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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2015, 31(7):109-114
莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）属于绿
藻门、团藻目、衣藻科，是真核单细胞生物。进化
上比较古老，介于高等植物和动物之间。衣藻的培
养条件简单、生长周期短、光合效率高、遗传背景
清楚，是重要的能源作物，素有“绿色酵母”之称［1］。
其生物学特性与高等植物和动物密切相关，如纤毛
病理学［2］，是目前用于研究纤毛的模式生物中最为
广泛使用的一个［3］。
近年来，人们关于纤毛的知识大多来自于对
莱茵衣藻的研究，如我们对纤毛结构的了解，“鞭
毛内运输”的机制的发现以及与纤毛相关疾病的确
定 等［3］。 其 中， 巴 德 - 毕 氏 综 合 症（Bardet-Biedl
syndrome，BBS）就是一种由多种基因突变造成、与
原生纤毛功能缺失相关的疾病。包含 12 种致病基因，
分别为 BBS1-12［4，5］。BBS 患者的症状包括视网膜
衰退、肾囊形成、多指（趾）症、嗅觉失敏、高血压、
肥胖症乃至精神发育迟滞症等［5］。最近的研究发现
BBS 蛋白位于纤毛或基体，它们参与了纤毛的组装
收稿日期 ：2014-11-12
基金项目 ：武汉市人力资源和社会保障局“衣澡冷适应的系统生物学研究”项目
作者简介 ：陈利红，女，博士，助理研究员，研究方向 ：植物分子生物学 ；E-mail ：clh101@126.com
通讯作者 ：彭海，男，博士，副教授，研究方向 ：分子遗传学 ；E-mail ：penghai138@163.com
莱茵衣藻 BBS1 基因 RNAi 载体的构建及应用
陈利红  李丽丽  高利芬  周俊飞  李甜甜  彭海 
（江汉大学 系统生物学研究院，武汉 430056）
摘 要 ： 巴德 - 毕氏综合症（Bardet-Biedl syndrome，BBS）是一种由多种基因突变造成、与原生纤毛功能缺失相关的疾病，
包含 12 种致病基因，分别为 BBS1-12。旨在通过对衣藻 BBS1 基因进行 RNAi 干扰来研究其在衣藻中的功能。首先搭建衣藻快捷
简单的 RNAi 骨架载体 ；再用 RT-PCR 克隆莱茵衣藻 BBS1 基因的一段 cDNA 序列于中间载体 pEASY-T1 上 ；测序后通过两次酶切
连接到 RNAi 骨架载体上，经菌液 PCR、酶切和测序验证，成功构建 BBS1 基因的 RNAi 干涉载体。经基因枪介导法转化莱茵衣藻
CC503，转基因衣藻具有明显不同于对照的表现型，趋光性发生了改变。
关键词 ： 莱茵衣藻 ；RNAi 载体 ；BBS1 基因 ；趋光性
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.016
Construction and Application of the RNAi Vector for BBS1 Gene in
Chlamydomonas reinhardtii
Chen Lihong Li Lili Gao Lifen Zhou Junfei Li Tiantian Peng Hai
（Institute for System Biology，Jianghan University，Wuhan 430056）
Abstract: Bardet-Biedl syndrome is a disease caused by mutations of various genes and associated with afunction of primary cilia. There
are 12 disease-causing genes of BBS1-12 respectively. This study aimed to understand the function of BBS1 gene in Chlamydomonas reinhardtii
through RNAi interference technology. Firstly, the fast and simple RNAi backbone vector was constructed. Subsequently, a cDNA in BBS1
gene was cloned into media vector pEASY-T1 using RT-PCR. After sequencing, the target fragment was inserted into the RNAi backbone vector
through the twice enzyme digestion. Verified by PCR testing, enzyme digestion and sequencing, the RNAi vector of BBS1 gene was successfully
constructed. The phenotype of transgenic C. reinhardtii CC503 transformed into BBS1 RNAi plasmid by gene gun was significantly different from
that of the control and their phototaxis changed compared to the control.
