全 文 :·药理·
民族药蓝花参的止咳化痰药效研究
曾茂贵1,罗 兰2,邓元荣2,张 宽1,叶 华1(1. 福建中医药大学附属第二人民医院 福州 350003;2. 福建职
业卫生技术学院 福州 350101)
摘要:目的 阐述蓝花参“止咳化痰”药效,为其临床合理应用提供实验依据。方法 采用小鼠氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法、小鼠酚红排泌
法及蛙上腭和食道纤毛运动试验,从“止咳”和“化痰”两方面指标对蓝花参正丁醇极性部位作药效表征,对其高、中、低三个剂量分别进行考察。
结果 蓝花参正丁醇提取物可减少实验动物咳嗽次数并延长咳嗽潜伏期,此外,还可以增加小鼠气管酚红排泌量并对蛙上腭和食道纤毛运动具
有促进作用,高剂量效果最显著。结论 蓝花参正丁醇极性部位具有止咳化痰药效。
关键词:蓝花参;止咳;化痰
中图分类号:R969 文献标识码:B 文章编号:1006-3765(2016)-03-0235-0032-04
基金项目:福建省自然科学基金项目(2014J01039)
Experimental Study on Antitussive and Expectorant Effects ofWahlenber-
gia marginata(Thunb. )A. DC
ZENG Mao-gui1,LUO Lan2,DENG Yuan-rong2,ZHANG Kuan1,YE Hua1(1. The second Peoples Hospital
Afflliated Fujian Chinese Medical University,Fuzhou 350003,China;2. Fujian Health College,Fuzhou
350101,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To observe the antitussive and expectorant effects of the aqueous extract fromWahlen-
bergia marginata(Thunb. )A. DC,and provide experimental basis for clinical reasonable application. METHODS
The model of cough induced by ammonia liquor spray in mice and acid citric in guinea pig were used to observe the
antitussive effect;the model of phenol red execretion in mice trachea and the ciliary movement in the frogs esophagus
were used to observe the expectorant effect. Respectively to investigate the high,medium and low three doses of butyl
alcohol extraction ofWahlenbergia marginata(Thunb. )A. DC(BA). RESULTS The BA could reduce cough and
prolong cough incubation period induced by ammonia in mice and acid citric in guinea pig,also can increase phenol
red output of trachea in mice and increase the speed of the ciliary movement in the frog’s esophagus. BA-H is the
