全 文 ：HPLC法测定华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量
周军1，赵晨1，张洋2，张红意3，曲佳1，王杰1
(1．天津市药品检验所，天津 300070;2．天津中新药业集团达仁堂制药厂，天津 300457;
3．天津中新药业集团有限公司第六中药厂，天津 300401)
摘要 目的:建立 HPLC法测定华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量。方法:采用资生堂 CAPCELL － PAK C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈 －甲醇 －磷酸氢二钠缓冲液(15∶ 4∶ 81)为流动相，流速 1. 0 mL·min －1，东莨菪碱、阿
托品检测波长 210 nm(0 ～ 15 min) ，东莨菪内酯检测波长为 344 nm(15. 1 ～ 30 min) ，柱温 30 ℃。结果:东莨菪碱、阿托品及东
莨菪内酯的线性范围分别为 0. 04 ～ 3. 95，0. 04 ～ 4. 10，0. 05 ～ 0. 54 μg(r = 0. 9999) ;平均回收率(n = 6)分别为 97. 58%(RSD =
1. 3%) ，98. 65%(RSD = 1. 3%) ，98. 42%(RSD = 1. 8%)。结论:本文方法简便、准确，可以用于华山参滴丸中东莨菪碱、阿托
品及东莨菪内酯的含量测定。
关键词:华山参滴丸;止咳平喘药;托品烷类生物碱;东莨菪碱;阿托品;东莨菪内酯;高效液相色谱法;多成分分析;质量控制;
中药制剂;标准提高
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2012)05 － 0892 － 04
RP － HPLC analysis of scopolamine，atropine and
scopoletin in Huashanshen dripping pills
ZHOU Jun1，ZHAO Chen1，ZHANG Yang2，ZHANG Hong － yi3，QU Jia1，WANG Jie1
(1． Tianjin Institute of Drug Control，Tianjin 300070，China;2． Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group
Corporation LTD，Darentang Traditional Chinese Medicine Factory，Tianjin 300457，China;3． Tianjin
Zhongxin Pharmaceutical Group Corporation LTD，No. 6 Traditional Chinese Medicine Factory，Tianjin 300401，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for determination of scopolamine，atropine and scopoletin in
Huashanshen dripping pills．Methods:The analysis was carried out on a CAPCELL － PAK C18(4. 6 mm ×250 mm，
5 μm)column;The mobile phase was composed of acetonitrile － methanol － disodium hydrogen phosphate buffer so-
lution(15∶ 4∶ 81)and the flow rate was 1. 0 mL·min －1;The detection wavelengths were set at 210 nm for scopol-
amine and atropine(0 － 15 min) ，and 344 nm for scopoletin(15. 1 － 30 min) ;The column temperature was 30 ℃ ．
Results:The linear ranges of scopolamine，atropine and scopoletin were 0. 04 － 3. 95，0. 04 － 4. 10，0. 05 － 0. 54 μg
(r = 0. 9999) ，respectively;The average recoveries(n = 6)were 97. 58% (RSD = 1. 3%) ，98. 65% (RSD =
1. 3%) ，and 98. 42%(RSD =1. 8%) ，respectively． Conclusion:This method is simple，and can be used to deter-
mine the above three components with satisfactory accuracy and repeatability．
Key words:Huashanshen dripping pills;antitussive and antiasthmatic drugs;tropane alkaloids;scopolamine;atro-
pine;scopoletin;HPLC;multicomponent assay;quality control;TCM preparation;standard improvement
第一作者 Tel:13820329907;E － mail:happy76dragon@ yahoo． com． cn
华山参滴丸是由华山参药材制成的止咳平喘
药，临床用于慢性支气管炎、喘息性气管炎，其质量
标准收载于中国药典 1995 年版 1997 年增补本。华
山参滴丸止咳平喘的有效成分主要为托品烷类生物
碱及东莨菪内酯，目前评价华山参药材或其制剂质
量时，大多以其生物碱含量作为指标［1 ～ 5］，而东莨菪
内酯［6］同样具有明显的药理活性，因此本文建立
HPLC 法测定样品中的东莨菪碱、阿托品及东莨菪
内酯 3 个成分的含量。本文建立的方法简单、快速、
