全 文 ：　第 26 卷第 4 期
2007年 7月 　 　 　　　　 　
食 品 与 生 物 技 术 学 报
Journal of Food Science and Biotechnology
　 　 　　　　Vo l.26　No.4Jul.　2007
　文章编号:1673-1689(2007)04-0042-04
　　收稿日期:2006-09-11.
作者简介:陈瑞娇(1969-)女 , 广东南雄人 , 讲师 , 工学硕士.主要从事生物工程理论教学与研究.Email:chrj@
21cn.com
辣木叶总黄酮的提取及其降血糖作用
陈瑞娇 , 　朱必凤 , 　王玉珍 , 　刘主
(韶关学院 英东生物工程学院 ,广东 韶关 512005)
摘　要:采用乙醇回流法从辣木叶中提取黄酮类化合物 ,经 AB-8型大孔吸附树脂柱纯化获得辣
木叶总黄酮(TFM);以四氧嘧啶糖尿病小鼠为动物模型 ,以中成药消渴丸为对照 ,进行 TFM 的降
血糖动物试验研究 。结果表明 TFM 能明显降低糖尿病模型小鼠的血糖 ,同时能提高血清 SOD活
力 ,降低血清 MDA 含量 ,但 TFM 对正常小鼠的血糖水平无影响。
关键词:辣木叶总黄酮;提取;糖尿病;降血糖作用
中图分类号:Q 946.83.9 文献标识码:A
Extraction and Hypolycemic effect of the Total Flavonoid
From leaves of Moringa oleif era
CHEN Rui-jiao , 　ZHU Bi-feng , 　WANG Yu-zhen , 　LIU Zhu
(Yingdong College o f Bio eng ineering , Shaoguan Unive rsity , Shaoguan 512005 , China)
Abstract:In this manuscript , the f lav onoid of Moringa olei f era leaves w as ext racted w ith ethanol
refluxing method , then the crude total f lav onoid w as chormatog raphed by AB-8 microporous
absorbent resins to obtain the to tal flavones of Moringa olei f era leaf (TFM), With al loxan-
induced diabetic mice as animal model , and Xiaoke pill as the control to estimated the ef fect o f
TFM on hypogly cemic.The results show ed that TFM could remarkably decrease the serum
glucose , improve act ivity of se rum SOD and decreased their MDA in allox an-induced diabe tic
mice ,On the o ther hand , it w as found that TFM had no influence on the se rum g lucose level in
nomal mice.
Key words:to tal flavones of Moringa olei fera leaf;ex t ract ion;diabetes;hypog ly cemic effect
　　辣木(Moringa olei f era)为辣木科辣木属植
物 ,原产于印度北部喜马拉雅区域[ 1] ,辣木不仅可
以食用 ,在热带 、亚热带地区还用作植物药材而备
受重视。近年来 ,辣木在我国广东 、云南和海南等
都有引种栽培 , 其产品的开发成为热点。E.Ma-
konnen 等人研究发现辣木叶提取物能在 3 h 内有
效地降低血糖水平[ 2] 。然而目前对其降血糖活性
的物质基础尚不清楚。植物中具有降血糖作用的
成分归纳起来有:生物碱 、黄酮类 、多糖类 、萜类及
皂甙 、多肽 、氨基酸类及不饱和脂肪酸类等。近年
来 ,具有抗氧化和清除自由基作用的黄酮类受到医
药界广泛的重视。因此 ,本实验以韶关引种栽培的
辣木叶为原料 ,提取辣木叶总黄酮 ,研究其降小鼠
血糖的功能作用 ,为辣木资源的利用 、开发预防糖
尿病的药物与保健食品提供依据。
1　材料与仪器
1.1　材料
辣木叶:2005年 7月中旬采自韶关新丰东林农
业开发有限公司种植场;将新鲜的辣木叶洗净 ,自
然风干后于 50 ℃烘箱中烘干 ,粉碎过 100 目筛
备用 。
昆明种小鼠:体重(18 ～ 22)g ,雌雄兼用 ,购于
广东省医学实验动物中心 。
AB-8树脂:南开大学化工厂生产;卢丁:中国
药品生物制品检定所产品;四氧嘧啶:Sigma公司试
剂 ,消渴丸:广州中药一厂产品;血糖试剂盒:保定
长城临床试剂有限公司产品;其他试剂均为国产分
析纯试剂 。
1.2　仪器
HH-W420数显三用恒温水浴锅:江苏金坛荣
华仪器制造厂制造;R201 旋转蒸发器:上海申生科