most significant efficacy. Conclusion BA has a significant antitussive and expectorant effects.
KEY WORDS:Wahlenbergia marginata(Thunb. )A. DC;Antitussive;Expectoran
蓝花参为桔梗科植物蓝花参 Wahlenbergia marginata
(Thunb.)A. DC的根或全草,具有补虚健脾,止咳化痰的功
效〔1〕。在福建分布面积较广,《闽东本草》中记载:“解表清
热,化痰止嗽。治风热喘嗽,……”,福建民间常用其单味药
或复方以水煎汤来治疗小儿咳嗽。蓝花参别名众多,其中
《福建植物志》中记载称为金线吊葫芦(通称),寒草(松溪、周
宁、闽侯、福州),葫芦草(福鼎、福安),金线草(福安、霞浦、宁
德、罗源)〔2〕。目前的研究显示:蓝花参主要含有植物甾醇、
三萜成分、内酯、香豆素、多糖、酚性成分〔3-7〕,但其药效方面鲜
少见报道,本研究对蓝花参进行止咳化痰药效评价,实验结果
如下:
1 实验材料
1. 1 试药与试剂 蓝花参全草干品购于福州回春中药饮片
厂有限公司(批号:14010507),经福建卫生职业技术学院药学
系朱扶蓉副教授鉴定为〔Wahlenbergia marginata(Thunb. )
A. DC〕;盐酸吗啡片购于青海制药厂有限公司(批号:
20141146);氨水、枸橼酸、酚红、氢氧化钠、氯化铵均为 AR
级。
1. 2 仪器 T6 新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用
仪器有限责任公司);402B型多功能雾化器(江苏鱼跃医疗设
备股份有限公司);BSA224S型天平(赛多利斯科学仪器有限
公司)。
1. 3 动物 ICR清洁小鼠,1. 5 月龄,雌雄各半,体质量 18. 0
·23·
海峡药学 2016 年 第 28 卷 第 3 期
~ 22. 0g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供(许可证
号:SCXK(沪)2012-0002、合格证编号 2013001806899);普通
级豚鼠,雌雄各半,体重 250 ~ 300g,由上海松联实验动物场
提供 (许 可 证 号:SCXK (沪)2012-0011、合 格 证 编 号
2007001104797);蛙,市购。实验动物饲养于福建卫生职业技
术学院 SPF 级屏障系统动物实验室(许可证号:SYXK(闽)
2012-0006)。饲养温度:20 ~ 25℃,湿度 40% ~ 70%。实验动
物饲喂常规饲料,自由摄食及饮水。
1. 4 受试样品制备 称取蓝花参全草 100g,加入 4 倍量
80%乙醇浸泡 24h。70℃加热回流提取 1h,过滤,滤渣再次加
入 80%乙醇提取,重复 3 次,收集并合并滤液。减压浓缩后,
以不同极性的溶剂(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和 5%醋酸水)
萃取。取正丁醇极性部位,冷冻浓缩干燥得其冻干品(BA),
用时加水溶解至 220mL,相当含生药量 0. 45g·mL -1。
2 实验方法〔8〕
2. 1 止咳实验
2. 1. 1 对氨水致咳小鼠的影响:取健康 ICR小鼠 50 只,按体
质量随机分成 5 组,每组 10 只,雌雄各半。给药组三个剂量
分别设置为蓝花参正丁醇高剂量组(BA-H)、蓝花参正丁醇中
剂量组(BA-M)、蓝花参正丁醇低剂量组(BA-L),分为:18g·
kg -1、9. 0g·kg -1和 4. 5g·kg -1;阴性对照组按等体积灌胃给
予等量生理盐水;阳性对照组按等体积灌胃给予等量蒸馏水,
末次给吗啡 20mg·kg -1。各给药组按剂量灌胃给药,灌胃容
积均为每 10g体重 0. 4mL,1 日 1 次,连续给药 7d。末次给药
前动物禁食不禁水 12h,给药后 1h用多功能雾化器将 50. 0%
的氨水以 1. 8mL·min -1流速向 500mL 密封玻璃容器喷雾至
