全 文 ：　　作者简介:冀小君 ,女 , 1974年 1月生 ,讲师 ,在读硕士生 ,沈阳
药科大学(沈阳　110016);王淑君 、吴书昱 ,单位同第一作者;程侯
莲 ,山西生物应用职业技术学院。
杨梅叶提取物中总黄酮的含量测定方法研究
冀小君　王淑君　程侯莲　吴书昱
　　摘要:目的:测定杨梅叶提取物中的总黄酮含量。 方法:以杨梅素为指标成分 , 采用分光光度法测定。 结果:杨梅素在
0.000 0 ～ 11.840 0 mg/L(r=0.999 3)范围内线性关系良好。结论:采用紫外分光光度法测定杨梅叶提取物中总黄酮的含量
测定方法简便 、可靠 、准确 , 可作为该提取物的质量控制标准。
关键词:杨梅叶;紫外分光光度法;总黄酮;含量测定
中图分类号:284.2+5　文献标识码:A　文章编号:1000-7156(2008)02-0055-03
StudyofAssayingMethodofTotalFavonoidsinExtractiveofMyricaRubraLeaves　
JIXiao-jun＊ , WANGShu-jun＊ , CHENGHuo-lian, etal.(＊ShenyangPharmaceuticalUniversi-
ty, Shenyang, 110016, China)
Abstract:Objective:ToassaytotalflavonoidsinextractiveofMyricaRubraleaves.Method:Myricetinwas
selectedastheindexingredient, andultravioletspectrophotometrywasadoptedtodetermine.Results:Thelinear
rangeofMyricetinwas0.000 0 ～ 11.840 0mg/L(r=0.999 3).Conclusion:Themethodisconvenient, reliable
andprecise, andcanbeasefectiveassayingmethodoftotalflavonoidsforqualitycontrol.
Keywords:MyricaRubraleaves, ultravioletspectrophotometry, totalflavonoids, assaying
　　杨梅叶是杨梅属杨梅科常绿乔木杨梅(Myricarubra
Sieb.etZucc.)的干燥叶片 , 革质 ,无毛 ,楔状倒卵形至长楔
状披针形 , 长 4 ～ 10cm, 宽 1 ～ 4 cm, 全缘或偶在中部以上
有少数锐齿状 , 上面深绿色 、有光泽 , 下面浅绿色。在我国
广泛分布于长江以南的浙江 、江苏 、福建 、广东 、广西 、江
西 、湖南等省 , 据文献报道杨梅叶中含有杨梅素 、杨梅素
-3-0-α-L-鼠李糖苷 、杨梅素 -3-0-β -D-葡萄糖
苷等黄酮类化合物 [ 1] 。笔者选择杨梅素为对照 ,采用紫外
分光光度法测定杨梅叶提取物中总黄酮的含量 [ 2] 。
1　实验仪器及材料
分析天平(上海精密科学仪器有限公司生产)、TU-
1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限
责任公司生产)、杨梅素(纯度 98%,自制)、甲醇(分析纯 ,
购自天津市科密欧化学试剂开发中心)、乙醇(分析纯 , 山
东禹王化工有限公司生产)、氯化铝(分析纯 ,天津市百世
化工有限公司生产)。
2　实验方法与结果
2.1　提取物中黄酮类化合物的定性鉴别:为了充分证实提
取物是黄酮类化合物 ,我们用下列几种实验方法进行了定
性鉴别。
(1)盐酸 -镁粉反应:取杨梅叶提取物样品适量用乙
醇溶解 , 滴加盐酸 3 ～ 4滴 , 无颜色变化 , 加入少许镁粉 , 产
生大量泡沫 , 溶液颜色呈红色。
(2)铝盐络合反应:取杨梅叶提取物样品适量用乙醇
溶解 ,加入 1 mL氯化铝 , 溶液颜色变为黄色。 在 NaNO2和
Al(NO3)3存在下 ,加入 NaOH溶液 , 溶液颜色呈红橙色。