Key words: Chlamydomonas reinhardtii ；RNAi vector ；BBS1 gene ；phototaxis
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.7110
过程和信号传导过程［6］。在莱茵衣藻中，抑制 BBS5
的表达，纤毛将不能形成［6］；BBS1 或 BBS4 基因突
变的莱茵衣藻丧失趋光性［4］，但是其失去趋光性的
分子机制尚不清楚，有待人们进一步深入研究。
2007 年莱茵衣藻基因组测序的完成为莱茵衣
藻反向遗传学的研究提供了可能。RNA 干扰（RNA
interference，RNAi）是指在进化过程中高度保守、
由双链 RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发、
同源 mRNA 高效特异性降解的现象［7，8］。它是一种
高效的特异性强的基因阻断技术，近年来发展迅速，
目前已成为功能基因组研究领域中一种简单、有效
的代替基因敲除的遗传工具，在一定程度上起到了
基因 Knock-down 的效果［9，10］。因此若用 RNAi 技术
对衣藻 BBS1 进行研究，将会促进人们深刻了解和
认识莱茵衣藻趋光性的分子机制，同时有可能揭示
出“纤毛相关疾病”发生的分子机理，为 BBS1 基
因功能的进一步揭示及衣藻趋光性分子机制的阐明
奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
试 材 莱 茵 衣 藻 CC503， 购 自 于 美 国 Duke 大
学衣藻中心。藻株接种 到 固 体 TAP（Tris-Acetate-
Phosphate）平板上进行继代培养。
菌 株 大 肠 杆 菌 DH5α 为 本 实 验 室 保 存。
pEASY-T1 Cloning Kit 购自于北京全式金生物技术
有限公司，中间载体 pChlamy_3 载体质粒购自于
Invitrogen 公司。反转录试剂及各种内切酶购自于
NEB 公司，各种 Taq 聚合酶购于大连宝生物公司。
1.2 方法
1.2.1 衣藻 RNAi 骨架载体的搭建
1.2.1.1 pGH-intron 中间载体的构建 利用 CTAB 法
提取莱茵衣藻基因组 DNA，以其为模板，根据已经
发表的磷酸核酮糖激酶（Phosphoribulokinase）序列
信息（GenBank 登录号 ：AAA33090.1），设计一对引
物 PRF1 ：5-GTGAGCAAGAGATGCGGC-3，PRR1 ：
5-CTGGTGGGGAGGAGGGAG-3，PCR 扩 增 其 第 4
段内含子，连接到 pEASY-T1 载体，并进行测序，
获得磷酸核酮糖激酶的第 4 段内含子序列，即间隔
序列。将设计好的两端带有合适多克隆位点的间隔
序列委托捷瑞生物工程有限公司进行合成，并构
建到由该公司提供的 pGH 载体上，形成中间载体
pGH-intron。
1.2.1.2 pChlamy_RNAi 骨架载体的构建 以 pGH-
intron 为载体的基本骨架，利用 PCR 技术设计 4 条
引物分别扩增 pChlamy_3 载体上的启动子序列，引
物 为 HSPF1 ：5-AACTGCAGTCGCTGAGGCTTGAC-
ATG-3（下划线部分为 Pst Ⅰ酶切位点）与 HSPR1 ：
5-GGGGTACCTTTAAGATGTTGAGTGACTTC-3
（下划线部分为 Kpn Ⅰ酶切位点）；扩增含有终止
子（3UTR）和潮霉素标记完整表达框序列，引物
为 UTRHYGF1 ：5-GCTCTAGACCGCTCCGTGTA-
AATGGA-3（ 下 划 线 部 分 为 Xba Ⅰ 酶 切 位 点 ） 与
UTRHYGR1 ：5-AGAATGCGGCCGCAGTACCATCAA-
CTGACG-3（下划线部分为 Not Ⅰ酶切位点）；扩增
产物酶切后相继插入到 pGH-intron 的多克隆位点之
间，并进行测序验证，从而形成衣藻的 RNAi 骨架
载体，命名为 pChalmy-RNAi 载体。
