全 文 ：欧李仁多肽抗氧化作用的研究
张 玲 王晓闻 *
（山西农业大学食品科学与工程学院 山西太谷 030801）
摘要 目的：研究欧李仁多肽的抗氧化作用。 方法：以欧李仁多肽对 DPPH·自由基、羟自由基、超氧阴离子自由
基的清除能力以及对小鼠体内血清及肝脏中 SOD、GSH-PX 酶活力和 MDA 含量的影响来确定欧李仁蛋白多肽
的抗氧化能力。结果：欧李仁多肽对 DPPH·自由基有显著的清除能力，其 IC50值为 2.69 mg/mL；欧李仁多肽还具
有明显的清除羟自由基和超氧阴离子自由基的作用，其 IC50值分别为 6.52 mg/mL 和 7.19 mg/mL。欧李仁多肽还
可显著提高小鼠血清和肝脏中 SOD、GSH-PX 酶的活力，显著降低小鼠体内 MDA 的含量。 结论：欧李仁多肽具
有较好的抗氧化作用。
关键词 欧李仁多肽； 自由基； 抗氧化
文章编号 1009-7848（2012）07-0036-06
欧李〔Cerasus humilis（Bge）Sok〕为蔷薇科樱
桃属、落叶小灌木果药兼用野生树种，其茎叶、果
实、根皮具有很高的经济和药用价值[1]。欧李仁（郁
李仁）中含有丰富的脂肪和蛋白，且果仁中氨基酸
齐全，必需氨基酸含量高 [2]，所以欧李仁中优质蛋
白质是制备活性多肽的极好的原料。近年来，活性
抗氧化肽的开发越来越受到世界各国的关注，并
取得了一定的进步。 然而多肽的研究水平仍处于
初级阶段，技术水平有待进一步提高，这极大地限
制了蛋白质资源的有效利用。因此，研究活性多肽
的制备方法，明确其保健功能的作用机理，开发保
健功能食品， 对提高各种来源蛋白质深加工的转
化率和利用率具有重要的现实意义， 同时也为综
合利用蛋白质资源提供了一条有效途径。
1 试验器材
1.1 材料
欧李仁粕，山西农大果园提供；欧李仁多肽，
由实验室课题组确定的最佳酶解工艺制得 （分子
质 量 约 为 660u）； 二 苯 代 苦 味 酰 肼 自 由 基
（DPPH·），Sigma 公司； 总超氧化物歧化酶 （T-
SOD）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH～
Px）活力测定试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒，均由
南京建成生物工程研究所提供。 其他试剂均为分
析纯。
实验动物：昆明种小鼠，雄性，60 只，体重 30~
34g，购自山西医科大学。
1.2 仪器
LG-2.4A 低温高速离心机， 北京医用离心机
厂；756 型紫外-可见分光光度计， 上海光谱仪器
有限公司；其它为常规仪器。
2 试验方法
2.1 欧李仁多肽对 DPPH·自由基的清除作用
参考文献 [3]的方法进行 ，配制 125 μmoL/L
DPPH· 无水甲醇溶液，将欧李仁多肽配成质量浓
度 10 mg/mL 的溶液，之后稀释，分别配制成 1、2、
4、6、8和 10 mg/mL共 6个质量浓度。 在试管中加
入 2 mL 待测液和 2 mL DPPH·（125 μmoL/L）溶
液，强烈振荡后静置 30 min，于 517 nm 处测定吸
光值（Ai）。 另取 2 支试管，分别加入 2 mL 待测液
和 2 mL 甲醇作样品对照 （Aj），2 mL DPPH·溶液
和 2 mL 甲醇作空白（Ac），同样测吸光值。 按下式
计算各待测样品对 DPPH·自由基的清除率。 重复
3次取平均值。
清除率（%）= 1- Ai-AjAc! ×100%
式中，Ai——样液与 DPPH·试剂混合液的吸
收稿日期： 2011-08-08
作者简介： 张玲，女，1982 年出生，硕士生
通讯作者： 王晓闻
Vol． 12 No． 7
Jul． 2 0 1 2Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
中 国 食 品 学 报第 12 卷 第 7 期
2 0 1 2 年 7 月
第 12 卷 第 7 期
光值；Aj——样液与空白溶剂混合液的吸光值；Ac
——DPPH·试剂与空白溶剂混合液的吸光值。
2.2 欧李仁多肽对羟基自由基的清除作用
参考文献[4]，将制备的欧李仁多肽配成 1、2、
