全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第2期
收稿日期 ：2012-07-17
基金项目 ：国家自然科学基金资助项目（30860076），新疆大学博士启动基金项目（BS060104）
作者简介 ：布威海丽且姆·阿巴拜科日，女，硕士研究生，研究方向 ：生物化学与分子生物学 ；E-mail ：buwihelqem@sina.com
通讯作者 ： 依米提·热合曼，男，博士，副教授，硕士生导师，研究方向 ：天然物中生物活性成分的分离及其抗肿瘤作用机理 ；
E-mail ：yimitrahman@gmail.com
新疆蜂胶提取物抗氧化活性及槲皮素和
白杨素含量测定
布威海丽且姆·阿巴拜科日  木塔力甫·艾买提  阿米尼姑丽·买买提   
尼砸木·艾海提  依米提·热合曼
（新疆大学生命科学与技术学院，乌鲁木齐 830046）
摘 要 ： 旨在探讨新疆伊犁蜂胶和库车蜂胶不同溶剂提取物清除 1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基和抗油脂过氧化力的
作用，并测定新疆伊犁蜂胶的主要生物活性物质槲皮素和白杨素的含量。处理原蜂胶，以 4 种溶剂提取蜂胶，用 DPPH 自由基法
和抗亚油酸过氧化法对新疆伊犁蜂胶和库车蜂胶提取物进行抗氧化活性的测定。以 70% 乙醇和甲醇作为提取溶剂从新疆伊犁蜂胶
中提取槲皮素和白杨素 ；用高效液相色谱法对所提取的槲皮素和白杨素进行含量测定，测定波长分别为 370 nm 和 268 nm。结果显
示，对 DPPH 自由基的清除能力在蜂胶不同提取物和不同浓度之间则有差异，部分试验组的清除能力优于同浓度的茶多酚 ；对亚
油酸均有抗氧化活性，其中伊犁蜂胶抗亚油酸过氧化活性较好。在乙醇提取液里槲皮素的含量最低，为 2.2950 mg/g，而在经脱脂
的甲醇提取液里其含量最高，为 2.8150 mg/g ；在甲醇提取液里白杨素的含量最低，为 60.72 mg/g，而在经脱脂的甲醇提取液里其含
量最高，为 74.37 mg/g。伊犁和库车蜂胶具有一定的抗氧化作用 ；DPPH 自由基法是一种快速、灵敏、简便的方法，结果表明，新
疆产蜂胶可作为天然抗氧化剂进一步开发和利用 ；经过高效液相色谱法（HPLC）的分析结果表明，活性成分槲皮素和白杨素从新
疆伊犁蜂胶样品中可被检测出。
关键词 ： 蜂胶 抗氧化剂 DPPH TBA 高效液相色谱 槲皮素 白杨素
Antioxidant Activity of Solvent Extracts of Xinjiang Propolis and
Determination of Quercetin and Chrysin Propolis
Buwihelqem Ababekri Mutallip Amet Aminigul Mamat Nizam Ehet Yimit Rahman
（The College of Life Science and Technology of Xinjiang University，Urumqi 830046）
Abstract:  To study the DPPH free radical scavenging activity and anti-lipid peroxidation activity of Kuqa and Yili, and determine the
content of the Quercetin and Chrysin in Xinjiang Yili propolis. Different extracts of raw propolis were extracted by four kinds of solvents, taking
tea polyphenol as comparison ；measure Kuqa and Yili, Xinjiang propolis extracts antioxidant activity in removal of DPPH（1, 1-Diphenyl-
1-picrylhydrazyl）free radicals and antioxidant properties of linoleic acid peroxidation. With 70% ethanol and methanol as solvent to extract
Quercetin and Chrysin from Xinjiang Yili propolis, using HPLC（high performance liquid chromatography）to determine the content of the
extracted Quercetin and Chrysin, the detection wavelength was 370 nm and 268 nm, respectively. Result showed that propolis different extracts
in different concentrations has different scavenging free radical DPPH capacity, in partial experimental groups’ scavenging capacity is even
surpassed to same concentration of tea polyphenol group ；has antioxidant activity to linoleic acid, in which Yili propolis has higher anti-
peroxidation activity. The content of Quercetin was the lowest in the without defatted ethanol extracts（2.2950 mg/g）, the highest in the defatted