(3)碱性试剂显色反应:将杨梅叶提取物样品点在聚
酰胺薄膜上 , 斑点用氨蒸气熏后变成棕色 , 置空气中颜色
随后褪去。
经上述实验证实 , 杨梅叶提取物中含有黄酮类化合
物。
2.2　定量分析方法的建立
2.2.1　试液的制备
2.2.1.1　标准品溶液:精密称取减压干燥至恒重的杨梅素
标准品适量 ,用甲醇溶解 , 制备成标准品溶液。
2.2.1.2　样品溶液:取杨梅叶适量用 95%乙醇连续回流
提取至色淡 ,回收乙醇 , 加 3倍量水静置 ,过滤 ,减压干燥 , 得
到杨梅叶提取物。取适量 ,用甲醇溶解 ,制备成样品溶液。
2.2.2　显色剂的选择:取标准品溶液和样品溶液各 3份 ,
分别加入 NaOH、NaNO2 +Al(NO3)3 +NaOH、氯化铝显色 ,
结果表明 , 氢氧化钠显色后在 1 h内不稳定。 NaNO2 +
Al(NO3)3 +NaOH显色后产生大量沉淀 , 影响含量测定结
果 ,最后选定氯化铝为显色剂。
2.2.3　检测波长的确定:分别取标准品溶液和样品溶液适
量加入 5%氯化铝 , 用甲醇定容至 10 mL, 放置 20 min后随
行空白溶液作对照 ,按紫外 -可见分光光度法(《中华人民
共和国药典》 2005年版一部附录)在 200 ～ 600 nm波长范
围内扫描 ,测得最大吸收波长。见图 1、2。
由图 1、2可知:杨梅素标准品在 270nm处有最大吸收
峰 ,提取物在 271 nm处有最大吸收峰 , 因此将测定波长定
为 270 nm。
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2.2.4　显色剂用量的选择:取标准品溶液 3份 , 分别加入
不同量的 5%三氯化铝作为显色剂 , 显色后测定吸光度 , 结
果见表 1。
表 1　显色剂用量考察结果
序号 显色剂用量(mL) 吸光度
1 2 0.658
2 3 0.660
3 4 0.665
4 5 0.664
　　由以上结果可知 , 随着显色剂用量的增加 , 吸光度变
化不大 , 所以选定显色剂用量为 3 mL。
2.2.5　显色时间的选择:精密称取干燥至恒重的杨梅素标
准品适量 , 置于 10 mL容量瓶中 , 加入甲醇溶解 ,加入氯化
铝 , 用甲醇定容于 10 mL, 随行试剂为空白 , 在 270 nm波长
处测定吸光度。测得结果见表 2。
表 2　显色时间考察结果
序号 时间(min) 吸光度
1 5 0.348
2 10 0.351
3 15 0.361
4 20 0.362
5 25 0.363
6 30 0.362
7 35 0.363
8 40 0.364
　　可见 ,溶液显色后在 20 ～ 40 min内稳定 , 确定显色时
间为 20min。
2.2.6　含量测定方法的确定:经以上实验研究 , 确定定量
分析的方法是:精密称取干燥至恒重的提取物适量 , 置于
10 mL容量瓶中 ,加入甲醇溶解 , 分别取适量加入 5%氯化
铝 3 mL, 用甲醇定容于 10 mL, 放置 20 min, 随行试剂为空
白 , 在 270 nm波长处测定吸光度 , 根据杨梅素标准品的回
归方程计算样品中总黄酮的含量。
2.3　方法学考察
2.3.1　标准曲线的制备:精密称取干燥至恒重的杨梅素标
准品 14.8mg,置于 25 mL容量瓶中 , 加入甲醇溶解 , 定容
于 25 mL,制得浓度为 0.592 mg/mL的标准品储备液 , 精密
量取杨梅素标准品储备液适量 ,分别置于 10mL容量瓶中 ,
加入 5%氯化铝 3 mL, 加甲醇定容至 10 mL, 揺匀 , 即得供
试品溶液 ,随行试剂为空白 , 在 270 nm波长处测定吸光度。
结果见表 3。
表 3　标准曲线的制备
序号 浓度(mg/mL) 吸光度
1 0.000 0 -0.001
2 0.002 368 0.144
3 0.004 736 0.266
4 0.007 104 0.394
5 0.009 472 0.529
6 0.011 840 0.636