4、6、8和 10 mg/mL共 6个质量浓度的多肽液。 在
试管中加入 0.5 mL 10 mmol/L 水杨酸-乙醇溶液、
0.5 mL 样液 、0.5 mL 10 mmol ／ L FeSO4 溶液 、3.5
mL蒸馏水，最后加入 5 mL 100 mmol/L H2O2启动
Fenton反应， 摇匀后于 510 nm 处测定吸光度 A1；
取 0.5 mL 蒸馏水代替 10 mmol/L FeSO4溶液所测
的吸光度为 A2；取 0.5 mL 蒸馏水代替酶解液所测
的吸光度为 A3。 羟自由基的清除率 S（％）计算公
式为：S（％）=[1－（A1－A2）/A3]×100。
2.3 欧李仁多肽对超氧阴离子自由基 （O2-·）清
除率的测定
采用邻苯三酚自氧化法测定[5]。取 4.5 mL pH
8.2 50 mmol/L Tris-HCI 缓冲液、4.2 mL 蒸馏水。
混匀后于 25℃水浴中保温 20 min。 取出后立即加
入 0．3 mL 已在 25 ℃水浴中预热过的 30 mmol/L
邻苯三酚（以 10 mmol/L HCl 配制）。 空白管用 10
mmol/L HCI 代替邻苯三酚的 HCI 溶液，迅速摇匀
后倒人比色杯，325 nm 处每隔 30 s 测定吸光度。
计算线性范围内每分钟吸光度的增加值。 在加入
邻苯三酚前先加入 1 mL样液。
抑制率（％）=（△Ao－△A） ／△Ao×100
式中，△Ao——不含样液每分钟吸光度的增
加值；△A——加入样液每分钟吸光度的增加值
2.4 欧李仁多肽抗氧化动物试验
2.4.1 动物试验设计 动物购回后先适应环境 4
d，后随机分为 5组，每组 10只。分别为：空白对照
组， 每天灌胃 0.2 mL/只生理盐水；5 mg/mL 的 VC
组为阳性对照组，每天灌胃 0.2 mL/只；欧李仁肽
低剂量组， 中剂量组和高剂量组每天灌胃 0.2 mL
质量浓度分别为 5、10、15 mg/mL 的欧李仁蛋白多
肽。 连续灌胃 30 d，每天自由采食和饮水。
2.4.2 样品采集 试验期结束，动物禁食 12 h 后
摘除眼球取血， 肝素抗凝， 在 0~4 ℃ 3 000 r/min
离心 15 min 制备血清；颈椎脱臼法处死，取肝脏
称重用小剪将肝脏样品剪碎， 在研钵中倒入适量
的经过冰浴的生理盐水快速充分研磨， 然后用生
理盐水配成 10%的肝脏匀浆液，3 000 r/min 离心，
取匀浆上清液分别测定有关生化指标。
2.4.3 抗氧化功能指标的测定 取肝脏匀浆上清
液并用生理盐水稀释至适当的浓度， 用考马斯亮
蓝法 [6]测定肝脏蛋白质的浓度。 超氧化物歧化酶
（SOD）活性，谷胱甘肽过氧化物酶活性的测定以
及丙二醛含量的测定都按照试剂盒 （南京建成生
物工程研究所）要求测定。
2.4.4 数据统计与分析 数据用 SPSS 软件处理，
用单因子方差分析（One-way ANOVN，LSD）进行
差异显著性检验，数据以 X±SD表示。
3 结果与分析
3.1 欧李仁蛋白多肽对 DPPH·自由基的清除能
力
从图 1 可以看出， 在 1 mg/mL 至 6 mg/mL 质
量浓度范围内，欧李仁多肽对 DPPH·自由基的清
除作用随浓度的增加几乎呈直线上升。 当质量浓
度为 6 mg/mL时，清除率已达 87.6%。 当质量浓度
继续升高时，欧李仁多肽对 DPPH·自由基的清除
率接近 100%，当质量浓度为 10 mg/mL 时，清除率
可达 94.3%。 试验数据用 Excel 进行多项式回归，
通过回归方程得出欧李仁多肽清除 DPPH·自由
基的 IC50为 2.69 mg/mL。
3.2 欧李仁多肽对羟自由基的清除能力
从图 2 可以看出，随着质量浓度的增加，欧李
仁多肽对羟自由基的清除力逐渐上升， 当质量浓
度为 10mg/mL时，清除作用最强，其清除率达 56.9%。
y = -1.0604x2 + 19.564x + 5.0458
R2 = 0.9943
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
清
除
率
/%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