methanol extracts（2.8150 mg/g）；The content of Chrysin was the lowest in the without defatted methanol extracts（60.72 mg/g）, the highest
in the defatted methanol extracts（74.37 mg/g）. The Kuqa and Yili propolis has a certain extent of antioxidant capacity, this DPPH method is
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期164
蜂胶的化学组分非常复杂，生物学活性多样［1］。
现代药理研究表明，蜂胶总黄酮具有抗病毒、抗肿瘤、
抗氧化、降血脂、调节机体免疫功能等多种生物活
性作用［2］。国内外大量的科学研究证明，蜂胶对
机体的诸多保健功效与其抗氧化活性有着密切的关
系［1］。蜂胶中含有丰富的黄酮类化合物，其品种和
含量之丰富，非植物药所能相比，目前世界各地蜂
胶样品中分离出来的黄酮类化合物已有 70 多种［3］。
新疆大学实验室从新疆伊犁蜂胶的 95% 乙醇提取物
中采用 GC-MS 法已鉴定了 23 种化合物，其主要成
分为黄酮类物质［4］。蜂胶中的黄酮类化合物主要包
括黄酮醇类、黄酮类和黄烷酮类。常见的黄酮醇类
有槲皮素、良姜素、芦丁等 ；黄酮类主要有芹菜素、
白杨素等 ；二氢黄酮类主要有松属素等 ；异黄酮有
后莫紫檀素等［5-7］。多种药用植物中的现有研究已
表明，槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗菌、
抗病毒、抑制恶性肿瘤生长和转移等多方面药理作
用，能提高免疫能力、对冠心病及高血压患者也有
辅助治疗作用，成为近年来国内外学者研究的热门
课题［8］。大量研究表明，白杨素还具有抗病毒［9］、
抗高血压［10］、抗糖尿病［11］、抗菌抗过敏［12］等作用。
由于白杨素对常见病、多发病所具有的重要的生理
作用，也引起了人们的广泛关注。目前，对蜂胶成
分的分析主要采用高效液相色谱法［13-15］。蜂胶中的
黄酮类化合物、咖啡酸酯类等成分都具有较强的清
除自由基和抗氧化能力［16］。蜂胶抗氧化活性的测定
方法，包括清除羟自由基和氧自由基能力测定法、β-
胡萝卜素一亚油酸法、清除 1，1-二苯基苦基苯肼（1，
1-Diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH） 自 由 基 法、2-
连氮 -双（3-乙基苯并噻唑 -6-磺酸）［2，2-azinobis
（3-ethly-binzothiazoline-6-sulfonic acid），ABTS2］ 阳
离 子 脱 色 法、 铁 还 原 抗 氧 化 能 力 测 试 法（ferric
reducing antioxidant power，FRAP）、 氧 化 自 由 基 吸
收 能 力 测 定 法（oxygen radical absorption capacity，
ORAC）等［17］。蜂胶的化学成分及其各种生物学活
性取决于其收集产地［18］，因此，产地是影响蜂胶抗
氧化活性的重要因素之一。有关研究证明，澳大利
亚、中国、匈牙利、新西兰的蜂胶清除 DPPH 自由
基的能力较强，清除能力达 60％以上。不同蜂胶样
品中清除 DPPH 自由基活性和总多酚含量之间呈正
相关 R2=0.762。多酚含量与抗氧化作用具有显著性
相关 R2=0.671［19］。可见，清除 DPPH 自由基法是检
测抗氧化活性的有效、快速方法。
王小平等［20］对河南、山东、甘肃、内蒙产的
蜂胶中的槲皮素含量进行测定分析，由于新疆所处
的特殊地理位置和气候条件，就药用植物的种类与
其他省、自治区相比有较大的差异，很多种类属新
疆特有种，蜜源植物是蜜蜂赖以生存，及蜂腊、蜂
胶等各种蜂产品的物质基础。新疆野生蜜源植物比
较丰富，约有 200 种。由于受生态系统和气候条件
的影响，植物渗出物和分泌物的不同导致了不同地
区采集的蜂胶化学成分的差异，生物学活性也因此
有所变化，所以新疆产蜂胶的化学成分与生物学活
性与其他种类也必然存在较大的差异。就这一科研
领域，尚未见有关基于新疆产蜂胶进行抗氧化活性
及其活性成分槲皮素和白杨素含量测定研究的报道。
本研究首先从新疆产蜂胶有效成分的提取及其抗氧
化作用着手，采用超声波提取法和不同有机溶剂提
取蜂胶，检测其对 DPPH 自由基的清除能力和抗亚
油酸过氧化能力，进一步检测其生物活性物质——
黄酮类化合物，将其开发成天然抗氧化物质 ；其次
利用比较先进的研究方法对新疆产蜂胶活性成分槲
皮素和白杨素的含量进行分析，旨在对新疆产蜂胶
产品产业化、标准化提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 原料及来源 蜂胶取自新疆伊犁尼勒克县和
阿克苏库车县养蜂场，采集时间 ：秋季。纯度均为
98% 的槲皮素对照品和白杨素对照品（金测分析技
术天津有限公司）。
fast, sensitive and simple, this results showed that the Xinjiang propolis is a natural antioxidant, and waiting for further study and utilization ；
HPLC analysis showed that Quercetin and Chrysin the active ingredients of propolis samples from Xinjiang Yili were detected.