容器内充满白色雾为准,依次放入小鼠,喷雾时间为 5s,喷雾
终止后立即取出小鼠,观察并记录 5 组小鼠咳嗽潜伏期时间
及 2min内咳嗽次数。每组动物均按以上方法相同操作并于
试验结束后及时更换氨水以避免因浓度不均造成误差。
2. 1. 2 对枸橼酸引咳豚鼠的影响:使用多功能雾化器,
17. 5%的枸橼酸溶液以 2mL·min -1流速向 4000mL密封玻璃
容器喷雾至容器充满白色雾,依次放入体重 250 ~ 300g 的豚
鼠,接受喷雾为 50s,喷雾终止后立即取出豚鼠,剔除 5min 内
咳嗽次数低于 10 次者。
次日取筛选合格豚鼠 50 只,随机分为 5 组,各组 10 只,
雌雄各半。给药组为 5. 4g·kg -1(BA-H)、2. 7g·kg -1(BA-
M)和 1. 35g·kg -1(BA-L),各给药组按剂量灌胃给药,灌胃
容积均为每 100g体重 1. 2mL,1 日 1 次,连续给药 7d。末次
给药前各组动物禁食不禁水 12 h,给药后 1 h 按上述方法让
豚鼠接受枸橼酸喷雾刺激,时间为 120s,观察并记录豚鼠咳
嗽潜伏期及 5min内咳嗽次数。同样每组实验结束后更换新
鲜枸橼酸溶液。
2. 2 祛痰实验
2. 2. 1 对小鼠气管酚红排泌量的影响:配制酚红溶液标准曲
线:以 5% NaOH 溶液为溶剂制备 1mg·mL -1的酚红溶液。
依次稀释成每 mL 含酚红 0. 25μg、0. 5μg、1μg、1. 5μg、2μg、
3μg、4μg、6μg、8μg、10μg的一系列溶液,每支 2mL 封装于小
试管中,于暗处保存,波长为 546nm 处测定 OD 值,以酚红浓
度为纵坐标(Y),OD 值为横坐标(X),计算回归方程(Y =
41. 609X + 0. 1562 r = 0. 9981),根据回归方程计算小鼠气管
酚红排泌量。
取 KM小鼠 50 只,按体质量随机分成 5 组,各组 10 只,
雌雄各半。给药组剂量按“2. 1. 1”项下操作,阴性对照组给
等量生理盐水,灌胃容积均为每 10g体重 0. 2mL,1 日 1 次,连
续 7d,氯化铵组末次给予氯化铵,前 6d 给予生理盐水,1 日 1
次。末次给药前各组动物禁食不禁水 12 h,末次给药 30min
后,腹腔注射 2. 5% 酚红生理盐水(每 10g 体重 0. 2mL),
30min后颈椎脱臼处死,分离甲状软骨下缘至气管分叉处的
气管 1cm,用生理盐水振荡洗涤 30min,取上清液加 1mol·
L -1 NaOH,混匀后,3000rpm·min -1离心 10min,取上清液于
波长为 546nm处测定 OD值并根据回归方程计算酚红含量。
2. 2. 2 对蛙上腭及食道纤毛运动的影响〔9〕:制备标本:将破
坏脑和脊髓的蛙仰卧固定于板上,分离食道并沿腹中线剪开,
后自上腭左耳孔下缘沿食道向下 1. 0cm,在食道底部进行标
记,用任氏液润湿食道面,稳定 20min 后,在食道黏膜上滴上
0. 1mL任氏液,作用 1min 后,在蛙上腭左耳孔下缘再滴 1 滴
任氏液,然后将重量为 2. 5mg、面积为 1. 5 × 1. 6mm2 的塑料片
轻放于蛙上腭左耳孔下缘食道黏膜上,以秒表记录其向下移
动 1. 0cm所需时间。合格标本为移动时间在 80 ~ 150s内的。
用上述方法测定样品,给药顺序按拉丁方设计。
运行速率(cm·min -1)= 1. 0cm × 60 / t(s)
增减变化率(%)=(给药组平均值-阴性组平均值)/ 阴
性组平均值 × 100%
3 统计学处理
采用 SPSS 16. 0 统计软件对实验数据进行分析。各组计
量资料以均数 ±标准差(x ± s)表示。各组间数据进行单因素
方差分析,组间比较用 LSD(Least-significant difference,最小显
著差数法)。以 α = 0. 05 为检验水准,P < 0. 05 为差异显著。
4 实验结果
4. 1 蓝花参对氨水致咳小鼠的影响 表 1 结果显示:吗啡组
小鼠咳嗽潜伏期延长、咳嗽次数减少,与阴性组比较均具有显
