全 文 ：延边大学医学学报　２０１１年６月　第３４卷　第２期
［基金项目］　延边大学２１１工程项目（ＹＢ２１１－２）．
［收稿日期］　２０１０－１２－１５
＊［通信作者］　张善玉（１９５９—），女（朝鲜族），研究员，研究
方向为天然药物的开发．
ＨＰＬＣ法测定关苍术超临界萃取物中ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的含量
车奇恩１，刘爽１，梁刚１，张善玉２＊
（１．药学院；２．长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室：延边大学，吉林 延吉１３３００２）
［摘要］　 ［目的］建立关苍术超临界萃取物中ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的含量测定方法．
［方法］色谱柱为Ｃ１８柱，以甲醇－乙腈－水（５９．５∶０．５∶４０．０）为流动相，流动速度为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波
长为２２０ｎｍ，柱温为２８℃．［结果］ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ分别在进样量为７０～５６０ｎｇ（ｒ＝
０．９９９　７）和３９～３９０ｎｇ（ｒ＝０．９９９　９）范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为１００．８０％和
１０１．５２％；ＲＳＤ值分别为４．９５和５．７５．［结论］ＨＰＬＣ法灵敏、准确、重现性好，可作为关苍术超临界萃
取物中ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的含量测定方法．
［关键词］　关苍术；色谱法，高压液相；ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ；ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ
［中图分类号］　Ｒ　２８４．１　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　１０００－１８２４（２０１１）０２－０１１５－０３
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠａｎｄ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢｉｎ
ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒｈｉｚｏｍａ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｊａｐｏｎｉｃａ　ｗｉｔｈ　ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｌｕｉｄ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＣＨＥ　Ｑｉ－ｅｎ１，ＬＩＵ　Ｓｈｕａｎｇ１，ＬＩＡＮＧ　Ｇａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈａｎ－ｙｕ２＊
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　Ｃｈａｎｇｂａｉ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　＆Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ
ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ：Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ　１３３００２，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥＴｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｏｆ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ ａｎｄ
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢｉｎ　ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｌｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（ＳＦＥ）ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒｈｉｚｏｍａ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｊａｐｏｎｉｃａ．ＭＥＴＨＯＤＳ
Ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ　ａｓ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ，ｍｅｔｈａｎｏｌ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（５９．５∶０．５∶４０．０）ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ，１．０
ｍＬ／ｍｉｎ　ａｓ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ，２２０ｎｍ　ａｓ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，ａｎｄ　２８℃ａｓ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．ＲＥＳＵＬＴＳＴｈｅ
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠａｎｄ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢｈａｄ　ｆａｖｏｒａｂｌｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　７０—５６０ｎｇ
（ｒ＝０．９９９　７）ａｎｄ　３９—３９０ｎｇ（ｒ＝０．９９９　９），ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．８０％ａｎｄ　１０１．５２％，ａｎｄ　ＲＳＤ