Key words:  Propolis Antioxidant DPPH TBA HPLC Quercetin Chrysin
2013年第2期 165布威海丽且姆·阿巴拜科日等 ：新疆蜂胶提取物抗氧化活性及槲皮素和白杨素含量测定
1.1.2 仪器和试剂 筛子（60-120 目）；PYX-DHS-
40X50-B 型隔水式电热恒温培养箱 ；λ-17 型紫外可
见光谱仪（PE 美国，波长范围 190-900 nm，准确
度 ±0.3）；HP1100 高效液相色谱仪（安捷伦科技公
司，原惠普公司）；JY92-2D 型超声波细胞破碎仪（宁
伯新芝生物科技股份有限公司）；2GKC14 型控温水
浴锅、冷柜、定量滤纸、容量瓶、电子天平、烧杯、
移液管 ；DPPH（1，1-二苯基苦基苯肼，C18H12N5O6，
相对分子质量 394.3，Fluka 公司）、硫代巴比妥酸
（2-Thiobarbituric acid，TBA）、亚油酸、无水乙醇、
茶多酚、乙酸乙酯、正丁醇、三氯乙酸、醋酸钾、
丙酮等试剂均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 蜂胶的提取
1.2.1.1 预处理 将原料蜂胶放入冰箱冷冻 5 h（蜂
胶在 15℃以下变硬变脆，在此温度以上具有黏性，
不便粉碎），粉碎，过 40 目筛。分别标准称取 3 g
伊犁和库车原蜂胶并加上 150 mL 蒸馏水，在 65℃
放置 4 h 后抛弃蜂蜡和滤杂，备用。
1.2.1.2 蜂胶的各溶剂提取 分别称取预处理过的
蜂胶→分别加入 15 倍体积的各溶剂（80% 乙醇、丙
酮、乙酸乙酯和正丁醇）→在超声波细胞粉粹机处
理 20 min（20℃）→过滤→放 65℃水浴锅，干燥→
称重（计算提取率）→避光处保存，备用。
1.2.2 清除 DPPH 自由基能力的测定
1.2.2.1 测定原理 DPPH 自由基在有机溶剂中是一
种稳定的自由基，其孤对电子在 517 nm 附近有强吸
收（显深紫色）。当有机清除剂存在时，孤对电子被
配对，吸收消失或减弱，通过测定吸收减弱的程度，
可评价自由基清除剂的活性。
1.2.2.2 测定方法 秤取将茶多酚和已提取备用的
蜂 胶 用 80% 乙 醇 配 制 成 质 量 浓 度 为 10、20、40、
60、80 和 100 μg/mL 的系列样品。准确称取 DPPH
试剂 0.098 6 g，用无水乙醇溶解定容至 500 mL 容量
瓶中，得到 DPPH 贮备液浓度为 197.2 mg/mL，摇匀
置于冰箱中冷藏备用。使用时，将 DPPH 贮备液稀
释成浓度为 39.44 mg/mL DPPH 溶液。
取 2 mL DPPH 溶液溶解待测物，充分混合，静
置 40 min。在 517 nm 处测定其吸光度。每个样品平
行做 3 次。各待测物对 DPPH 的清除率 K，可由下
列公式 ：
K=［1-（Ai-Aj）］/Ac×100%
其中，K 为样品对 DPPH 自由基的清除率 ；Ai
为 2 mL DPPH 溶液 + 2 mL 待测试液的吸光度 ；Aj
为 2 mL 待测试液 +2 mL 乙醇的吸光度 ；Ac 为 2 mL
DPPH 溶液 +2 mL 乙醇的吸光度。
1.2.3 抗油脂过氧化力的测定［21］
1.2.3.1 测定原理 油脂发生过氧化反应从其化学
本质来讲，主要是油脂中含有不饱和脂肪酸。尤其
是亚油酸和亚麻酸上含有的 1，4 戊二烯结构使它们
对氧化的敏感性远远超过油酸中丙烯体系，这种氧
化作用又受到金属离子如 Fe2+、Cu2+ 的催化，氧化
反应一旦被启动，很容易形成链式反应，加速油脂
的氧化酸败。抗氧化剂作为氢给予体和自由基接受
体起着抑制链式反应的作用，从而使油脂过氧化反
应的发生受到一定的限制。该方法的原理是［22］：丙
二醛是油脂被氧化后的产物，它可以与 TBA 反应生
成有色产物可在 532 nm 下测定出其吸光值，吸光度
值表示油脂氧化程度，其值越大，氧化程度越严重，
当油脂中加入抗氧化剂时，就会减少氧化反应的发
生从而降低丙二醛的含量。
1.2.3.2 测定方法［23］ 秤取将已提取备用的伊犁和
库车蜂胶用 95% 乙醇配制成质量分数为 0.2% 的蜂
