全 文 ：　　 [文章编号 ]　 1671-587Ⅹ ( 2003) 05-0581-02
[收稿日期 ]　 2002-07-18
[基金项目 ]　吉林省科技厅资助课题 ( 20010560)
[作者简介 ]　牛凤兰 ( 1951- ) ,女 ,吉林省长春市人 ,教授 ,主要从事药食同用植物与健康研究。
东北菱中黄酮类化合物的分离实验
牛凤兰 1 ,刘国良 1 ,董威严1 ,程　舸1 ,梁　睿 1 ,巩宏伟 1 ,曲　扬 2
( 1. 吉林大学公共卫生学院中心实验室 ,吉林 长春 130021; 2. 吉林大学图书馆 )
[摘　要 ]　目的:分析东北菱中的黄酮类化合物。方法: 采用薄层层析法、高效液相色谱法对东北菱
中的黄酮类化合物进行分析。结果:东北菱中含有黄酮类化合物。 结论:东北菱是一种具有开发利
用价值的野生水生植物。
[关键词 ]　黄酮类 /分离和提纯 ;色谱法 ;东北菱
[中图分类号 ]　 O622. 4;　 R284. 2　　 [文献标识码 ]　 A
　　为进一步发掘东北菱的药用价值 ,本文作者对
其进行了系统的研究 [1-3 ] ,分析了东北菱中的黄酮化
合物。
1　仪器与试剂
1. 1　仪　器　电热恒温水浴锅 (北京医疗设备
厂 ) , SHB-B型循环水式多用真空泵 (郑州长城科工
贸有限公司 ) ,电热三用水箱 (北京医疗设备厂 ) ,
ZFQ85A型旋转蒸发器 (上海医械专机厂 ) ,日本岛
津的 LC-8A高效液相制备色谱仪 (日本岛津 SPD-
6AV紫外—可见检测器 ) , SB3200型超声波提取器
( SHANGHAI, BRAN SON ) , SYZ-B型石英亚沸高
纯水蒸馏器 (江苏宜兴新建勤华石英玻璃仪器厂 )。
1. 2　试　剂　 95%的乙醇 ,石油醚 ,正丁醇 ,盐
酸 -镁粉 ,硅胶剂 ,展开剂 [乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶
水 ( 5∶ 3∶ 1∶ 1) ] ,显色剂 ( 1%～ 2% FeCl3乙醇溶
液 ) ,乙腈 ( HPLC专用 ) ,磷酸 (分析纯 ) ,无水乙醇
(优级纯 ) ,二次蒸馏水 ,甲醇 (优级纯 )。
2　方　法
2. 1　提　取　东北菱粉碎至通过 1 cm直径的
筛子 ,取 4 kg粉碎后的东北菱放入提取器中 ,加
95%乙醇热回流提取 ,每次提取加热 3 h后 ,吸出提
取液后再加入 95%乙醇 ,如此反复若干次 ,直至提
取液用盐酸 -镁粉检查在泡沫处不出现粉红色为止 ,
合并提取液减压浓缩 ,回收乙醇 ,待提取液浓缩至约
2 500 m l时 ,分次转入旋转蒸发器浓缩 ,直至稠膏。
2. 2　分　离　将提取液的浓缩稠膏以三重水
溶解 ,搅拌使之悬浮 ,进而转入分液漏斗中 ,用石油
醚萃取 11次 ;水层再以乙酸乙酯萃取 10次 ,将所得
的脂层溶液转入另一分液漏斗中再静置分层 ,得乙
酸乙酯萃取液的上层和下层。
2. 3　提取物的硅胶层析　以硅胶 G铺成
24 cm× 8. 9 cm的硬板 ,将石油醚萃取液、乙酸乙酯
萃取液上层和下层分别点板 ,以展开剂展层 50 min,
取出、晾干后喷 1. 5%的 FeCl3乙醇溶液显色。
2. 4　 HPLC测定　色谱柱为 ODS C18色谱柱。
流动相为乙腈 -0. 4%的磷酸水溶液 ( 1∶ 3) ,流速为
2. 4 ml· min- 1 ,检测波长选在 360 nm处。
3　结　果
3. 1　极性不同的溶剂萃取结果　石油醚萃取
液为墨绿色 ,其中有大量沉淀积于底部 ,据文献介绍
这部分萃取液中含叶绿素和大量的植物性油脂 ,乙
酸乙酯萃取过程中水层、脂层分层缓慢需过夜 ,但即
使静置过夜 ,水、脂两层中间还有一不透明的油层 ,
该层流动性较差 ,称之为乙酸乙酯萃取液下层 ,该层
为橙黄色 ;乙酸乙酯萃取液上层为桔红色 ,流动性
好。
3. 2　薄层层析结果　以毛细管将 3种萃取液
点于薄层板上 ,晾干后以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶
水 ( 5∶ 3∶ 1∶ 1)的展开剂展层 , 50 min后取出 ,晾
干后喷 FeCl3 的乙醇溶液显色 ,所得斑点数据 ,
见表 1。
—581—
第 29卷　第 5期
2003年 　
吉　林　大　学　学　报　 ( 医　学　版 )
Journa l of Jilin Univ ersity ( Medicine Edition)
　 Vol. 29　 No. 5　
2003
DOI : 10. 13481 /j . 1671 -587x. 2003. 05. 021
