全 文 ：传统医药— 0 206 年第 15 卷第 15 期黄岑 、粘毛黄岑及沙滩黄岑种子的蛋白质电泳鉴别 *赵丽丽 , 聂凤提 , 李连怀(河北 医科大学药学院 , 河北 石家庄 0 5 0 0 17 )摘要 : 目的 建立黄答 、 粘毛黄岑和沙滩黄答种子 的蛋白质电泳 图谱 ,将图谱作 为黄答种子及混淆品鉴定 的指征 。方法 采用聚 丙烯酞胺凝胶电泳片 3 种黄茶种子 的蛋白质电泳图谱进行分析 。结果 不同产地的黄答种子的电泳图谱基本一致 , 同属 3 种黄答种子的蛋 白质 电泳图谱具有明显差异 。结论 聚丙烯酚胺凝胶电泳图谱可作为鉴别 3 种黄答种子的指征 。关键词 :黄茶 ;粘毛黄岑 ; 沙滩黄茶 ;种子 ;蛋白质电泳 ;鉴别中图分类号 : 2R 8 4 . 1 ; 2R 8 2 . 7 1 文献标识码 : A 文章编号 : 10 06 一 4 93 1 (2 00 6 ) 1 5 一 0 060 一 01E le c t r o P h o r e s i s I d e n it if e a it o n of P r o te i n o f S e e d s o f S e u te lal r 认 b a ic a le n s is G e o r gl ,S e u et 而血 v is e id u 勿 B g e . a n d S e u et 枷iar s tr ig i lo s a H e m s l ·hZ a o L i li , iN e eF 刀邵h i , L i L ia n h u a i( D印 a rt nze n ￡ of hP a二 a cx, eH乙e i eM id e a l nU加 e sr iyt , s h ij haz u a哈 eH b e i , Ch ina o , 00 1 7 )A b s t r a c t : o bj e e“ v e 肠 e s t a b li s h p A GE m a p of th e s e e d s ’ port e in 。 f cs u et zza r i。 乙a i e a ze sn 站 G e。职 i , cs u t e l la r ia : i s e id u l。 B g e . a n d cS u t e u a ir a, t r嗜 i lo s a H e m s l二 M e th o ds P o ly a e n y la m id e g e l e l e e tor p h o r e s i s a n al y s is w a s u s e d t o d e t e e t th e s e e d s o f S e u r e l la r ia b a ie a l e邢 15 G e o r g i , cS u t e l-la r ia o is e id u la B ge . a n d S e ut e lla r ia s t叮 il o s a H e m s l二 eR su lst E l e e t r o P h o er s i s s p e e t r u m Of th e s e e d s o f S e u t e ll a ir a b a i e a l e ns is G e o吧1 for md ife er n t s o u r e e s w e r e s im i la r a n d t h e r e w e r e o b v i o u s d ife r e n e e s in e l e c t or p h o r e s is s p e e tur m o f th e th r e e t即e s o f s e e d s . C o n e lu is o n T h em e th o d s e a n b e u s e d i n id e n t iif e a t i o n o f th e t h er e ty p e s o f s e e d s .K e y w o r ds : sc u t e l la r ia b a ie a le o is G e o gr i ; S e u t e l la r i a o is e i dul a B g e . ; S e u t e l a r i a s t lgr il o s a H e m s l . ; s e e d s : PA G E ; i d e n t沂为了提高和保证中药材质量 ,必须改散种 、散收 、 野生采挖为 离胶后电压调整至 180 V 。待示踪指示距前沿约 1 c m 时停止电泳 ,道地产区规范化 、 规模化种植 , 而中药材种子真伪和品种鉴别应是中药集约化生产的重要环节和前提 。药材种子所含蛋白质的种类和数量携带了其长期演化的遗传特征 ,具有很高的稳定性和专属性 。 近年来蛋白质电泳技术在中药种子及其混伪品的鉴定研究中应用得越来越广泛 } ’ 一 ’ ] 。 1991 年国际种子检验协会将蛋白质电泳方法正式定为标准的品种鉴定方法 , 表明了这种方法在种子鉴定和纯度检测中的地位 { 4 , 。笔者对野生黄芬种子 、 药都安国市售的不同产地的黄琴种子及其同属常见混伪品粘毛黄芬 、沙滩黄琴种子
进行了聚丙烯酞胺凝胶电泳 ( P AG )E 分析 ,研究了其蛋白质的表达
特征 , 为药材的规模 、规范化种植提供了种子物种鉴别指征 。
1 仪器与试药
DY Y 一 1 ZC 型稳压稳流电泳仪 (北京市六一仪器厂 ) ; D Y Y -
6C 型垂直板电泳槽 ; is gm a 3K 30 型离心机 ; K Q 一 1 18 型超声波清洗
机 (昆山超声仪器有限公司 ) 。黄芬 sc ut el la ir a ba ic al e ns is eG or ig 种子
(来源于 山东 、 山西 、 甘肃的安国市售品 ,对照品采于秦皇岛市抚宁
县 ;) 粘毛黄芬 s cu et l la ir a 。 isc idu la B ge . 种子 (采于张家口市宣化 ) ;
沙滩黄琴 sc u t e ll a r ia : t r娜 lo s a H e m s l . 种子 (采于秦皇岛市抚宁县 ) 。
采集品原植物及购买品种后原植物均经生药鉴定 , 凭证标本保存
于本校生药标本室 。丙烯酞胺 (A c r ) 、 甲叉双丙烯酞胺 ( iB s ) 、三经甲
基氨基甲烷 ( Tir s ) 、考马斯亮蓝 R 一 250 、甘氨酸等为进 口分装 ,其余
试剂为国产分析纯 。
2 方法与结果
2
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1 方法
2
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1
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1 试剂及凝胶制备 :参考文献【5」配制试剂及凝胶 ,分离胶浓
度为 7 , 5% ,浓缩胶浓度为 4% 。分离胶灌制完成后于 4℃冰箱中过
夜 ,浓缩胶在电泳前灌制。
2
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1
.
