全 文 ：收稿日期:2004-12-15　　　修回日期:2005-06-12
基金项目:美国农业部 1890 研究基金资助课题(项目号 #SCX-420-20-00)
通讯联系人:姚兴东 , 男 ,博士 , 教授 ,研究方向为仪器分析与绿色化学.
第 22卷第 2期
Vol. 22　No. 2 分 析 科 学 学 报JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE 2006 年 4 月Apr. 2006
文章编号:1006-6144(2006)02-0199-03
紫锥花种属中酚类化合物的 HPLC分析
姚兴东*1 , 聂园梅1 , Datta-Gupta N 2
(1.广西民族学院化学与生态工程学院 ,南宁 530006;
2. Department of Phy sical Sciences , South Carolina State U niversi ty , Orangeburg , SC 29117 , USA)
摘　要:本文报道了一种测定紫锥花草药中咖啡酸 、对羟基苯甲酸 、对-香豆酸 、原儿茶
酸 、丁香酸 、阿魏酸 、香草酸 、咖啡奎尼酸 、洋蓟酸 、菊苣酸和紫锥花苷等 11 种酚类化合
物的高效液相色谱分析方法。本法可应用于各种紫锥花草药中酚类化合物的测定。结
果表明 ,在紫锥菊种属中含量最多的酚类化合物是菊苣酸 、咖啡奎尼酸和紫锥花苷;在
狭叶紫锥菊种属中含量较丰的是紫锥花苷和菊苣酸;而在白花紫锥菊种属中则以紫锥
花苷以含量较多 。
关键词:紫锥花;高效液相色谱法;酚类化合物
中图分类号:O657. 7+2　　　文献标识码:A
1　前言
紫锥花(Echinacea)是一种在欧美地区广泛应用的草药 ,一直被应用于提高免疫力和创伤愈合。药用
紫锥菊主要有三种 , 即紫锥菊(E. purpurea)、狭叶紫锥菊(E. angust i folia)和白花紫锥菊(E . pal li-
da)。通常将紫锥花的疗效归功于其中所含的酚类化合物[ 1 , 2] ,而菊苣酸和紫锥花苷是紫锥花草药中含量
最丰的酚类化合物[ 1] 。酚类化合物总量可通过光度法测定[ 3] ,气相色谱 /质谱(GC /MS)[ 4] 和毛细管电泳
法[ 5]可应用于单一酚类化合物分析 ,但应用最多的还是高效液相色谱(HPLC)分离 ,紫外或质谱检测器进
行测定[ 6 - 10] 。固相萃取技术(SPE)或其它预处理方法也常被应用来除去草药中的其它杂质[ 4] 。
本文利用 HPLC 方法分析了紫锥花草药中的 11种酚类化合物。所有化合物于 50 min内可在 C18反
相色谱柱上用梯度淋洗技术完全分离 ,且无需进行样品预处理。同已报道的分析方法相比 ,由于本法可分
析的酚类化合物种类较多 ,分析速度较快 ,因此适合用作紫锥花草药中酚类化合物的标准分析方法 。
2　实验部分
2. 1　主要仪器与试剂
Beckman Coulter System Gold液相色谱系统 。测量波长 254 nm , Alltech N ucleo sil 100 C18反相色
谱柱(150×4. 6 mm i. d. ,5 μm)及保护柱 。柱温控制在 25℃。
咖啡酸(Caf feic Acid)、香豆酸(Coumaric A cid)、原儿茶酸(Pro to catechuic Acid)、阿魏酸(Ferulic
Acid)、香草酸(Vanillic)、对羟基苯甲酸(p-hydro xybenzoic acid)购自美国 Sigma 化学公司 ,咖啡奎尼酸
(Caf taric A cid)、洋蓟酸(Cynarin)、菊苣酸(Cichoric acid)和紫锥花苷(Echinacoside)购自美国 Chroma-
Dex 公司 ,以甲醇配成浓度为 1. 000 mg /mL 的贮备液。配制流动相所需甲醇(色谱纯)购自美国 Fisher
化学公司 。超纯水由 Mill-Q超纯水制备系统制备 。
3年生紫锥花草药的茎叶和根购自加拿大 Caribou Ginseng 公司和美国 Starwest Botanical公司。称
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第 2 期 姚兴东等:紫锥花种属中酚类化合物的 HPLC 分析 第 22 卷
取 0. 5 g 试样用 150 mL 甲醇在索氏提取器中提取 2 h ,将提取液浓缩到 10 mL 供色谱分析 。
2. 2　色谱分析条件
11种酚类化合物采用 1%(V /V)乙酸溶液作为流动相 A 、纯甲醇作流动相 B ,采用梯度淋洗法洗脱:0
～ 10 min , B 5%～ 10%;10 ～ 60 min , B 10%～ 40%;60 ～ 65 m in , B 100%(除去柱中残余物质)。进样量