ｗａｓ　４．９５ａｎｄ　５．７５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＴｈｅ　ＨＰＬＣ　ｉｓ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ
ｃａｎ　ｂｅ　ａｓ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠａｎｄ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｊａｐｏｎｉｃａ　ｗｉｔｈ　ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｌｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｊａｐｏｎｉｃａ；ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｈｉｇｈ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｌｉｑｕｉｄ；ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ；ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ
　　 关苍术为菊科植物关苍术 （Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ
ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｋｏｉｄｚ．ｅｔ　Ｋｉｔａｍ）的干燥根茎，性味辛、苦、
温，具有健脾燥湿、发汗行表、明目祛风和避秽之功
效［１］．朝鲜族民间经常把关苍术作为治疗胃溃疡、慢
性胃炎及消化系统疾病的药物，疗效佳．超临界二氧
化碳流体萃取（ＳＦＥ－ＣＯ２）是较新的提取分离技术，
和传统的溶剂法比较具有降低化学成分损失、提高
各种成分的提取率及产品没有有机溶剂残留等优越
性［２］．本实验采用超临界萃取法萃取关苍术中的非
极性 成 分，并 用 ＨＰＬＣ 法 测 定 了 萃 取 物 中
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的含量，旨在为
建立关苍术的有效质量控制方法提供依据．
·５１１·

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｊｕｎ．２０１１　Ｖｏｌ．３４　Ｎｏ．２
１　材料
高 效 液 相 色 谱 仪 为 日 本 岛 津 产，包 括
ＬＣ－１０ＡＴｖｐ泵、ＳＰＤ－１０Ａｖｐ紫外检测器及ＡＴ－３３０柱
温箱．ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ对照品均
为芜湖甙尔塔医药科技有限公司产品；关苍术药材
于２０１０年５月采集于吉林省汪清县，经延边大学药
学院生药学吕惠子副教授鉴定为 Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ
Ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｋｏｉｄｚ．ｅｘ　Ｋｉｔａｍ的根茎；甲醇为色谱级；
水为重蒸水．
２　方法与结果
２．１　关苍术超临界萃取物的制备　取干燥粉碎的
关苍术根茎粉末装入萃取釜，在萃 取 压 力 为
２５ＭＰａ、温度为４５℃、二氧化碳流量为１４５ｋｇ／Ｌ的
条件下萃取２ｈ，得棕色油状物质，得率为４．３％．
２．２　 对 照 品 溶 液 的 制 备 　 分 别 精 密 称 取
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ一定量，分别用
甲醇配制成２８０，２６０ｍｇ／Ｌ溶液，再分别精密量取
２个对 照 品 溶 液，混 合 并 用 甲 醇 稀 释 得
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ （１４ ｍｇ／Ｌ）和 ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ
（１３ｍｇ／Ｌ）对照品混合溶液，过０．４５!ｍ微孔滤膜，
即得．
２．３　供试品溶液的制备　精密称取关苍术超临界
萃取物０．１ｇ，加入５ｍＬ二氯甲烷和１５ｍＬ甲醇，超
声提取１５ｍｉｎ，用甲醇定容至２５ｍＬ．精密吸取上述
溶液１ｍＬ，置于１０ｍＬ容量瓶中，用甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，过０．４５!ｍ微孔滤膜，即得．
２．４　色谱条件　色谱柱为 ＯＤＳ　Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　Ｃ１８柱
［（２５０．０×４．６）ｍｍ，５!ｍ，Ｔｈｅｒｍｏ］；以甲醇－乙腈－
水（５９．５∶０．５∶４０．０）为流动相；流动速度为
１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２２０ｎｍ；柱温为２８℃；进
样量为１０ !Ｌ．在此色谱条件下，理论塔板数按照
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ计，不低于３　０００，分离度大于１．５．
２．５　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ含量测定
２．５．１　分离度考察试验　依法制备对照品溶液和
供试品溶液，在上述色谱条件下分别注入到液相色
谱仪中，得色谱图．在供试品溶液色谱图中，在与
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的对照品溶液
色谱图相应保留时间处分别可见相应峰出现，且分
离良好，见图１．
Ａ：对照品；Ｂ：供试品；ａ：ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ；ｂ：ａｔｒａｃｔｙｌｅ－
ｎｏｉｄｅⅠ．
图１　ＨＰＬＣ色谱图
２．５．２　线性关系考察　取质量浓度为１４ｍｇ／Ｌ的
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ对照品溶液５，１０，１５，２０，２５，４０!Ｌ
和１３ｍｇ／Ｌ　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ对照品溶液３，５，１０，
１５，２０，３０!Ｌ，进样，以进样量为横坐标，峰面积为纵
坐标得ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的回归
方程分别为：Ｙ＝２　０９９．７　Ｘ＋２　４９７．４（ｒ＝０．９９９　７）
