全 文 ：HPLC色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中厚朴酚的含量
冯 华 1 ,王样培 2 ,邹孔强 1 ,王小东1 　(1.遵义市药品检验所,贵州遵义 563002;2.贵阳中医学院 ,贵州贵阳 553002)
摘要　[目的 ]建立用高效液相色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中厚朴酚的含量。 [方法 ]色谱柱为DiamonsilC18 , 以甲醇-水(78∶22)为流动相;流速为 1.0ml/min;柱温 25 ℃;检测波长为 294 nm。 [结果]厚朴酚线性范围为 0.627 2～ 1.164 8ug, r=0.999 4;平均回收率为
98.56%, RSD=0.33%。 [结论]该法简便、灵敏 、准确。
关键词　高效液相色谱法;黔北凹叶厚朴;厚朴酚;含量测定
中图分类号　R284.1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)15-07841-01
ContentDeterminationofMagnololinQianbeiMagnoliaofficinalisbyHPLC
FENGHuaetal　(ZunyiInstituteforDrugControl, Zunyi, Guizhou563002)
Abstract　[ Objective] TheaimwastodeterminethecontentofmagnololinQianbeiMagnoliaofficinalisbyHPLCmethod.[ Method] ADia-
monsilC18 columnwasusedwithmobilephaseofmethanol-water(78∶22), thedetectionwavelengthwas294nm, theflowratewas1.0 ml/
min, thecolumntemperaturewas25℃.[ Result] Themagnololgoodlinerrangewaswithin0.627 2-1.164 8 ug, r=0.999 4.Theaverage
recoverywas98.56%andRSDwas0.33%.[ Conclusion] Themethodissimple, sensitiveandaccurate.
Keywords　 HPLC;QianbeiMagnoliaoficinalis;Magnolol;Contentdetermination
基金项目　遵义市中药现代化科技产业研究开发专项项目(市科合中
药专字〔2008〕2号)。
作者简介　冯华(1977-),男 ,贵州沿河人 ,硕士 , 主管药师 , 从事新药
研究及药品检验方面的研究。
收稿日期　 2010-03-01
　　厚朴为木兰科植物厚朴 (MagnoliaoficinalisRehd.et
Wils.)或凹叶厚朴(MagnoliaoficinalisRehd.etWils.var.biloba
Rehd.etwils)的干燥干皮 、根皮及枝皮 ,味苦 、辛 ,温 ,具有燥湿
消痰 、下气除满等功效。收载于 2005版《中国药典(一部)》[ 1] 。
笔者采用高效液相色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中厚朴酚的
含量 ,并以此对其药用价值进行考察和评估 ,为黔北凹叶厚朴
GAP基地开发及质量控制提供一定的参考依据。
1　材料与方法
1.1　仪器与试药 　 Waters1525型高效液相色谱仪 , KQ-
300DE超声仪 ,色谱柱:DiamonsilC18 (5 μm, 250 cm×4.6
mm)。厚朴药材 ,采集于习水县 GAP厚朴药材基地 ,经邓顺
超副主任中药师鉴定为木兰科植物凹叶厚朴的干燥干皮 。
甲醇色谱纯 ,水为纯净水 。厚朴酚对照品 ,中国药品生物检
定所批号:0729-200309。
1.2　溶液的制备
1.2.1　对照品溶液制备。精密称取厚朴酚对照品 11.20
mg,置 50ml容量瓶中 ,加甲醇溶解至刻度 ,摇匀 ,精密取 5ml
置 25 ml容量瓶中加甲醇至刻度 ,即得对照品溶液。
1.2.2　供试品溶液制备。精密称取厚朴药材粉末(过三号
筛)约 0.2 g,置带塞的锥形瓶中 ,加甲醇 25ml,称重 ,超声 40
min,用甲醇补足重量 ,滤过 ,滤液置 50 ml容量瓶中 ,加甲醇
至刻度 ,制得供试品溶液。
2　结果与分析
2.1　色谱条件 　色谱柱为 DiamonsilC18 ,以甲醇 -水
(78∶22)为流动相;流速为 1.0 ml/min;柱温 25℃;检测波长
为 294 nm。对照品和供试品 HPLC色谱见图 1和 2。
2.2　线性关系考察　精密吸取以上对照品溶液 ,分别进样