为 5μL。各化合物色谱峰通过与相应标准品的保留时间对照确定。
2. 3　分析方法
线性范围:对各种酚类化合物在 0 ～ 100μg /mL 范围内分析 ,并以峰面积对浓度作图 。应用线性回归
法计算回归系数 。
回收试验:以试样分析程序向试样中加入 20 μg 酚类化合物 ,萃取后测定各自的回收率。
3　结果和讨论
3. 1　11种酚的 HPLC分离
在实验选定的色谱分离条件下 ,酚类化合物的色谱图如图 1。结果表明 ,甲醇和温度对保留时间及各
种酚类化合物间的相互分离有明显影响 。增大甲醇浓度或提高温度均会使这些化合物的保留时间减少 ,
从而导致分离度降低 。通过试验 ,选择柱温为 25℃,梯度淋洗法可使各种酚相互间完全分离。测量了各
种酚的校正曲线 ,在 0 ～ 100 μg /mL范围内各种酚类化合物均具有较好的线性关系 ,线性回归系数均高于
0. 999。对 20μg /mL 标准溶液 6次重复测定 ,结果的 RSD为 0. 1%～ 3. 7%。放置数日后 ,样品测定结果
的 RSD也在 7%以内 ,表明本方法可用于实际样品分析。
Fig. 1　Chromatogram of the mixed standard phe-
nolic compound solution (20 μg/mL)
1:protocatechuic;2:caftaric;3:p-hydroxybenzoic;4:
vanilli c;5:caf feic;6:sy ryngic;7:cy nrin;8:p-coumar-
ic;9:cichoric;10:f erulic;11:echinacoside.
应当指出 ,大量的试样可在溶剂萃取过程中产生树脂
状沉淀 ,从而影响各种酚测定的回收率 。本法采用以 0. 5 g
试样 ,用 150 mL 甲醇在索氏提取器中提取 2 h ,测得所有酚
类化合物的回收率均在 78%～ 107%之间 ,效果较好 。
3. 2　样品分析
利用本文所建立的分析方法 ,测定了几种紫锥花种属
中的酚类化合物 ,结果如图 2所示。与采用文献[ 6]的方法
对同一样品中相应酚的测量结果基本一致 ,说明本法结果
可靠 。所测定的酚类化合物可与萃取液中其它成份分离 ,
因而无须对萃取液作 SPE 或其它预处理 。测得各种紫锥
花种属中酚类化合物含量列于表 1。
Fig. 2　Chromatogram of different E. species
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第 2 期 分 析 科 学 学 报 第 22 卷
Table 1　Phenolic compound levels in different E. Species(μg/g)
Compound E. purpurea root a E. purpurea aerial topa E. pallida roo t a E. angusti f olia roo ta E. angusti folia aerialb
P ro tocatechuic 20. 30 57. 58 - 38. 06 86. 28
Caftaric 1 694. 85 2 274. 49 116. 37 757. 75 590. 64
p-Hydroxybenzoic 19. 93 24. 71 29. 71 20. 09 28. 38
Vanillic 33. 77 17. 61 15. 02 13. 57 18. 47
Caffeic 105. 15 76. 37 128. 71 42. 26 371. 89
Sy ryng ic 32. 69 49. 53 63. 54 57. 74 96. 68
Cynrin 146. 62 104. 78 655. 01 180. 32 386. 84
p-Coumaric 250. 62 596. 41 82. 73 195. 59 124. 55
Cicho ric 9130. 09 6266. 71 18. 62 894. 85 509. 16
Ferulic 63. 64 131. 51 71. 06 113. 26 160. 00
Echinacoside 1863. 85 774. 39 5903. 84 11673. 45 998. 62
　　a:Sample from Caribou Gin seng , Williams Lake , B. C. Canada;b:S am ple f rom S tarw est Botanicals , Ranch o Cordova , California.
