全 文 ：第 34 卷 第 4 期
2 0 1 6 年 4 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 34 No． 4
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2016． 04． 046
HPLC法测定北豆根及其制剂中蝙蝠
葛碱、蝙蝠葛苏林碱的含量
张阳1，李可强2，3，张鹏1，李峰3，张振秋3
(1．辽宁省中药研究所，辽宁 沈阳 110161;2．辽宁公安司法管理干部学院，辽宁 沈阳 110161;
3．辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116000)
摘 要:目的:建立 HPLC法测定北豆根药材及其制剂中蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱的含量。方法:采用高效
液相色谱法。色谱条件为 Agilent Eclipse XDB － C18色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;以乙腈 － 0． 05%三乙胺的
水溶液(45 ∶ 55)为流动相;流速 1． 0 mL·min －1;检测波长为 284 nm。结果:蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的线性范
围分别为 0． 78 ～ 3． 88 μg(r = 0． 999 6)、0． 62 ～ 3． 09 μg(r = 0． 999 5) ;平均加样回收率(n = 5)分别为98． 4%，
98． 9%。结论:该法简便、灵敏、准确，可用于北豆根药材及其制剂的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;北豆根;蝙蝠葛碱;蝙蝠葛苏林碱
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2016)04-0921-03
Determination of Dauricine and Daurisoline in Ｒhizoma
Menispermi and Its Preparations by HPLC
ZHANG Yang1，LI Keqiang1，2，ZHANG Peng，LI Feng2，ZHANG Zhenqiu2
(1． Liaoning Institute of TCM，Shenyang 100161，Liaoning，China;
2． Liaoning Public Security Judicial Management College，Shenyang 100061，Liaoning，China;
3． Pharmacy School of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To determine the contents of dauricine and daurisoline in Ｒhizoma Menispermi and its prepara-
tions by HPLC． Methods:The reversed phase HPLC system consisting of an Agilent Eclipse XDB － C18 column(250 mm
×4． 6 mm，5 μm)and a mixture of acetonitrile － 0． 05% triethylamine as the mobile phase was adopted． The flow rate
was 1． 0 mL /min． The absorbance was monitored at 284 nm． Ｒesults:The linear response ranges of dauricine and dau-
risoline were 0． 78 ～ 3． 88 μg(r = 0． 999 6)and 0． 62 ～ 3． 09 μg(r = 0． 999 5) ，respectively． The average recoveries were
98． 4% and 98． 9% ． Conclusion:The method was convenient with accuracy and sensitivity and can be used to control the
quality of Ｒhizoma Menispermi and its preparations．
Key words:HPLC;Ｒhizoma Menispermi;dauricine;daurisoline
收稿日期:2015 － 11 － 29
基金项目:辽宁省人力资源与社会保障厅“百千万人才工程”项目
(2011921017)
作者简介:张阳(1982 －) ，男，中药师，硕士研究生，研究方向:中药
药物分析。
通讯作者:李可强(1967 －) ，男，教授，博士研究生，研究方向:中药
药物分析教学、科研。E-mail:sylkq@ sina． com。
北豆根为防己科植物蝙蝠葛 (Menispermum dauricum
DC．)的干燥根茎，具有清热解毒，祛风止痛的功效，常用于
咽喉肿痛，热毒泻痢，风湿痹痛等［1］。目前市场上销售的
北豆根制剂主要是固体制剂，有片剂(包括咀嚼片和分散
片)、胶囊剂、滴丸剂，均以北豆根中提取的总生物碱为原
料制成，现代研究表明北豆根及其制剂的主要药效成分为
蝙蝠葛碱(Dauricine)和蝙蝠葛苏林碱(Daurisoline)［2 － 11］，
通过查阅相关文献，未见同时测定其药材及制剂中蝙蝠葛
碱和蝙蝠葛苏林碱含量的报道［12 － 18］，本实验采用高效液相
色谱法首次系统全面的测定了北豆根药材及其市售各种制
剂中的蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱的含量，经方法学验证，方
法灵敏准确，可用于北豆根及其制剂的质量控制，为进一步
规范北豆根药材及其各种制剂提供了参考依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