准确，对控制和提高华山参滴丸的质量有重要意义。
—298— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2012.05.030
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪，配有在线脱气
机、四元泵、VWD检测器、自动进样器、ChemStations
色谱工作站。SIBATA超声波清洗器。
甲醇、乙腈、四氢呋喃(天津市康科德科技有
限公司)为色谱纯，水为去离子水，磷酸氢二钠、磷
酸、三乙胺(天津市康科德科技有限公司)为分析
纯。对照品东莨菪内酯(批号 100249 － 199501)、
氢溴酸东莨菪碱(批号 100049 － 200308)、硫酸阿
托品(批号 100040 － 200510)均购自中国食品药
品检定研究院，供含量测定用。华山参滴丸样品，
天津中新药业集团股份有限公司第六中药厂，规
格为每丸 0. 017 g，批号为 64001，64002，64003。
辅料聚乙二醇 6000 为天津中新药业集团有限公
司第六中药厂提供。
2 溶液的制备
2. 1 对照品溶液 取对照品氢溴酸东莨菪碱(60
℃干燥 1 h 后在 105 ℃干燥 3 h)及硫酸阿托品
(120 ℃干燥 3 h)、东莨菪内酯适量，精密称定，加甲
醇制成每 1 mL 分别含 0. 05，0. 17，0. 01 mg 的混合
溶液，即得。
2. 2 供试品溶液 取样品适量，研细，精密称取细
粉 2 g，置 50 mL量瓶中，加甲醇约 35 mL，超声(功
率 40 W，频率 350 kHz)30 min使溶解(每隔 10 min
振摇 1 次) ，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。将甲醇溶
液置具塞离心管中，3000 r·min －1离心 10 min，取上
清液，过 0. 45 μm微孔滤膜，即得供试品溶液。
2. 3 阴性样品溶液 按处方量精密称取华山参滴
丸辅料聚乙二醇，按“2. 2”项下方法制备阴性样品
溶液。
3 东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量测定
3. 1 色谱条件 使用资生堂 CAPCELL － PAK C18
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈 －
甲醇 －磷酸氢二钠缓冲液(15 ∶ 4 ∶ 81) ，磷酸氢二钠
缓冲液含 30 mmol·L －1磷酸氢二钠、0. 08%三乙胺
(用磷酸调 pH 6. 0) ，流速 1. 0 mL·min －1，东莨菪
碱、阿托品检测波长为 210 nm(0 ～ 15 min) ，东莨菪
内酯检测波长为 344 nm(15. 1 ～ 30 min) ，柱温
30 ℃，进样量 5 μL。在上述色谱条件下，东莨菪碱、
阿托品、东莨菪内酯的保留时间分别为 9. 6，11. 5，
18. 7 min;分离度均大于 1. 5;理论板数按阿托品峰
计算应不低于 10000;样品中其他成分对东莨菪碱、
阿托品、东莨菪内酯的测定无干扰。对照品、样品、
阴性样品的色谱图见图 1。
图 1 对照品(A)、样品(B)、阴性样品(C)色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of reference substances(A) ，sample(B)and
negative sample(C)
1．东莨菪碱(scopolamine) 2． 阿托品(atropine) 3． 东莨菪内酯
(scopoletin)
3. 2 方法学考察
3. 2. 1 线性关系的考察 取对照品氢溴酸东莨菪
碱、硫酸阿托品、东莨菪内酯适量，精密称定，加甲醇
制成氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品、东莨菪内酯浓度
为 0. 50，0. 48，0. 054 mg·mL －1的混合对照品储备
溶液，精密吸取储备溶液 1，2，10，20 mL，分别置
100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密
吸取上述稀释后的溶液及储备溶液各 10 μL，按上
述色谱条件进样测定。分别以各自的峰面积 Y 为
纵坐标，以对照品进样量 X(μg)为横坐标，求得东
莨菪碱、阿托品、东莨菪内酯回归方程分别为:
Y = 31. 55 + 1. 268 × 103X r = 0. 9999
Y = 29. 54 + 1. 326 × 103X r = 0. 9999
Y = 11. 34 + 4. 558 × 103X r = 0. 9999
结果表明东莨菪碱进样量在 0. 04 ～ 3. 95 μg，阿托
品进样量在 0. 04 ～ 4. 10 μg，东莨菪内酯进样量在
0. 05 ～ 0. 54 μg(氢溴酸东莨菪碱折合成东莨菪碱系
数为 0. 7894;硫酸阿托品折合成阿托品系数为
0. 8551)范围内与峰面积具有良好的线性关系。
3. 2. 2 进样精密度试验 取供试品溶液连续进样 6
次，记录峰面积，计算东莨菪碱、阿托品、东莨菪内酯
峰面积的 RSD(n =6)分别为 1. 4%，0. 12%，0. 10%。
3. 2. 3 重复性试验 取同一批号(64001)样品适
量，研细，取 2 g，共 6 份，精密称定，按照“2. 2”项下
方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样
测定。结果样品中东莨菪碱、阿托品、东莨菪内酯平
均含量(n = 6)分别为 0. 94，3. 48，0. 24 mg·g －1;
—398—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
RSD分别为 0. 71%，1. 1%，1. 0%。
3. 2. 4 稳定性试验 取同一供试品溶液分别在 0，
2，4，8，12，18，24 h 进样测定，结果东莨菪碱、阿托
品、东莨菪内酯峰面积的 RSD(n = 7)分别为
0. 97%，0. 69%，0. 62%。表明供试品溶液中东莨菪
碱、阿托品、东莨菪内酯在 24 h内均稳定。
