全 文 ：第 3 期
第 54 卷第 3期
2015 年 2 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 54 No.3
Feb.，2015
收稿日期：2014－09－29
基金项目：青海省自然科学基金项目（2014－Z－925）
作者简介：张召华（1975－），男，青海西宁人，助理研究员，主要从事藏药质量控制研究，（电话）18097262197（电子信箱）961749321＠qq．com；
通讯作者，林鹏程，男，教授，硕士生导师，主要从事藏药化学成分分析及质量控制研究，（电话）0971－8804649（电子信箱）qhlpc＠126．com。
肋柱花 （Lomatogonium rotatum （L．）Fries es
Nym）是一种传统藏蒙医（蒙药名为哈比日跟—地格
达），是龙胆科植物辐花肋柱花的干燥全草。味苦，性
寒、钝、糙、轻、燥。 用于“协日”热、瘟疫、流感、伤寒、
中暑头热、肝胆热、黄疸、胃“协日”、伤热等症状 ［1，2］。
肋柱花为欧亚大陆及北美洲间断分布，全世界已发
现的有 18 种，其中 16 种集中分布在中国西部喜马
拉雅山－克什米尔地区， 仅两种分布于欧亚大陆及
北美， 并直达北极地区。 在中国分布于黑龙江、辽
宁、内蒙古、河北、陕西、甘肃、新疆、青海等地。 生于
海拔 4 200 m 以下的山坡，草坡及灌木丛中［3－7］。
当药黄素对四氯化碳引起的转氨酶升高有抑
制作用。 当药醇苷主要功能是减轻肝细胞的损伤，
有效抑制炎症介质（肿瘤坏死因子）的形成，减轻细
RP－HPLC法同时测定藏药肋柱花中三种成分的含量
张召华 1，曾擎屹 2，3，林鹏程 2，3，赵 英 2，3
（1．青海省测试计算中心， 西宁 810007； 2．青海民族大学化学与生命科学学院，西宁 810007；
3．青藏高原植物化学重点实验室，西宁 810007）
摘要：建立了同时测定藏中当药黄素、当药醇苷、苦龙苷含量的方法。 采用反相高效液相色谱法（RP－
HPLC），以 Kromasil－C18（250 mm×4．6 mm，5 μm）为色谱柱，以甲醇（A）－0．04％磷酸溶液（B）为流动相，梯
度洗脱，40％A（0 min）－63％A（20 min）；流速为 0．8 mL ／ min；柱温为 30 ℃，检测波长为 254 nm。 结果表明，
在 20 min内完成对 3种成分的分析，各成分之间均达到基线分离。当药黄素、当药醇苷、苦龙苷的线性范围
分别为：0．675 0～4．050 0 μg（R2＝0．999 5）、0．005 5～0．330 0 μg（R2＝0．999 5）、0．027 5～0．165 0 μg（R2＝0．999 5），
线性关系良好。 平均加样回收率（n＝9）分别为 99．90％、99．15％、99．88％。 建立的 HPLC 分析方法简单、准
确，能快速测定藏药肋柱花中有效成分的含量。
关键词：RP－HPLC；药肋柱花（Lomatogonium rotatum（L．）Fries es Nym）；当药黄素；当药醇苷；苦龙苷
中图分类号：O657．7＋2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2015）03－0687-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.03.047
Content Analysis of Three Constituents in Tibetan Herb Lomatogonium rotatum （L．）
Fries es Nym by RP－HPLC
ZHANG Zhao－hua1，ZENG Qing－yi2，3，LIN Peng－cheng2，3，ZHAO Ying2，3
（1．Qinghai Province Test Center， Xining 810007， China； 2．College of Chemistry and Life Science， Qinghai Nationality University， Xining
810007， China； 3．Key Laboratory of Plant Resources of Qinghai－Tibet Plateau in Chemical Research， Xining 810007， China）
Abstract： RP-HPLC was used to determine the content of swertisin， swertianolin， amarogerth in Tibetan herb. The sample
was separated on the column of Kromasil－C18 （250 mm×4．6 mm，5 μm） eluted with methanol （A） and 0．04％ phosphoric acid
solution （B）． The initial condition was 40％A， then rose to 63％ A in 20 min with detection wavelength at 254 nm， flow rate
0．8 mL ／ min， and column temperature 30 ℃． And three active constituents were base－isolated． The linear ranges of swertisin，