胶提取液。配制 2.5% 的亚油酸和 95% 乙醇溶液作
底物溶液，分别加入已配好的 0.2% 蜂胶和 95% 乙
醇提取物（1∶1），蜂胶的终质量分数为 0.1%，向
空白组不加蜂胶提取液。混匀后置于培养箱中于
（40±1）℃下培养，定时取待测样品 1 mL，加入 1
mL 25% 的三氯乙酸，混匀，放置，终止反应。然后
加入 1 mL 0.67% TBA，于沸水浴中加热 10 min。取
出冷却后加入 4 mL 正丁醇，摇匀，于 4 000 r/min 离
心 10 min，取上层正丁醇液，于 532 nm 处测定光吸
收值 A，同时测定不加抗氧化物（蜂胶提取液）空白
组的光吸收值 A，吸光值越小表明抗氧化能力越强。
1.2.4 高效液相色谱（High performance liquid chro-
matography，HPLC）法分析蜂胶提取液的活性成分槲
皮素和白杨素的含量
1.2.4.1 测定原理 当流动相（液体）中携带的混
合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期166
于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定
相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动
相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平
衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按
一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法
结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
1.2.4.2 测定方法
（1）测定波长的选择 ：取一定浓度的槲皮素对
照品溶液和白杨素甲醇溶液分别置于 190-400 nm 和
200-600 nm 波长范围内进行光谱扫描，结果分别在
370 nm 和 268 nm 波长处有最大特征光吸收，此时
检测基线稳定，槲皮素峰和白杨素峰前后杂质峰干
扰小，因此，对于槲皮素选择 370 nm、对于白杨素
选择 268 nm 作为测定波长。
（2）原料预处理 ：将原料伊犁蜂胶放入冰箱冷
冻 5 h（蜂胶在 15℃以下变硬变脆，在此温度以上
具有黏性，不便粉碎），取原蜂胶 5 g，用研钵磨碎，
过 40 目筛，加入 50 mL 水，放入 65℃水浴中 4 h，
充分搅拌，除去蜂蜡和杂质，置于顺风处，以便干
燥备用。
（3）蜂胶的提取 ：准确称取干燥并恒重的伊
犁蜂胶样品 2 g 于烧杯中，分别精密加入 50 mL 的
70% 乙醇和甲醇，称定重量，超声处理 30 min（20℃，
600 W），冷却，再称定重量，分别用 70% 乙醇和甲
醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取滤液 25
mL，置于分液漏斗中，加石油醚（60-90℃）萃取 2 次，
每次 25 mL。弃去石油醚液，分别取 70% 乙醇和甲
醇液，置水浴上蒸干。将粉碎的伊犁蜂胶称 2.5 g 分
别加入 5 倍的一定浓度的 70% 乙醇和甲醇提取溶液
中，超声处理 30 min（20℃，600 W）。30℃浸渍 48 h，
提出浸液，减压回收 70% 乙醇和甲醇。
（4）供试品溶液的制备 ：精密称取槲皮素和白
杨素样品 0.2 g，分开置于 50 mL 容量瓶中分别加
70% 乙醇和 45 mL 甲醇使溶解，分别用 70% 乙醇和
甲醇定容至划度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，
滤液作为供试品溶液，注入 HPLC 色谱仪，测定。
（5）对照品溶液的制备 ：精密称取槲皮素对照
品 5.0 mg， 置 200 mL 容 量 瓶 中， 加 70% 乙 醇 166
mL 并摇匀，即得槲皮素对照品（浓度为 30 μg/mL）。
精密称取白杨素对照品 5.0 mg，置 125 mL 容量瓶中，
