全 文 ：第３９卷　第１０期 西 南 师 范 大 学 学 报 （自然科学版） ２０１４年１０月
Ｖｏｌ．３９　 Ｎｏ．１０　　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｏｃｔ．２０１４
ＤＯＩ：１０．１３７１８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｘｓｘｂ．２０１４．１０．０１７
雪胆口服液的制备及热加速评价
①
郭丽华，　刘在青，　肖建森，　李　莎，　王　静
山东德州神牛药业有限公司，山东 德州２５３０３４
摘要：目的：优化雪胆口服液制备工艺．方法：以雪胆甲素为评价指标，采用正交设计优化口服液提取工艺并考察
所制备样品的稳定性．结果：最佳提取工艺条件为提取温度６０℃，提取时间４ｈ，提取次数４次，料液比１∶８，在
此条件下制得口服液中雪胆甲素含量最高为１０．５６ｍｇ／ｍＬ．结论：雪胆口服液制备方法简单且产品质量稳定；雪
胆甲素含量测定方法灵敏度高、专属性强、重现性好．
关　键　词：雪胆口服液；雪胆甲素；正交试验；提取；热加速
中图分类号：Ｒ２８　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１０００－５４７１（２０１４）１０－００８７－０５
中药雪胆为葫芦科雪胆属植物（Ｈｅｍｓｌｅｙａ　ａｍａｂｉｌｉｓ　Ｄｉｅｌｓ）的干燥块根，主要有峨眉雪胆（Ｈ．ｅｍｉｅｎｓｉｓ）、
彭县雪胆 （Ｈ．ｐｅｎｇｘｉａｎｅｎｓｉｓ）、圆果雪胆 （Ｈ．ａｍａｂｉｌｉｓ）、长果雪胆 （Ｈ．ｄｏｌｉｃｈｏｃａｒｐａ）、巨花雪胆
（Ｈ．ｇｉｇａｎｔｈａ）等［１］．云南、四川、贵州三省是中国雪胆属植物的主要分布区［２］．雪胆性味苦、寒，具有清热
解毒，消肿止痛，抗菌消炎功效，常被用于菌痢、肠炎、呼吸道感染、妇科感染等感染性疾病，具有疗效显
著，无耐药性，用药剂量小等特点［３］．研究人员从雪胆中提取出了雪胆甲素、雪胆乙素、雪胆皂苷、齐墩果
酸等成分，药理实验表明这些化学成分具有广谱抗菌、抗炎、抗肿瘤、保护心肌等活性［４］，尤其以雪胆素的
抗菌［５－６］、抗炎［７］作用最为明显．据文献报道，彭县雪胆中雪胆甲素含量高达（５．３±０．４）ｍｇ／ｇ，雪胆甲素
能够通过抑制葡萄球菌细胞壁的合成进而起到抑菌作用［８］，是雪胆抗菌作用的最主要活性成分．
本文以彭县雪胆为原料，采用正交设计法优化提取工艺，制备了雪胆口服液．该制备方法操作简便，
成本低，重现性好，制得的口服液质量稳定，雪胆甲素含量高，值得进一步探索其临床疗效．
１　仪器与材料
ＤＦ－１０１Ｓ集热式恒温加热磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）；高效液相色谱仪（ＬＣ－２０ＡＢ，日本
岛津公司）；十万分之一分析天平（瑞士梅特勒－托利多公司）
彭县雪胆（购于四川彭县，按中国药典鉴定为真品），雪胆甲素对照品（中国药品生物制品检定所，纯
度：９９．６０％，批号：１１１５１８－２００６０２），自制雪胆口服液（批号：２０１２０５０１，２０１２０５０２，２０１２０５０３），乙腈（色
谱纯，ｄａｍａｓ－ｂｅｔａ），其余试剂为分析纯．
２　方法与结果
２．１　雪胆口服液制备工艺优化
２．１．１　提取溶剂的选择［９］
雪胆甲素易溶于乙醇、甲醇或氯仿，溶于丙酮或乙酸乙酯，微溶于乙醚，不溶于水、石油醚或环己烷．
综合考虑提取效率、生产过程中带来的有关物质、环保及生产成本，选用９５％乙醇为溶媒．
① 收稿日期：２０１３－０８－１７
基金项目：山东省现代农业产业技术体系建设专项（Ｎｏ．ＳＤＡＩＴ－０６－０１１－０２）．
作者简介：郭丽华（１９８０－），女，山东德州人，主管药师，主要从事药物制剂生产及工艺方面的研究．
２．１．２　提取工艺
参照文献［１０］进行提取：彭县雪胆１００ｇ，粉碎至６０目，加入三颈烧瓶中，按照提取方案选择适宜的
提取温度、提取时间、料液比和提取次数．提取完成后，上清液合并过滤，残渣加入９５％乙醇１００ｍＬ洗涤过
滤后并入上清液，旋蒸回收乙醇至８０ｍＬ，过滤，９５％乙醇定量至１００ｍＬ，即得１ｍＬ∶１ｇ的雪胆口服液．
２．１．３　正交试验
在预实验基础上，选择对提取收率有较大影响的料液比（Ａ）、提取温度（Ｂ）、提取时间（Ｃ）和提取次数
（Ｄ）为影响因素，以口服液中雪胆甲素含量为考察指标，按Ｌ９（３４）正交表设计试验［１１］，因素水平表见表１，
