全 文 ：HPLC法测定藏药猪毛蒿中绿原酸的含量
西藏藏医学院(拉萨 850000)　　　　　　　　　　　　　　　尼玛次仁　格桑顿珠　格桑次仁
江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室(南昌 330004)　廖正根　王光发　　　　　　　
摘　要:目的:建立 HPLC法测定猪毛蒿药材中绿原酸的含量。方法:采用 WatersSymmetry-C18柱(4.6mm0133250mm,
5μm), 甲醇 -水 -磷酸(26:74:0.1)为流动相 , 流速为 1mL· min-1 ,检测波长为 327nm,柱温为 25℃。结果:绿原酸浓度在
2.53 ～ 25.3μg· mL-1之间与峰面积线性关系良好 , r=0.9999;平均回收率为 100.30%, RSD为 1.6%。结论:本法操作简
便 , 重复性好 ,可用于猪毛蒿药材的质量控制。
关键词:猪毛蒿;绿原酸;HPLC;含量测定
中图分类号:R291.4　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)04-0051-02
　　猪毛蒿 ArtemisiascopariaWaldst.etKit, 又名滨蒿 , 为
菊科植物猪毛蒿的带根全草 , 是中药茵陈的植物来源之一 ,
分布于西藏大部分地区及青海等地。常用于清热解毒 , 消
肿 , 主治喉炎 、肺热 、热病引起的肿胀。全草含挥发油 、绿原
酸(chlorogenicacid)、对 -羟基苯乙酮(p-hydroxyaceto-
phenone)和大黄素(emodin)等 〔1〕。其中绿原酸具有广泛的
抗菌作用 , 有利胆 、止血 、增高白血球及抗病毒等药理作
用 〔2, 3〕;可用于治疗上呼吸道感染 , 消炎解热 , 凉血散热。
现行法定药品标准中均未见猪毛蒿的含量测定标准 ,为控
制其原药材的质量 , 本文建立了 HPLC法测定猪毛蒿中绿
原酸含量的方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器:Agilent1200型高效液相色谱仪 , 包括:四元梯
度泵 、真空脱气机 、VWD检测器;TG328A十万分之一电子
天平(德国 Startorius公司);KQ-250VDB型双频数控超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2　试药:绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批
号:110731-200513);猪毛蒿为菊科植物猪毛蒿 Artemisia
scopariaWaldst.etKitag的带根全草 , 采购于西藏自治区 ,经
江西中医学院中药鉴定教研室鉴定;甲醇为色谱纯;水为双
蒸水 , 其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件:色谱柱:WatersSymmetry-C
18
(4.6mm×
250mm, 5μm),甲醇 -水 -磷酸(26:74:0.1)为流动相 , 流
速为 1mL· min-1 , 检测波长为 327nm, 柱温为 25℃;进样
量:20μl。
2.2　对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品 0.
00506g, 置 100mL棕色容量瓶中 , 加 50%甲醇溶解并定容
至刻度 , 摇匀。得浓度为 50.6μg· mL-1的标准品储备液。
2.3　供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约 0.3g,
精密称定 , 置具筛锥形瓶中 , 精密加入 50%甲醇 50mL, 称
定重量 ,回流提取 30分钟 ,放冷 , 再称定重量 , 用 50%甲醇
补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 精密量取续滤液 1mL, 置
10mL棕色量瓶中 , 加流动相定容至刻度 , 摇匀 , 即得。
HPLC图谱见图 1。
图 1　绿原酸对照品(A)、猪毛蒿(B)的 HPLC色谱图
2.4　标准曲线及线性范围:分别精密吸取上述标准品储备
液 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 5.0ml, 置 10ml棕色容量瓶中 , 加
50%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得。分别进样 20μl, 以进样
浓度为横坐标(X), 峰面积为纵坐标(Y), 绘制标准曲线。
结果表明绿原酸在 5.06μg· mL-1 ～ 25.3μg· mL-1范围内
呈良好线性关系 , 回归方程为 Y=58.282X-2.7537, r=0.
9999。
2.5　精密度试验:精密吸取对照品溶液 20μl, 重复进样 6
次 ,测得峰面积积分值 ,计算得 RSD为 0.32%,表明仪器精
密度良好。
2.6　稳定性试验:取本品粉末(过四号筛)约 0.3g, 按 “ 2.
3”项下的供试品溶液制备方法制备供试品溶液 , 精密吸取
供试品溶液 20μl,分别于第 0、2、 4、 8、 12小时进样 , 得绿原
酸含量的 RSD为 0.37%。表明供试品溶液在 12小时内稳
定。
2.7　重复性试验:按 “ 2.3”项下的供试品溶液制备方法制
备供试品溶液 5份 , 进样测定。得绿原酸平均含量为 1.