著差异(P < 0. 05);各给药组 2min内咳嗽次数与阴性组比较
均有显著减少(P < 0. 05);高剂量组咳嗽潜伏期与阴性组比
较延长效果显著(P < 0. 05),低剂量组与中剂量组无延长小
鼠咳嗽潜伏期的作用。表明蓝花参正丁醇极性部位对氨水致
咳小鼠具有一定止咳作用,高剂量下作用更明显。
4. 2 蓝花参对枸橼酸引咳豚鼠的影响 表 2 结果显示:吗啡
组豚鼠与各给药组均显示咳嗽潜伏期延长且 2min 咳嗽次数
减少,与阴性组比较具有显著差异(P < 0. 05),表明蓝花参正
丁醇极性部位对豚鼠枸橼酸引咳具有一定止咳药效。
4. 3 蓝花参对小鼠气管酚红排泌量的影响 表 3 结果显示:
氯化铵组小鼠气管酚红排泌量明显增加,与阴性组比较具有
显著差异(P < 0. 05);高、中剂量组给药组小鼠气管酚红排泌
量明显高于阴性对照组(P < 0. 05),表明蓝花参正丁醇极性
部位高、中剂量下具有一定祛痰作用,低剂量下无明显作用。
4. 4 蓝花参对蛙上腭及食道纤毛运动的影响 表 4 结果显
示:氯化铵组与各给药组上腭及食道纤毛运行速率与阴性组
·33·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 28 No. 3 2016
比较显著增加(P < 0. 05),表明蓝花参正丁醇极性部位可以 通过促进纤毛运动发挥祛痰作用。
表 1 蓝花参水提物对小鼠氨水引咳法实验结果(n = 10,x ± s)
组别 n 给药剂量(g·kg -1) 体质量(g) 咳嗽潜伏期(s) 咳嗽次数(次 /2min)
阴性对照组 10 / 20. 28 ± 2. 99 16. 67 ± 2. 81△ 34. 50 ± 3. 55△
吗啡对照组 10 0. 02 20. 97 ± 1. 49 29. 33 ± 8. 11* 16. 58 ± 5. 53*
BA-L 10 4. 5 21. 96 ± 3. 22 15. 20 ± 3. 36△ 21. 67 ± 4. 44*
BA-M 10 9 20. 72 ± 2. 82 16. 11 ± 1. 90△ 17. 90 ± 4. 65*△
BA-H 10 18 20. 69 ± 2. 66 26. 14 ± 3. 29* 18. 57 ± 3. 51*
注:* 与阴性组比较,P < 0. 05;△与阳性组(吗啡组)比较,P < 0. 05。
表 2 蓝花参水提物对豚鼠枸橼酸引咳法实验结果(n = 10,x ± s)
组别 n 给药剂量(g·kg -1) 咳嗽潜伏期(s) 咳嗽次数(次 /2min)
阴性对照组 10 / 66. 80 ± 4. 15△ 24. 20 ± 3. 96△
吗啡对照组 10 0. 02 94. 40 ± 14. 24* 10. 40 ± 2. 07*
BA-L 10 1. 35 80. 14 ± 3. 08* 14. 43 ± 3. 41*
BA-M 10 2. 7 85. 57 ± 8. 28* 11. 00 ± 4. 83*
BA-H 10 5. 4 85. 00 ± 20. 43* 10. 71 ± 4. 61*
注:* 与阴性组比较,P < 0. 05;△与阳性组(吗啡组)比较,P < 0. 05。
表 3 蓝花参水提物对小鼠气管酚红排泄实验结果(n = 10,x ± s)
组别 n 给药剂量(g·kg -1) 体质量(g) OD值 酚红排泌量(μg)
阴性对照组 10 / 20. 79 ± 2. 44 0. 0917 ± 0. 0407△ 3. 92 ± 1. 74△
氯化铵对照组 10 1 20. 79 ± 2. 44 0. 1574 ± 0. 0318* 6. 45 ± 1. 33*
BA-L 10 4. 5 19. 27 ± 2. 32 0. 0910 ± 0. 0329△ 3. 94 ± 1. 37△
BA-M 10 9 20. 38 ± 1. 66 0. 1473 ± 0. 0326* 6. 12 ± 1. 22*
BA-H 10 18 20. 82 ± 1. 88 0. 1303 ± 0. 0341* 5. 19 ± 0. 97*△