用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得白杨素对照
品溶液（浓度为 40 μg/mL）。
（6）色谱条件 ：测定槲皮素的色谱条件 - 色谱
柱 ：Spherisorb（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相 ：
甲醇 -16.7% 四氢呋喃的 0.4% 磷酸溶液（38∶62）；
流 速 ：1.0 mL/min ；检 测 波 长 ：370 nm ；柱 温 ：
40℃。测定白杨素的色谱条件 - 色谱柱 ：Diamonsil
CL8（5 μm，4.6 mm×200 mm）；流动相：甲醇 - 水（35：
25）；流速 1.0 mL/min ；检测波长 ：268 nm ；柱温为
25℃。
（7）标准曲线的制定 ：在选定的色谱条件下，
分别精密吸取槲皮素对照品溶液（0.03 mg/mL）4、8、
12、16、20 μL 和白杨素对照品溶液（0.04 mg/mL）2.5、
5.0、10.0、15.0、20.0 μL，以依次注入 HPLC 色谱
仪进行测定，记录其色谱峰的峰面积积分值。以进
样量浓度（μg/mL）为横坐标，相应的峰面积为纵坐
标，绘制标准曲线。
（8）精密度试验 ：精密度是指在规定的测试条
件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结
果之间接近的程度［24］，一般用相对标准偏差（Relative
standard deviation，RSD）表示，其数值一般不大于
2.0%。RSD 越小说明精密度越高，公式 ：
RSD= 标准偏差 / 平均值 ×100%
本试验分别精密吸取槲皮素和白杨素对照品溶
液，重复进样 5 次，每次 10 μL，测定峰面积，记录
色谱，计算其 RSD 值。
（9）稳定性试验 ：精密吸取各样本供试品溶液，
进样量为 10 μL，每隔 4 h 测定一次，总共测 24 h，
记录色谱，计算结果。
1.2.5 统计学处理 各组数据以 Microsoft Excel 和
SPSS 10.0 版统计分析程序对各组数据进行相对标准
偏差分析。
2 结果
2.1 不同提取方式对蜂胶提取率的影响
各溶剂提取物分别加入已准确称重的干燥空烧
杯中，放在 65℃水浴锅，待干燥后称重，减去空烧
杯的重量，所得的蜂胶提取率结果如表 1 所示。
由表 1 可知，库车蜂胶的提取率高于伊犁蜂胶，
对伊梨蜂胶正丁醇提取法的提取率（26%）最高，
2013年第2期 167布威海丽且姆·阿巴拜科日等 ：新疆蜂胶提取物抗氧化活性及槲皮素和白杨素含量测定
正丁醇可做为最佳提取溶剂 ；对库车蜂胶丙酮提取
法的提取率（36%）最高，丙酮可做为最佳提取溶剂。
2.2 不同蜂胶提取物对DPPH自由基的清除作用
当伊犁和库车蜂胶各溶剂提取物系列浓度为
10-100 μg/mL 时，对 DPPH 自由基的清除能力结果
（表 2）显示，伊犁和库车蜂胶各溶剂提取物和茶多
酚的各浓度液对 DPPH 清除率的均值比较，蜂胶在
有机溶剂正丁醇里溶解成分的抗氧化能力最强。从
表中可以看出伊梨蜂胶各溶剂提取物浓度为 10-100
μg/mL 时对 DPPH 自由基的清除能力为 ：80% 乙醇
> 正丁醇 > 丙酮 > 乙酸乙酯，清除率越高就表明抗
表 1 蜂胶在不同提取法中的提取率
提取溶剂
样本提取率（%）
伊犁蜂胶 库车蜂胶
丙酮 25.0 36.0
正丁醇 26.0 30.5
80% 乙醇 22.0 34.0
乙酸乙酯 24.0 30.0
表 2 伊梨蜂胶和库车蜂胶各溶剂提取物及茶多酚对 DPPH 自由基的清除率
氧化能力越强 ；结果表明在此浓度的 4 种提取溶剂
里 80% 乙醇提取物的抗氧化能力最强；与对照品（茶
多酚）相比，80% 乙醇提取物的抗氧化能力在 6 种
浓度梯度下都高于茶多酚。库车蜂胶各溶剂提取物
系列浓度为 10-100 μg/mL 时对 DPPH 自由基的清除
能力为 ：正丁醇 > 丙酮 > 乙酸乙酯 >80% 乙醇，结
果表明在此浓度的 4 种提取溶剂里正丁醇提取物的
抗氧化能力最强，与对照品（茶多酚）相比正丁