质量浓度/mg·mL-1
图 1 欧李仁蛋白多肽对 DPPH·自由基的清除作用
Fig.1 Scavenging activity of CHKPs on DPPH radical
欧李仁多肽抗氧化作用的研究 37
中 国 食 品 学 报 2012 年第 7 期
试验数据用 Excel进行多项式回归。 R2=0.9617，回
归方程显著。 通过回归方程得出欧李仁多肽清除
羟自由基的 IC50为 6.52 mg/mL。
3.3 欧李仁多肽对超氧阴离子自由基的清除能力
从图 3 可以看出，在 1~10 mg/mL 的质量浓度
范围内， 欧李仁多肽对 O2-·自由基的清除能力逐
渐上升， 在 1~4 mg/mL 的质量浓度范围内上升幅
度较大， 当质量浓度为 1 mg/mL 时， 其清除率为
18.5%，当多肽质量浓度为 4 mg/mL 时，其清除率
即达 45.7%，之后，当欧李仁多肽浓度再增加时，
清除率上升缓慢。 当多肽质量浓度为 10 mg/mL
时，欧李仁多肽对 O2-·自由基的清除率为 57.7%。
试验数据用 Excel 进行多项式回归， 通过回归方
程得出欧李仁多肽清除 O2-·自由基的 IC50为 7.19
mg/mL。
3.4 欧李仁多肽对小鼠血清和肝脏 SOD 活性的
影响
由表 1 可知：①欧李仁多肽对血清中 SOD 活
性的影响：经过灌胃欧李仁肽 30 d 后，空白对照
组中血清 SOD 的活力为 70.4 U/mL， 与空白对照
组相比， 各组小鼠血清中 SOD 的活力均有所升
高，且剂量越大 SOD 的活力越高。 其血清中欧李
仁多肽低、中、高剂量组 SOD 的活力与空白对照
组相比分别升高了 20.2%、72.2%、84.4%。 血清中
肽高剂量组的 SOD 的活性极显著高于其他组（P<
0.05），肽中剂量组显著高于肽低剂量组和空白对
照组（P<0.05），肽低剂量组显著高于空白组（P<
0.05），说明肽高剂量组对提高血清 SOD活力的作
用要优于 VC对照组。②欧李仁多肽对肝脏中 SOD
活性的影响：灌胃欧李仁肽 30 d 后，空白对照组
肝脏中 SOD 的活力为 84.28 U/mg 蛋白， 多肽低、
中、高剂量组 SOD 的活力与空白对照组相比分别
升高了 7.6%、31.1%、38.7%。肝脏中肽高剂量组和
中剂量组 SOD 的活性显著高于低剂量组和空白
组（P<0.05），肽低剂量组和空白对照组相比差异
不显著（P>0.05）。
3.5 欧李仁多肽对小鼠血清和肝脏 GSH-PX 活
性的影响
由表 2 可知： ①欧李仁多肽对血清中 GSH-
PX 活性的影响：灌胃欧李仁肽 3 个剂量组的血清
中 GSH-PX的活性均显著高于空白对照组（P<0.05），
与空白对照组相比，血清中多肽低、中、高剂量组
分别提高了 19.9%、39.7%、44.5%。 说明欧李仁肽
能显著提高小鼠血清中 GSH-PX的活力。 ②欧李
y = -0.3953x2 + 7.889x + 15.55
R2 = 0.9617
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
清
除
率
/%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
质量浓度/mg·mL-1
图 2 欧李仁多肽对羟自由基的清除作用
Fig.2 Scavenging activity of CHKPs on hydroxyl radical
y = -0.6109x2 + 10.603x + 11.599
R2 = 0.9724
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
清
除
率
/%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
质量浓度/mg·mL-1
图 3 欧李仁多肽对超氧阴离子自由基的清除作用
Fig.3 Scavenging activity of CHKPs on superoxide radical
组别 血清/U·mL-1 肝脏/U·mg-1蛋白
空白对照组 70.4 ± 6.56d 84.28 ± 14.55b