swertianolin， amarogerth， were 0．675 0～4．050 0 μg（R2＝0．999 5）， 0．005 5～0．330 0 μg（R2＝0．999 5）， and 0．027 5～0．165 0 μg（R2＝
0．999 5）respectively； the average recoveries （n＝9） were 99．90％， 99．15％ and 99．88％ respectively． The method was easy and
precise which can be used for content analysis of active constituents in Lomatogonium rotatum （L．）Fries es Nym rapidly．
Key words： RP－HPLC； Lomatogonium rotatum（L．）Fries es Nym； swertisin； swertianolin； amarogerth
湖 北 农 业 科 学 2015 年
胞间质的炎性反应，促进受损肝细胞的修复。苦龙苷
是龙胆属植物的主要苦味成分，常用作苦味成分 ［8］。
目前有关辐花肋柱花这 3 种成分检测的文献报道
较少［9］；本研究利用 RP－HPLC测定肋柱花中当药黄
素、当药醇苷、苦龙苷的含量，对评价药材质量及新
药源的研究具有重要意义。
1 材料与方法
1．1 材料与仪器
1．1．1 材料 辐花肋柱花由中国科学院西北高原
生物研究所胡凤祖教授鉴定并提供，阴干后粉碎过
100目筛，冷藏保存。甲醇（色谱纯，山东禹王实业有
限公司禹城化工厂）；磷酸（分析纯，北京红星化工
厂）。 当药黄素、当药醇苷、苦龙苷为课题组分离鉴
定，纯度大于 98％。
1．1．2 仪器 Agilent1100 型高效液相色谱仪（安捷
伦科技有限公司），配置手动进样器、在线脱气机、
高压二元梯度泵、 恒温柱温箱、DAD 检测器、Agi
lent1100色谱工作站、Kromasil－C18（250 mm×4．6 mm，
5 μm）色谱柱；AG204 型电子分析天平（南京安铎贸
易有限责任公司）；SHB－Ⅱ型循环水式多用真空泵
（上海科兴仪器有限公司）；EYEL4 型旋转蒸发仪
（日本东京理化器械株式会社）。
1．2 试验方法
1．2．1 色谱条件 色谱柱：Kromasil－C18 （250 mm×
4．6 mm，5 μm）柱；流动相：甲醇和 0．04％磷酸溶液，
在 0～20 min 内由 40∶60 至 63∶27（V ／ V）；流速为 0．8
mL ／ min；检测波长为 254 nm；柱温为 30 ℃。 该色谱
条件下当药黄素、当药醇苷、苦龙苷 3 种成分均被
洗脱且达到基线分离 ， 保留时间分别为 10．40、
14．30、15．86 min（图 1）。
1．2．2 对照品溶液的制备 精密称取对照品当药
黄素 0．27 mg 溶于 1 mL 甲醇配成 0．27 mg ／ mL、当药
醇苷 0．22 mg 溶于 1 mL 配成 0．22 mg ／ mL、苦龙苷
0．22 mg 溶于 1 mL甲醇配成 0．22 mg ／mL，使用时稀释
成所需浓度。
1．2．3 供试溶液的制备 分别精密称取粉碎至 100
目的样品 0．1 g 两份，一份加入甲醇 10 mL，超声连
续提取两次（1．0，0．5 h），合并提取液定容至 25 mL；
另一份加入甲醇 10 mL， 热回流连续提取两次
（1．0，0．5 h），合并提取液定容至 25 mL。 过 0．45 μm
滤膜，在选定色谱条件下测定有效成分的含量。
2 结果与分析
2．1 线性关系考察
精密量取 3 种对照品储备液，当药黄素：浓度
为 0．27 mg ／ mL 的标准品分别以质量为 0．675、
1．350、2．025、2．700、3．375、4．050 μg进样。当药醇苷：
浓度为 0．22 mg ／ mL 稀释至 0．002 2 mg ／ mL， 分别以
质量为 0．005 5、0．011 0、0．016 5、0．027 5、0．330 0
μg 进样。 苦龙苷： 浓度 0．22 mg ／ mL 稀释 20 倍至
0．011 mg ／ mL， 分别以质量为 0．027 5、0．055 0、0．082
5、0．110 0、0．138 0、0．165 0 μg进样。 以含量（x）为横
坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，绘制 3 个成分的
标准曲线， 分别求得上述 3 个组分的回归方程，见
表 1。
2．2 检测限
在选定的色谱条件下，当 S ／ N＝3 时，对各组分
最低检测限进行测定，结果表明，当药黄素、当药醇
苷、苦龙苷的最低检测限分别为 0．27、0．44、0．50 ng。
2．3 精密度考察
取浓度为 0．27 mg ／ mL 当药黄素、0．011 mg ／ mL
当药醇苷、0．002 2 mg ／ mL 苦龙苷混合对照品溶液，
在选定的色谱条件下测定色谱峰的峰面积，计算得
RSD 分别为 0．72％、0．90％、0．93％（n＝6）， 表明仪器
精密度良好。
2．4 稳定性考察
精密称取肋柱花样品 0．1 g，按“1．2．3”的方法操
作，分别在 0、2、4、6、12、16 h 时分别进样，测定当药
黄素、当药醇苷、苦龙苷的峰面积，计算得 RSD 分别
为 1．4％、1．8％、1．0％（n＝5）。表明样品溶液在 16 h内
表 1 当药黄素、当药醇苷、苦龙苷的线性方程及相关系数
对照品
当药黄素
当药醇苷
苦龙苷
回归方程
y=17 342x-6.338 6
y＝5 352x-46.180
y=2 941x-6.343
R2
0.999 5
0.999 5
0.999 5