1.2.2 BBS1 基 因 干 涉 片 段 的 获 得 为 确 认 cDNA
选取片段对 BBS1 基因干扰效果的影响，选取了
BBS1 基因上的两段序列进行干扰，克隆出来的片
段分别命名为 BBS1.1 和 BBS1.2。具体方法如下 ：
TRIzoL 提取莱茵衣藻总 RNA，并用 M-MuLV 反转
录酶进行 cDNA 第一条链的合成。然后再以合成的
cDNA 为 PCR 模板，用 BBS1.1F 与 BBS1.1R 引物对
及 BBS2.1F 与 BBS2.1R 引 物 对 进 行 PCR 扩 增， 扩
增产物分别连接到 pEASY-T1 载体上并测序，形成
pEASY-T1-BBS1.1/2.1 中间载体，获得 BBS1 基因两
段干涉片段 BBS1.1 和 BBS2.1。 其中克隆 BBS1 基因
上这两段序列所用的引物如下 ：
BBS1.1F ：5-GCTCTAGAGGGGTACCAGTCCAA-
CCCAAACGATTAC-3（下划线部分分别为 Xba Ⅰ和
Kpn Ⅰ 酶 切 位 点 ）；BBS1.1R ：5-GATTCCATATGG-
ACTAGTGTCGCCAAACAGATTACAAG-3（ 下 划 线
部分分别为 Nde Ⅰ和 Spe Ⅰ酶切位点）；BBS2.1F ：
5-GCTCTAGAGGGGTACCCGGGCGTATGTCAAGG-
TC-3（下划线部分分别为 Xba Ⅰ和 Kpn Ⅰ酶切位点）；
BBS2.1R ：5-GATTCCATATGGACTAGTGCACCAG-
GAAGGGTATCG-3 （下划线部分分别为 Nde Ⅰ和
Spe Ⅰ酶切位点）。
2015,31(7) 111陈利红等 ：莱茵衣藻 BBS1 基因 RNAi 载体的构建及应用
1.2.3 BBS1 基因 RNAi 载体的构建 酶切含有 BBS1
基因正向目的片段的 pEASY-T1-BBS1.1/2.1 中间载
体质粒，与同样经 Kpn Ⅰ和 Spe Ⅰ酶切的 pChlamy_
RNAi 骨架载体连接，获得含有 BBS1 基因正向目的
片段的 pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_F 中间载体。
酶切含有 BBS1 基因反向目的片段的 pEASY-
T1-BBS1.1/2.1 中 间 载 体 质 粒， 与 同 样 经 Nde Ⅰ
和 Xba Ⅰ 酶 切 的 含 有 BBS1 基 因 正 向 目 的 片 段 的
pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_F 中 间 载 体 连 接， 获 得
含 有 BBS1 基 因 正 向 和 反 向 目 的 片 段 的 pChlamy_
RNAi_BBS1.1/2.1_FR RNAi 载体。
1.2.4 BBS1 基因 RNAi 载体的转化与筛选 取对数
期生长的无细胞壁的莱茵衣藻 CC503，用基因枪方
法转化，转化后在弱光下培养 2 d 后，将固体平板
上的莱茵衣藻转移至含 10 mg/L 潮霉素的 50 mL 液
体培养基中进行筛选，培养 7-10 d 直至液体培养基
中绿色完全褪去，再取 2 mL 涂在固体平板上进行固
体筛选（10 mg/L hygromycin），7 d 左右长出单克隆，
挑单克隆至液体培养。
1.2.5 Real-time PCR 分析 BBS1 基因的沉默效果
分别提取 CC503 野生型及转 pChlamy_RNAi_BBS1.1/
2.1_FR 质粒的莱茵衣藻总 RNA。反转录合成 cDNA
第 一 链， 然 后 以 其 为 Real-time PCR 的 模 板 ；S26
RNA 作为内参［11］，进行 Real-time PCR 扩增。检测
野生型及转 pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_FR 质粒的莱
茵衣藻中目标基因 mRNA 的表达变化，以确定对目
标基因的干扰效果。所用内参及靶基因引物对如下：
S26F ：5-CGCCCTGCCCAAGATTTA-3 ；S26R ：5-
