4 白果自蛋白对FeS04一Luminol体系产生
羟自由基的清除作用
Fig．4Scavengingeffectofginkgoalbuminonhydro·
xidefreeradicalinducedbyFeS04-Luminol
chemiluminescencesy t m
样品池中，加入50肛L0．15mol／LH20。和900弘L
0．1mmol／L鲁米诺一pH9．40．05mol／L碳酸盐缓
冲液混合液(体积比为1：17)，反应总体积为1．0
mL，启动发光系统，间隔2S记数，记录180S内发
光强度。本底不加双氧水。试验均重复3次，曲线面积
积分表示相对发光强度，计算抑制率，以Origin7．0
软件统计数据，各组数据采用Y+s表示。
本体系中H。O。能在有氧和碱性条件下氧化冷
光剂鲁米诺产生化学发光。试验结果表明该体系在
6S内化学发光强度达到最大，随后开始缓慢下降，到
180S左右下降到最小值。在本体系中观察了白果白
蛋白、小牛血清蛋白和莲房原花青素对化学发光强度
的影响，结果见图5。当体系加入白果自蛋白和小牛
血清蛋白(图未给出)后，在0．16～500pg／mL(20～
500／-g／mL的曲线数据未给出)时，随着质量浓度的
增加，发光曲线峰值和面积均增加，两者均表现出较
强的“促氧化”作用。而莲房原花青素则随着其质量浓
度的增加(图未给出)，对双氧水的抑制率增加，其
IC50值为1．55tLg／mL。
2．4 白果白蛋白对DNA损伤的保护作用：采用
CuSO。一Phen—Vc—H：O。一DNA化学发光体系[1¨。分别
用去离子水配制0．1mol／L醋酸一醋酸钠缓冲液，
4．2×10～mol／LVcC，3％H202及DNA—Cu2十一
Phen体系(用缓冲溶液配制，DNA质量浓度为3
／19／mL，CuS04·5H20浓度为7．5×10一mol／L，
Phen5．25×10叫mol／L)；在发光池中依次加入
100弘L样品溶液，800肛LDNA／Cu抖／Phen体系溶
液，100}tLVc，轻轻振荡混匀后，置于发光装置中，打
开记录系统后，立刻注入200弘L双氧水，立刻启动发
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·689·
f／s
O一0／19／mL1-0．16／19／mL2-0．8／19／mL3-4btg／mL
图5 白果白蛋白对H：O：一Luminol化学发光体系中
双氧水的清除作用
Fig．5ScavengingeffectofginkgoalbuminonHzOz
inH202-Luminolchemi uminescencesy t m
光装置，每隔3S记录数据1次，记录540S内的动态
发光过程，本底不加双氧水。试验均重复3次，曲线面
积积分表示相对发光强度，计算抑制率，以Origin
7．0软件统计数据，各组数据用i±5表示。
该化学发光体系的发光动力学曲线出现两个峰，
前峰是Fenton反应产生的·OH攻击Phen出现的
化学发光现象而导致的，后峰则是·OH导致DNA
损伤而产生的一延迟化学发光峰。与空白对照相比，
在0．4～500／-g／mL时，随着白果白蛋白质量浓度的
增加，化学体系发光动力学曲线的两个峰值和面积持
续下降，但两峰均未发生位移，白果白蛋白对DNA
损伤的抑制率不断增加，当白果白蛋白质量浓度为
500／-g／mL时，抑制率为79．78％，其IC。。值为
27．28／．tg／mL。莲房原花青素同样在0．4～lOOug／
mL时，近乎呈线性关系抑制羟自由基的产生和保护
DNA免受损伤，且两峰均明显的不断后移(图未给
出)；在质量浓度为100肛g／mL时，抑制率达
81．36％，其IC。。值为7．43弘g／mL，结果见图6。
3讨论
活性氧的测定方法有很多种，如核磁共振法、比
色法、荧光法、气相色谱法、高效液相色谱法、示踪原
子法和免疫分析法等，而化学发光法由于其灵敏快
捷而被广泛用来测定各种活性氧，较常见的如超氧
阴离子、羟自由基、脂质自由基和双氧水等，各种活
性氧的测定则又有多种化学发光体系供选择，在本
试验中选择了一些较为经典的化学发光体系。
测定超氧阴离子常用的化学发光体系有邻苯三
酚一鲁米诺、黄嘌呤氧化酶一鲁米诺和二甲基亚砜一鲁
米诺3种体系‘12J。本试验采用了邻苯三酚一鲁米诺
非酶促化学体系，结果表明白果白蛋白清除超氧阴
离子能力接近强抗氧化剂莲房原花青素。测定羟自
。3
2
×2．
似
强l
装
撼O
O 100200300400500
／／’S p／(ug’·mL一1)
O一0pg／mL1-0．4pg／mL2-2／19／mL3-10p．g／mL
4-20ttg／mL5-100／19／mL6-500／19／mL
A一化学发光曲线B一剂鳖一效应关系
A—chemiluminescencecurveB，dos —effectrelationship
图6 白果白蛋白对CuS04一Phen—Vc—H202-DNA化学发
光体系DNA损伤的保护作用
Fig．6Protectiveeffectofginkgoalbuminondamaged
DNAinCuS04-Phen-Vc—H202一DNAchemilumi—
nescencesystem
由基的化学发光体系主要有硫酸铜一酵母(或骨髓细
胞)一抗坏血酸一双氧水、氯化铜一双氧水一邻菲哕啉一碳
酸盐缓冲液、硫酸铜一邻菲哕啉一抗坏血酸一双氧水、
硫酸亚铁一鲁米诺一双氧水和硫酸亚铁一鲁米诺5个
化学发光体系[9,12,13]。本试验选择了后3种化学发
光体系，得到了相反的结果，白果白蛋白和小牛血清