3. 2. 5 回收率试验 取同一批号(批号 64001)已测
知含量的样品适量，研细，取 1 g，共 6 份，精密称定，
分别置 50 mL量瓶中，精密加入含东莨菪碱 0. 041 mg
·mL －1、阿托品 0. 14 mg·mL －1、东莨菪内酯 0. 010
mg·mL －1的甲醇溶液 25 mL，再加甲醇约 10 mL，按
照“2. 2”项下方法制备溶液，在上述色谱条件下进样
测定，计算回收率。结果东莨菪碱、阿托品、东莨菪内
酯平均回收率(n = 6)分别为 97. 58%，98. 65%，
98. 42%;RSD分别为 1. 3%，1. 3%，1. 8%。
3. 3 样品的测定 取 3 个批号的样品，按照“2. 2”
项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液及
“2. 1”项下的对照品溶液各 5 μL，注入液相色谱仪，
在上述色谱条件下进样测定，记录峰面积，按外标法
计算含量。结果见表 1。
表 1 华山参滴丸样品含量测定结果(mg·丸 －1)
Tab 1 Contents of scopolamine，atropine and
scopoletin in Huashanshen dripping pills(mg per pill)
批号(Lot No．)
东莨菪碱
(scopolamine)
阿托品
(atropine)
东莨菪内酯
(scopoletin)
64001 0. 018 0. 059 0. 167
64002 0. 018 0. 058 0. 167
64003 0. 018 0. 060 0. 167
4 讨论
4. 1 提取方法考察 ①因生物碱及聚乙二醇在甲
醇中均易溶解，因此采用甲醇作为提取溶剂;②对加
热回流和超声处理 2 种方法进行比较，并对提取溶
剂用量和提取时间进行考察，结果表明加入甲醇
50 mL超声处理 30 min，即可将样品中莨菪碱、阿托
品和东莨菪内酯提取完全;③因为样品粉末易聚集
在量瓶底部，故采用每隔 10 min 振摇 1 次的方法使
样品分散，更易溶解。
4. 2 流动相的选择 试验中参考文献比较 3 种流
动相体系:(1)以乙腈 － 0. 01 moL·L －1十二烷基硫
酸钠水溶液(33 ∶ 67)为流动相，结果样品色谱中东
莨菪内酯色谱峰与杂质峰分离较差; (2)以乙腈 －
醋酸盐缓冲液(5∶ 95)为流动相 A，乙腈 －醋酸盐缓
冲液(15 ∶ 85)为流动相 B(醋酸盐缓冲液含
30 mmoL·L －1醋酸钠，0. 02%三乙胺，0. 3%四氢呋
喃，用冰醋酸调 pH 6. 0) ，进行梯度洗脱，结果样品
色谱中东莨菪碱、阿托品、东莨菪内酯色谱峰与杂质
峰分离较好，分离度均大于 1. 5，但此流动相系统存
在向下漂移的缺点; (3)采用本文的乙腈 －甲醇 －
磷酸氢二钠缓冲液(15 ∶ 4 ∶ 81)为流动相，磷酸氢二
钠缓冲液含 30 mmol·L －1磷酸氢二钠、0. 08%三乙
胺(用磷酸调 pH6. 0) ，结果品色谱中东莨菪碱、阿
托品、东莨菪内酯色谱峰与杂质峰分离较好，分离度
均大于 1. 5，基线平稳，效果较好。
4. 3 检测波长的确定 参考文献报道东莨菪碱、
阿托品检测波长为 210 nm;采用二极管阵列检测器
对东莨菪内酯进行光谱扫描，最大吸收波长为
344 nm［7］。当采用 210 nm测定上述 3 个成分时，样
品中东莨菪内酯色谱峰附近有杂质峰干扰，采用
344 nm测定时，可有效消除干扰。因此，本文选择
东莨菪碱、阿托品检测波长为 210 nm(0 ～ 15 min) ，
东莨菪内酯检测波长为 344 nm(15. 1 ～ 30 min)。
4. 4 柱温的选择 比较不同柱温(30，35，40 ℃)条件下
样品的分离情况，结果以柱温为30 ℃时样品分离较好。
4. 5 对照品系数的确定 根据分子式计算，氢溴
酸东莨菪碱折算成东莨菪碱系数为 0. 7894。硫酸
阿托品折算成阿托品系数为 0. 8551。
4. 6 耐用性试验 采用 Agilent － 1200 高效液相色
谱仪，按本文色谱条件，分别以资生堂 Capcell － pak
C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱、Phenomenex
C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)色谱柱、DIKMA － Kro-
masil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱对“3. 3”
项下 3 个批号样品的供试品溶液进行测定，计算样
品中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的总量。结果
不同色谱柱对样品的含量测定结果基本一致。
4. 7 小结 托烷品类生物碱(东莨菪碱、阿托品)
及内酯类成分(东莨菪内酯)均为华山参中止咳平
喘的有效成分，本文采用 HPLC 法同时测定华山参
滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量，提高
了华山参滴丸的质量标准，可用于华山参药材及制
剂的质量控制。
参考文献
1 ZHOU Jun(周军) ，MIAO Shu － shen(苗淑森)． HPLC analysis of
raceanisodamine，scopolamine and hyoscyamine in Huashanshen
dripping pills(HPLC法测定华山参滴丸中消旋山莨菪碱、东莨菪
碱及阿托品的含量)． Chin J Pharm Anal(药物分析杂志) ，2010，
30(5) :838
(下转第 918 页)
—498— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
12 Jackson SN，Ugarov M，Egan TF，et al． A Study of phospholipids by
ion mobility TOFMS． Mass Spectrom，2008，19(11) :1655
13 Miller RA，Eiceman GA，Nazarov EG，et al． A novel micromachined