实验设计及结果见表２．
表１　因素水平表
水　平
因　　　素
Ａ　 Ｂ／℃ Ｃ／ｈ　 Ｄ
１　 １∶８　 ６０　 ４　 ４
２　 １∶７　 ５０　 ３　 ３
３　 １∶６　 ４０　 ２　 ２
　　表２表明，以雪胆甲素含量为评价指标时，４个因素对提取效果的影响依次为Ｄ，Ｃ，Ｂ，Ａ，最佳提取工
艺为Ａ１Ｂ１Ｃ１Ｄ１，即料液比为１∶８，提取温度为６０℃，提取时间为４ｈ，提取次数为４次．
表２　Ｌ９（３４）正交试验设计与结果
试验号
因　　素
Ａ　 Ｂ　 Ｃ　 Ｄ
结　　果
含量／（ｍｇ·ｍＬ－１）
１　 ３　 ３　 ３　 ３　 １０．５６
２　 ３　 ２　 ２　 ２　 ８．８０
３　 ３　 １　 １　 １　 ７．７０
４　 ２　 ３　 ２　 １　 ７．９５
５　 ２　 ２　 １　 ３　 ８．３８
６　 ２　 １　 ３　 ２　 ９．３４
７　 １　 ３　 １　 ２　 ８．６８
８　 １　 ２　 ３　 １　 ８．４５
９　 １　 １　 ２　 ３　 ８．９４
Ｋ１ ９．０２　 ９．０６　 ９．４５　 ９．２９
Ｋ２ ８．５６　 ８．５４　 ８．５６　 ８．９４
Ｋ３ ８．６９　 ８．６６　 ８．２５　 ８．０３
Ｒ　 ０．４６　 ０．５２　 １．２　 １．２６
２．２　口服液中雪胆甲素含量测定［１２－１４］
２．２．１　色谱条件与系统适用性
色谱柱：Ｄｉａｍｎｏｓｉｌ　ＴＭＯＤＳ柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－水（４０∶６０）；流速：０．８ｍＬ／
ｍｉｎ；检测器：蒸发光散射检测器，检测温度１００℃，载气流速２．６ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５℃；检测波长：２１０
ｎｍ；进样量１０μＬ．在此色谱条件下，雪胆甲素色谱峰的保留时间为１５．６７ｍｉｎ，理论塔板数应不低于
３　０００，雪胆甲素对照品色谱图见图１，雪胆口服液色谱图见图２．
２．２．２溶液的制备
精密称取雪胆甲素对照品２０．８８ｍｇ置于２５ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照
品储备溶液，浓度为８３１．８６μｇ／ｍＬ；精密量取自制雪胆口服液１ｍＬ置２５ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释并定容
至刻度，摇匀，溶液经０．４５μｍ微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液．
２．２．３　专属性试验
取等量自制雪胆口服液各５ｍＬ，分别用２．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液，２．０ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液及６％过氧化
氢溶液稀释至１０ｍＬ，在室温下放置２４ｈ，分别作为酸、碱和氧化破坏样品．另取２份自制雪胆口服液各５
ｍＬ，用水稀释至１０ｍＬ，其中１份置于１３０℃烘箱中６ｈ后，甲醇定容至１０ｍＬ，作为高温破坏样品；另一
份于４５００±５００Ｌｘ光照下放置７２ｈ，作为强光照破坏样品．所有破坏试验样品分别在“２．２．１”项色谱条
件下进样测定，色谱图见图３．
８８ 西南师范大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　第３９卷
图１　雪胆甲素对照品色谱图 图２　雪胆口服液色谱图
Ａ．酸破坏；Ｂ．碱破坏；Ｃ．氧化破坏；Ｄ．强光照破坏；Ｅ．高温破坏
图３　雪胆口服液专属性试验
２．２．４　线性关系的考察
精密量取上述对照品储备液１，２，４，６，８，１０ｍＬ于１０ｍＬ容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系
列溶液中标准品浓度分别为８３．１９，１６６．３７，３３２．７４，４９９．１２，６６５．４９，８３１．８６μｇ／ｍＬ，按“２．２．１”项色谱条
件，上述一系列溶液分别进样测定，记录峰面积．并分别以物质浓度Ｘ 为横坐标，峰面积Ｙ 为纵坐标，绘
制标准曲线，线性回归方程为：Ｙ＝０．９６８　１　Ｘ＋１．６８７　２，ｒ２＝０．９９９　８，雪胆甲素的浓度与峰面积在此色谱
条件下均呈现良好线性关系．
２．２．５　精密度试验