Tab. 1　 Spo t o f flavones on silica g el film
Ext raction liquid
Solv ent f ront
line ( l /cm)
Spot place
( l /cm)
Rf× 100
Ext raction liquid 15. 9 12. 1 76. 1
Submit layer 15. 9 11. 3 71. 1
15. 9 10. 8 67. 9
15. 9 10. 4 65. 4
15. 9 9. 8 61. 6
Under layer 15. 9 10. 7 67. 3
15. 9 10. 1 63. 5
3. 3　 HPLC分析结果　①在最佳条件下测得
的样品分析色谱图见图 1。 ②部分组分纯度检验色
谱图见图 2。
4　讨　论
从薄层层析的结果来看 [4-5 ] ,东北菱提取液的石
油醚萃取液中没有层析斑点 ,表明石油醚萃取物中
不含黄酮体 ,东北菱提取液的乙酸乙酯萃取液上层
含有 5种黄酮体 ,萃取液下层中含有 2种黄酮体 ,至
于这 7种黄酮体的化学结构 ,尚需进一步研究。
Fig . 1　 HPLC chromatog raphy picture( solv ent
C H3CN /0. 4% H3PO4 )
Fig. 2　 Ch romatog raphy picture of detection
of composition purity
　　利用高效制备液相色谱法分离东北菱中黄酮类
化合物 [6 ] ,操作简单 ,易于放大 ,可为进一步的研究
提供标准样品。物种组分的结构有待用红外光谱、核
磁共振波谱法进一步分析。 黄酮类化合物生理活性
多种多样。迄今为止 ,已发现黄酮类化合物能防治高
血压及动脉硬化 ,对心血管系统疾病有显著的疗效。
另外还有解毒、抗炎、雌性激素、抗菌及抗病毒、泻
下、解痉作用。
[参考文献 ]
[1 ] 牛凤兰 , 李晨旭 , 董威严 , 等 .东北菱中氨基酸和无机元素含
量分析 [ J ] . 食品科学 , 2001, 22 ( 3): 84-86.
[ 2 ] 牛凤兰 , 李晨旭 , 董威严 , 等 . 四种水生植物中无机元素和维
生素 C的研究 [ J] .食品科学 , 2001, 22 ( 1): 78-79.
[ 3 ] 牛凤兰 , 李晨旭 , 董威严 , 等 . 菱壳提取物对胃癌细胞抑制作
用的实验研究 [ J ] . 白求恩医科大学学报 , 2001, 27 ( 5): 475-
497.
[4 ] 中国医学科学院药物研究所编 . 薄层分离及其在中草药分析中
的应用 [M ] . 北京: 科学出版社 , 1976. 8.
[ 5 ] 中国科学院上海药物研究所编 .中草药有效成分提取与分离
[M ] . 上海: 上海科学技术出版社 , 1983. 7.
[ 6 ] 黄文哲 . HPLC测定短瓣金莲花中两种黄酮苷的含量 [ J] .中
国药学杂志 , 2000, 35 ( 10): 658-659.
Separating of Flavones from Northeast Water Chestnut
NIU Feng-lan
1
, LIU Guo-l iang
1
, DONG Wei-yan
1
, CHENG Ge
1
,
LIANGRui
1
, GONGHong-wei
1
, QU Yang
2
( 1. Dept . of Central Laboratory , School of Publ ic Health , Jilin University ,
Changchun 130021, China; 2. Library of Jil in Universit y )
[Abstract ]　 Objectiv e: To analy ze f lav ones in northeast water chestnut. M ethods: Silica g el film and HPLC
was employed to analy ze flavones from northeast w ater chestnut. Results: Northeast water chestnut contained
some f lav ones. Conclusion: No rtheast w ater chestnut w as very useful that can be developed and utilized.
[Key words ]　 Flavones /separate and purify; HPLC; Water chestnut
—582— 吉林大学学报 (医学版 )　 2003年　第 29卷　第 5期