日立 U －3010 紫外可见双光束扫描分光光度计;Agi-
lent1100Series高效液相色谱仪;ChemStation 色谱工作站;
G1314 － A紫外检测器;AＲ2140 电子分析天平。
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1． 2 试药
对照品蝙蝠葛碱(726 － 9004)、蝙蝠葛苏林碱 (110853
－ 200201)由 DELTA天然有机化合物信息中心提供，纯度
均为98． 5%。
高效液相色谱用甲醇、乙睛为色谱纯，水为超纯净水。
其他试剂均为分析纯。
北豆根药材分别自采或购于各地药店及药材市场，经
辽宁中医药大学李峰教授鉴定，其制剂分别购于各地正规
药店，来源及规格见表 1。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse XDB － C18(250 mm × 4． 6
mm，5 μm) ;流动相:乙腈(A)－ 0． 05%三乙胺的水溶液
(45:55) ;流速:1． 0 mL·min － 1;284 nm;柱温:25 ℃。
理论塔板数按蝙蝠葛碱峰计算应不低于 2000。在该条
件下，北豆根药材及其制剂中蝙蝠葛苏林碱和蝙蝠葛碱
的色谱图，见图 1。
图 1 北豆根药材及其制剂 HPLC
2． 2 溶液制备
2． 2 ． 1 混合对照品溶液 分别取蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏
林碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 蝙蝠葛
碱0． 3888 mg、含蝙蝠葛苏林碱 0． 3096 mg的混合溶液，
即得。
2． 2 ． 2 北豆根药材供试品溶液［2］ 取 5 个不同商品地
干燥的北豆根药材粉末(40 目)1． 0 g，精密称定，置索
氏提取器中，加氯仿 30 mL 及浓氨水 1 mL，浸泡过夜，
再加氯仿 50 mL，回流提取 3 h，将提取液转移至蒸发皿
中，蒸干，残渣加甲醇转移至 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻
度，摇匀，经 0． 45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液作为各供
试品溶液。
北豆根制剂供试品溶液 取北豆根各制剂，北豆根片
10 片，除去糖衣，北豆根胶囊取内容物，其他北豆根制剂直
接研细粉碎，取各制剂粉末适量，约 0． 1 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称定重量，超声处
理(功率 140 W，频率 42 kHz)30 min，防冷，再称定重量，用
甲醇补足减失的重量，摇匀，经 0． 45 μm微孔滤膜过滤，取
续滤液作为各制剂的供试品溶液。
2． 3 标准曲线的绘制
分别精密吸取混合对照品溶液 2、4、6、8、10 μL，注入高
效液相色谱仪，按 2． 1 项下色谱条件进样测定色谱峰面积，
以进样量 X(μg)为横坐标，峰面积 Y为纵坐标，进行线性回
归，蝙蝠葛碱的回归方程 Y =680． 94X － 41． 9，r = 0． 999 6，结
果表明:蝙蝠葛碱在 0． 78 ～ 3． 88 μg 线性关系良好;蝙蝠葛
苏林碱的回归方程 Y = 711． 72X + 15． 7，r = 0． 999 5，结果表
明:蝙蝠葛苏林碱在 0． 62 ～3． 09 μg线性关系良好。
2． 4 定量限和检测线
通过稀释对照品溶液，进样测定，确定检测限和定量
限，检测限信噪比为 3 ∶ 1，定量限信噪比为 10 ∶ 1，结果蝙蝠
葛碱的检测限和定量限分别为 0． 13 μg和 0． 40 μg;蝙蝠葛
苏林碱的检测限和定量限分别 0． 09 μg和 0． 30 μg。
2． 5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL，按 2． 1项下色谱条件，
重复进样 5 次，以峰面积计算，蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的
ＲSD(n =6)分别为 0． 26%和 0． 56%，表明仪器精密度良好。
2． 6 重复性试验
按 2． 2． 2 项下方法制备北豆根药材样品溶液 6 份，按
2． 1 项下色谱条件进行分析，测得蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林
碱的 ＲSD分别为 1． 22%，1． 18%，表明重复性良好。
2． 7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10 h 按
2． 1 项下色谱条件进行分析，测定蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林
碱的 ＲSD分别为 1． 17%和 1． 34%，表明供试品溶液在 10 h
内基本稳定。
2． 8 加样回收率试验
精密称取已知含量的北豆根药材粉末 5 份，每份约
0． 5 g，精密称定，分别精密加入蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱
对照品溶液，按 2． 2． 2 项下供试品溶液制备及 2． 1 项下色
谱条件测定，计算回收率。结果表明，蝙蝠葛碱的平均回收
率 98． 4%，ＲSD 1． 17%，蝙蝠葛苏林碱的平均回收率
98． 9%，ＲSD 1． 36%，见表 1。
表 1 蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱加样回收率试验结果
成分
样品量
(g)
样品中
量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
0． 503 5 3． 702 6 3． 708 6 7． 328 7 97． 78
0． 501 4 3． 698 5 3． 708 6 7． 419 4 100． 33
蝙蝠葛碱 0． 500 7 3． 714 7 3． 708 6 7． 361 1 98． 32 98． 4 1． 17
