全 文 ：Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2014 Vol.27 No.9
中国科技 核心期刊
专 题·民族医药
藏药湿生扁蕾，藏药名“机合斗”，具有清热解
毒，利湿消黄之功效，临床主要用于肝炎、胆囊炎、
胃肠炎、结膜炎、急性肾盂肾炎、疮疥肿毒等的治
疗［1］。近年来，相关研究表明：湿生扁蕾提取物能
够稳定抑制动物体内S180肉瘤及其他瘤株的生
长［2］、湿生扁蕾中的 1- 羟基 -3，7，8- 三甲氧基
口山酮、1，7-二羟基-3，8-二甲氧基口山酮对卵巢癌
细胞HO-8910具有毒性作用［3］。但有关湿生扁蕾
提取物对结肠癌细胞的作用及机制研究尚未见文
献报道。因此本研究从抑制结肠癌细胞增殖、改变
细胞周期分布方面对藏药湿生扁蕾提取物的抗结
肠癌活性进行研究。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂湿生扁蕾采自甘肃省甘南藏
族自治州临潭县冶力关镇，经甘肃农业大学陈垣
教授鉴定为 Gentianopsis paludosa(Munro)Ma.的
干燥全草。碘化丙啶(PI，Sigma公司)；RPMI 1640
培养基(杭州四季青公司)；胎牛血清(FBS，杭州四
季青公司)；胰蛋白酶(Sigma公司)；十二烷基硫
酸钠(SDS，Sigma 公司)；二甲基亚砜(DMSO，
Ameresco公司)；四甲基偶氮唑蓝(MTT，Ameresco
公司)；其他化学药品均为分析纯。
1.2 细胞系人结肠癌SW480细胞(购自兰州大
学生命科学学院)。
藏药湿生扁蕾提取物
对人结肠癌SW480细胞增殖和周期的影响
张艳霞 1，2，景 明 1，2△，蔺兴遥 1，2，杨雅丽 1，郭红云 3
1 甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000；2 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室；
3 甘肃省医学科学研究院
［摘 要］目的：探讨藏药湿生扁蕾提取物（GPM）对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的作用机制。方法：采
用MTT比色法测定GPM对SW480细胞体外细胞毒活性，采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：GPM对结肠
癌SW480细胞的增殖具有抑制作用，且这种抑制作用具有明显的量效关系；用GPM处理后，SW480细胞表现出
明显的G1期周期阻滞。结论：GPM能够抑制人结肠癌细胞SW480细胞的生长，并可改变细胞周期分布。
［关键词］结肠癌；SW480细胞；增殖；湿生扁蕾
［中图分类号］R735.35［文献标识码］A ［文章编号］1004-6852(2014)09-0050-03
Influence of Tibetan ShiSheng BianLei Extract on the Proliferation and Cycle
of Human Colon Cancer SW480 Cells
ZHANG Yanxia1,2, JING Ming1,2△, LIN Xingyao1,2, YANG Yali1, GUO Hongyun3
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China;
2 Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology for Traditional Chinese Medicines
of Gansu Province (nurturing station); 3 Gansu Provincial Academy of Medical Science
AbstractObjective: To find out the mechanism of Tibetan ShiSheng BianLei [Gentianopsis paludosa (Hook.
f.)Ma] (GPM) extract on the proliferation and cycle of human colon cancer SW480 cells. Methods: Cytotoxicity ef-
fects of GPM to human colon cancer SW480 cells were investigated by MTT chromatometry in vitro, and the
changes of cell cycles were detected by flow cytometry. Results: GPM could inhibit the proliferatin of colon cancer
SW480 cells, and the inhibition presented obvious dose-effect relationship; after dealt with GPM, SW480 cells indi-
cated remarkable cycle arrest at G1 phase. Conclusion: GPM could inhibit the growth of human colon cancer SW480
cells and change the distribution of cell cycles.
Keywordscolon cancer; SW480 cells; proliferation; ShiSheng BianLei
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2014年第 27卷第 9期
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1.3仪器与设备 CO2培养箱(天津市泰斯特仪
器有限公司)；倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)；
高速离心机(美国 Heraeus 公司)；培养板(美国
Costar细胞培养板)；酶标仪(美国BIO-RAD)；流
式细胞仪(美国BECKMAN COULTER公司)。
1.4 方法
1.4.1 提取物的制备［4］ 称取湿生扁蕾干品
150g，用15倍量95%乙醇浸泡过夜，回流提取 2
次，1.5 h/ 次，合并乙醇提取液，自然冷却，离心
(2000r/min，10分钟)，上清液回收乙醇，浓缩至
浸膏，搅拌下加热水分散，得混悬液120mL，用乙
酸乙酯萃取(120mL×5次)，合并萃取液，回收乙酸乙
酯后浓缩成浸膏，用DMSO助溶，配制成90μg/mL