high － field asymmetric waveform － ion mobility spectrometer． Sens
Actu B，2000，67(3) :300
14 Miller RA，Nazarov EG，Eiceman GA，et al． A MEMS radio － fre-
quency ion mobility spectrometer for chemical vapor detection． Sens
Actu A，2001，91(3) :301
15 Karasek FW，Hill HHJ，Kim SH． Plasma chromatography of heroin
and cocaine with mass － identified mobility spectra． J Chromatogr A，
1976，117(2) :327
16 Khayamian T，Tabrizchi M，Jafari MT． Quantitative analysis of mor-
phine and noscapine using corona discharge ion mobility spectrome-
try with ammonia reagent gas． Talanta，2006，69(4) :795
17 Matz LM，Hill HHJ． Evaluation of opiate separation by high － resolu-
tion electrospray iIonization － ion mobility spectrometry /mass spec-
trometry． Anal Chem，2001，73(8) :1664
18 Miki A，Kellerb T，Regenscheit P，et al． Application of ion mobility
spectrometry to the rapid screening of methamphetamine incorporated
in hair． J Chromatogr B，1997，692(2) :319
19 LI Gang(李刚) ，CHEN Qiang(陈强) ，ZHAO Jian － long(赵建
龙)． Ion mobility spectrometry and its applications in bio － analytical
chemistry(离子迁移谱技术及其在生命分析化学中应用)． Mod
Instrum(现代仪器) ，2006，2:31
20 Cui M，Ding L，Mester Z． Separation of cisplatin and its hydrolysis
products using electrospray ionization high － field asymmetric wave-
form ion mobility spectrometry coupled with ion trapmass spectrome-
try． Anal Chem，2003，75(21) :5847
21 Eatherton RL，Morrissey MA，Hill HH． Comparison of ion mobility
constants of selected drugs after capillary gas chromatography and
capillary supercritical fluid chromatography． Anal Chem，1988，60
(20) :2240
22 Weston DJ，Bateman R，Wilson ID，et al． Direct analysis of pharma-
ceutical drug formulations using ion mobility spectrometry / quadru-
pole － time － of － flight mass spectrometry combined with desorption
electrospray ionization． Anal Chem，2005，77(23) :7572
23 Wang Y，Nacson S，Pawliszyn J． The coupling of solid － phase micro-
extraction /surface enhanced laser desorption / ionization to ion mobil-
ity spectrometry for drug analysis． Anal Chim Acta，2007，582(1) :50
24 Chaim W，Karpas Z，Lorber A． New technology for diagnosisof bacte-
rial vaginosis． Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2003，111(1) :83
25 Ruzsanyi V，Baumbach JI，Sielemann S，et al． Detection of human
metabolites using multi － capillary columns coupled to ion mobility
spectrometers． J Chromatogr A，2005，1084(1 － 2) :145
26 Francesco FD，Fuoco R，Trivella MG，et al． Breath analysis:trends in
techniques and clinical applications．Microchem J，2005，79(1 －2):405
27 Karpas Z，Tilman B，Gdalevsky R，et al． Determination of volatile bi-
ogenic amines in muscle food by ion mobility spectrometry． Anal
Chim Acta，2002，463(2) :155
28 Hudgins RR，Mao Y，Ratner MA，et al． Conformations of Gly(n)H
