全 文 ：收稿日期:2006-01-24;　修订日期:2006-04-04
基金项目:延边大学大学自然科学基金资助项目(No.2004-05)
作者简介:朴　龙(1971-),男(朝鲜族), 吉林延吉人, 现任延边大学医院
副主任医师 ,硕士学位 ,主要从事组织化学研究工作.
漏芦提取物抗衰老作用的研究
朴　龙 1 , 张学武2 , 金香子 2
(1.延边大学医学院附属医院 , 吉林 延吉　133000;　2.延边大学医学院 ,吉林 延吉 　133000)
摘要:目的 研究漏芦乙醇提取物对 D-半乳糖致衰老小鼠影响。方法 D-半乳糖制作小鼠衰老模型 ,比色分析法测定小
鼠大脑皮质超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)、单胺氧化酶(monoamineoxidase, MAO)的活性及丙二醛(malond-
ialdehyde, MDA)的含量 , 同步观察电子显微镜下的组织学变化。结果 漏芦提取物可提高 D-半乳糖所致大鼠脑组织 SOD
活性 、降低 MDA含量 , 抑制 MAO活性;电子显微镜观察到漏芦提取物可以减轻 D-半乳糖导致的线粒体等超微结构的改
变。结论 漏芦提取物对 D-半乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用。
关键词:漏芦;　衰老;　小鼠
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)10-1918-01
Anti-senileEffectofRhaponticumuniflorm(L.)DC.ExtractonD-galgctoseInducingSe-
nileinRats
PIAOLong1 , ZHANGXue-wu2 , JINXiang-zi2
(1.AfiliatedHospital, YanbianUniversity, Yanji133000, China;2.MedicalColege, YanbianUniversity,
Yanji133000, China)
Abstract:ObjectiveTostudythealcoholextractofRhaponticumuniflorm(L.)DC.inthesenescentmiceinducedbyD-galac-
tose.MethodsThesenescentmiceinducedbyD-galactose;theactivitiesofSOD, MAOandthecontentMDAweremeasuredwith
colorimetricmethod, andthehistologicalchangesweresynchronouslyobservedbyelectronicmicroscope.ResultsRhaponticum
uniflorm(L.)DC.extractsignificantlyincreasedtheactivityofSODinbraintissue, decreasedthecontentMDA, inhibitedthe
MAOactivity.Itwasobservedundermicroscopethat:Rhaponticumuniflorm(L.)DC.couldretrievethedegenerationofmito-
chondrion.ConclusionRhaponticumuniflorm(L.)DC.extracthasanti-senileeffectonD-galgctoseinducedsenescentinmice.
Keywords:Rhaponticumuniflorm(L.)DC.;　Senescence;　Mice
　　漏芦 Rhaponticumuniflorm(L.)DC.为菊科多年生草本植物 ,
产于东北 、华北和西北诸省区 , 药源丰富。早在《神农本草经》中
就有 “下乳汁 , ……轻身益气 、耳目聪明 、不老延年”的记载。近
年来研究发现漏芦有提高细胞免疫 [ 1] 、抗动脉粥样硬化 [ 2] 、抗
炎 [ 3]等作用。本实验观察漏芦对 D-半乳糖致大鼠衰老模型 , 通
过生化指标检测及电子显微镜的观察 ,阐明漏芦对大脑衰老的保
护作用 , 为进一步开发应用漏芦提供一些实验依据。
1　材料与方法
1.1　药物 漏芦采自吉林省长白山 ,将漏芦切碎后 ,用 90%乙醇
回流提取(1 h)3次 , 温度 100℃,合并 3次滤液 , 减压浓缩 , 得漏
芦乙醇提取物(1 g漏芦有效成分相当于 7.3 g漏芦生药)。
1.2　试剂 D-半乳糖系上海试剂二厂产品(批号为 980218);
SOD、MAO、MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所;其他试
剂均为国产分析纯。
1.3　仪器 JEM-1200透射电镜 , UV-2501PC型紫外分光光度计 ,
722型分光光度计 ,旋转蒸发仪 , 电热恒温水浴箱。
1.4　动物 昆明种小鼠(雌雄各半), 体重为 18 ～ 22 g,由延边大
学医学院动物科提供 。
