全 文 ：5 科技创新导报 Science and Technology Innovation Herald
研 究 报 告
2010 NO.26
Science and Technology Innovation Herald科技创新导报
火炭母 ,为多年蓼科植物Polygonum
chinense L.的干燥枝叶,分布于附件、江西、
两广等省区 ,主要成分为黄酮醇和黄酮苷
类化合物等 [1],功效为清热利湿、凉血解毒 ,
临床上用于湿热泄泻、痢疾 ,黄疸 ,咽喉肿
痛 ,湿热疮疹等 ,现收载于《广东省中药材
标准》(第一册)中 [2]。该质量标准缺乏含量测
定项 ,而国内报道多以槲皮苷作为其目标
成分。本实验采用高效液相色谱法(HPLC)
对其中异槲皮苷进行含量分析 ,进一步完
善其质量标准。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪 (厂家 :美国安捷伦公
司,型号:Agilent 1200系列),电子天平(Sartorius
BP211D),电子天平(Sartorius BS 400S)超声波
清洗器(美国Branson公司,型号B5510E,频率
40kHz)。
1.2 试药
异槲皮苷对照品 (批号 :B0400,供含量
测定用,购自维克奇生物科技有限公司);乙
睛为色谱纯(Fisher化学试剂公司),水为超
纯水 ;其他试剂均为分析纯。火炭母药材样
品(批号:20090201、20090301、20090401、
20090501)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以ODS为固定相 ,乙腈 -四氢呋喃 -0 .
2%磷酸水溶液 (15:4:81)为流动相 ;检测波
长为255nm;进样量为5μ l。理论板数按异
槲皮苷峰计算应不低于3000。
2 .2 对照品溶液的制备
取异槲皮苷对照品适量 ,精密称定 ,置
50ml量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,制成每1ml含
异槲皮苷0.2mg的溶液 ,即得。
2 .3 供试品溶液的制备
取本品适量 ,粉碎 ,过3号筛 ,取粉末约
1g,精密称定,置150ml具塞锥形瓶中 ,精密
加入甲醇25ml,密塞 ,称定重量 ,超声处理
30分钟 ,再称定重量 ,用甲醇补足减失的重
量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.4 线性范围
取同一份对照品溶液(浓度为异槲皮苷
0.1984mg/ml),分别进样1、2、5、10、15μL,
按上述色谱条件测定 ,以峰面积 (Y)为纵坐
标 ,进样量 (X)为横坐标绘制标准曲线 ,得
线性方程 :Y=2353.4X+68.01,r=0.9992。
结果表明 ,异槲皮苷在0.1984～2.976mg的
范围内与其峰面积呈现良好的线性关系。
2.5 专属性试验
取对照品溶液、供试品溶液、溶剂 ,分
别按上述色谱条件进样5μL,依法测定。结
果溶剂无干扰。
2.6 精密度试验
取同一份对照品溶液 ,连续进样6次 ,
在上述色谱条件下检测异槲皮苷的峰面积
的含量,测得RSD为0.10％。
2.7 稳定性试验
取同一份供试品溶液(批号:20090201),
按上述色谱条件分别在0、3、6、12、24、48h
进样5μ L,测定 ,计算 ,测得异槲皮苷含量
的RSD为2.18％。结果表明 ,供试品溶液在
48h内稳定。
2.8 重复性试验
取同一批号的火炭母(批号:20090201)6
份 ,按上述含量测定方法测定 ,计算 ,测得
异槲皮苷的平均含量为6.32mg/g(RSD=0.
53%),表明该方法重复性良好。
2 .9 加样回收率试验
取同一批火炭母(批号:20090201,含异
HPLC 法测定火炭母中异槲皮苷的含量
谢仕伟1 张韧2
(1.东莞市药品检验所 东莞 523109; 2.广东省药品检验所 广州 510000)
摘 要:目的 :建立火炭母中异槲皮苷的HPLC分析方法。方法:采用Diamonsil C18(5μm×250mm×4.6mm)色谱柱,以乙腈-四氢呋喃-
0.2％磷酸水溶液(15:4:81)为流动相洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长为255nm,柱温为35℃。结果 :异槲皮苷在0.1984～2.976mg的
范围内线性关系良好,相关系数r为0.9992;异槲皮苷的平均加样回收率分别为100.8％(RSD=1.65%)结论:本方法操作简单,重现性好,
结果稳定 ,可有效地控制火炭母的质量。
关键词:火炭母 高效液相色谱法 异槲皮苷
中图分类号 :R284 文献标识码 :A 文章编号 :1674-098X(2010)09(b)-0005-01
槲皮苷6.32mg/g)9份 ,按表1要求分别精密
加入供试品和对照品 ,置150ml量瓶中 ,照
“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,按上述色
谱条件测定 ,计算回收率。结果见表1。
2.10 样品的含量测定
取3批火炭母药材 ,按上述含量测定方
法 操 作 ,测 定 ,计 算 。结 果 ,测 得 批 号
20090301、20090401、20090501的样品中异槲
皮苷的含量分别为5.94mg/g、6.22mg/g、
5.50mg/g。
3 讨论
(1)在提取条件的摸索过程中 ,笔者参
考文献报道 [3-5],比较了不同的提取方法 ,包
括超声提取和索氏提取。结果发现,超声提
取和索氏提取对含量测定影响不大。笔者
又比较了超声提取20、30、50分钟三种提取
时间。结果表明 ,超声20分钟未能提取完
全。而超声30分钟与50分钟并无显著差异。
因此 ,选用超声提取30分钟作为供试品制
备方法。
(2)在色谱条件的摸索过程中 ,笔者参
考文献报道 [3-5],发现流动相中添加4%四氢
呋喃能有效改善异槲皮苷的峰形 ,提高其
分离度。
参考文献
[1] 王永刚 ,谢仕伟 ,苏薇薇 .火炭母化学成
分研究 [J].中药材 ,2005.
[2] 广东省食品药品监督管理局 .广东省中
药材标准 .2004,1.
[3] 李宗主 ,潘瑞乐 ,李展 ,等 .阳春砂仁中
总黄酮、异槲皮苷和槲皮苷含量测定研
究 [J].科技导报 ,2009.
表1 回收率试验结果
DOI:10.16660/j.cnki.1674-098x.2010.26.028