全 文 ：看出，70%乙醇除杂后天麻钩藤饮使得大鼠血小板聚集时间有了
明显的延长。天麻钩藤饮口服液对大鼠血小板聚集功能的影响
得出:空白组血小板聚集时间为(13． 4 ± 1． 3)s，高、中、低剂量组
的聚集时间分别是:(42． 5 ± 2． 7)、(40． 9 ± 2． 2 )、(36． 1 ± 4． 0 )
s。与空白组相比，各剂量组血小板的凝聚时间均有所延长:低剂
量组将血小板聚集时间延长了 22． 7s;中剂量组延长了 27． 5s;高
剂量组延长了 29． 1s，70%乙醇除杂后天麻钩藤饮使得大鼠血小
板聚集时间有了明显的延长。
天麻钩藤饮起效剂量较低，作用半衰期也比较短，提示在用
于临床镇静治疗时，降低天麻钩藤饮给药量，并缩短给药间隔时
间可取得较好的疗效［8］。但是，汤剂本身的特殊性质在一定程
度上制约了其在治疗疾病方面的发展，本文将其制备成便于服用
和保存的 70%乙醇除杂后天麻钩藤饮，并通过药效学的研究，
70%乙醇除杂后天麻钩藤饮在改善高血压症状上可能发挥着一
定的药效，为天麻钩藤饮口服液的进一步研究与开发提供一定的
理论基础。
参考文献:
［1］ 刘喜平．方剂学笔记图解［M］．北京:化学工业出版社，2009:130．
［2］ 毛丽军，周韶华． 神经科方药心得［M］． 北京:科学出版社，2010:
69．
［3］ 乔文军．天麻钩藤饮加减治疗原发性高血压的临床观察［J］． 吉林
中医药，2007，27(2):17．
［4］ 徐宝石，李晓宇．天麻钩藤颗粒对高血压患者 24 小时血压的影响
［J］．医学信息(中旬刊)，2010，5(2) :3743．
［5］ 龙梦林．正交试验法优选天麻钩藤胶囊提取工艺研究［J］． 中国医
药导报，2011，8(13):60．
［6］ 张远梅．高血压伴高脂血症患者血小板聚集功能变化分析［J］． 吉
林医学，2012，33(9):1815．
［7］ 刘旺华，周小青，李 花，等．丹龙醒脑片对脑血栓形成大鼠脑血管
通透性及对花生四烯酸代谢的影响［J］．中西医结合心脑血管病杂
志，2005，3(9):776．
［8］ 赵智强，王小勤，陆跃鸣，等．镇肝熄风汤与天麻钩藤饮对小鼠自发
活动抑制作用的药效动力学研究［J］．南京中医药大学学报，1996，
12(6):23．
国药鉴别
收稿日期:2014-09-11; 修订日期:2015-02-06
基金项目:内蒙古自治区自然科学基金(No． 2011MS1211)
作者简介:王俊杰(1963-)，男(汉族)，内蒙古土默特左旗人，内蒙古医科
大学附属人民医院副主任药师， 主要从事药品质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:乔俊缠(1961-)，男(汉族)，内蒙古清水河人，内蒙古医
科大学教授，学士学位，主要从事中药新药研发及质量标准研究工作．
* 通讯作者简介:任常胜(1958-)，男(汉族)，内蒙古托克托人，内蒙古医
科大学教授，学士学位，主要从事中药药效及有效成分研究工作．
线叶菊的高效液相色谱指纹图谱研究
王俊杰1，马睿婷2，乔俊缠3* ，任常胜4*
(1．内蒙古医科大学附属人民医院，内蒙古 呼和浩特 010010;
2．内蒙古精神卫生中心，内蒙古 呼和浩特 010010; 3．内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010110;
4．内蒙古医科大学中医学院，内蒙古 呼和浩特 010110)
摘要:目的 建立线叶菊药材的 HPLC 指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法 采用 C18色谱柱
(250mm ×4． 6mm，5． 4μm);以甲醇 － 0． 04%冰醋酸水连续梯度洗脱，检测波长 300nm;柱温 30℃;体积流量 1． 0ml /min;测
定 11 批线叶菊药材的色谱图，确立标准指纹图谱。结果 运用梯度洗脱能够很好的分离线叶菊药材的各类成分，在测定
的 11 批药材中，有 12 个共有峰，样品指纹图谱相似度均在 0． 9 以上，经方法学验证，符合指纹图谱技术要求。结论 该法
简便、准确、重现性好，可作为线叶菊药材鉴定和质量评价的依据。