1.5　方法
1.5.1　衰老小鼠模型的制备及药物投入 60只小鼠随机分为正
常组 , 模型组 ,给药组 、阳性对照组。各组动物在实验前禁食 12 h
进行实验 , 给药组分别灌服漏芦乙醇提取物 7.12, 3.56, 1.78g/
(kg· d)-1、阳性对照组灌服脑复康 0.4 g/kg及等体积蒸馏水。
除正常组外 ,给药组和模型组小鼠每天皮下注射 D-半乳糖 0.12
mg/kg,连续 40 d。第 41天处死小鼠 , 迅速取出大脑 , 进行组织学
观察。
1.5.2　观察指标 超微结构观察 左侧小块中央回皮质 1 mm×1
mm×1 mm, 用 0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗 3次 ,经 3%戊二醛固
定 2 h, 1%锇酸后固定 1 h,梯度丙酮脱水 , Epon-812环氧树脂包
埋 , 做超薄切片 , 铀铅双重染色后 , 在 JEM-1200透射电镜下观察
并拍片 。
生化指标检测剩余脑组织除去丘脑 、小脑和延髓 , 以 pH7.4
的磷酸缓冲液冰浴中制成匀浆液后 , 2 000 r/min离心 10 min, 取
上清液 ,用比色分析法检测 SOD、MAO的活性及 MDA的含量。
1.6　统计学处理 应用 SPSS10.0统计软件进行方差分析。
2　结果
2.1　超微结构观察 正常组细胞器形态基本正常 , 模型组神经元
胞体内溶酶体大小和形态不规则 ,线粒体出现肿胀变性和空泡样
变 , 且核膜不规则;给药组 、阳性对照组锥体细胞内溶酶体 、LPF
大小和形态较规则 ,线粒体轻度肿胀 , 核膜较规则。
2.2　生化指标检测 结果见表 1。漏芦提取物对 D-半乳糖导致
的大鼠脑组织的 SOD活性的降低有明显的升高作用(P<0.05),
而对 MAO活性 、MDA含量的升高有明显的降低作用(P<
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 10期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2006VOL.17NO.10　
0.05)。
表 1　漏芦提取物对 D-半乳糖致衰老大鼠脑组织 SOD,
MAO活性及 MDA含量的影响( x±s)
组别 SOD/U· mg-1 MDA/nmol· ml-1 MAO/U· g-1
正常　　　 7.5±1.7＊ 69.6±14.9＊ 196.3±35.6＊
模型　　　 4.2±0.6 110.2±25.5 281.9±45.8＊
漏芦大剂量 6.3±1.2＊ 82.1±25.3＊ 215.5±36.2＊
漏芦中剂量 5.9±0.9＊ 88.8±19.1＊ 234.1±35.1＊
漏芦小剂量 6.1±0.8＊ 86.7±23.5＊ 225.4±27.6＊
人参皂苷　 6.5±0.9＊ 74.5±17.9＊ 195.3±23.5＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05;n=10
3　讨论
衰老是生命过程中正常而又复杂的生物过程 ,有关衰老的学
说很多 , 如代谢废物学说 、免疫功能衰退学说 、基因程序学说 、自
由基学说等 , 每种学说都有一定的实验依据 , 而自由基学说与其
它学说有直接或间接的关系 , 受到众多实验的支持。自由基学说
认为引起人体衰老的主要原因是人体细胞代谢过程中不断产生
的自由基 , 因其具有高度的化学活性 , 并能与活细胞的大部分发
生反应 , 损伤 DNA分子 , 造成键的断裂 ,使细胞死亡或发生突变。
SOD作为体内重要的抗氧化酶 , 它能促使超氧化物阴离子自由
基变为过氧化氢和氧离子 ,从而减少脂质过氧化反应 ,使机体细
胞和组织免受损害。 MDA是过氧化脂质的分解产物之一 , 它能
使膜交联和聚集 , 并最终导致 DNA的交联 , 引起突变 , 因此通过
测定 MDA可以间接反应体内自由基产生和老化程度。 MAO在
正常肝 、肾 、大脑 、脑干等区活性较强 , 其定位于线粒体外膜及线
粒体嵴 , 可催化单胺氧化脱氨基 , 参与神经元去甲肾上腺素 、 5-羟
色胺等递质的分解 [ 4] 。
既往研究表明 , D-半乳糖可致 SOD活性降低 , MAO活性增
高等 , 从而引起大脑功能衰退 [ 5] 。本实验研究结果与其相符。
本实验结果表明模型组与正常组 、草苁蓉组 、人参皂甙组锥体细
胞 SOD活性 、MDA含量及 MAO活性均有显著差异 ,说明漏芦能
使亚急性衰老大鼠的脑组织的 SOD活性增强 , 降低 MDA的含
量 , 抑制 MAO活性。本实验超微结构观察表明 ,模型组锥体细胞
内溶酶体 、脂褐素大小和形态不规则 ,线粒体出现肿胀变性和空
泡样变 , 且核膜不规则;而漏芦组锥体细胞内线粒体轻度肿胀 , 核
膜较规则。
总之 , 漏芦作为一种抗衰老的药物 , 具有广泛的开发前景 ,
对其确切的作用机理今后应从其有效成分中进一步研究。
参考文献:
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Biotechnol, 2002, 30:189.