的母液，离心(10000r/min，20分钟)，取上清液，
0.22μm过滤除菌，于4℃储存，临用前用培养液
稀释至所需浓度，实验DMSO浓度均未超过 0.2%
(v/v)，而且此浓度下DMSO对细胞生长状况无影
响。
1.4.2 GPM 对 SW480 细胞增殖的抑制作用（MTT
法） 取对数生长期SW480细胞，用RPMI1640培
养液调整细胞浓度至 5×103个 /mL，在 96孔培养
板中以200μL/孔加入细胞悬液，实验分阴性对照
组、空白对照组、GPM(5、10、20、40μg/mL)组、GPM(5、
10、20、40μg/mL)颜色对照组，置37℃、5%CO2培养
箱内培养24小时后，以200μL/孔加入药物或溶
媒。继续培养 24、48、72 小时后，于实验终止前
4小时每孔加入20μLMTT(5mg/mL)，实验终止时
加入10%SDS100μL/孔，置37℃、5%CO2的培养
箱中过夜，次日用酶标仪在570nm处检测OD值，
实验重复4次。根据下式计算GPM对结肠癌细胞
SW480的抑制率(IR)。
细胞增殖抑制率(IR%)=(阴性OD均值-受试
药组OD均值)/阴性OD均值
阴性OD均值=阴性对照组OD均值-空白对
照组OD均值
受试药OD值=各受试药组OD均值-各受试
药颜色对照组OD均值
1.4.3 GPM对SW480细胞周期变化的影响(流式
细胞仪PI染色法)取对数生长期细胞，以浓度
为1×105个/mL接种于12孔培养板内，每孔1mL，
培养24小时。阴性对照组加入相应体积的完全培
养液。加药组分别加入30μg/mL的GPM药液，处
理 24、36 小时；以 800 r/min 离心收集对照组和
加药组细胞(1×106个)，用冷PBS洗两次；之后用
70%冷乙醇4℃固定过夜。离心去乙醇，用PBS洗
2次，然后用10μg/mL碘化丙啶(PBS溶液，含0.2%
Triton X-100，0.1 mmol/L EDTA 和 100μg/mL
RNaseA)于室温、暗处染色30分钟。用PBS洗去
碘化丙啶，上流式细胞仪检测，并分析细胞周期分
布。
1.5 统计学方法采用 SPSS 13.0 统计软件对
实验数据进行处理，计量资料以(χ±s)表示，采用t
检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 细胞增殖抑制实验GPM 对 SW480 细胞生
长具有明显的抑制作用，并且药物浓度越高，药物
作用时间越长，其对细胞的生长抑制率越高，表现
出一定的时间和剂量依赖性，见表1。
表1 GPM对SW480细胞抑制率的影响(χ±s)
组别 例数
抑制率/%
质量浓度/（mg·L-1） 24h 48h 72h
阴性对照组 4 0 0 0 0
GPM1 4 5.0 4.55±1.78 16.01±1.97▲ 22.24±3.45★
GPM2 4 10.0 11.13±1.53 32.52±4.04★ 37.71±4.39★
GPM3 4 20.0 26.17±2.47▲ 46.29±2.81★ 48.24±5.06★
GPM4 4 40.0 45.08±2.79★ 87.14±2.29★ 88.26±29.43★
注:GPM1、GPM2、GPM3、GPM4分别为GPM5、10、20、40μg/mL(给药组)；与对照组同时间点比较，▲表
示 P＜0.05，★表示 P＜0.01。
2.2GPM对SW480细胞周期分布的影响(流式细
胞仪PI染色法) 对照组SW480细胞的细胞周期
各时相分布G1期为48.5%，S期为41.7%，G2/M期
为9.79%(图1，培养48小时)以及G1期为43.6%，
S 期为 44.5%，G2/M 期为 11.9%(图 2，培养 72 小
时)；GPM处理组SW480细胞的细胞周期各时相分
布 G1 期为 2.74%，S 期为 37%，G2/M 期为 60.3%
(图3，GPM处理48小时)以及G1期为1.86%，S期
为 39.5%，G2/M 期为 58.6%(图 2，GPM 处理 72 小
时)。表明采用浓度为30μg/mL的GPM药液处理
4、36小时后导致细胞周期停滞于G1期。
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3 讨论
结肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，近年发
病率和病死率呈上升趋势［5］。目前，常用治疗药
物临床疗效不理想，因而开发新的抗结肠癌药
物成为研究结肠癌治疗的重点问题之一。随着肿
瘤发病率的不断升高，天然药物抗肿瘤作用日益
成为研究热点。本研究观察了不同浓度湿生扁蕾
提取物对大肠癌SW480细胞的增殖抑制作用，以
及对细胞周期分布的影响，结果显示大肠癌SW480
细胞的生长受到了明显抑制，且呈一定时效和量
效关系，湿生扁蕾提取物可改变细胞周期的分布，
有助于进一步揭示中药的抗肿瘤机制。但中药的
化学成分复杂，药理作用复杂，抗肿瘤的机理也表
现在各个方面，所以中药提取物及其有效成分的
研究是艰巨而漫长的工作［6］。湿生扁蕾所含的化
学成分包括黄酮类、酮类、三萜类、三十烷醇、胡萝
卜苷及倍他谷甾醇，还含有酚类、有机酸等，其中
酮类、黄酮类具有抗炎、镇痛、解热、抗腹泻作用［7］。
湿生扁蕾抗肿瘤有效成分的分离、纯化、定性等有
待于进一步的研究。
参考文献
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版社，1979：568-569.
［2］ 张宝琛，甄润德，胡柏林，等.湿生扁蕾化学成分的研究［J］.
中草药，1980，11(4)：149-151.
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［J］.青海师范大学学报：自然科学版，2005，33(2)：64-66.
［4］ 韩锐.抗癌药物研究与实验技术［M］.中国协和医科大学联
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［6］ 杨静怡，徐进宜，吴晓明，等.抗肿瘤天然药物的研究概况［J］.
中国现代应用药学，2007，24(4)：277-282.
［7］ 景明，罗永皎，陈正君，等.藏药湿生扁蕾药材反相高效液相
层析指纹图谱的研究［J］.甘肃中医学院学报，2010，27(6):
18-21.
收稿日期：2013-10-03
作者简介：张艳霞(1981—)，女，硕士学位，讲师。研究方向：
中药药理学与新药药理学。
△通讯作者：景明(1963—)，男，教授。研究方向：中、藏药资
源与开发研究。
图1 对照组细胞，培养48小时 图2 对照组细胞，培养72小时
图3 GPM处理48小时组细胞 图4 GPM处理72小时组细胞
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