关键词:线叶菊; 高效液相色谱法; 指纹图谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2105． 05． 042
中图分类号:Ｒ282． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2015)05-1141-03
线叶菊 Filifolium sibiricum(L．)Kitam又名兔毛蒿、西伯利亚
艾菊、消疔草等，是菊科线叶菊属植物，其地上部分入药，具有清
热解毒、凉血、安神、镇“赫依”之功效，临床上用于治疗“粘”性
热、血瘀刺痛、月经不调、臁疮、心悸失眠、疔疮痈肿、中耳炎等
症［1 ～ 3］。研究证明该药对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和痢疾杆菌
等均有一定的抑制作用，并有镇静作用及其它生理活性［4，5］。线
叶菊的主要化学成分为黄酮类、挥发油、香豆精、鞣质、多糖及酸
性成分等，其抗菌主要成分为兔毛蒿素、北美圣草素、万寿菊黄素
3，6 －二甲醚等黄酮类化合物［6］。目前，对线叶菊药材的质量控
制研究报道甚少，仅有对总黄酮的定量测定［7］，对药材的质量控
制专属性不强。本研究采用 HPLC法建立了线叶菊药材的 HPLC
指纹图谱，得到能够标示其特性的共有色谱峰图谱，为线叶菊药
材提供了鉴定和质量评价的依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器与试剂 日立 L － 2000 高效液相色谱仪(二元泵，DAD
检测器);Alltech C18色谱柱(250mm ×4． 6mm，5． 4 μm);电子天平
(梅特勒 －托利多仪器有限公司);HHHS 型恒温水浴箱(上海博
迅实业有限公司医疗设备厂);KQ － 250DE 型数控超声波仪(昆
山市超声仪器有限公司);Milli － Q 纯水仪(美国)。甲醇(色谱
纯，Fisher)，其他试剂均为分析纯。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期
1． 2 药材 实验所用线叶菊药材批号、来源及采集日期见表 1。
表 1 线叶菊药材批号、来源及采集日期
批号 来源 采集日期
1 内蒙古呼和浩特市新城区小井沟生态园 2009 － 06 － 08
2 内蒙古呼和浩特市武川县大青山乡 2009 － 07 － 13
3 内蒙古呼和浩特市和林格尔县南天门林场 2010 － 07 － 16
4 内蒙古呼和浩特市保合少乡大青山避暑山庄 2010 － 08 － 18
5 内蒙古乌兰察布市凉城县蛮罕山林场 2010 － 09 － 02
6 内蒙古赤峰市赛罕乌拉国家级自然保护区 2011 － 07 － 04
7 内蒙古呼和浩特市新城区古路板林场 2011 － 08 － 26
8 内蒙古锡林郭勒盟白音锡勒牧场 2012 － 07 － 10
9 内蒙古通辽市扎鲁特旗罕山林场 2012 － 07 － 20
10 内蒙古锡锡林郭勒盟西乌珠穆沁旗 2012 － 07 － 06
11 内蒙古通辽市扎鲁特旗巴雅尔吐胡硕镇 2012 － 07 － 22
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 Alltech C18色谱柱(250mm × 4． 6mm，5． 4μm);流
动相为甲醇(A)－ 0． 04%冰醋酸水(B)，梯度洗脱(0 ～ 5min，
25%A;5 ～ 12min，25%A ～35%A;12 ～ 27min，35% A;27 ～ 35min，
35%A ～40%A;35 ～ 50min，40% A ～ 45% A;50 ～ 60min，45% A ～
50%A;60 ～ 70min，50% A;70 － 90min，50% A － 60% A;检测波长
为 300nm;柱温 30℃;体积流量 1． 0ml /min;进样量 10μl。
2． 2 供试品溶液的制备 取线叶菊药材粉末(过 60 目筛)0． 5g，
精密称定，置 100ml 圆底烧瓶中，加 70%乙醇 30ml，85℃水浴中
回流提取 2h，滤过，用少量 70%乙醇洗涤容器，合并滤液和洗涤
液，蒸干，用 15ml甲醇超声溶解并定容于 25ml量瓶中，精密吸取
