全 文 ：1 0 6 病毒学杂志 1 , 1 9的
甲 1 r o l o g 主e 一 S i n l e .
长叶车前花叶病毒上海分离株
单克隆抗体的制备及其免疫学特性
l 病毒抗原决定簇的单克隆抗体识另{}
涂 正 金 于 善 谦
( 复旦 大学吐: 物系 , 上 海 )
关健 词 : 单克隆抗休 , 增值指数 , 杭原决定簇
前文 〔 `习〔之〕 分别报道丁 一长叶车前花叶病 毒上海分离株 ( R M V s h ) 单克隆抗体 的制备及
根据它们在不同免疫反应中的特性 , 将它们分为两组 , 分别识另!J性 质不 同的 抗原 决定
簇 。 本文采 用修改的 F ir g ue t 方法 〔 3 〕测定了各组内各单克隆抗体之间的增 值反 应 ( A d -
id it v it y R
e o c it
。 。
) 特性 , 并分析了它们识别抗原 决定簇的特性 。
材 料 与 _方 法
一 , 病毒及单克隆抗体 长叶车前花叶病毒上 i每分离株及其 单克隆抗体 I H 2 、 7 H I 、 l o H I 、
z z H Z
、
i z H 3
、
i 7 H 6
,
2 9 H i 来源 、 制备和特性见前文 [ ’ ] [二]报巡 。
二 、 杭原饱和 曲线的测定 抗原 饱和曲线 测定采用 间接 E L IS A 方 法 t ’ ] , 疚原浓 度为 2 ; L合 ,1 。
又J月二单克隆抗体 I H z 、 z Z H 3 采用先包被兔抗休的 E L L S A 方法 3 , 7 H I 、 i 0 H z 、 i i H Z 、 1 7H 6 、 2 9 H z
采用直接包被病毒抗原的 E L IS A 方法 2 。 底物显色 0 . 5小 时 。 以抗体稀释倍数对 E LI S A 反应 谈数
作图 , 确定杭体的 饱和浓 度 。
三 、 单克隆抗体间增值反应的测定 川{ E LI S A 方法 测定单克隆抗体增吐反应时抗原浓 度为 l
卜g /mI
。 加 入 已选定饱和浓度的 单克隆拉体 , 37 ℃反应 2 小 !1j , 以 P B S 一 T w “ “ n 洗涤液洗四次 , 再
加入 第二种单克隆抗体 , 反应 同样时 }、小 叹它 一少骤 同前 。 分别 测定各单充隆抗体的 E L I S A 反应 位和
先后加入 两种单克隆抗体的共同 E L I S A 反应 总数值 。 以 曾、 数值 A , A : 减去第一 种单克隆抗体单独反
应值 A , 后除以第二种 单克隆抗体单独 反应 位 A : 的百 分数为增值 指数 A . 1 . ( A d id t i v i yt I o d e x ) 。
计算公式为 : A A
I A : 一 A t
A
X 1 0 0%
。
结 果
一 、 单克隆抗休饱和浓度的选定 测定各单克隆抗体在不同稀释度下与抗原反应曲
线 。 其中 I H2 、 7 H王、 1 1 112 的反应曲线如图 I] 沂示。 在抗体浓度增加到一定值 LI J一 , E L I S A
本文于 }。 8 7年 1 1月 吕日收玉: {
病毒学佘志 l ! 8 8。
i Vr o l . gi ea Si .i e
-
反应浪 映本不冉 !几升 。 说明抗原粒子上的决定
簇均被该单完隆抗体饱和 。 因此它们的饱和浓
一变飞可分另! J选为 1, 1 0 0 0 、 1 , 1 0 0 、 1 , t o o o 。 以
!司样的方法选定 其它几 个单克隆抗体的饱和浓
度列 入丧 ! 。
二 、 单允隆抗体间增 位指数 各单克隆抗
体分另!{反应依 rIJ 两种 单克隆抗休共同反应值及
增 {,`走子行数均 兄 炎 1 。 ) }J E L I S A方法 3 测定 I H 2 、
1 2 H 3 之 l}1」的增值指数分别 为 10% 干{ 1 6 3% 。 Jll
E L I S A 方法 2 测定 7 H I 又J l o H I 、 1一H z 、 1 7 H 6 、
2 9 H I 的增 值达 31 % 一 38 % 。 当抗体顺序调 换
llJ
·增 值达 2 3%一 3 8 % 。 l o H I 、 1 1 H 2 、 17 H 6 、
2 9 H I 之间 从木无增值作川 , 最 大 的 增 位 指
1 0 7
人 一一一一曰尸月、一闷
护尸户一一一一
夕一一厂
乡一一~一一一户
日、MO璐ta .0
抗休稀释度 A n t i b 。 d y d s一u t i。 n
圈 l 抗原饱 和曲线
( A )
: I H 2
,
( B )
: 下H I , ( C ) : 一 , H 2 .