日内精密度：同一日内第０，２，４，８，１２和２４ｈ分别进样测定“２．２．２”项中对照品储备溶液，记录峰面
积，不同时刻峰面积的ＲＳＤ＝０．７１％．
日间精密度：连续５日进样测定对照品储备溶液，记录峰面积，连续５天所得峰面积的ＲＳＤ＝０．９４％．
２．２．６　回收率试验
精密称取不同质量的雪胆甲素标准品，分别加入浓度已知的雪胆口服液，制备成不同浓度（８０％，
９８第１０期　　　　　　　　　　　郭丽华，等：雪胆口服液的制备及热加速评价
１００％，１２０％）的待测溶液各３份，按“２．２．１”项方法分别测定最终浓度，计算加样回收率．低、中、高３种
浓度下的平均回收率分别为１００．５１％，９９．８３％和１００．３５％（ｎ＝３）．
２．２．７　自制口服液样品含量测定方法及结果
精密量取雪胆口服液１ｍＬ于２５ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，溶液经０．４５μｍ微孔
滤膜滤过，续滤液作为待测样品溶液；另取适量雪胆甲素标准品，精密称定，经同法处理后，取续滤液作为
对照品溶液．按“２．２．１”项色谱条件，分别进样测定样品及对照品溶液，记录各自峰面积，外标法计算口服
液中药物含量．测得３批（２０１２０５０１，２０１２０５０２，２０１２０５０３）自制雪胆口服液中雪胆甲素含量分别为９．５８，
９．４９，９．５２ｍｇ／ｍＬ．
２．３　雪胆口服液稳定性考察［１５］
本文按照《中华人民共和国兽药典》一部“稳定性试验指导原则”，本文对自制雪胆口服液进行加速试
验：在温度为４０℃±２℃，相对湿度为７５％±５％的条件下，放置６个月，考察结果见表３．
表３　加速试验结果
时间／月
考　察　指　标
性状 澄明度 ｐＨ 雪胆甲素含量／（ｍｇ·ｍＬ－１）
０ 淡黄色 澄清 ４．３　 ９．５８
１ 淡黄色 澄清 ４．２　 ９．６１
２ 淡黄色 澄清 ４．２　 ９．５２
３ 淡黄色 澄清 ４．１　 ９．４１
４ 淡黄色 澄清 ４．０　 ９．３３
５ 淡黄色 澄清 ３．９　 ９．３１
６ 淡黄色 澄清 ３．９　 ９．２５
　　加速试验结果表明，雪胆口服液制备工艺设计合理，制剂稳定性良好，可将雪胆口服液的有效期暂定
为２年．
３　讨　　论
近年来，由于化学药物及抗生素在养殖业中的大量滥用，不仅引发了严重的食品安全问题，同时也造
成了病原体耐药现象在全球范围内迅速蔓延，加速了超级细菌［１６］、超级病毒的出现，给人类和动物生存均
带来严重威胁．中药及天然药物不仅有耐药性低，无残留，副作用小等优点，研究还发现部分药物具有恢
复耐药细菌对抗生素敏感性的能力［１７］，有报道称雪胆提取物作用后，细菌对强力霉素的耐药率下降
６．６７％［１８］．因此，中药现代化研究越来越受到人们重视．
据报道称，雪胆甲素对白血病细胞［１９］、非小细胞肺癌Ａ５４９细胞等肿瘤细胞具有抑制作用［２０］，并推测
其能够通过引起肌动蛋白聚集而破坏微丝细胞骨架，诱导脂多糖活化的ＲＡＷ２６４．７细胞发生凋亡，从而发
挥其抗炎效应［２１］．而有研究称雪胆乙素对前列腺癌ＰＣ－３细胞增殖有抑制作用［２２］，对小鼠淋巴细胞的活
化、增殖也具有明显抑制作用，同时减少炎症相关细胞因子的表达，进而发挥抗炎效应［２３］．
目前以雪胆生药及其提取物为主要原料开发且应用于人用临床的剂型主要有散剂、片剂、胶丸剂、糖
浆剂、注射剂、滴丸剂［２４］，而单独用于临床剂型的尚不多见．本文以彭县雪胆生药为原材料，选择给药方
便，制备成本低的兽用口服液作为开发剂型，通过正交设计试验得到雪胆口服液的最佳提取工艺为料液比
１∶８，提取温度６０℃，提取时间４ｈ，提取次数４次．按上述提取工艺条件制得的三批雪胆口服液中雪胆
甲素平均含量为９．５３ｍｇ／ｍＬ，优化后的提取工艺操作简便，有效成分含量较高，且具有良好的重现性，适
宜规模化生产．而中药的开发利用，必须建立严格有效的产品质量控制方法，用于保证其在临床上的疗效
和安全性，本文建立了ＨＰＬＣ法用于雪胆甲素含量测定，其专属性强，灵敏度高，结果准确、可靠，适合用
于雪胆口服液的质量控制．加速试验后雪胆口服液的性状、澄明度、ｐＨ和雪胆甲素含量均无明显变化，表
明通过该方法制备雪胆口服液质量稳定可控．
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责任编辑　汤振金　　　　
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