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不同产地蒙古扁桃药材种仁蛋白质含量测定与比较



全 文 :内蒙古中医药
*包头医学院药学院(014040)
**包头市第四医院内分泌科(014030)
***内蒙古大学生命科学学院(010021)
****包头医学院 2013级研究生(014040)
2015年 3月 15日收稿
不同产地蒙古扁桃药材种仁蛋白质含量测定与比较
摘 要:目的:测定不同产地蒙古扁桃种仁蛋白质含量并进行比较研究。方法:采用凯氏定氮法测定蒙古扁桃种仁蛋白质含量,应用
SPSS 17.0软件对所得数据统计分析。结果:不同产地蒙古扁桃种仁蛋白质含量为18.97%~25.31%,其中4号产地的含量最高,7号产地的
含量最低;统计学分析表明,1号、2号和5号三个产地蒙古扁桃种仁蛋白质含量差异不显著,其余各产地蒙古扁桃种仁中蛋白质含量差
异均显著(P<0.05)。该方法的平均回收率为100.19%,RSD为1.02%。结论:该法简便、快速、准确,蒙古扁桃种仁中含有丰富的蛋白质,本
研究为其资源综合开发利用和质量评价提供一定的参考依据。
关键词:蒙古扁桃种仁;蛋白质;含量;测定;比较
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1006-0979(2015)08-0134-02
钮树芳 * 汪 静 ** 石松利 * 周红兵 *,*** 郑倩男 **** 吴培赛 ****
药物定性与定量研究
Determination and Comparison of Contents of Protein in the Kernels of Prunus mongolica in Different Origins
NIU Shu-fang1,WANG Jing2,SHI Song-li1,ZHOU Hong-bing1,3,ZHENG Qian-nan4,WU Pei-sai4
(1.Department of Pharmacy,Baotou Medical College,Baotou,014040,China;2. Department of endocrinology,The Fourth Hospital of Baotou,
Baotou,014030,China;3.College of Life Sciences,Inner Mongolia University,Huhhot 010021,China;4.The second grade graduate of Baotou
Medical College,Baotou,014040,China.)
[Abstract] Objective:Determination and comparison the contents of protein in the kernels of Prunus Mongolia in different origins.Methods:Pro-
tein contents were determined by the Kjeldahl method,SPSS 17.0 analysis software was applied to analyze the results. Results:The contents of
protein in the kernels of Prunus Mongolia in different origins were 18.97%~25.31%,the contents of protein were the highest in origin 4 and the
lowest in origin 7. The statistical results indicated that the contents of the protein were significant difference (P<0.05)except origin 1 ,2 and 5.
The results showed that the average recovery rate of the method was 100.19%,the relative standard deviation was 1.02%. Conclusion:The con-
tents of protein in the kernels of Prunus Mongolia were more abundant,Kjeldahl method is rapid,simple,accurate and reliable data. The re-
search provided some reference for comprehensive utilization and quality evaluation of the resources.