2 样品液制备: 将各试验药材研碎后 , 称取 0 . 3 9 ,加样品缓
冲液 1 m L , 充分浸润后冰浴超声处理 15 m in , 10 00 9 低温离心
10 m in
, 取上清液放置于 4℃冰箱中备用 。
2
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1
.
3 电泳 : 用微量进样器分别取各样品液 20 林L , 注人样品槽
底部 。立即于 4℃冰箱中电泳 , 起始电压控制在 120 V , 样品进入分
* 河北省 自然科学基金项 目 , 项 目编号 : 3 0 3 4 53 。
迅速取出胶板 ,标记前沿 。
2
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1
.
4 染色 : 胶板浸人 0 . 25 % 的考马
斯亮蓝 R 一 250 溶液中 , 室温下染色 3 h ,
除去染色液后用脱色液浸润的棉球擦
洗凝胶以除去染料颗粒 , 然后浸于脱色
液中脱色 ,不断更换脱色液直至凝胶谱
带清晰 。
2
.
2 结果
照相后绘制电泳图谱 (图 1 ) ,涂黑
区域表示深色的一级带 , 为主要鉴别
区 , 斜线区域表示颜色较浅的二级带 ,
打点区表示颜色最浅的三级带 。
3 讨论
1 2 3 4 5 6
l
, 甘肃产黄茶 2 . 山东产黄羊
3
. 山西产黄答 4 . 抚宁采集黄琴
5
. 粘毛黄答 6 . 沙滩黄答
图 l 不同产地的黄茶、 粘毛黄茶、
沙滩黄羊种子的 PAGE 图借(简图)
3
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1 由图 1 可见 , 黄芬 、粘毛黄荃 、沙滩黄琴种子的蛋白质谱带区
别明显 ;而不同产地的黄琴种子的谱带则基本一致 。这也显示了该
方法作为品种鉴定方法的可行性 。
3
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2 聚丙烯酞胺凝胶电泳分辨率较高 ,重现性较好 ,费用低 ,易于
操作 , 可作为黄荃种子鉴别的一种切实可行的方法 。
作者简介 : 赵 丽丽 ( 19 80 一 ) , 女 , 秦皇岛市抚宁县人 , 在读硕
士 , 从事中药种子 鉴别研究 , ( 电话 ) 03 1 1 一 86 26 5 62 8( 电子 信箱 )
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z h a o 2 0 0 8@ 1 2 6
.
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。
参考文献 :
【l] 马晓莉 , 周文英 , 沙苑子及其伪品 的可溶性蛋白质 电泳鉴 别 LJ] . 中草
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【3 〕张琼 光 , 陈科力 , 王克勤 . 厚朴 两种 类型种子的 电泳鉴别【J] . 时珍国
医 国药, 2 0 0 3 , 14 ( 9 ) : 5 4 1 一 5 4 2 .
〔4] 吴敏生 , 王守才 ,戴景瑞 . 指纹图谱技术在品种鉴定和纯度分析上 的应
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【5] 部尧君 . 蛋白质 电泳实验技术〔M I . 北京 : 科学出版社 , 19 9 : 72 一 73 .
(收稿日期 : 2 00 5 一 1 2 一 0 1 ; 修回 日期 : 20 0 6 一 02 一 2 3 )
6 0 中国药业 hC in a hP a rm ac eu 价asI