+ and Ala(n)H + peptides in the gas phase． Biophys J，1999，76
(3) :1591
29 Ruotolo BT，Gillig KJ，Woods AS，et al． Analysis of phosphorylated
peptides by ion mobility mass spectrometry． Anal Chem，2004，76
(22) :6727
30 Knapman TW，Berrymana JT，Campuzano I，et al． Considerations in
experimental and theoretical collision cross － section measurements
of small molecules using travelling wave ion mobility spectrometry －
mass spectrometry． Int J Mass spectrom，2010，298(1 － 3) :17
31 Menéndez M，Garrido － Delgado R，Arce L，et al． Direct determina-
tion of volatile analytes from solid samples by UV － ion mobility
spectrometry． J Chromatogr A，2008，1215(1 － 2) :8
32 Donnel RM，Sun X，Harrington P． Pharmaceutical applications of ion
mobility spectrometry． Trends Anal Chem，2008，27(1) :44
33 Sielemann S，Baumbach JI，Schmidt H． IMS with non radioactive ion-
ization sources suitable to detect chemical warfare agent simulation
substances． Int J Ion Mobil Spectrom，2002，5(3) :143
34 Sielemann S，Xie Z，Schmidt H，et al． Determination of MTBE next
to benzene，toluene and xylene within 90 s using GC /IMS with multi
－ capillary column． Int J Ion Mobil Spectrom，2001，4:69
35 Kanu AB，Hill HH． Ion mobility spectrometry detection for gas chro-
matography． J Chromatogr A，2008，1177(1) :12
36 Wu C，Siems WF，Hill HHJ，et al． Improved supercritical fluid chro-
matography － ion mobility spectrometry interface． J Microcolumn，
1999，11:251
(本文于 2011 年 10 月 24 日收到)
(上接第 894 页)
2 HOU Yuan － yuan(侯媛媛) ，LI Ruo － jie(李若洁) ，PENG Jia －
min(彭佳敏) ，et al． Rapid simultaneous determination of atropine，
anisodamine and scopolamine in Huashanshen dripping pill by liquid
chromatography － tandem mass spectrometry［HPLC － MS /MS 法同
时测定华山参滴丸中阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱的含量(英
文) ］． Acta Sci Nat Univ Nankai(南开大学学报 自然科学版) ，
2010，43(4) :29
3 DONG Lin － yi(董林毅) ，ZHANG Yun － hui(张韻慧) ，LI Rui － jie
(李若洁) ，et al． Determination of three active components in Huas-
hanshen dripping pills by RP － HPLC(RP － HPLC同时测定华山参
滴丸中 3 种有效成分的含量)． Chin Pharm J(中国药学杂志) ，
2011，46(5) :385
4 WU Shao － ping(吴少平) ，LIU Xiao － qin(柳小秦)． Study on qual-
ity specifications of Hyoscyamus extract tablets(莨菪浸膏片质量标
准研究)． Chin J Pharm Anal(药物分析杂志) ，2008，28(8) :1319
5 LING Xiao(凌霄) ，XU Zhi － zhou(许志洲)． HPLC determination of
raceanisodamine hydrochloride injection and its related substances
(HPLC法测定盐酸消旋山莨菪碱注射液的含量及有关物质)．
Chin J Pharm Anal(药物分析杂志) ，2011，31(10) :1947
6 LOU Yu － xia(娄玉霞) ，NIE Gui － hua(聂桂华) ，LI Zhen － guo
(李振国)． HPLC determination of scopoletin in Physochlainae(华山
参中东莨菪内酯的含量测定方法研究)． Chin J Pharm Anal(药物
分析杂志) ，2011，31(6) :1137
7 ChP(中国药典). 2010． Vol Ⅰ(一部) :131
(本文于 2011 年 4 月 15 日收到)
—819— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)