[Keywords] Kernels of Prunus Mongolia; Content of Protein; Determination; Comparison
蒙古扁桃(Prunus mongolica)又称山樱桃、土豆子,是蔷薇科李
属的多年生木本植物,为蒙古高原特有的阿拉善荒漠种[1-2],是荒漠
区重要牧草,其叶、嫩枝、花及果实均为家畜喜食,在植被稀疏干旱
少雨荒漠区草原牧民称之为“救命草”[3],亦是集药用、食用、饲用、
工业用、生态、经济、社会效益为一体的优良的木本油料树种。其种
仁含油率达 40%,含有苦杏仁苷、不饱和脂肪酸、多糖类、黄酮类、
蛋白质及人体必需的微量元素和维生素等多种药用成分[4]。它为传
统的中药材,以种仁入药,性苦,味平,主治干咳、咽喉干燥、支气管
炎及阴虚便秘,还可制成止痛剂和镇静剂,对糖尿病、高血压、神经
衰弱、肺炎等有一定疗效[5-6]。由此可见蒙古扁桃具有广阔的开发利
用价值。
绿叶植物是蛋白质资源的巨大宝库,也是人类获取蛋白质最
廉价的途径之一。作为植物体的初生代谢产物,蛋白质在调节代
谢、催化体内的生化反应及抵御逆境等方面都起着重要作用 [7]。研
究表明,药材中的蛋白质含量与中药的药性有一定的相关性 [8]。蛋
白质含量高低是鉴别药材品质的重要标志之一。到目前为止,对蒙
古扁桃药材的药用成分研究主要集中在黄酮、多糖、有机酸、苦杏
仁苷、维生素和微量元素等方面[9-14],迄今未见对不同产地蒙古扁桃
种仁蛋白质含量的比较研究。因此,本文以不同产地蒙古扁桃药材
种仁为材料,采用凯氏定氮法对其蛋白质含量进行测定、比较和分
析,希望为蒙古扁桃药材质量评价和资源综合开发利用提供更多
的试验依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器:蒙古扁桃种子(采集于 2012 年 8 月),产地分别
为:阿右旗雅布赖戈壁、阿左旗诺日公、阿左旗贺兰山沟口、包头固
阳爬榆树、包头固阳忽鸡沟、包头赵长城、张家口,经内蒙古大学生
命科学学院王迎春教授鉴定均为蒙古扁桃种子。浓硫酸,氢氧化
钠,盐酸,硼酸,无水碳酸钠,无水硫酸铜,二氧化钛,硫酸钾,氯化
铵,溴甲酚绿,甲基红,碘化钾,碘化汞。所用试剂均为分析纯,水为
无氨去离子水。
GZX-9023 MBE型数显鼓风干燥箱(上海启威电子有限公司),
FA1004型电子分析天平(上海恒华科技仪器有限公司),微量滴定
管(10mL),常压蒸馏装置,干燥器,电热板,电炉。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理:将蒙古扁桃种子去壳,种仁置 105℃的烘箱中烘
至恒重,取出冷却、研成细粉,放干燥器中备用。
1.2.2 定氮混合指示剂的配制:0.5g溴甲酚绿和 0.1g甲基红放入玛
瑙研钵,加 100mL 95%的乙醇研磨溶解,然后用稀盐酸或稀氢氧化
钠调节 pH值约为 4.5,备用。
1.2.3 纳氏试剂的配制:取 16g氢氧化钠溶于 50mL水中冷却至室
温,另取 7g碘化钾和 10g碘化汞溶于水,将此溶液在搅拌下徐徐注
入氢氧化钠溶液,稀释至 100mL,静置过夜,取清液存于棕色瓶中,
密塞保存,备用。
1.2.4 蛋白质含量的测定
1.2.4.1 消化:准确称取一定质量样品粉末于 100mL锥形瓶中,加入
10g硫酸钾、0.4g硫酸铜、0.3g二氧化钛,再加入 3滴石蜡油,然后加
20mL浓硫酸,锥形瓶口加小漏斗,置于电热板上低温消化至不冒
气泡,再转移至电炉上,使硫酸大量发烟,保持溶液沸腾,温度约为
400℃,直到样品由黑色逐渐变为棕褐色再变至翠绿色溶液,再加热
20min,使消化完全。
1.2.4.2 蒸馏:消化完毕,待消化液冷却后,将消化液转移至圆底烧
瓶中,用 50mL无氨去离子水少量多次冲洗锥形瓶,缓慢加入 40%
氢氧化钠溶液 80mL,避免过量浓硫酸与氢氧化钠反应过于剧烈而
产生爆沸现象,连接蒸馏装置。将装有 50mL 2%硼酸吸收液(加 3
滴定氮混合指示剂)的锥形瓶,连接于牛角管下端,然后开始蒸馏。
约 60min后检查是否蒸馏完全。检查方法:取下牛角管,用白瓷板
在冷凝管下端接 1滴液体,加 1滴纳氏试剂,若无黄色,即表示蒸
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DOI:10.16040/j.cnki.cn15-1101.2015.08.134
2015年 8月