14、18、20、24、26 ul,测定峰面积 ,以厚朴酚浓度(ug)为横坐
标 ,峰面积积分值(A)为纵坐标 ,得厚朴酚回归方程为 Y=
5.0E+5x-1.4E+6, r=0.999 4。结果表明 ,厚朴酚在
图 1　对照品 HPLC色谱
Fig.1　Controlsubstancemap
图 2　供试品 HPLC色谱
Fig.2　Testedsubstancemap
0.627 2 ～1.164 8 ug线性关系良好。
2.3　精密度试验　精密吸取厚朴酚对照溶液 20 ul,注入高
效液相色谱仪中 ,测定 5份。平均峰面积为 1 254 302, RSD=
1.2%,表明精密度良好。
2.4　稳定性试验　精密称定该品 0.2 g按 “1.2.2”制备供试
品溶液 ,吸取供试品溶液 ,分别在 0、4、8、16、24 h测定 1次。
平均峰面积为 2 788 590, RSD=1.1%,表明供试品在 24 h内
基本稳定 ,稳定性好。
2.5　重复性试验　精密取该品约 0.2g, 5份 ,按 “1.2.2”制备
供试品溶液 ,精密吸取供试品溶液各 20 μl,测定平均峰面积为
2 785 989,平均含量为 2.54%, RSD=1.0%,表明重复性良好。
(下转第 7865页)
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(15):7841, 7865 责任编辑　李占东　责任校对　卢瑶
表 2　正交试验结果
Table2　Resultsoforthogonaltest
试验号
TestNo. A B C D
黄酮含量∥mg/g
Flavonoidcontent
1 A1 B1 C1 D1 4.071
2 A1 B2 C2 D2 4.390
3 A1 B3 C3 D3 4.612
4 A2 B1 C2 D3 6.567
5 A2 B2 C3 D1 3.333
6 A2 B3 C1 D2 3.062
7 A3 B1 C3 D2 4.095
8 A3 B2 C1 D3 5.449
9 A3 B3 C2 D1 3.406
M1 4.358 4.911 4.194 3.604
M2 4.321 4.391 4.788 3.849
M3 4.316 3.694 4.013 5.543
K1 13.072 14.733 12.582 10.81
K2 12.962 13.172 14.363 11.547
K3 12.950 11.080 12.040 16.628
R 0.037 1.217 0.775 1.939
　注:表中数据均为 3次重复平均值。
　Note:Datainthetablearethemeanvaluesofthreerepetitivemeasurements.
2.3　验证试验　由于得出的最佳工艺条件不在正交试验
范围内 ,所以需进行验证试验。依据正交试验得出的优化条
件进行试验 ,得三白草总黄酮的提取量为 6.890 mg/g,高于
其他工艺条件下的黄酮提取量 ,进一步说明正交试验得出的
最佳条件为提取三白草总黄酮的较理想的工艺 。
2.4　方法学考察
2.4.1　精密度考察。精密吸取三白草提取原溶液 2 ml,按
“1.2.1”的方法制备样品液 ,在 506 nm处测定其吸光度 ,连
续测定 5次 ,得其平均吸光度为 0.127 8,相对标准偏差
(RSD)为 0.35%,说明仪器的精密度良好。
2.4.2　稳定性研究。对上述溶液每隔 10 min测定 1次吸
光度 , 6次测定总黄酮提取量的平均值为 5.277 mg/g, RSD为
1.26%(n=6),说明三白草提取原溶液在 1h内较稳定。
2.4.3　重现性考察。取相同的三白草提取液 5份 ,测定其
吸光度值 , 5次测定总黄酮提取量的平均值为 4.375 mg/g,
RSD为 0.72%,说明方法的重现性较好。
2.4.4　回收率试验。取三白草提取原溶液 3份 ,分别加入
一定量的标准芦丁溶液 ,按照含量测定方法测定其吸光度 ,
计算加标回收率 ,得回收率分别为 102.8%、99.0%和
101.4%,平均值为 101.1%,说明方法的准确度较高 。
3　结论
采用超声波提取工艺 ,以乙醇为溶剂提取三白草中的黄
酮类物质 ,通过单因素试验研究了乙醇浓度 、超声温度 、提取
时间和料液比对总黄酮提取率的影响。正交试验结果表明 ,
影响三白草总黄酮提取率的因素依次为:超声温度 >固液比
>提取时间 >乙醇浓度 ,据此得出三白草黄酮类成分的最佳
提取条件为:乙醇浓度 50%,料液比 1∶25,提取时间 30 min,
超声温度 65 ℃。在此工艺条件下 ,三白草中总黄酮的提取
量达 6.890 mg/g。
参考文献
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部 [ S] .北京:化学工业出版社 , 2005:11.