F i g
.
l
.
S e b e m
a o f a n t jg
e n s a t u r a l e d
b y a n t i b o d y
表 1
T a b
.
1
.
A d d i l i
v i t y
单克隆抗体增 值反应和增值指数
r e a e t i o n 题 Il d i n d e x o f m o n o c l o n a l a n t i b o d i e 弓
A 上
1 11止
( 1 : } ( 1 1、 (l )
} Z H ;弓
( {
: 1 1一`川 )
丁 H I
(卜 }` 一( } )
I` 、 111
〔 l : {。叭 l)
] } 112
( } : 1《 JO (门
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〔 l : 5口臼 )
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( 1 1 0 0 0 )
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( 6 1肠 )
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.
3 8 丁
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口 . 4 2 ` 、
( 一 )
数为 1 0 % , }!之当抗体顺 j事互换 l}d一无增值作丹1。 因此认为 I H 2 、 1 2 H 3 分另I」识别 R M V s h
病毒抗原上的两 个不同的抗原决定簇 , 7 H I 识另U第三个抗原决定簇 , 1 0 H I 、 1 1 H 2 、 1 7 H 6 、
2 9 H I 共同识别 一`。 前不同的第四 个抗原决定簇 。 、!改 7 种单克隆抗体 共可 识别 R M v s h 病
; !异抗原上四个不同的抗昧决定簇 。
i仑
采 用修改的非际记抗体增吐指数测定方法确定了我 们制备的 R M V s h 7 币! ,单克隆抗
1 0 8 病毒学杂志
i Yr 一 1 . ` i . e
1
, 19 8 9
5 1 . 1。 -
休共能识别出病毒颗粒 _卜四个不同的抗原决定簇 。 i亥方法较标记抗体测定 L` ’ 及抗原肤分
析 艺5 1等方法简单 。 rF i g u o t 采 )州亥方法对大肠杆菌色氨酸合成酶 刀亚华 ( M . W . 2 9 , 5 0 0)
的 7 个单克隆抗体分析表 明它们分别识别抗原分子 _ .l 二个不同的抗原 决定 簇 。 R M V s h
的 7 1、 单克隆抗体增值反应测定中 , 识别不同抗原决定簇的单克隆抗体间的增值指数较
小 ( 约 3 7% ) , 但当两种抗体 的反应顺序互换时仍达到同样水平 , 说明结论可靠 。增值指数
较小 , 可能是由于 R M Vs h 抗原分子较小 ( M . W . 1 7 , 5 0 0 ) , 第一抗体对第二抗体的结合产
封:.至 ilJ 位阻效应以及酶联第二抗休 的二价特性所致 。 一 i亥方法适 用于大量单克隆抗体特性
分析及病毒抗原性质的研究 。
参 考 文 献
〔 l 〕 涂正 金等 , } , 8 3 , 病毒学余 志 3 ( 幼 : 托 生一 川
〔 2 〕 涂正金等 , l洲 3 , 润毒学杂志 别 4) : `沁一拐 {
〔 3 〕 F r i g u e t , B 二 。 一 a l . , } , 8改 , J . o f l , ,: ,,: :` ,: o l o g i o a l 八] 亡尤]: o J : . 6 0 : 35 工一 35 8 .