VC 对照组 113.68 ± 1.29b 119.1 ± 10.68a
肽低剂量组 84.61 ± 6.56c 90.68 ± 11.12b
肽中剂量组 121.22 ± 2.69b 110.46 ± 12.36a
肽高剂量组 129.83 ± 3.93a 116.92 ± 13.13a
表 1 欧李仁多肽对小鼠血清和肝脏 SOD 活性的影响
Table 1 Effect of CHKPs on the SOD activities
in serum and liver
注：同列肩注不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。
38
第 12 卷 第 7 期
仁多肽对肝脏中 GSH-PX活性的影响： 与空白对
照组相比，多肽低、中、高剂量组的 GSH-PX 活性
分别提高了 23.6%、44.9%、52.4%。 肽高剂量组和
中剂量组以及 VC 对照组都显著高于肽低剂量组
和空白对照组（P<0.05），但肽高剂量组与中剂量
组相比差异不显著（P>0.05），肽高剂量组和中剂
量组的 GSH-PX 活性与 VC 对照组相比差异不显
著 （P>0.05）， 说明中剂量的肽组在提高肝脏中
GSH-PX 活性方面可以达到与 VC 对照组相同的
效果。
3.6 欧李仁多肽对小鼠血清和肝脏 MDA 浓度的
影响
从表 3可知：①欧李仁多肽对血清中 MDA 浓
度的影响：多肽低、中、高剂量组与空白对照组相
比 MDA的浓度分别下降了 34.2%、45.7%、55.3%。
肽高剂量 MDA 的浓度显著低于 VC 对照组、肽低
剂量组和空白对照组（P<0.05），但与中剂量组差
异不显著（P>0.05），肽中剂量组与低剂量组以及
VC 对照组相比差异不显著（P>0.05），说明在降低
血清 MDA 浓度的作用方面肽高剂量组优于 VC
对照组， 而肽低剂量组就可以与 VC 对照组达到
相同的效果。②欧李仁多肽对肝脏中 MDA浓度的
影响：多肽低、中、高剂量组与空白对照组相比分
别下降了 25.6%、31%、58%。 肽高剂量组 MDA 的
浓度显著低于肽中，低剂量组和空白对照组（P<
0.05）， 肽中剂量组与低剂量组相比差异不显著
（P>0.05）。
4 讨论
DPPH·自由基是一种稳定的深紫色自由基，
在 517 nm 波长处有最大吸收峰，当其从能够释放
质子的物质处得到质子时， 会形成一种稳定的反
磁性分子，其 517 nm 波长处吸光度会变小。 释放
质子是物质抗氧化的机理之一， 通过测定物质对
DPPH·自由基的清除能力， 可以较迅速地评价物
质的抗氧化能力 [7-8]。 试验结果显示，欧李仁肽对
DPPH·自由基有很强的清除作用，其 IC50值为 2.69
mg/mL。O2-·和·OH等活性氧自由基诱导的氧化损
伤一直被认为是引起衰老、细胞损伤、死亡和组织
伤害、细胞癌变的原因之一[9]。 试验所用的欧李仁
肽对 O2-·和·OH均表现出一定的清除能力， 这可
能与其氨基酸组成有着密切的关系。
SOD 是生物体内的一种重要的以 O2-·为唯一
底物的天然酶类和自由基连锁反应的阻断剂，它
可特异性地催化超氧化物自由基歧化为过氧化氢
和氧，具有维持活性氧代谢平衡。保护膜结构的功
能。GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的过氧
化物分解酶，也是抗脂质过氧化的一种重要酶，能
使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，促
进过氧化氢的分解， 过氧化氢在过氧化酶和谷胱
甘肽过氧化物酶的作用下，还可还原为水和氧[10-11]。
减轻细胞膜多不饱和脂肪酸的过氧化作用， 保护
细胞膜的结构和功能不受过氧化物的干扰及损
害， 它还可介导还原型谷胱甘肽催化脂质过氧化
物分解成相应的无毒害作用的醇[12]。 这表明 SOD、
GSH-PX 协同作用能有效地清除超氧阴离子，过
注：同列肩注不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。
表 2 欧李仁多肽对小鼠血清和肝脏 GSH-PX