收稿日期:2006-01-05;　修订日期:2006-05-27
基金项目:湖北省教育厅重点科研 B类项目(No.2004X090)
作者简介:童学飞 (1975-),男(汉族),湖北鄂州人 ,现在读湖北中医学院
2003级硕士研究生 ,主要从事中药资源和质量工作.
栽培和野生竹节参中人参皂苷含量比较
童学飞 1 , 尹文仲2 , 陈科力 1
(1.湖北中医学院 ,湖北 武汉　430061;　2.湖北民族学院附属医院 ,湖北 恩施　445000)
摘要:目的 对野生和栽培竹节参中所含人参皂苷及其含量进行比较。方法 参照人参的分析方法 , 以人参皂苷 Rg1、 Re
为对照品 , 对野生和栽培竹节参进行 TLC鉴别比较 ,用发 HPLC法进行定量分析。结果 在选定的薄层条件下 , 对照品与
供试品的薄层图谱清晰 ,分离度好 , 栽培和野生竹节参具有相同的斑点;对照品在 0.48 ～ 2.40 μg范围内具有良好的线
性关系 , 回归方程为:Y=336 182X-302 41, r=0.999 8。结论 根据测定和比较的结果 ,栽培和野生竹节参所含人参皂
苷类成分基本相似 , 野生竹节参根茎中人参皂苷 Rg1 、 Re的含量较高。
关键词:竹节参;　人参皂苷 Rg1、 Re;　薄层色谱;　高效液相色谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)10-1919-02
　　竹节参为五加科植物竹节参 PanaxjaponicusC.A.Mey的干
燥根茎。主产于云南 、四川 、贵州 、陕西及湖北等省。竹节参含人
参皂苷 , 具有滋阴补肾 , 散淤止痛 , 止血祛痰的功效 [ 1] 。其药材
原来主要来自野生 , 但资源有限 , 因此在湖北恩施 、建始 、宣恩 、鹤
峰等地已开始栽培。由于栽培品与野生品生长环境不尽相同 ,栽
培品成长较快 、两者在化学成分上可能存在差异。为此 , 我们对
栽培的竹节参与野生竹节参所含的人参总皂苷进行了比较 ,现报
道如下 。
1　仪器与材料
1.1 　仪器 Waters510液相色谱仪;U6K进样器;Waters486紫外
检测器;Waters746数据处理仪;METTLERTOLEDOAL204型万
分之一电子天平。
1.2 　试剂 乙腈为光谱纯 , 重蒸水 , 磷酸及其他试剂均为分
析纯。
1.3 　对照品 人参皂苷 Rg1、 Re由中国药品生物制品检定所
提供。
1.4 　样品 野生竹节参 ,栽培竹节参(分别种植于海拔 1 560 m
和 950 m),分别采自湖北恩施自治州建始县和恩施市 , 经湖北民
族学院张万福教授鉴定为五加科植物竹节参 PanaxjaponicusC.
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2006VOL.17NO.10 时珍国医国药 2006年第 17卷第 10期