CGCGGCTGTGGATAGCA-3 ；BBS1QF ：5-GGGCGT-
ATGTCAAGGTC-3；BBS1QR5：5-GCACCAGGAAGG-
GTATCG-3。
1.2.6 莱茵衣藻趋光性分析 分别取对数生长期的
野生型 CC503 及转基因莱茵衣藻于培养皿中，然后
用锡箔纸包严，只留一定大小的空隙以便光源射入，
2 h 后观察两株系莱茵衣藻的趋光性变化。
2 结果
2.1 衣藻RNAi骨架载体的搭建
利用 PCR 技术，扩增了衣藻磷酸核酮糖激酶
蛋白的第 4 段内含子，然后连接到 pEASY-T1 载体，
并进行测序，大小为 497 bp（图 1）。在该段序列两
端设计合适的多克隆酶切位点，委托上海捷瑞生物
工程有限公司进行合成，并构建到由该公司提供的
pGH 载体上，形成中间载体 pGH-intron。
2000
1000
750
500 497
bpbp
M 1 2
250
100
M ：D2000 Marker ；1，2 ：莱茵衣藻磷酸核酮糖激酶第 4 段内含子 PCR 产物
图 1 莱茵衣藻磷酸核酮糖激酶第 4 段内含子的 PCR 产物
利用 PCR 技术，设计合适的含有相应酶切位点
的引物，分别扩增 Invitrogen 公司 pChlamy_3 载体上
的启动子序列及含有终止子和潮霉素标记完整表达
框序列（图 2），PCR 产物酶切后相继连接到中间载
体 pGH-intron 上，并测序验证，形成衣藻 RNAi 载
体的基本骨架，命名为 pChalmy-RNAi 载体（图 3）。
2000
1000
750
500 496
1864
bpbp
M 1 2 3 4
250
100
M ：D2000 Marker ；1，2 ：莱茵衣藻嵌合组成型表达启动子 HSP70A/RBC S2
的 PCR 产物 ；3，4 ：莱茵衣藻 3UTR 与潮霉素筛选标记表达框序列的 PCR
产物
图 2 莱茵衣藻启动子和 3UTR 与潮霉素表达框序列的
PCR 产物
2.2 BBS1基因干涉片段的获得
根 据 phytozome 数 据 库 公 布 的 BBS1 基 因
（g17944.t1）报道的序列，设计了两对引物分别扩增
BBS1 基因上两段序列，然后连接到 pEASY-T1 载体，
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.7112
并进行测序形成 pEASY-T1-BBS1.1/2.1 中间克隆载
体，扩增产物片段大小分别为 188 bp 和 229 bp，结
果与预期大小一致（图 4）。另外，由于我们设计的
每条引物上均含有正向插入位点和反向插入位点合
适的酶切位点，因此中间载体 pEASY-T1-BBS1.1/2.1
上相当于既含有靶基因的正向片段序列又含有反向
片段序列，因此无需再进行反向片段的克隆，节省
了构建时间和实验成本。
样经这两个酶酶切的含有 BBS1 基因正向目的片段
的 pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_F 中间载体连接，获
得含有 BBS1 基因正向和反向目的片段的 pChlamy_
RNAi_BBS1.1/2.1_FR RNAi 载 体， 经 Kpn I 和 Xba
I 酶切鉴定，结果（图 5-B）表明大小与预期大小
一致。
Forward Reverse
Pst l
HSP intron 3 U˃TR β2-T hpt
Kpn l Spe l Bg lll Nde l Xba l Not l
HSP ：嵌合的 HSP70A/Rbc S2 启动子 ；intron ：衣藻磷酸核酮糖激酶蛋白的
一 段 内 含 子 ；3UTR ：Rbc S2 终 止 子 ；β2-T ：β2-tubulin 启 动 子 ；hpt ：含
有终止子的潮霉素选择标记基因序列 ；Forward ：目的基因的正向片段 ；
Reverse ：目的基因的反向片段
图 3 衣藻 RNAi 骨架载体构建示意图
2000
bp bp
M 1 2 3 4
1000
750
500
250
100
229
188