活性的影响
Table 2 Effect of CHKPs on the GSH-Px activities
in serum and liver
组别 血清/U·mL-1 肝脏/U·mg-1蛋白
空白对照组 176.57 ± 2.82d 73.95 ± 18.58c
VC 对照组 328.61 ± 9.28a 107.96 ± 18.01a
肽低剂量组 211.63 ± 6.46c 91.38 ± 0.05b
肽中剂量组 246.74 ± 7.84b 107.14 ± 11.04a
肽高剂量组 255.19 ± 5.85b 112.67 ± 12.03a
组别 血清/nmol·mL-1 肝脏/nmol·mg-1蛋白
空白对照组 6.22 ± 1.05a 11.27 ± 0.53a
VC 对照组 3.95 ± 0.76b 4.23 ± 1.62c
肽低剂量组 4.09 ± 0.32b 8.38 ± 2.17b
肽中剂量组 3.38 ± 0.44bc 7.78 ± 0.25b
肽高剂量组 2.78 ± 0.56c 4.73 ± 0.81c
表 3 欧李仁多肽对小鼠血清和肝脏 MDA 浓度的影响
Table 3 Effect of CHKPs on the concentration
of MDA in serum and liver
注：同列肩注不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。
欧李仁多肽抗氧化作用的研究 39
中 国 食 品 学 报 2012 年第 7 期
氧化氢和脂质过氧化物。GSH-Px酶的活性高低可
影响体内抗氧化能力的强弱。 MDA是超氧自由基
作用生物体后引起膜系统脂质过氧化的产物，它
能与蛋白质氨基酸残基或核酸反应生成 Shift 碱，
降低膜的稳定性， 促进膜的渗漏；MDA 会降低
SOD的活性，加剧膜脂质过氧化作用，其含量的高
低是衡量生物体氧化衰老程度的一个指标。
胡文琴 [13]研究大豆蛋白与酪蛋白酶解物对小
鼠抗氧化功能的影响， 分别以 4、12、20 mg/mL 的
大豆蛋白酶解物与酪蛋白酶解物 0.25 mL 连续灌
胃小鼠 10 d， 结果表明不同剂量的大豆蛋白酶解
物均能增强小鼠的抗氧化功能， 其中高剂量组效
果最好， 能极显著增加小鼠肝脏 SOD 和 GSH-Px
酶的活性以及血浆 GSH-Px 酶的活性 （P<0.05），
但对小鼠血浆和肝脏中 MDA 的浓度无显著影响
（P>0.05）。 试验结果表明欧李仁多肽也能够显著
提高小鼠血清和肝脏中 SOD、GSH-PX 的活性，但
不同于大豆蛋白酶解物的是欧李仁多肽还能够显
著降低小鼠血浆和肝脏中 MDA 的浓度。 樊金娟，
付岩松，罗霞等[14]用米糠肽连续灌胃小鼠 30 d，试
验结果表明米糠肽可明显提高成年小鼠血清中超
氧化物歧化酶 （SOD）、 谷胱甘肽过氧化物酶
（GSH-Px）的活性，其中高剂量组提高水平极显著
（P<0.01）， 说明米糠肽具有提高小鼠抗氧化能力
的作用，并呈一定的剂量相关性。 在试验中肽的 3
个剂量组与空白组相比均能显著提高小鼠血清和
肝脏中 SOD，GSH-PX 的活性以及显著降低血清
和肝脏中 MDA的浓度，但欧李仁肽高剂量组和中
剂量组没有相关性，这一点不同于米糠肽。总的结
果表明欧李仁多肽可以提高小鼠体内抗氧化酶的
活性，增强机体的抗氧化能力，至于其提高抗氧化
酶活力、降低 MDA 的含量的量效关系、作用机理
和有效活性成分有待于进一步研究。
试验选用 VC 做阳性对照，因为 VC 是公认的
抗氧化剂，在体内有很好的抗氧化作用。试验结果
也表明，VC 在小鼠体内的抗氧化作用显著高于同
浓度下的多肽剂量组。VC对抗氧化物酶的促进作
用，可能是由于它对自由基的灭活作用，从而降低
了体内抗氧化物酶的消耗， 升高抗氧化物酶的活
性。 此外，VC 也可能通过恢复抗氧化物酶某些基
团的活性，提高了抗氧化物酶的活性。 有报道说，
VC 可使 GSH-PX 和 VE 的基团恢复活性，重新具
有抗自由基作用[15]。
5 结论
欧李仁肽的体外抗氧化试验结果表明欧李仁
肽有显著的清除 DPPH·自由基能力， 其 IC50 为