　　以杨梅素浓度为横坐标 , 吸光度为纵坐标 , 按最小二
乘法进行线性回归 , 回归方程为:A=53.909 C+0.008 9
(r=0.999 3),线性范围为:0.000 0 ～ 0.011 840 0 mg/mL,
r=0.999 3。
2.3.2　精密度:取 6份标准品溶液适量 , 分别置于 10 mL
容量瓶中 ,加入氯化铝 , 加甲醇定容至 10.0mL,摇匀 ,随行
试剂为空白 , 在 270 nm波长处测定吸光度 ,相对标准偏差
为 0.1%,仪器精密度良好。
2.3.3　加样回收率:采用加样回收法 , 精密取已知总黄酮
含量的样品 5.4 mg9份 , 分别精密加入一定量的杨梅素标
准品 ,加甲醇溶解并定容 , 取适量加入 5%氯化铝 3 mL并
用甲醇定容至 10 mL,随行空白溶剂作对照 , 在 270 nm波
长处测定吸光度 ,计算加样回收率 , 平均回收率为 98.6%,
RSD为 1.54%。
2.3.4　样品稳定性考察:将同一样品溶液平行配制多份 ,
在室温条件下避免阳光直射 ,每隔 30 min测定 1次。结果
表明在 4h内 , 吸光值基本保持不变。
2.4　杨梅叶提取物含量测定:精密称取杨梅叶提取物 3
份 ,置于 10 mL容量瓶中 ,加入甲醇溶解 , 分别取适量加入
5%氯化铝 3mL, 用甲醇定容于 10mL, 随行试剂为空白 , 在
270 nm波长处测定吸光度 ,根据回归方程计算样品总黄酮
的含量。结果如表 4。
表 4　含量测定结果
序号 称取量(mg)总黄酮含量(%)平均含量(%)RSD(%)
1 5.01 22.6
2 5.04 23.3 22.9 1.57
3 4.97 22.8
　　杨梅叶提取物中总黄酮含量以杨梅素计为 22.9%。
3　讨论
3.1　经液 -质连用分析杨梅叶中的黄酮种类 , 发现其中至
少有 20多种;而且杨梅在我国种植较多 ,不同的产地 、不同
的品种 、不同的采收时间其中有效成分的含量也不同 , 以
总黄酮的含量作为一个质量控制指标无疑是比较合理的。
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3.2　从目前的研究结果 [ 3]来看 , 杨梅素为杨梅中公认的
有效成分之一 , 具有降血糖 、抗氧化 、保肝护肝 、抗炎 、抗突
变 、消除体内自由基等多种药理活性。选择它作为标准
品 , 探讨和建立科学 、可靠 、简便的定量方法。经方法学考
察 , 该方法可以较为简便 、快速 、准确地测定杨梅叶提取物
中的总黄酮含量 , 可以作为提取物质量控制的一种手段。
参考文献:
[ 1] 　邹耀洪 ,李桂荣 .杨梅叶黄酮类化合物研究 [ J] .常熟高专
学报 , 1998, 7(1):36-39.
[ 2] 　何桂霞 ,何群 ,裴刚,等 .瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量测
定 [ J].湖南中医药导报 , 1999, 5(12):30-31.
[ 3] 　唐霖 ,张莉静.杨梅中活性成分杨梅素的研究进展 [ J] .中
成药 , 2006, 28(1):121-122.
(收稿日期:2007-08-10)
本文编辑:王存明
作者简介:杨晋原 ,女 , 1957年 2月生 ,副主任医师 , 山西省中
医药研究院(太原　030012)。
活血消脂益肝汤治疗脂肪肝
杨晋原
　　关键词:脂肪肝;活血降脂益肝汤;中医药疗法
中图分类号:R575.5　文献标识码:B　文章编号:
1000-7156(2008)02-0057-01
　　随着生活条件的改善和生活方式的改变 , 脂肪肝已成
为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。脂肪肝的发生率较 5
年前增加了 50倍 ,且渐趋低龄化。临床统计数字显示 , 脂
肪肝患者并发肝硬化 、肝癌的概率是正常人的 150倍。
2002年 8月至 2007年 6月 , 笔者自拟活血消脂益肝汤治疗
脂肪肝 49例 ,取得满意疗效 , 报道如下。