注:* 与阴性组比较,P < 0. 05;△与阳性组比较,P < 0. 05。
表 4 蓝花参水提物对蛙上腭和食道纤毛运动试验结果(n = 10,x ± s)
组别 n 给药剂量(g·mL -1) 时间(s) 运行速率(cm·min -1) 增减变化率(%)
阴性对照组 10 / 42. 75 ± 3. 91△ 1. 42 ± 0. 14△ /
氯化铵对照组 10 1 28. 67 ± 4. 33* 2. 13 ± 0. 29* 50
蓝花参低剂量组 10 0. 1125 32. 09 ± 4. 28* 1. 90 ± 0. 25*△ 33. 8
蓝花参中剂量组 10 0. 2250 29. 83 ± 2. 66* 2. 03 ± 0. 19* 42. 9
蓝花参高剂量组 10 0. 4500 27. 25 ± 5. 64* 2. 27 ± 0. 34* 59. 9
注:* 与阴性组比较,P < 0. 05;△与阳性组比较,P < 0. 05。
5 讨论
5. 1 目前探索药物止咳活性的方法主要包括使用化学药物
或电刺激对动物致咳造模,以观察药物的止咳药效。豚鼠对
化学刺激敏感度较强且咳嗽反射与人类近似,利于准确评估
咳嗽的症状〔10〕。小鼠浓氨水致咳的方法快速且简便,易于掌
握,适合于止咳药研究的筛选〔11〕,因此本实验采用小鼠浓氨
水引咳法及豚鼠枸橼酸引咳法建立模型,共同评价蓝花参止
咳活性。小鼠气管酚红排泌量试验及蛙上腭及食道纤毛运动
广泛应用与评价药物祛痰活性,其中小鼠气管酚红排泌量试
验已得到国际上的认可〔12〕,蛙上腭及食道纤毛运动也被编写
于《新药(西药)》临床前研究指导原则(药学、药理学、毒理
学)》祛痰药效评价方法中〔13〕。
5. 2 查阅相关文献,《四川中药志》记载:“用于脾虚气弱…
肺热咳嗽…”;《福建药物志》记载:“祛风解毒,宣肺化痰。主
治…慢性气管炎…百日咳…”;《浙江药用植物志》记载:“养
阴清肺,止咳…,治肺燥咳嗽…”,由此可见蓝花参在我国分
布之广泛、民间应用历史之悠久,尤其在福建、云南等地的少
数民族地区人民常以蓝花参来治疗肺热咳嗽、肺虚咳嗽、支气
管炎、小儿感冒等疾病,效果良好〔14-15〕。为研究开发蓝花参
的药用价值,我们对其止咳化痰作用进行研究,在实验中发现
蓝花参正丁醇提取物可减少实验动物咳嗽次数并延长咳嗽潜
伏期,此外,还可以增加小鼠气管酚红排泌量并对蛙上腭和食
道纤毛运动具有促进作用,高剂量效果显著。但其药效活性
成分及药效作用机制还未可知,因此阐明蓝花参止咳化痰药
效物质基础及机制需要我们继续探索,为其临床合理应用提
供实验依据。
参考文献
〔1〕南京中医药大学 . 中药大辞典:上册〔M〕. 上海:上海科学技术出
版社,2006,1067-1068.
〔2〕福建省科学技术委员会 . 福建植物志〔M〕. 福建:科学技术出版
社,1982,308-309.
〔3〕中国医学科学院药用植物资源开发研究所等 . 中药志第四册
〔M〕. 北京:人民卫生出版社,1998,693.
·43·
海峡药学 2016 年 第 28 卷 第 3 期
〔4〕国家中医药管理局中华本草编委会 . 中华本草(7)〔M〕. 上海:上
海科学技术出版社,1999,628-629.
〔5〕Wei GuangMa,Ren XiangTan,Nicola fuzzati,ect. Wahlenbergioside,a
phenylpropanoid gluc-oside from wahlenbergia marginata 〔 J 〕
. Phytochemistry,1997,45(2):411-415.
〔6〕R. X. Tan,W. G. Ma,H. X. wei,ect. Glycosides from wahlenbergia
marginata〔J〕. Phytochemist-ry,1998,48(7):1245,1250.
〔7〕肖庆,周春权,韩静,等 . 蓝花参化学成分研究进展〔J〕. 亚太传统
医药,2015,11(8):33-35.