与文献[ 3 , 9] 比较结果表明 ,不同产地及生长年份 、收获季节等对草药中酚类化合物含量都会产生影
响。对文献[ 9]中的色谱图进行分析 ,根据相对保留值所估计的保留时间段并没有出现菊苣酸和紫锥草苷
的色谱峰 。
参考文献:
[ 1] 　Bauer R. Immunomodulato ry Agents fr om P lants[ M] , Basel:Birkhause r Ve rlag , 1999:41.
[ 2] 　H u C , Kitts D D. J. Ag ric. Food Chem. [ J] , 2000 , 48:1466.
[ 3] 　Pe rry N B , Burgess E J , Glennie V. J. Agric. F ood Chem. [ J] , 2001 , 49:1702.
[ 4] 　YAO Xing-dong(姚兴东),HUANG Hai-ping(黄海萍), NIE Yuan-mei(聂园梅), Da tta-Gupta N , e t al. J. Guangxi Uni-
ver sity fo r Nationalitie s(广西民族学院学报(自然科学版))[ J] , 2004 , 10:100.
[ 5] 　Pomponio R, Go tti R, H udaib M , Hudaib M , Cav rini V. Chroma to g raphy A [ J] , 2002 , 945:239.
[ 6] 　Luo W H , Ang C , Gehring T A ,Heinze T M , Lin L J ,Mattia A , J. OF AOAC INTERNATIONAL[ J] , 2003 , 86(2):202.
[ 7] 　Luo X B , Chen B , Yao S Z , Zeng J G . J. Chromatog raphy A[ J] , 2003 , 986:73.
[ 8] 　Laasonen M , Wennberg T , Harmia-Pulkkinen T , e t al. PLANTA M EDICA[ J] , 2002 , 68:636.
[ 9] 　Kazimierz Glow niak , Grazyna Zgo rka and Malgo rzata Kozy ra. J. Chroma to g raphy A[ J] , 1996 , 730:25.
[ 10] WANG Qing-zhang(王清章), PENG Guang-hua(彭光华), JIN You(金　悠), LI Jie(李　洁), YAN Shou-lei(严守
雷). J. Anal. Sci. (分析科学学报)[ J] , 2004 , 20:38.
HPLC Analysis of Phenolic Compounds in Echinacea Species
YAO Xing-dong*1 , NIE Yuan-mei1 , Datta-Gupta N2
(1. Col lege o f Chemistry &Ecological Engineering ,Guang xi Universi ty f or N at ional it ies ,
Nanning 530006;
2. Department o f P hysical Sciences ,South Carolina State Universi ty ,Orangeburg , SC 29117)
Abstract:A new method based on HPLC for quant itative determination of 11 phenolic acids (caf feic
acid , p-coumaric acid , protocatechuic acid , syringic acid , ferulic acid , vanillic acid , caftaric acid , cynrin ,
cicho ric acid , echinacoside and 4-hydro xybenzoic acid) in dif ferent Echinacea species w as repo rted. The
results show that cichoric acid , caf ta ric and echinacoside are the most abundant pheno lic compounds in E.
purpurea;echinacoside and cicho ric acid are the most abundant phenolic compounds in E. angusti folia;
Echinaco side is the most abundant phenolic compound in E. pallida.
Keywords:Echinacea;Phenolic compound;High Performance Liquid Chromatography
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