蛋白在硫酸亚铁一鲁米诺一双氧水体系中表现出“促
进”自由基产生的作用，白果白蛋白在其他两个体系
中则能较好的清除羟自由基，且以硫酸铜一邻菲哕
啉一抗坏血酸一双氧水体系较为灵敏。双氧水的化学
发光测定体系主要是双氧水一鲁米诺体系，结果表明
白果白蛋白和小牛血清蛋白均表现出强烈的“促氧
化”作用，而莲房原花青素则能显著清除双氧水，因
此该体系不宜衡量白果白蛋白的清除双氧水活性。
在上述体系中，白果白蛋白和小牛血清蛋白均是在
同时有鲁米诺和双氧水的发光体系中表现出“促氧
化”作用，推测蛋白的“促氧化”作用可能是由于体系
氧化电位升高从而增强了由H。O。氧化引起的鲁米
诺发光作用，具体原因尚待进一步研究和证实。
观测天然活性成分对DNA损伤的保护作用的
方法也有多种，如应用非常广泛的单细胞凝胶电泳
法可检测单个细胞DNA的断裂。采用化学发光法
目前则只有CuSO。一Phen—Vc—H。02一DNA体系；天然
抗氧化剂对该体系DNA损伤的保护有抑制型、延
迟型和混合型3种机制口4’15|。本试验结果表明白果
白蛋白和莲房原花青素都能较好地保护DNA所受
到的损伤，但白果白蛋白的保护机制属于抑制型，而
莲房原花青素的保护机制则属于混合型。可见该体系
能用来衡量白果白蛋白对DNA损伤的保护作用。
白果白蛋白的抗氧化作用则可能存在以下机
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万方数据
·690· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
制：(1)由于自身蛋白质结构决定的，如能提供活泼
氢质子，使其易于受到活性氧自由基的攻击，从而与
发光剂竞争活性氧自由基导致发光强度的降低；(2)
蛋白质的抗氧化活性多与巯基量或类似于酶的活性
有关，如保护蛋白(protectorprotein)是巯基特异性
抗氧化剂，能清除双氧水及羟自由基[161；而肌球蛋
白，血红蛋白及血红蛋白一蛋白质复合物(如肝球蛋
白)等具有类似于过氧化物酶的活性，可清除H：Oz
或有机氢过氧化物[1川。白果白蛋白的氨基酸组成分
析表明其含有2．5％左右的半胱氨酸，因此具有较
多的巯基，从而表现出类似于保护蛋白的抗氧化机
制。而其是否具有类似于酶的抗氧化活性则有待于
进一步的证实。
因此，本试验结果表明化学发光法能用于测定
白果白蛋白对活性氧的清除作用及对DNA损伤的
保护作用，但也具有一定的选择性。
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灌胃养阴通脑颗粒大鼠血浆中川芎嗪的HPLC法测定
张国平1，郭 莹2，张 莉2，樊守艳2，韩 进2，余 勤2，潘远江1，万海同2+
(1．浙江大学医学院附属第二医院，浙江杭州310009；2．浙江中医药大学心脑血管病研究所，浙江杭州310053)
摘 要：目的建立HPLC测定大鼠灌胃养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中川I芎嗪质量浓度的方法。方法以
乙腈提取处理血浆，以安眠酮为内标，甲醇一水(55：45)为流动相，ODSC-s色谱柱(150mmX4．6mm，5pm)为固
定相，体积流量为1．0mL／min，以紫外检测器在279nm波长下测定m浆中川芎嗪。结果川芎嗪在0．11～22
Fg／mL线性关系良好，平均回收率为102．98％，RSD<10％，最低检测限为0．21ng，血浆中最低检测质量浓度为
0．042／xg／mL。结论此法灵敏、可靠，可较好地用于口服养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中的川芎嗪的测定，为
测定中药复方体内有效成分提供方法。
关键词：养阴通脑颗粒；川芎嗪；血药浓度；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2007)05—0690～03
收稿日期：2006—07—03
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30371789；30672652)；浙江省自然科学基金项目(Z204424)
作者简介：张国平(1967一)，男，浙江嵊州人，主治医师，硕士，主要从事脑血管病的中西医结合临床与实验研究。
Tel：(0571)87783511E—mail：zhangguoping@zj．eom
*通讯作者万海同E—mail：wanhaitong@zjtcm．net
万方数据
化学发光法测定白果白蛋白的体外抗氧化活性
作者： 邓乾春， 陈春艳， 田斌强， 谢笔钧， DENG Qian-chun， CHEN Chun-yan， TIAN Bin-
qiang， XIE Bi-jun
作者单位： 邓乾春,田斌强,谢笔钧,DENG Qian-chun,TIAN Bin-qiang,XIE Bi-jun(华中农业大学食品科
技学院,湖北,武汉,430070)， 陈春艳,CHEN Chun-yan(湖南科技学院,化学与生物工程系,湖
南,永州,425006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)
被引用次数： 4次

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引证文献(4条)
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