M ：D2000 Marker ；1，2 ：BBS1 基因干涉片段 BBS1.1 的 PCR 扩增 ；
3，4 ：BBS1 基因干涉片段 BBS2.1 的 PCR 扩增
图 4 BBS1 基因干涉片段的 PCR 扩增
2.3 BBS1基因RNAi载体的构建
用 Kpn Ⅰ和 Spe Ⅰ 酶切含有 BBS1 基因正向目
的片段的 pEASY-T1-BBS1.1/2.1 中间载体，然后与
同样经这两个酶酶切的 pChlamy_RNAi 骨架载体连
接，获得含有 BBS1 基因正向目的片段的 pChlamy_
RNAi_BBS1.1/2.1_F RNAi 载体。由于靶基因片段较
小，因此用 Kpn Ⅰ和 Nde Ⅰ进行酶切，多了中间的
内含子序列，片段大小 750 bp 左右（图 5-A），结果
与预期大小一致，表明获得了含有 BBS1 基因正向
目的片段 pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_F 中间载体。
用 Nde Ⅰ和 Xba Ⅰ酶切含有 BBS1 基因反向目
的片段的 pEASY-T1-BBS1.1/2.1 中间载体质粒，与同
M 1 2
2000
bp
1000
750
500
250
100
M 3 4
2000
bp
1000
750
500
250
100
䞦࠷⡷⇥A B
M ：D2000 Marker ；1，2 ：Kpn Ⅰ和 Nde Ⅰ双酶切鉴定含有 BBS1 基因正向
片 段 pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_F RNAi 质 粒 ；3，4 ：Kpn Ⅰ 和 Xba Ⅰ 双
酶切鉴定含有 BBS1 基因正向和反向片段的 pChlamy_RNAi_BBS1.1 /2.1_FR
RNAi 载体质粒
图 5 BBS1 基因 RNAi 载体的酶切检测
2.4 莱茵衣藻的转化及转基因藻株的检测与分析
采用基因枪法将 pChlamy_RNAi_BBS1.1/2.1_FR
RNAi 载体转化莱茵衣藻 CC503。转化后先在含有
潮霉素的液体培养基上进行初步筛选，再涂在固体
平板上进行筛选。然后随机挑取转干涉片段 BBS1.1
或 BBS2.1 RNAi 质 粒 的 转 基 因 衣 藻 单 克 隆（ 每 个
干涉片段选取 10 个单克隆）进行提取 DNA，以扩
增 pChlamy_3 载体上启动子序列的引物对 HSPF1 和
HSPR1 进行 PCR 检测。结果（图 6）显示，扩增条
带大小约 500 bp，与预期大小一致，其中只有一个
单克隆未扩增出目标条带，阳性转化率高达 95%，
证明了转化和筛选方法的可行性。
2.5 Real-time PCR分析BBS1基因的沉默效果
取 野 生 型 CC503 及 转 pChlamy_RNAi_BBS1.1/
2.1_FR 质粒的莱茵衣藻，分别提取总 RNA。其中
转 pChlamy_RNAi_BBS1.1_FR 质粒获得的阳性转化
子后代命名为 BBS1.1_n（n 代表哪个单克隆），转
pChlamy_RNAi_BBS2.1_FR 质粒获得的阳性转化子后
代命名为 BBS2.1_n（n 代表哪个单克隆）。以其反转
录合成的 cDNA 第一链为 Real-time PCR 模板，进行
2015,31(7) 113陈利红等 ：莱茵衣藻 BBS1 基因 RNAi 载体的构建及应用
BBS1 基因沉默效果分析。其中荧光定量 PCR 数据
采用 2-ΔΔCt 法分析。结果（图 7）表明，针对 BBS1
基因设计的 RNAi 干扰片段，确实抑制了 BBS1 的
表达。
其构建步骤较为繁琐，需要多次酶切和连接才能构
建成功［12，13］，而且其转化后阳性克隆子的筛选效果
也不理想。本研究搭建的 RNAi 载体只需在靶基因
片段两段加上合适的酶切位点，克隆得到的 cDNA
片段再经两次酶切与连接即可得到目的基因的 RNAi
载体，试验方法简单易行，大大节约了构建时间与
实验成本。
随后，针对 BBS1 基因设计的两个干涉片段被
构建到我们所搭建的 RNAi 载体上，并转化莱茵衣