[ 2] 李泽友,陈峰 ,任守忠,等.三白草的化学成分和药理作用研究进展[ J].中国药房, 2007, 18(6):473-474.
[ 3] 邬方宁.超声提取技术在现代中药中的应用 [ J].中草药 , 2007, 38(2):
315-316.
[ 4] XUXQ, YEHZ, WANGW, etal.DeterminationofflavonoidsinHout-tuyniacordataThunb.andSaururuschinensis(Lour.)Bail.bycapilarye-
lectrophoresiswithelectrochemicaldetection[J].Talanta, 2006, 68(3):759-764.
[ 5] 彭永芳 ,马银海 ,郭亚东,等.高效液相色谱法快速测定三白草中黄酮类物质 [ J].理化检验 -化学分册, 2007, 43(6):463-464, 467.
[ 6] 汪怡,李祥 ,邱蓉丽 ,等.三白草中总黄酮醇提工艺的研究 [ J].中华中医药学刊, 2007, 25(4):812-813.
[ 7] 朱飞娥 ,田自华 ,张子义.甘草总黄酮微波法提取工艺的研究 [ J].畜牧
与饲料科学 , 2008, 29(5):1-2.[ 8] 吴晓亮 ,韩敏,刘晓松 ,等.瑞香狼毒总黄酮 3种提取方法的比较[ J].畜
牧与饲料科学, 2009, 30(1):39-40.
(上接第 7841页)
2.6　加样回收率试验　取已知含量(2.53%)供试品 5份 ,
每份约 0.1 g,精密称定 ,分别加入厚朴酚对照品(1.276
mg/ml)2ml,测定厚朴酚的含量 ,计算回收率 。由表 1可知 ,
平均回收率为 98.56%, RSD为 0.33%,说明回收率好。
表 1　加样回收率试验
Table1　Samplerecoverytest
药材含量∥mgMedicinalcontent
加入量mgDosage
回收量mgRecovery
回收率∥%Recoveryrate
平均回收率∥%Averagerecoveryrate
RSD%
3.263 2.552 5.775 98.43
3.272 2.552 5.774 98.04
3.282 2.552 5.809 99.02 98.56 0.33
3.275 2.552 5.799 98.90
3.312 2.552 5.823 98.39
2.7　样品含量测定　厚朴酚的平均含量为 2.5%,RSD=0.66%。
3　结论与讨论
(1)对贵州黔北凹叶厚朴药材中厚朴酚提取条件的优
选 ,结果表明 ,用甲醇 25 ml,超声 40min,药材中厚朴酚提取
完全 ,故选用甲醇为溶剂较好;对色谱条件进行选择 ,结果表
明 ,以甲醇 -水(78∶22);流速为:1.0 ml/min;柱温 25 ℃;检
测波长为 294nm[ 2-3] ,各组分峰达到完全分离。
(2)该研究采用高效液相色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴
药材中厚朴酚的含量 ,并对测定方法进行方法学研究。结果
表明 ,厚朴酚与其他组分分离度好 ,重现性好 ,回收率高 ,专
属性强 。
(3)优选的色谱条件可行 、稳定 、省时 ,可以对黔北凹叶
厚朴 GAP基地开发利用及质量控制提供一定的科学依据 。
参考文献
[ 1] 国家药典委员会.《中国药典》2005版一部 [ S].北京:化学工业出版社,
2005:176.
[ 2] 杨红兵 ,石磊,詹亚华,等.湖北产凹叶厚朴质量研究(I)[J] .湖北中医
杂志, 2007, 29(11):59-60.
[ 3] 孟超,吴丰 ,马林.厚朴类中药和厚朴酚及和和厚朴酚的含量测定[ J].
天然产物研究与开发 , 2007, 19(6):1024-1026.
786538卷 15期　　　　　　　　　　　　　　　　冯海燕等　三白草总黄酮的超声波提取工艺研究