和Ｙ＝３　９１６．４　Ｘ－１８　４１３．０（ｒ＝０．９９９　９）．表明
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅ Ⅰ 在 ７０ ～ ５６０ ｎｇ 范 围 内、
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ在３９～３９０ｎｇ时进样量与峰面积
呈良好的线性关系．
２．５．３　精密度试验　按照上述色谱条件，分别进样
质量 浓 度 为 ２８０ ｍｇ／Ｌ 的 ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ 和
２６０ｍｇ／Ｌ的ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ对照品溶液１０!Ｌ，连
续进样５次，ＲＳＤ值分别为０．３６５％和０．３６９％．
２．５．４　稳定性试验　依法制得关苍术超临界萃取
物供试品溶液１份，分别于０，１，２，４，８，１２ｈ进样测
定，测 得 ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ 和 ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ 的
ＲＳＤ 值分别为１．０７％和２．８２％，表明供试品溶液
在１２ｈ内稳定．
２．５．５　重复性试验　称取同一批关苍术超临界提
取物约０．１ｇ，平行５份，分别依法测定，结果见
·６１１·

延边大学医学学报　２０１１年６月　第３４卷　第２期
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的ＲＳＤ 值分别
为２．３６％和２．５２％．
２．５．６　回收率试验　取已知含量的关苍术超临界
萃取 物 一 定 量，分 别 加 入 ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ 和
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ，进行测定，计算结果见表１和
表２．
表１　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ回收率实验
编号
样品质量
／ｍｇ
原样含量
／ｍｇ
测得总量
／ｍｇ
实际加入
量／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
１　 １０．６４　 ０．３２　 ０．６３　 ０．３０８　 ９９．２４
２　 １２．２０　 ０．３７　 ０．６７　 ０．３０８　 ９５．４１
３　 ９．７０　 ０．３０　 ０．５５　 ０．２５２　１０１．６９
４　 ９．９８　 ０．３０　 ０．５５　 ０．２５２　 ９７．１９
５　 １１．１８　 ０．３４　 ０．７１　 ０．３６４　１０１．７０
６　 １０．１８　 ０．３１　 ０．７１　 ０．３６４　１０９．５５
１００．８０　４．９５
表２　ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ回收率实验
编号
样品质量
／ｍｇ
原样含量
／ｍｇ
测得总量
／ｍｇ
实际加入
量／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
１　 １０．６４　 ０．２１　 ０．３７　 ０．１６９　 ９６．０８
２　 １２．２０　 ０．２４　 ０．４０　 ０．１６９　 ９５．４１
３　 ９．７０　 ０．１９　 ０．３１　 ０．１１７　１０２．２１
４　 ９．９８　 ０．２０　 ０．３１　 ０．１１７　 ９９．３７
５　 １１．１８　 ０．２２　 ０．４５　 ０．２２１　１０５．３８
６　 １０．１８　 ０．２０　 ０．４４　 ０．２２１　１１０．６５
１０１．５２　５．７５
２．５．７　样品含量测定　取样品按照２．３项下方法
制备供试品溶液（平行３份），进行测定，以外标法计
算ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ的质量分数，
结果 见 平 均 含 量 分 别 为 ３０．４５ ｍｇ／ｇ（ＲＳＤ ＝
２．０８％）和１９．６６ｍｇ／ｇ（ＲＳＤ＝２．４６％）．
３　讨论
关苍术中含有苍术酮、ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ，Ⅱ，Ⅲ
等桉烷型倍半萜烯类和聚乙炔类及多糖等化合
物［３］，其中ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ对唾液淀粉酶活性有增
强作用［４］，ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅢ具有抗肿瘤作用，对小鼠
肉瘤Ｓ１８０的抑制率高于３０％，还具有调节胃肠道
功 能 和 促 进 营 养 物 质 吸 收 的 功 能 等［５］．
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和Ⅲ为关苍术药材的主要活性成
分，因此本实验测定了关苍术超临界萃取物中
ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅⅠ和Ⅲ的含量．本实验参考相关文献，
并进行了色谱条件的探索，实验中应用过乙腈、乙腈
∶水和甲醇、甲醇∶水等不同比例流动相，结果发现
甲醇－乙腈－水（５９．５∶０．５∶４０．０）可得到良好的分
离．本实验结果表明，ＨＰＬＣ法准确、稳定、灵敏，可
用于测定关苍术超临界萃取物中ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｉｄｅ
Ⅰ和Ⅲ的含量，可做为关苍术质量控制的有效方法
之一．
［参　考　文　献］
［１］　吉林省中医中药研究所．长白山植物药志［Ｍ］．长春：
吉林人民出版社，２００２：５０．
［２］　严嘉，童明伟，林崐．超临界ＣＯ２ 萃取在中草药研究中
的应用［Ｊ］．重庆大学学报：自然科学版，２００５，２８（８）：
１１２－１１５．
［３］　李英姬，朴惠善．关苍术的研究进展［Ｊ］．中国野生植物
资源，２００２，２１（１）：１２－１４．
［４］　郝延军，桑育黎，李宝林，等．白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ
对唾液淀粉酶活性的影响［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７
（９）：１６１７－１６１８．
［５］　李翠芹，贺浪冲，邓婷．白术内酯Ⅲ在大鼠体内的药代
动力学和组织分布特性［Ｊ］．中药材，２００６，２９（８）：８０７－
８０９．?
欢迎投稿，欢迎订阅
２０１１年《延边大学医学学报》
·７１１·