2ml，用甲醇定容于 10ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜(0． 45 μm)滤
过，作为供试品溶液。
2． 3 样品 HPLC图谱测定 精密吸取供试品溶液 10μl，注入高效
液相色谱仪，按照上述色谱条件进行检测，记录 90min的色谱图，
见图 1。
图 1 线叶菊药材的 HPLC指纹特征图谱
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度试验 取同一批线叶菊药材，按
“2． 2”项下方法制备供试品溶液，连续进样 5 次，测定 HPLC色谱
图，选择 12 个共有峰进行比较，结果表明各共有峰相对保留时间
的 ＲSD 为 0． 48% ～ 1． 5%，相对峰面积的 ＲSD 为 0． 26% ～
2． 82%，表明仪器精密度良好，共有峰的相对保留时间和峰面积
比值的 ＲSD均符合指纹图谱检测要求。
2． 4． 2 重复性试验 取同一批线叶菊药材 5 份，按“2． 2”项下方
法制备供试品溶液，测定其 HPLC色谱图。结果各共有峰相对保
留时间的 ＲSD 为 0． 07% ～ 1． 9%，相对峰面积的 ＲSD 为 0． 23%
～ 2． 94%，表明该方法的重复性良好，共有峰的相对保留时间和
峰面积比值的 ＲSD均符合指纹图谱检测要求。
2． 4． 3 稳定性试验 取同一批线叶菊药材，按“2． 2”项下方法制
备供试品溶液，分别于 0，1． 5，3，6，12h进样，测定 HPLC 色谱图，
对 12 个共有峰进行比较。结果各共有峰相对保留时间的 ＲSD
为 0． 55% ～ 3%，相对峰面积的 ＲSD 为 0． 24% ～ 2． 98%，表明样
品在 12h内稳定性良好。
2． 5 指纹图谱及技术参数
2． 5． 1 指纹图谱 取 11 批线叶菊药材，分别按“2． 2”项下方法制
备供试品溶液，测定 HPLC色谱图，根据检测结果，建立线叶菊药
材的高效液相色谱指纹图谱。见图 2。
图 2 线叶菊药材的 HPLC指纹图谱
2． 5． 2 共有指纹峰的最终确定 采用相对保留时间标定共有指
纹峰。在比较分析各色谱图的基础上，用国家药典委员会颁布的
中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版，根据 11 个供试品
HPLC谱给出的相关技术参数，标定线叶菊药材的共有指纹峰。
以 7 号峰为参照色谱峰，以峰的共有率大于 80%为依据，其中 12
个峰为各样品所共有，故最终确定这 12 个峰为共有指纹峰。线
叶菊药材指纹图谱中共有指纹峰的相对保留时间的计算结果见
表 2。
表 2 线叶菊药材指纹图谱共有峰的相对保留时间
批号
各峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0． 0554 0． 1369 0． 2172 0． 4804 0． 5436 0． 8977 1 1． 2297 1． 2850 1． 3810 1． 5442 1． 6677
2 0． 0556 0． 1408 0． 2326 0． 4791 0． 5381 0． 8981 1 1． 2289 1． 2856 1． 3838 1． 5430 1． 6649
3 0． 0566 0． 1419 0． 2347 0． 4781 0． 5477 0． 9016 1 1． 2341 1． 2901 1． 3886 1． 5539 1． 6753
4 0． 0559 0． 1375 0． 2298 0． 4761 0． 5452 0． 9009 1 1． 2350 1． 2911 1． 3893 1． 5336 1． 6772
5 0． 0565 0． 1394 0． 2183 0． 4686 0． 5178 0． 8844 1 1． 2102 1． 2656 1． 3641 1． 5289 1． 6424
6 0． 0569 0． 1398 0． 2185 0． 4716 0． 5150 0． 8840 1 1． 2200 1． 2784 1． 3807 1． 5599 1． 6792