1　临床资料
1.1　诊断标准:(1)右胁胀痛或隐痛 , 纳差 , 乏力 , 肝脏边
缘饱满或肿大。 (2)B超诊断标准:①肝实质点状高回声
(回声水平肝高于脾);②后场回声衰减;③肝内脉管显示
不清 [ 1] 。 (3)实验室检查:血脂升高 , 总胆固醇(TC)≥
6.0mmol/L,甘油三酯(TG)≥ 1.92 mmol/L。 (4)肝功异
常:ALT、γ-GT、AST均有不同程度的升高。
1.2　一般资料:49例脂肪肝患者均系门诊病例 , 其中男 36
例 , 女 13例;年龄最小 19岁 , 最大 56岁;肥胖者 23例 , 酒
精性脂肪肝 15例 ,肝炎后脂肪肝 11例。
2　治疗方法
予自拟活血消脂益肝汤。 药用:丹参 、山楂各 20 g, 制
首乌 30g, 赤芍 15 g,郁金 12g, 泽泻 、鸡内金各 10g, 柴胡 、
当归各 9 g。胃脘憋闷者加藿香 、佩兰各 10 g;胁肋胀痛者
加木香 6 g,川楝子 10g, 元胡 20 g;头晕头蒙者加川芎 6 g,
天麻 10g, 钩藤 15 g;纳呆口苦者加陈皮 10g, 茯苓 20 g,竹
茹 15 g;便溏或黏腻不爽者加薏仁 30 g, 山药 15 g, 枳壳
10 g。每日 1剂 , 水煎 400 mL, 分早晚两次温服。 30天为 1
个疗程 , 连用 3个疗程。
3　疗效观察
3.1　疗效标准 [ 2]　临床治愈:症状 、体征完全消失 , 3个疗
程后肝功能正常 , 血脂正常 , B超提示脂肪肝声像明显减
轻;有效:症状 、体征明显减轻 , ALT及血脂下降 , B超提示
脂肪肝声像图改善;无效:未达以上标准者 ,中断治疗者。
3.2　治疗结果:临床治愈 35例 , 有效 11例 , 无效 3例 , 总
有效率 93.9%(95%CI=87.8% ～ 99.3%)。
4　体会
脂肪肝多归属中医学的胁痛 、痞满 、痰湿 、积证等范
畴。 《类证治载》记载胁痛为 “肝郁 、肝瘀 、食积 、肝虚”。 均
认为痰浊 、湿热 、血瘀与脂肪肝的发病机制关系密切。 其
病理演变过程中各种病因相互影响 , 互为因果 , 如过食肥
甘厚味 ,饮酒不节 , 损伤肝脾 , 致使脾胃功能失常 , 湿浊内
生;情志不遂 , 或内分泌失调及代谢疾病均会造成脂肪在
肝脏中的过量浸润 ,以致肝郁气滞 ,肝胆疏泄失职;脾失健
运 ,水湿内停 , 湿郁化热 ,聚而成痰;气机不畅 ,气滞血瘀 , 瘀
血阻络。
针对病因病机 , 活血消脂益肝汤中丹参 、山楂 、赤芍 、
当归均有活血化瘀 、消脂降脂的作用。 现代药理学证明 ,
丹参能抑制内源性胆固醇的合成 [ 3] , 可降低肝中甘油三酯
的含量 , 还能改善微循环和抑制胶原纤维的增加 , 阻断肝
纤维化的发生和发展。山楂入肝 、脾 、肾经 , 可消导酒食陈
腐之积 ,活血化瘀消脂 , 能增加胆固醇的排泄 [ 4] 。泽泻清
利肝胆湿热 , 泻浊除滞。现代药理学证实 , 泽泻对脂质代
谢的影响作用明显 ,与胆碱 、磷脂相当 ,能干扰外源性胆固
醇的吸收和影响内源性胆固醇的代谢 [ 5] 。 制首乌 、当归养
血柔肝 ,补益肝肾。柴胡 、郁金入肝经 ,疏肝解郁 。诸药合
用 ,随证加减 , 有是证 ,用是药 , 共奏疏肝利胆 、清热利湿 、祛
痰消脂 、活血化瘀之功效。
参考文献:
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[ 3] 　戚心广 ,程垣平.丹参 、赤芍对实验性肝损伤性肝细胞保护
作用的机理研究 [ J] .中西医结合杂志 , 1991, 11(2):102-
103.
[ 4] 　张赛璐 .山楂治疗高脂血症 [ J] .浙江中医杂志 , 1993, 28
(9):402.
[ 5] 　林小田 ,王昱.脂肪肝的诊治及食疗 [ M] .广州:广东科学
技术出版社 , 2002:85.
(收稿日期:2007-12-19)
本文编辑:王存明
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