技有限公司制造;3K18超速冷冻离心机:美国 Sig-
ma 公司制造;Ultrospec2000 紫外/可见分光光度
计:Amersham Pharmacia Bio tech 公司制造 。
2　结果与讨论
2.1　辣木叶总黄酮的提取
称取适量的干燥辣木叶粉 ,以 3 倍量石油醚
(沸程 60 ～ 90 ℃)70 ℃回流去脂 6 h ,共2次 。滤渣
干燥侯用 10倍量 70%乙醇 70 ℃回流提取 3次 ,每
次 2 h ,提取液合并后减压浓缩 ,回收乙醇 ,得辣木
叶总黄酮粗提取液。
2.2　AB-8大孔树脂分离纯化总黄酮
将辣木叶总黄酮粗提液加入 AB-8型大孔吸附
树脂柱中 ,依次用蒸馏水 200 mL ,体积分数 30%乙
醇 、50%乙醇 、70%乙醇各 100 mL 梯度洗脱 ,调节
体积流量为 2 mL/min , 每管收集 25 mL , 以
NaNO 2-Al(NO 3)3-NaOH 体系显色检测 ,在波长为
510 nm下测定吸光度 ,绘制洗脱曲线(见图 1)。由
洗脱曲线可知 , 50%和 70%乙醇洗脱组分中黄酮含
量较高 ,因此确定洗脱条件为先用蒸馏水洗去杂质
后 ,用 3倍柱床体积 50%乙醇和 70%乙醇 50 mL
洗脱 ,收集 50%和 70%的乙醇洗脱部分 ,洗脱液减
压浓缩 ,回收乙醇 ,浓缩液水浴蒸干至浸膏 ,50℃低
温干燥 ,得辣木叶总黄酮(Total Flavones of Mo rin-
ga oleifera ,以下简称为 TFM)粉末 ,测定其总黄酮
含量 。
图 1　AB—8 大孔吸附树脂吸附辣木叶总黄酮梯度洗
脱曲线
Fig.1 　Chromatographic isolation of total flavonoid on
AB-8 microporous absorbent resins column
2.3　总黄酮含量的测定
2.3.1　标准曲线回归方程的建立　精密称取卢丁
对照品 10 mg ,置 50 mL 量瓶中 ,用 30%乙醇定容
至刻度 ,摇匀 ,即得 0.2g/L 的对照液。精密吸取对
照液 0.0 ,1.0 ,2.0 ,3.0 ,4.0 ,5.0和 6.0 mL ,分别置
25 mL 容量瓶中 ,各加 30%乙醇至 10 mL ,摇匀 ,加
5%亚硝酸钠 1 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,加 10%硝酸
铝 1 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,再加 1 mol/L 氢氧化钠
液 10 mL ,用 30%乙醇定容后摇匀 ,放置 15 min ,以
0管作为空白 ,再 510 nm 处测定吸收度(A),测 3
次取平均值 ,以吸光度(A)为横坐标 ,浓度(C)为纵
坐标 ,绘制标准曲线 , 线性回归得回归方程 C=
0.083A+0.000 4 ,相关系数 r=0.999 0。
2.3.2　TFM 中总黄酮含量的测定 　精密称取
TFM 粉末 50 mg ,置 50 mL容量瓶中 ,用 30%乙醇
溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 1.0 mL 置 25
mL 容量瓶中 ,然后再按照标准曲线制备方法测定
吸光度 ,测定结果:TFM 中总黄酮含量为 28.77%
(以卢丁为基准)。
2.4　TFM降血糖活性研究
2.4.1　TFM 对正常小鼠血糖水平的影响 　取正
常小鼠 40只 ,随机分为 4组 ,每组 10只 ,即 TFM
高低剂量组(100 mg/kg , 300 mg/kg),阳性对照组
(XKW 1000 mg/kg)及正常对照组(Control)。均
按 0.20 mL/10 g 体积灌胃给药 ,正常对照组在同
样条件下灌胃生理盐水 ,每日 1 次 ,连续 7 d 。末次
给药前 12 h禁食 ,给药 2 h 后眼眶静脉采血 ,采用
血糖测定试剂盒 ,葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖 ,
所得数据进行组间 t检验 ,结果见表 1 。
　　由表 1可见 ,给药 7 d后 , TFM 高 、低剂量组对
正常小鼠空腹血糖稍有降低作用 ,但与正常对照组
43　第 4期 陈瑞娇等:辣木叶总黄酮的提取及其降血糖作用
比较不存在显著性差异(P>0.05),而阳性药物消
渴丸(XKW)则有明显地降低正常小鼠血糖作用 。
表 1　TFM对正常小鼠血糖的影响
Tab.1　Effect of TFM on normal mice glucose(x±s)
组别 剂量/(mg/ kg) 小鼠数/只 血清葡萄糖浓度/(mmo l/ L)
Normal - 10 7.73±1.61
XKW 1000 10 4.92±1.12＊
TFM Ⅰ 100 10 6.63±1.83
TFM Ⅱ 300 10 7.42±0.65
　注:＊:P<0.05 v s no rmal。
2.4.2　TFM 对四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的降糖
作用　按文献[ 3] 方法造模 ,将正常小鼠禁食 12 h