51%, RSD为 1.41%, 表明本方法重复性良好。
2.8　加样回收率试验:取已知含量的本品粉末(过四号
512009年 4月第 4期　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　 　DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.04.026
筛)约 0.15g,精密称定 , 分别加入精密称定的绿原酸对照
品适量 , 按 “ 2.3”项下的供试品溶液制备方法制备供试品
溶液 9份 , 进行 HPLC测定 ,计算得平均加样回收率及 RSD
见表 1。
表 1　加样回收率试验
取样量
(g)
样品含
量(mg)
对照品
量(mg)
实测量
(mg)
加样回
收率(%)
平均加样回
收率(%)
RSD
(%)
0.1506 2.27 1.82 4.13 102.20
0.1498 2.26 1.81 4.04 98.34
0.1510 2.28 1.82 4.11 100.55
0.1548 2.34 2.34 4.68 99.57
0.1576 2.28 2.28 4.52 98.25 100.30 1.60
0.1513 2.31 2.31 4.64 100.87
0.1528 2.31 2.77 5.12 101.44
0.1545 2.33 2.80 5.20 102.50
0.1567 2.36 2.84 5.17 98.94
表 2　猪毛蒿中绿原酸的含量测定结果
批号 绿原酸的含量(%)( x±SD, n=2)
01 1.51±0.02
02 1.39±0.05
03 1.45±0.03
2.9　样品测定:精密称取 3批猪毛蒿粉末(过四号约 0.
3g, 按 “ 2.3”项下的供试品溶液制备方法制备供试品溶液 2
份。分别精密吸取供试品溶液 、10.12μg· mL-1对照品溶
液各 20μl, 注入高效液相色谱仪 , 按外标法以峰面积计算
含量。结果见表 2。
3　讨　论
本文建立的 HPLC分析方法 , 能使绿原酸的分离度良
好 ,峰面积与各自浓度之间有着良好的线性关系 ,加样回收
率高 ,且操作简便 ,精密度高 , 重复性好 ,可用于猪毛蒿药材
的质量控制。
在选择供试品的制备方法时 , 比较了回流提取与超声
提取两种提取方式并考察了提取时间 , 结果表明回流提取
优于超声提取 ,且回流提取 30分钟即可。提取溶剂的选择
时考察了甲醇 、50%甲醇 、95%乙醇 、50%乙醇 4种溶剂 , 结
果表明 50%甲醇溶剂更利于绿原酸的提取完全。 因此采
用 50%甲醇回流提取 30分钟制备供试品。
参考文献
〔1〕南京中医药大学.中药大辞典(第二版下册)〔M〕.上
海:上海科学技术出版社.
〔2〕张鞍灵 , 马琼 ,高锦明 , 等.绿原酸及其类似物与生物活
性〔J〕.中草药 , 2001, 32(2):173-175.
〔3〕高锦明 , 张鞍灵 , 张康健 , 等.绿原酸分布 、提取与生物
活性研究〔J〕.西北林学院学报 , 1999, 14(2):73-74.
2008年 11月 21日收稿
DeterminationofchlorogenicacidinArtemisiascopariabyHPLC
NIMAciren1 , GSANtunzhu1 , GSANciren1 , LIAOZheng-gen2 , WangGuang-fa2
　　1 ColegeofTibetanmedicine850000, Lasa
　　2 MainlaboratoryofchineseherbalpharmaceuticsincolegeofchinesemedicineofJiangxi330004, Nanchang
Abstract:Objective:TodevelopaHPLCmethodfordeterminationofchlorogenicacidinArtemisiascopariaby
HPLC.Methods:AWatersSymmetry-C18 column(4.6mm×250mm, 5μm)wasusedwiththemobilephaseof
methanol-waterphosphoricacid(26:74:0.1)asthemobilephase;theflowratewas1mL· min-1;thedetection
wavelengthwas327nm;thecolumntemperaturewas25℃.Results:Thecalibrationcurvewaslinearintherange
of2.53 ～ 25.3μg·mL-1(r=0.9999);theaveragerecoverywas100.30%, andRSDwas1.6%.Conclusion:
Themethoddevelopedissimple, convenientandgoodrepeatability.ItcanbeappliedtocontrolthequalityofAr-
temisiascoparia.
Keywords:Artemisiascoparia;chlorogenicacid;HPLC;determination
52 　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2009年 4月第 4期