醇提取物的抗氧化能力在 6 种浓度梯度下都高于茶
多酚。
2.3 蜂胶的抗油脂过氧化作用
如图 1 所示，532 nm 处吸光值随油样作用时间
的延长而升高。0.1% 蜂胶 +95% 乙醇提取物作为抗
氧化剂添加到油样中，提高了油样的抗氧化性，吸
光值低于未加抗氧化剂组（空白）。
从图 1 可知在第 6 天时亚油酸氧化达到最高值，
伊犁蜂胶提取物的 A 值比库车蜂胶提取物的 A 低，
表明其抗氧化效果较好。随着氧化的后期，由于分
解的醛类物质受到再氧化生成酸，因此油脂酸败至
一定程度时，其丙二醛物质生成减少，TBA 值有下
降的趋势，即测得的 A 值下降，表明油脂已剧烈酸败。
2.4 HPLC法测定蜂胶提取液的活性成分槲皮素和
白杨素的含量
2.4.1 标准曲线的制定 在选定的色谱条件下，分
别精密吸取槲皮素对照品溶液（0.03 mg/mL）4、8、
12、16、20 μL 和白杨素对照品溶液（0.04 mg/mL）
2.5、5.0、10.0、15.0 和 20.0 μL，以依次注入 HPLC
色谱仪，进行测定，分别记录其色谱峰的峰面积积
分值。浓度与峰面积线性关系见表 3。
分别以浓度（μg/mL）为横坐标，相应色谱峰峰
面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。槲皮素回归
图 1 0.1% 蜂胶 +95% 乙醇提取物对亚油酸抗氧化作用
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
0 2 4 6 8
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浓度（μg/mL）
伊梨蜂胶各溶剂提取物对 DPPH 的清除（%） 库车蜂胶各溶剂提取物对 DPPH 的清除率（%） 对照品
丙酮 正丁醇 乙酸乙酯 80% 乙醇 丙酮 正丁醇 乙酸乙酯 80% 乙醇 茶多酚
10 77.0 78.8 39.0 88.5 86.0 90.0 51.0 52.0 78.5
20 77.5 82.9 40.0 89.5 58.0 92.2 51.1 53.0 89.0
40 82.0 86.8 58.0 92.0 79.9 93.1 61.0 54.5 90.4
60 86.0 91.4 59.0 93.0 87.0 93.3 68.0 54.0 90.7
80 86.8 92.3 69.0 97.0 87.0 94.6 76.0 66.0 90.9
100 87.3 93.0 70.0 98.0 78.0 97.0 77.1 79.5 91.0
均值 82.8 87.5 55.8 93.0 79.3 93.4 64.0 59.8 88.4
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期168
方程 ：y=15.464x+2.7166，R2=0.9994 ；白杨素回归方
程：y=5.9351x-9.7648，R2=1，式中 x 为浓度（μg/mL），
y 为峰面积。槲皮素和白杨素含量分别在 1.91-19.11
μg/mL 和 37.24-372.40 μg/mL 范围内显示良好的线性
关系，其标准曲线如图 2 所示。
2.4.2 槲皮素及白杨素样品含量的测定 按“供试
表 3 槲皮素、白杨素浓度与峰面积线性关系
槲皮素 白杨素
序号 溶液量（μL） 峰面积 A（Y） 浓度（μg/mL） 序号 溶液量（μL） 峰面积 A（Y） 浓度（μg/mL）
1 4.0 29.88 1.91 1 2.5 215.72 37.24
2 8.0 60.98 3.82 2 5.0 431.98 74.49
3 12.0 124.43 7.64 3 10.0 868.52 148.97
4 16.0 181.68 11.47 4 15.0 1315.74 223.42
5 20.0 296.24 19.11 5 20.0 2202.75 372.40
350
250
150
100
200
300
50
0
0 5 251510 20
A
ጠ䶒
〟
A
ጠ䶒
〟
•Ⳟ㍐⎃ᓖμg/mL ⲭᶘ㍐⎃ᓖμg/mL
2500
A B