藻 CC503。 转化后的藻株先在固体平板上长 2 d 后，
转移到含有潮霉素的液体筛选培养基上再培养一周，
绿色褪去后又涂在固体平板上进行筛选，长出的单
克隆 95% 都是阳性，比未经液体培养基筛选，转化
后直接涂在固体筛选培养基上获得的单克隆阳性率
（4%）提高了几十倍。因此该筛选方案，不仅减少
了工作量，还节约了实验成本，值得同行借鉴。
对转化 BBS1 基因后的藻株进行抑制效果分析
结果表明，选取的两个干涉片段对 BBS1 基因均起
到了明显的抑制作用，改变了莱茵衣藻的趋光性，
说明 BBS1 基因在调控衣藻趋光性信号通路中起着
重要作用。但其如何调控衣藻趋光性信号通路，具
体由哪些基因参与，尚不清楚，是我们进一步要研
究的重点。我们将应用本实验室的高通量测序平台，
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1110 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
2000
bp
1000
750
500
250
100
M：DNA Marker；1-10：转 pChlamy_RNAi_BBS1.1_FR 质粒衣藻的 PCR 检测；
11-20 ：转 pChlamy_RNAi_BBS2.1_FR 质粒衣藻的 PCR 检测 ；21 ：CC503 野
生型
图 6 转基因衣藻的 PCR 检测
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
cc503 BBS1.1-1 BBS1.1-8 BBS1.1-13 BBS2.1-1 BBS2.1-2 BBS2.1-7
⴨ሩ㺘䗮䟿
图 7 BBS1 基因的 mRNA 表达水平
2.6 莱茵衣藻趋光性分析
分别取对数生长期的野生型 CC503 及转基因莱
茵衣藻，放入一定体积的培养皿中，然后用锡箔纸
包严，只留一定大小的空隙以便光源射入，2 h 后，
观察两株系莱茵衣藻的趋光性变化。结果（图 8）
显示，本研究所设计的针对 BBS1 基因上两段干扰
片段的干扰效果均较好，野生型莱茵衣藻 CC503 绝
大部分移动到靠近光源的一侧，而干扰 BBS1 基因
后的转基因莱茵衣藻对光线不敏感。
3 讨论
目前莱茵衣藻中已经有相应的 RNAi 载体，但
BBS2.1-2 BBS2.1-7
CC503
BBS1.1-8
图 8 莱茵衣藻的趋光性分析
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.7114
对转 BBS1 基因的藻株与对照进行转录组测序及分
析，以找到其调控的信号网络及网络中的关键基因，
为莱茵衣藻趋光性分子机制的阐明奠定基础。
另外，研究发现有些 BBS 患者具有不同程度的
嗅觉丧失，在 BBS1 或 BBS4 基因敲除掉的老鼠中嗅
觉纤毛数目降低［14］。BBS 蛋白位于纤毛或基体，它
们参与了纤毛的组装过程和信号传导过程。在线虫
中，BBS 蛋白是连接和协调“鞭毛内运输”蛋白颗
粒中的蛋白质 A 和 B 复合体，是纤毛形成所必需
的［15］。在斑马鱼中，BBS1 基因突变后，没有影响
纤毛的形成，而是影响其运动性。在衣藻中，抑制
BBS5 的表达，纤毛将不能形成。突变 BBS1、BBS4
或者 BBS7 基因，破坏了衣藻的趋光性［4］，但并不
影响鞭毛的组装，其趋光性的分子机制及是否影响
鞭毛的运动尚未阐明，有待于进一步研究。
除此之外，本研究所构建的 RNAi 骨架载体直
接可应用到衣藻中其它基因功能的研究，为后期进
行 BBS1 基因所参与的信号通路中其它的功能基因
的鉴定及同行进行衣藻功能基因的研究提供了宝贵
的载体资源。因此，本研究具有较好的理论价值和
应用价值。
4 结论
本研究成功构建了衣藻的 RNAi 骨架载体，并
将衣藻中 BBS1 基因的干涉片段构建到该骨架载体
上，转化衣藻 CC503 ；抑制了 BBS1 基因表达，改
变了衣藻的趋光性。
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（责任编辑 马鑫）