7 0． 0559 0． 1392 0． 2260 0． 4667 0． 5202 0． 8831 1 1． 2084 1． 2640 1． 3605 1． 5273 1． 6394
8 0． 0558 0． 1370 0． 2283 0． 4778 0． 5349 0． 8991 1 1． 2327 1． 2902 1． 3857 1． 5505 1． 6747
9 0． 0554 0． 1362 0． 2307 0． 4806 0． 5376 0． 8991 1 1． 2283 1． 2870 1． 3805 1． 5428 1． 6656
10 0． 0552 0． 1385 0． 2291 0． 4799 0． 5375 0． 8991 1 1． 2304 1． 2870 1． 3805 1． 5460 1． 6698
11 0． 0552 0． 1316 0． 2180 0． 4719 0． 5406 0． 9025 1 1． 2385 1． 2942 1． 3939 1． 5721 1． 6865
ＲSD /% 0． 0567 0． 2646 0． 0062 0． 4751 1． 0900 0． 7200 0 0． 9447 0． 9604 0． 9661 1． 2702 1． 3950
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2． 5． 3 共有指纹峰的相对峰面积 以 7 号峰为参照色谱峰，将各
共有指纹峰的峰面积与同一色谱图中参照色谱峰的峰面积比较，
其比值为各共有指纹峰的相对峰面积。见表 3。
2． 5． 4 非共有峰的面积 通过对 11 批线叶菊药材供试品的测
定，统计各批非共有峰面积比，其结果为非共有峰面积百分比在
5． 3% ～ 9． 4%，符合指纹图谱研究的检测要求(小于 10%)。结
果见表 4。
表 3 线叶菊药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
批号
各峰相对峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0． 0169 0． 0276 0． 8158 0． 2086 0． 1285 0． 3377 1 0． 0264 0． 7364 0． 0336 0． 0093 0． 2023
2 0． 0243 0． 0371 0． 9189 0． 1989 0． 1310 0． 3087 1 0． 0266 0． 7787 0． 0426 0． 0200 0． 2114
3 0． 0169 0． 0109 0． 8819 0． 1880 0． 1330 0． 3188 1 0． 0260 0． 7402 0． 0352 0． 0097 0． 2008
4 0． 0027 0． 0096 0． 2741 0． 0191 0． 0549 0． 1332 1 0． 0244 0． 8622 0． 0317 0． 0111 0． 1140
5 0． 0011 0． 0052 0． 0132 0． 0274 0． 0513 0． 0605 1 0． 0263 0． 8293 0． 0423 0． 0106 0． 2058
6 0． 0021 0． 0096 0． 2739 0． 0196 0． 0542 0． 1365 1 0． 0423 0． 8412 0． 0513 0． 0115 0． 1854
7 0． 0022 0． 0106 0． 2860 0． 0189 0． 0542 0． 1358 1 0． 0284 0． 8297 0． 0434 0． 0139 0． 1783
8 0． 0025 0． 0095 0． 2778 0． 0279 0． 0540 0． 1376 1 0． 0322 0． 8284 0． 0421 0． 0107 0． 1915
9 0． 0057 0． 0353 0． 8822 0． 1353 0． 0189 0． 1417 1 0． 0429 0． 8215 0． 0693 0． 0287 0． 2744
10 0． 0210 0． 0314 0． 9502 0． 2043 0． 1305 0． 3318 1 0． 0250 0． 7654 0． 0299 0． 0104 0． 2146