〔 4 〕 B u r d o n , R H . , e t a l 二 1 0 3 1 , I a } , . T e e h n i , u 。 , i n B i o o h e m , a : 、 d 、 f o i . B i o l 二 V o l . 1石. 飞污8一
工8 9 , E 1 5 e 丫 i e r , A 〕l z s t e r ( l a m .
〔。 〕 V a n R o g o n m o r t o l , 入丁H V . , { { {谧止 , , 。 r o l o g y a : 、 〔 1 l m n曰 ` n o e l l o m i : t r y o f p ] a n 一 \ 一 j r . J s e 、 1 尧一
2〔少5 , A c a d e m i e P r e s s .
P r e p a r a t i o n a n d lm m u n o lo g ie a l P r o P e r t i e s o f
M o n o e l o n a l A n t ib o d i e s t o R ibg r a s s M o s a i e V i r u s ( R M V s h )
川 A n t i g e n i e D e t e r m i n a n t s R e e o g n i z e ( 1 1) y
M o l i o e l o n a l A n t i b o d i e s o n V i r u s P a r t i e l c $
T u Z h e , 1 9
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T 12 0 a d d i t i v i七y t o s 忿5 b e t一、 7 o e n s 。 、 , 。 n zn o n o e l o l l a l a z l 之主石o d i o s 10 S J, a , i g h a i 2 5 0 -
1a t e o f R i b g r a s s M o s a i c V i r u s 、 、 。 r o d e t e r m i xi e d b y E L I S A m e t ll o d . A d d i n g t w o
n o n 一 l a b e l i 一1 9 一n o n o e l o n a l a n t i l) o d i e s t o t Zl e s a zn e 、、 e l l e o a t e (1 b y 、 i r u s a n t i g e l l
s e P a r a t e l y , t ll e a l n o u n t o f b ( ) u n d a l l t i b o d i e s 、` e r e m e a s u r e d a n d e o m z) a r e d w i t l l
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a t o f l」 o u n d e a e h n l o 一i o e l o ll a l a i i t i b o d y . T ll e
m o n o e l o n a l a n t i b o d i e s I H 2 a n d 12 H 3 a n d b e t 、 、
a d d i t i v i t i e s
e e l l 7 H I :一 n d
r e a e t i
o n s b e t w e e l i
1 0 H I , 1 1 H 2 , 1 7 H 6
,
2 9 H I w e r e f o u n d
.
H o w e 、 e r n o a d d i t i v i r i e s o f r e a e t i o n s 认
一
e r e f o u l z d b e t 、、 e e xl t w 。
n 、 o n o e l o 一l a l a n t i b o d i e s i r l 1 0 H I , 1 1 H Z , 1了H 6 , 2 9 H I . 了’ I, e ,吧 s 一x l t s i l z d i e a t e 老I一a 之
t h e m o u o e l o n a l a n t i b o d i e * I H 2
,
1 2 H 3
,
7 11 1 e a x l r e e o g x飞i z e t h r e e ( l i f f e r e n t a 一1 -
t j只e n i e ( l e ’ e r m i n a ll t , a 一i d I JI ,、 (一 111 “ r 、 e o l一 I· `· e o g 一 i z e t ll e f 。 , 一] r l ll “ l一t i只`一 j ( 心l “ t “ r -
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K e 》一 w o r d s : M o , , 【) e l , , n a l A : l t j h o d 、 . A (1〔l i t i 、 i t 、 l t l 、 l o x , A n t i g 。 、、 : , · l ) e r ,· r : 1 , j
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