2000
1000
1500
500
0
0 50 100 150 250 350 400300200
y=15.464x+2.7166
R2=0.9994
y=5.9351x9.7648
R2=1
图 2 槲皮素（A）和白杨素（B）标准曲线
品溶液的制备”方法制备供试品溶液。精密吸取各
供试品溶液 20 μL，注入 HPLC 色谱仪，测定。结果
（表 4）表明，伊犁蜂胶中与槲皮素相比白杨素的含
量较高 ；对槲皮素而言，与乙醇提取剂相比，以甲
醇为提取溶剂时蜂胶中槲皮素的含量较高、样品提
取率高、提取效果好 ；而对白杨素而言，与未经脱
脂的甲醇提取液相比未经脱脂的乙醇提取液里样品
中白杨素的含量较高 ；分别将乙醇和甲醇提取液直
接注入 HPLC 色谱仪进行分析，样品中槲皮素和白
杨素含量较低。但经采用石油醚萃取，脱脂，除去
脂溶性杂质，此时样品中槲皮素和白杨素含量都比
未经脱脂的高，分离效果最佳。
表 4 槲皮素、白杨素样品含量测定
蜂胶提取液 样品中槲皮素浓度（μg/mL） 槲皮素含量（mg/g） 样品中白杨素浓度（μg/mL） 白杨素含量（mg/g）
乙醇提取液 9.1800 2.2950 257.1600 64.2900
甲醇提取液 9.9300 2.4825 242.8900 60.7200
经脱脂的乙醇提取液 10.7700 2.6925 279.3300 69.8300
经脱脂的甲醇提取液 11.2600 2.8150 297.4900 74.3700
2.4.3 对照品的 HPLC 分析 按以上选定色谱条件，
分别精密吸取槲皮素和白杨素对照品溶液 20 μL 注
入 HPLC 色谱仪，测定。槲皮素和白杨素的保留时
间分别为 t=3.983 min、t=10.374 min，结果如图 3、
图 4 所示。
2.4.4 样品的 HPLC 色谱分析 分别精密吸取未经
脱脂的乙醇蜂胶提取液、未经脱脂的甲醇蜂胶提取
液、经脱脂的乙醇蜂胶提取液、经脱脂的甲醇蜂胶
2013年第2期 169布威海丽且姆·阿巴拜科日等 ：新疆蜂胶提取物抗氧化活性及槲皮素和白杨素含量测定
提取液各吸取 20 μL，注入 HPLC 色谱仪，测定结果
如图 5 - 图 8 所示，相应的保留时间见表 5。
由图 5- 图 8 可以看出，各蜂胶提取液中有很多
成分，此结果与槲皮素和白杨素对照品的 HPLC 色
谱分析图相比，未经脱脂的乙醇蜂胶提取液、未经
脱脂的甲醇蜂胶提取液、经脱脂的乙醇蜂胶提取液、
经脱脂的甲醇蜂胶提取液都包含槲皮素和白杨素。
表 5 说明蜂胶经过脱脂，除去脂溶性杂质以后，缩
短了出现槲皮素峰和白杨素峰的保留时间。
2.4.5 精密度试验 精密吸取槲皮素和白杨素对照
品溶液，重复进样 5 次，每次的进样量均为 10 μL
注入 HPLC 色谱仪进行分析，记录色谱，结果（表 6）
0
0
1
2
3
4
5
mAU
2 4 6 8 10 12 14 16 18؍⮉ᰦ䰤min
3.
98
5
•Ⳟ㍐
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
mAU
20
17
15
12.5
10
7.5
2.5
5
0
؍⮉ᰦ䰤min
10
.3
74
ⲭᶘ㍐
图 4 白杨素对照品的 HPLC 分析图图 3 槲皮素对照品的 HPLC 分析图
mAU
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25؍⮉ᰦ䰤min
2.
74
0
3.
08
8
3.
60
5 3.
93
9
4.
47
7
6.
84
9
7.
71
2
5.
97
5
5.
48
6
5.
14
7
8.
02
2
8.
33
5
9.
47
2
11
.2
70
12
.5
71
11
.8
53
10
.2
80
ⲭᶘ㍐
•Ⳟ㍐
mAU
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25؍⮉ᰦ䰤min
2.
74
3
3.
08
8
3.
60
6 3.
93
5
4.
47
2 5
.1
34
5.
46
7
5.
95
6
6.
62
2
7.
68
1
9.
45
1
8.
00
1
8.