〔8〕陈奇 . 中药药理研究方法学(第 1 版)〔M〕. 北京:人民卫生出版
社,1996,33,649.
〔9〕邓元荣 . 油茶皂苷止咳祛痰平喘功效学的实验研究〔J〕. 海峡药
学,2014,26(7):52-55.
〔10〕石艳,任立群,李才 . 咳嗽动物模型〔M〕. 北京:人民卫生出版
社,2008.
〔11〕张清玲 . 咳嗽动物模型〔M〕. 北京:人民卫生出版社,2008.
〔12〕Engler H,Szelenyi I,Tracheal phenol red secretion,a new methods for
secreening mucosecretolytic compound〔J〕. J Pharmacol Methods,
1984,11(2):151-158.
〔13〕谢强敏,沈文会,吴希美,等 . 良园枇杷膏对咳嗽反射和纤毛运
动的作用〔J〕. 浙江大学学报(医学版),2002,31(2):131-134.
〔14〕云南药物研究所 . 云南民族药志(1)〔M〕. 昆明:云南民族出版
社,2008,383-384.
〔15〕阮孝珠 . 畲族民间应用蓝花参验方举隅〔J〕. 中国民族民间医药
杂志,1999,37:122-123.
太子参保健酒对小鼠离体肠平滑肌的研究
黄文绮,吴 仲,李 煌,徐 伟,王瑞国(福建中医药大学 福州 350122)
摘要:目的 观察太子参保健酒对小鼠离体肠平滑肌收缩活动的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 通过小鼠离体肠段实验,观察不同
浓度的太子参保健酒对小鼠正常离体肠收缩活动的影响和对乙酰胆碱( Ach) 引起离体肠兴奋以及阿托品( Atr) 致肠管抑制等方面来考察太子
参保健酒对小鼠离体小肠平滑肌的影响。结果 与空白组比较,太子参保健酒增加正常小鼠小肠的张力、频率、活力;协同性作用于 Ach 致小
鼠离体小肠平滑肌;拮抗 Atr 致小鼠离体小肠平滑肌抑制作用。结论 提示太子参保健酒对肠管有一定的兴奋作用。
关键词:太子参;保健酒;离体小肠
中图分类号:R969 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2016)-03-1244-0035-03
作者简介:黄文绮(1991 -),女,2013 级中药学专业硕士研究生,主要
从事中药功能性食品的研制与开发。
通讯作者:王瑞国(1972 -),男,副教授。E-mail:wangruiguo@ hot-
mai. com
基金项目:福建省教育厅中青年教师教育科研项目(JA14154)
Effect of The Radix Pseudostellariae Health Wine on Mice Intestinal
Smooth Muscles in Vitro
HUANG Wen-qi,WU Zhong,LI Huang,XU Wei,WANG Rui-Guo(Fujian University of Tranditional Chinese
Medicine,Fuzhou 350122,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To observe the effects of the radix pseudostellariae health wine on contraction of mice
intestinal smooth muscles in vitro and explore the possible mechanisms. METHODS The mice isolated intestines
were used to observe the effect on normal mice intestinal contraction and the intestinal stimulated antagonism to ace-
tylcholie and barium chloride by the radix pseudostellariae health wine at different concentrations. RESULTS There
are obvious effects on intestinal smooth muscle in normal intestine and incitant intestine caused by Ach and
Atr. Conclusion Radix Pseudostellariae Health Wine can excite the intestinal constringency.
KEY WORDS:Radix Pseudostellariae;Health Wine;mice isolated intestines
中药太子参是为石竹科植物异叶假繁缕属植物孩儿参
Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex pax et Hoffm. 的干燥
块根,性平,味甘、微苦,归脾、肺经。具益气健脾、生津润肺之
功效,用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不足、自汗口
渴、肺燥干咳等症〔1〕。在我国已被卫生部确定列入“可用于
保健食品的中药材名单”。本研究通过观察太子参保健酒对
·53·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 28 No. 3 2016