11 0． 0102 0． 0237 0． 5163 0． 1231 0． 0852 0． 3483 1 0． 0318 0． 7851 0． 0562 0． 0236 0． 2680
平均 0． 0096 0． 0191 0． 5537 0． 1065 0． 0814 0． 2173 1 0． 0302 0． 8016 0． 0434 0． 0145 0． 2042
2． 5． 5 线叶菊药材 HPLC 指纹图谱的相似度评价 采用国家药
典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版计
算各样品之间的相似度，结果显示，11 批线叶菊药材相似度范围
为 0． 9000 ～ 1． 0000，达到指纹图谱相似度的要求，见表 5。
表 4 线叶菊药材非共有峰面积
批号 总面积 共有峰面积 非共有峰面积 百分比 /%
1 10101356 9391350 710006 7． 02
2 10213895 9578427 635468 6． 22
3 9960625 9242517 718108 7． 20
4 26434604 24752181 1682423 6． 36
5 48580088 45090088 3490000 7． 18
6 27949483 26336046 1613437 5． 77
7 27364480 25755967 1608513 5． 87
8 27531261 26071451 1459810 5． 30
9 14413679 13377509 1036170 7． 19
10 10182123 9239434 942689 9． 25
11 14707334 13323946 1383388 9． 40
表 5 线叶菊药材相似度计算结果
批号 相似度
1 0． 988
2 0． 918
3 0． 947
4 0． 942
5 0． 922
6 0． 963
7 1． 000
8 0． 980
9 0． 908
10 0． 922
11 0． 934
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 利用二极管阵列检测器对指纹图谱的检
测波长进行了选择，从 200 ～ 400nm进行扫描，结果表明在 300nm
波长下色谱峰数量最多，主要色谱峰的面积大，且 HPLC 因梯度
洗脱导致的基线漂移而引起的误差最小，所以选择 300nm 作为
检测波长。
3． 2 流动相的选择 考察了不同组分、不同比例以及不同洗脱梯
度的流动相的分离效果，结果表明在本实验所采用的流动相条件
下，色谱图基线平稳，色谱峰分离度好且保留时间适宜。
3． 3 参照峰的选择 通过对 11 批线叶菊药材的 HPLC色图谱进
行系统考察，发现 7 号峰量高且相对稳定，因此选其作为参照峰。
3． 4 供试品提取方法的选择 考察了乙醇浓度、倍量、提取时间
及提取次数，结果表明，以 60 倍量的 70%乙醇回流提取 2h 一次
即可提取完全，同时也对超声提取进行了考察，结果 HPLC 图谱
显示峰数显著减少，因此确定本实验提取方法。
实验结果表明，利用 HPLC指纹图谱法对线叶菊药材进行鉴
定，具有简便、准确、重现性好的特点，可作为该药材鉴定和质量
评价的依据。
参考文献:
［1］ 冉先德．中华药海［M］．哈尔滨:哈尔滨出版社，1993:1434．
［2］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海科学技术出版社，
1986:1162．
［3］ 毕立夫．蒙药质量标准化研究［M］．呼和浩特:内蒙古人民出版社，
2007:551．
［4］ 杨丽敏，马睿婷，乔俊缠，等．线叶菊总黄酮抗细菌性感染实验研究
［J］．中草药，2012，43(12):2471．
［5］ 吴景时，姚志国，秦泗军，等． 线叶菊的药理初步研究［J］． 药学通
报，1979，14(2):87．
［6］ 王栋．兔毛蒿有效成分的研究［J］．药学学报，1984，19(6):441．
［7］ 乔俊缠，陈 理，刘 涛，等．线叶菊总黄酮含量测定［J］．中草药，
1998，29(7):453．
·3411·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期