(自由饮水)后 ,腹腔注射体积分数 2%四氧嘧啶
(200 mg/kg),注射后恢复正常饮食。72 h 后眼眶
静脉丛采血测定空腹血糖(取血前禁食 12 h),血糖
值大于 11.1 mmol/L 者为实验性糖尿病动物模型 。
取造成糖尿病模型者 40只 ,随机分为 4组 ,即模型
对照组 ,阳性对照组(XFW ,1 000 mg/kg), TFM 高
低剂量组(100 mg/kg , 300 mg/kg)。另取 10 只同
批正常小鼠作为正常对照组(N ormal),模型对照组
和正常对照组给予等体积蒸馏水 ,给药方法均同
前 ,连续给药 7 d。末次给药前禁食 12 h ,给药 2 h
后眼眶静脉采血 ,离心分离血清 ,按试剂盒方法测
定空腹血清 、SOD盒 MDA等指标 。
1)TFM 对糖尿病小鼠血糖水平的影响
由表 2可知 ,给药 7 d 后 , TFM 高剂量组的血
清葡萄糖与模型组比较有极显著差异(P>0.01),
TFM 低剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P
<0.05),呈现剂量效应关系 ,且 TFM 高剂量组的
降糖效果稍优于阳性药物消渴丸 。提示 TFM 对四
氧嘧啶糖尿病小鼠有明显的降血糖作用 。
表 2　TFM 对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
Tab.2　Ef fect of TFM on diabetes mellitus mice model estab-
lished by the Alloxan(x±s)
组别 剂量/(mg/ kg) 小鼠数/只 血清葡萄糖浓度/(mmol/ L)
Normal - 10 6.54±1.81
Model - 10 18.7 ± 1.95 △△
XKW 1000 10 8.19±4.17＊
TFM Ⅰ 100 10 9.78±2.10＊
TFM Ⅱ 300 10 7.38±2.07 ＊＊
　注:﹡:P <0.05 , ﹡﹡:P <0.01 vs model ;△△:P <
0.01 vs no rmal。
　　2)TFM 对糖尿病小鼠血清 SOD 和 MDA 的
影响
由表 3可知 ,与模型对照组相比 TFM 高剂量
组能显著提高四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血清 SOD
活性(P <0.05),低剂量组也有一定的升高趋势;而
高 、低剂量组都明显降低了血清中 MDA 的含量(P
<0.05),结果表明 TFM 具有增强糖尿病模型小鼠
机体抗氧化 ,清除脂质过氧化物的能力 。
表 3　TFM对四氧嘧啶糖尿病小鼠 SOD、MDA的影响
Tab.3　Effect of TFM on serum SOD and MDA in alloxan induced hyperglycemic mice
组别 剂量/(mg/kg) 小鼠数/只 血清 SOD/(NU/ mL) 血清 MDA 浓度/(nmol/ m L)
Normal - 10 176.2 ± 20.97 7.00 ± 1.73
Model - 10 157.05±15.32 △ 9.20±1.64△△
XKW 1000 10 182.86±14.36﹡ 6.23±1.78﹡
TFM Ⅰ 100 10 171.69±24.67 7.29±1.13﹡
TFM Ⅱ 300 10 184.36±16.33﹡ 6.99±1.70﹡
　注:＊:P<0.05 , ＊＊:P<0.05 v s model ;△△:P<0.01 vs no rmal。
3　结　语
印度传统医学认为 ,辣木叶有护肝 、消炎 、利
尿 、降压 、止痛 、强心 、催欲等功效 ,常用于预防和治
疗糖尿病 、高血压 、皮肤病 、免疫力低下 、贫血 、佝
偻 、关节炎 、消化器官肿瘤等疾病[ 4] 。黄酮类化合
物广泛存在自然植物中 ,有多种生物活性[ 5] 。本实
验采用 AB-8型大孔吸附树脂对辣木叶总黄酮粗提
液进行分离纯化 ,结果表明 ,在 50%和 70%乙醇洗
脱组分中黄酮含量较高 ,经纯化后的辣木叶总黄酮
的含量可达到 28.77%,文献报道采用 AB-8型树脂
纯化银杏叶提取液和藜蒿黄酮粗提物 ,纯化后其总
黄酮含量分别为 26%以上和 21.98%[ 6-7] 。表明 AB-
44 食　品　与　生　物　技　术　学　报　　　　　　　　　　　　第 26卷　
8型树脂对辣木叶总黄酮有较好的分离纯化作用。
辣木叶总黄酮(TFM)的降血糖活性实验研究
表明 ,TFM 能显著降低四氧嘧啶所致糖尿病小鼠
的血糖 ,明显提高超氧化物歧化酶(SOD)活力 ,减
少脂质过氧化物(MDA)的产生 ,但 TFM 对正常小
鼠血糖水平无明显影响 。研究结果提示 TFM 的作
用机理可能是通过抗氧化作用 ,减轻四氧嘧啶对胰
岛 β细胞损伤 ,或促进已损伤的 β细胞的修复 ,增强
胰岛的分泌功能 ,从而减轻高血糖反应 。TFM 降
血糖的具体作用机理尚有待进一步实验研究 。
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(责任编辑:杨 萌)
45　第 4期 陈瑞娇等:辣木叶总黄酮的提取及其降血糖作用