2.69 mg/mL； 还具有一定的清除羟自由基和超氧
阴离子自由基的能力， 其 IC50分别为 6.52 mg/mL
和 7.19 mg/mL； 动物试验结果表明不同剂量的欧
李仁多肽能够显著提高小鼠血清和肝脏中 SOD、
GSH-PX 活性（P<0.05），因此认为欧李仁多肽可
以通过提高小鼠血清和肝脏中 SOD、GSH-PX 活
性来增强抗自由基反应的酶系统的能力。 试验结
果还表明欧李仁多肽能够显著降低血清和肝脏中
MDA 的含量（P<0.05），从而减少自由基对不饱和
脂肪酸的氧化。这说明欧李仁多肽可猝灭自由基，
清除自由基对机体的损害，有较好的抗氧化作用。
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Study on the Anti-oxidant Activity of the Cerasus Humilis Kernel Peptide
Zhang Ling Wang Xiaowen*
（College of Food Science and Engineering， Shanxi Agriculture University， Taigu 030801， Shanxi）
Abstract Objective： to study the anti-oxidant activity effect of the Cerasus Humilis Kernel peptide. Method： the
anti -oxidant activity was determined depend on the scavenging activity of the Cerasus Humilis Kernel peptide against
DPPH、 hydroxyl and super anion free radicals and the effect on the SOD activity、 GSH-PX activity and the level of
MDA in mouse serum and liver. Results： the Cerasus Humilis Kernel peptide exhibite a relatively high level of DPPH
free radical scavenging activity with the IC50 value of 2.69 mg/mL； the Cerasus Humilis Kernel peptide also has scaveng-
ing activity against hydroxyl and super anion free radicals， the IC50 were 6.52 mg/mL and 7.19 mg/mL respectively； The
Cerasus Humilis Kernel peptide can increase the activities of SOD、GSH-PX activities and reduced the level of MDA ef-
fectively in mouse serum and liver. Conclusion： the Cerasus Humilis Kernel peptide has an excellent anti-oxidant power.
Key words Cerasus Humilis Kernel peptide； free radicals； anti-oxidant activity
英国科学家发现海藻有助防止蛀牙
英国一所大学的科学家发现，海藻有助保护牙齿，防止蛀牙。
据 BBC 报道，研究结果显示，海藻里的细菌会产生一种酶，能够穿透牙垢，杀死牙垢里导
致蛀牙的诸多细菌。
这项发现可说是一个意外，因为他们最初研究的是地衣芽孢杆菌是否能清洁船壳，最后却
发现海藻产生的酶有防止蛀牙之用。
科学家更表示，这种酶还有其他医学用途，例如清洁人工关节等。
（消息来源：联合早报网）
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欧李仁多肽抗氧化作用的研究 41