0． 513 2 3． 693 2 3． 708 6 7． 302 3 97． 32
0． 521 1 3． 711 1 3． 708 6 7． 358 6 98． 35
0． 510 9 2． 851 4 2． 839 6 5． 623 6 97． 63
0． 497 8 2． 861 1 2． 839 6 5． 730 6 101． 05
蝙蝠葛苏林碱 0． 500 2 2． 866 7 2． 839 6 5． 671 9 98． 79 98． 9 1． 36
0． 494 6 2． 800 3 2． 839 6 5． 580 6 97． 91
0． 518 7 2． 813 5 2． 839 6 5． 625 4 99． 02
2． 9 样品含量测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注
入液相色谱仪，按 2． 1 项下色谱条件进行分析，每个样品重
复测 3 次，以平均值计算含量，药材和制剂的结果分别见表
2 ～表 3。
3 小结与讨论
3． 1 北豆根药材溶液制备方法的考察
本实验曾通过对提取溶剂(甲醇、氯仿、氯仿 － 浓氨
水) ，提取时间(2，3，4 h) ，提取方法(回流提取，索氏提取，
超声提取)的比较，结果表明以氯仿 －浓氨水作为提取溶
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剂，采用索氏提取方法，提取 3 h 的制备方法最为理想，此
结果与文献报道一致［12，17］。
表 2 北豆根药材及各制剂中蝙蝠葛碱、
蝙蝠葛苏林碱的含量(mg·g －1)
样品 购买地(厂家) 蝙蝠葛碱 蝙蝠葛苏林碱 总量
药材 沈阳 4． 10 9． 33 14． 43
药材 亳州 6． 98 5． 21 12． 19
药材 郑州 4． 54 7． 57 12． 11
药材 武汉 5． 90 8． 32 14． 22
药材 北京 3． 67 12． 02 15． 69
表 3 北豆根制剂中蝙蝠葛碱、
蝙蝠葛苏林碱的含量(n = 3)
样品规格 购买地(厂家) 蝙蝠葛碱 蝙蝠葛苏林碱 总量
片剂(15 mg) 鞍山制药有限公司 6． 91 mg /片 3． 19 mg /片 10． 10 mg /片
片剂(30 mg) 鞍山制药有限公司 14． 81 mg /片 6． 18 mg /片 20． 99 mg /片
片剂(15 mg) 伊春五加参药业有限责任公司 7． 90 mg /片 4． 11 mg /片 12． 01 mg /片
胶囊(30 mg) 颈复康药业集团有限公司 18． 39 mg /粒 8． 29 mg /粒 26． 68 mg /粒
胶囊(0． 3 g) 颈复康药业集团有限公司 35． 09 mg /粒 15． 16 mg /粒 50． 25 mg /粒
胶囊(30 mg) 伊春药业有限公司 17． 79 mg /粒 8． 46 mg /粒 26． 25 mg /粒
胶囊(30 mg) 河南科伦药业有限公司 15． 45 mg /粒 7． 26 mg /粒 22． 71 mg /粒
胶囊(30 mg) 黑龙江乌苏里江制药有限公司 19． 71 mg /粒 7． 16 mg /粒 26． 87 mg /粒
滴丸(0． 45 g /10丸) 鞍山制药有限公司 3． 36 mg /丸 1． 56 mg /丸 4． 92 mg /丸
咀嚼片(15 mg) 哈尔滨兰格药业股份有限公司 7． 47 mg /片 3． 24 mg /片 10． 71 mg /片
分散片(0． 3 g) 鞍山制药有限公司 27． 15 mg /片 11． 06 mg /片 38． 21 mg /片
分散片(0． 4 g) 伊春五加参药业有限责任公司 33． 34 mg /片 15． 61 mg /片 48． 95 mg /片
3． 2 北豆根制剂的溶液制备方法考察
参考 2010 版《中华人民共和国药典》北豆根片和北
豆根胶囊溶液的制备方法，其他北豆根制剂均采用此方
法进行制备，结果表明，此提取方法适用于所有北豆根
制剂。
3． 3 流动相的选择
参考 2010 版《中华人民共和国药典》北豆根片和北
豆根胶囊中蝙蝠葛碱的含量测定方法，对北豆根药材及
其制剂中的蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱进行测定，发现北
豆根药材及其制剂在该流动相的条件下均能很好的分
离，故选择故选择乙腈 － 0． 05%三乙胺溶液(45 ∶ 55)为
流动相。
3． 4 检测波长的选择
分别对蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的对照品溶液做紫外
波长扫描，发现在(284 ± 1)nm 处，蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林
碱具有最大吸收，故本实验选择 284 nm为检测波长。
北豆根药材中蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱和二者总量的
含量有高有低，蝙蝠葛碱的含量范围在 3． 67 ～ 6． 98 mg·
g －1之间，蝙蝠葛苏林碱的含量范围在 5． 21 ～ 12． 02 mg·
g －1之间，按均值的 80%计，蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的含
量限度分别暂定为 4． 0 mg·g －1和 6． 0 mg·g －1，同时二者
的总量相对稳定，在 12． 11 ～ 15． 69 mg·g －1，故蝙蝠葛碱和
蝙蝠葛苏林碱的总量不得少于 10． 0 mg·g －1。
查阅北豆根相关文献，有对北豆根片中的蝙蝠葛碱的
含量测定，有对北豆根胶囊中的蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱
含量的报道，本实验首次系统的对北豆根药材及其各种不
同厂家市售制剂进行全面系统的研究，得出各制剂蝙蝠葛
碱和蝙蝠葛苏林碱总量范围，对各种制剂总量进行限定，并
对蝙蝠葛苏林碱的量进行限定，填补《中华人民共和国药
典》空白，为进一步提高北豆根药材及其制剂的质量标准，
提供了一定的实验依据。
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