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样品质
量(g)
含氮量
(mg)
加标量
(mg)
回收量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
0.2502
0.2498
0.2511
9.612
9.596
9.646
7.678
9.597
11.516
7.678
9.597
11.516
7.678
9.597
11.516
17.161
19.453
21.104
17.110
19.406
21.391
17.310
19.026
21.281
98.32
102.54
99.79
97.87
102.22
102.42
99.82
97.74
101.03
100.19 1.95
产地编号 产地 蛋白质含量(%)
1
2
3
4
5
6
7
阿右旗雅布赖戈壁
阿左旗诺日公
阿左旗贺兰山沟口
包头固阳爬榆树
包头固阳忽鸡沟
包头赵长城
张家口
24.01±0.24
23.72±0.03
20.05±0.18
25.31±0.40
23.79±0.03
18.97±0.04
24.85±0.07
组分
名称
测定值(%) 平均值
(%)
RSD
(%)1 2 3 4 5 6
蛋白质 24.06 24.01 24.03 23.96 23.95 24.07 24.01 1.02
馏完全,若有黄色,应继续蒸馏,直到蒸馏完全为止。
1.2.4.3 滴定:蒸馏完毕,取下牛角管,用少量无氨去离子水冲洗,洗
入锥形瓶,然后用盐酸标准溶液滴定,当溶液由蓝色变为微红色即
达终点,消耗标准盐酸溶液体积 VmL。同时做空白试验,消耗标准
盐酸溶液体积 V0mL。根据所消耗标准盐酸的体积可用下式计算出
蒙古扁桃种仁中的蛋白质含量。
蛋白质含量(%)=(V-V0)×c×10
-3×14
ms
×100×6.25
14—氮的摩尔质量,g/mol;
6.25—蛋白质与氮的换算因子;
V—滴定样品所消耗标准盐酸的体积,mL;
V0—滴定空白所消耗标准盐酸的体积,mL;
c—标准盐酸溶液浓度,0.09287mol/L;
ms—烘干样品质量,g。
1.2.5 统计学方法:主要用 Excel 2003以及 SPSS17.0 软件对所得数
据统计分析处理,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行差
异显著性比较。
2 结果与分析
2.1精密度试验:平行称取 6份阿右旗雅布赖戈壁蒙古扁桃种仁样
品粉末 0.5g(精确至 0.0001g),按“1.2.4”项下方法消化、蒸馏、滴定。
结果如表 1所示,RSD为 1.02%。结果表明,该法精密度高。
表 1 精密度试验
2.2 回收率试验:采取加标回收法,精密称取 9份已知含量的阿右
旗雅布赖戈壁蒙古扁桃种仁样品粉末 0.25g,分成 3组,每组分别按
照样品含氮量的 80%~120%加入 4.00mL、5.00mL、6.00mL NH4Cl的
标准溶液(0.1371mol/L),按“1.2.4”项下方法消化、蒸馏、滴定。结果
如表 2所示,氮的平均回收率为 100.19%,RSD为 1.95%。结果表
明,该法准确度高。
表 2 加标回收率测定结果
2.3 样品含量测定:平行称取 3份蒙古扁桃种仁粉末 0.5g(精确至
0.0001g)于 100mL锥形瓶中。按“1.2.4”项下的方法测定不同产地蒙
古扁桃种仁蛋白质含量,求平均值,结果如表 3所示。结果表明,不
同产地蒙古扁桃种仁蛋白质含量各不相同,在 18.97%~25.31%之
间。统计学分析表明,1号、2号和 5号三个产地蒙古扁桃种仁中蛋
白质含量差异不显著,其余各产地蒙古扁桃种仁中蛋白质含量差
异均显著(P<0.05)。其中 4号产地的含量最高为 25.31%,其次为 7
号产地的含量为 24.85%,6号产地的含量最低为 18.97%。
表 3 不同产地蒙古扁桃种仁中蛋白质含量(x±s)
3 结 论
结果表明,蒙古扁桃种仁中的蛋白质含量较为丰富,为 18.97%
~25.31%。本试验建立的凯氏定氮法测定蒙古扁桃种仁蛋白质含量
的方法,简单、快速、准确,为蒙古扁桃种仁蛋白质含量的测定提供
了一种可靠方法。本文为研究蒙古扁桃药效与蛋白质之间的关系
提供试验依据,同时为蒙古扁桃药材的质量评价以及资源的合理
开发利用提供了参考。
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