线性范围//μg
0.675 0～4.050 0
0.005 5～0.330 0
0.027 5～0.165 0
1．当药黄素；2．当药醇苷；3．苦龙苷
图 1 混合对照品（A）及肋柱花样品（B）HPLC 色谱图
B
0 5 10 15 20
保留时间//min
400
300
200
100
0
-100
峰
值
//m
Au
1
3
2
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
保留时间//min
175
150
125
100
75
50
25
0
峰
值
//m
Au
A
2
1 3
688
第 3 期
稳定。
2．5 重复性试验
精密称取肋柱花样品 0．1 g共 6份，按“1．2．3”的
方法操作， 在选定的色谱条件下测定当药黄素、当
药醇苷、苦龙苷的含量，计算得 RSD 分别为 2．4％、
1．4％、2．0％（n＝6），表明方法重复性良好。
2．6 回收率试验
精密称取已测知含量的肋柱花样品 0．1 g 共 9
份，分为 3 组，每组 3 份，分别添加低、中、高 3 种浓
度的对照品，按“1．2．3”项下操作，测得当药黄素平
均回收率为 99．90％，RSD 为 0．42％； 当药醇苷平均
回收率为 99．15％，RSD 为 0．73％； 苦龙苷平均回收
率为 99．88％，RSD为 0．11％，见表 2。
2．7 样品测定
按“1．2．3”的方法制备的青藏高原辐花肋柱花
样品，以“1．2．1”的色谱条件进行分析，以峰面积为
标法计算青藏高原辐花肋柱花中当药黄素、当药醇
苷、 苦龙苷的含量分别为 0．021 7、0．016 1、0．044 2
mg ／ g。
3 小结与讨论
利用 DAD 检测器在 190～400 nm 内扫描 3 种
成分的紫外吸收曲线，吸收曲线显示 3 种活性成分
的甲醇溶液在 254 nm波长处有较高的吸收，故确定
波长 254 nm 为检测波长。 对不同流速（0．7、0．8、1．0
mL ／ min）及不同柱温（25、30、35、40 ℃）进行考察，发
现柱温 30 ℃、 流速在 0．8 mL ／ min 时 3 种待测成分
均可与其他组分达到基线分离， 且分析时间较短。
参照文献［10］，比较了不同提取时间（15、30、45、60
min）对提取率的影响，结果发现 30 min 即可将有效
成分提取完全。 精密称取肋柱花样品 0．1 g共 8份，
每 4 份为一组， 分别用甲醇超声和加热回流处理，
测定不同提取次数下上述各有效成分的含量。 结果
表明，热提取 3 次以及超声提取 2 次以后，继续增
加提取次数对提取率已无明显影响， 但超声次数
少，提取率比热回流提取法略高，故本试验采用超
声提取法。 用甲醇－水、甲醇－0．04％磷酸水溶液，结
果显示甲醇－0．04％磷酸溶液做流动相时样品中 3
种成分分离效果及峰形均较好。 因此该方法具有提
取、分析方法简便、快速、结果准确可靠等特点，对
全面评价药物质量及新药的研究有重要的作用。
参考文献：
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505．
表 2 当药黄素、当药醇苷、苦龙苷加样回收情况 （n＝9）
标准品
当药黄素
当药醇苷
苦龙苷
标
号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
2
3
4
5
6
7
8
9
药材含量
mg
0.021 7
0.021 9
0.021 0
0.021 5
0.022 1
0.021 1
0.022 2
0.021 3
0.021 4
0.016 7
0.017 7
0.017 1
0.016 3
0.017 4
0.017 5
0.017 2
0.017 3
0.016 7
0.042 2
0.042 7
0.044 4
0.045 2
0.044 5
0.043 5
0.045 4
0.043 1
0.044 7
加入量
mg
0.016 8
0.016 8
0.016 8
0.021 0
0.021 0
0.021 0
0.025 2
0.025 2
0.025 2
0.013 6
0.013 6
0.013 6
0.017 0
0.017 0
0.017 0
0.020 4
0.020 4
0.020 4
0.035 2
0.035 2
0.035 2
0.044 0
0.044 0
0.044 0
0.052 8
0.052 8
0.052 8
测定量
mg
0.038 4
0.038 9
0.037 7
0.042 5
0.043 2
0.041 9
0.047 5
0.046 4
0.046 4
0.030 1
0.031 2
0.030 5
0.033 3
0.034 3
0.034 1
0.037 4
0.037 8
0.037 0
0.077 3
0.077 7
0.079 7
0.089 3
0.088 3
0.087 7
0.098 1
0.095 7
0.097 6
回收率
%
99.40
101.19
99.40
100.01
100.48
99.05
100.02
99.60
99.99
98.53
99.26
98.53
100.00
99.41
97.65
99.01
100.49
99.51
99.97
99.43
100.28
100.02
99.55
100.45
99.81
99.62
99.81
平均值
%
99.90
99.15
99.88
RSD
%
0.42
0.73
0.11
（责任编辑 胡西洲）
张召华等：RP－HPLC 法同时测定藏药肋柱花中三种成分的含量 689