31
8
10
.2
61
12
.5
59
11
.2
57
11
.6
35
ⲭᶘ㍐
•Ⳟ㍐
图 8 经脱脂的甲醇提取液的 HPLC 分析图
图 5 未经脱脂的乙醇提取液的 HPLC 分析图
mAU
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25؍⮉ᰦ䰤min
24
.1
08
12
.6
30
11
.3
11
9.
47
9
7.
70
6
0.
01
8
10
.3
03 11
.9
09
8.
33
1
5.
98
8
5.
90
1
5.
15
9
4.
46
7
3.
94
2
6.
66
4
2.
75
4
3.
03
3
3.
60
6
ⲭᶘ㍐
•Ⳟ㍐
mAU
80
70
60
50
40
30
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0
0 5 10 15 20 25؍⮉ᰦ䰤min
11
.8
79
10
.2
95
8.
37
9
8.
07
8
6.
02
6
5.
53
8
5.
20
1
4.
53
0
3.
97
9
6.
91
7
3.
11
4
3.
63
4
7.
76
1
9.
49
5
11
.2
96
12
.6
01
15
.2
89
ⲭᶘ㍐
图 6 经脱脂的乙醇提取液的 HPLC 分析图
图 7 未经脱脂的甲醇提取液的 HPLC 分析图
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期170
显示，槲皮素峰的平均峰面积值为 60.96，RSD 为
0.86% ；白杨素峰的平均峰面积值为 431.16，RSD 为
0.26%。试验结果表明，该法测定蜂胶中槲皮素和白
杨素含量的重复性良好，仪器的精密度较高。
2.4.6 稳定性试验 精密吸取槲皮素和白杨素供试
品溶液，进样量均为 10 μL，注入 HPLC 色谱仪进行
分析，每隔 4 h 测定一次，总共测 24 h，记录色谱。
测定结果（表 7）显示，槲皮素峰平均峰面积值为
表 5 样品的 HPLC 色谱分析表
蜂胶提取液
槲皮素峰保留
时间（min）
白杨素峰保留
时间（min）
未经脱脂的乙醇提取液 3.939 10.280
未经脱脂的甲醇提取液 3.942 10.303
经脱脂的乙醇提取液 3.935 10.261
经脱脂的甲醇提取液 3.979 10.295
表 6 精密度试验结果
进样次数 槲皮素对照品峰面积 白杨素对照品峰面积
1 61.70 431.62
2 61.04 431.90
3 60.93 432.35
4 60.22 429.86
5 60.89 430.07
峰峰面积平均数 60.96 431.16
标准偏差 0.53 1.12
RSD（%） 0.86 0.26
表 7 稳定性试验结果
进样次数 槲皮素峰面积 白杨素对照品峰面积
1 170.40 1601.70
2 169.07 1641.49
3 163.74 1629.19
4 169.64 1637.99
5 172.30 1648.30
峰峰面积平均数 169.03 1631.73
标准偏差 3.19 18.15
RSD（%） 1.89 1.11
分［18］。随着人们对蜂胶的认识和研究的深入，经过
充分的考核考察，蜂胶有可能因其资源丰富、效果
显著、提取方便等优点而成为具有前途的天然抗氧
化剂新资源［25］。
蜂胶的功效成分主要是黄酮类化合物，如槲皮
素、白杨素等和酚类化合物，本研究首先针对新疆
伊犁和库车蜂胶采用 4 种不同溶剂进行提取得到一
系列蜂胶提取物，对其进行了抗氧化活性的测定，
并进一步定性分析了黄酮类物质 ；其次采用高效
HPLC 色谱法对新疆伊梨蜂胶中槲皮素和白杨素的
含量进行了测定。新疆伊犁蜂胶和库车蜂胶的提取
率具有一定的差异，即库车蜂胶的提取率较高，但
它们的抗氧化活性之间无明显差异，表明蜂胶提取
率和抗氧化活性之间没有相关性，原蜂胶的杂质成
分可能影响了其提取率。蜂胶的收集产地和原蜂胶
的不同溶剂法提取可能会引起蜂胶提取物在活性成
分含量的差异，很可能正是这种差异影响了其抗氧
化能力。本次试验中新疆两个地区蜂胶抗氧化活性
之间无明显差异，而且这两个地区的地理环境和植
被分布很相似，表明其蜂胶活性成分也很相近。
蜂胶是含有树脂状物的黏性物质，不溶于水，
易溶于甲醇、乙醇和甘油等有机溶剂。本试验用
70% 乙醇和甲醇作为提取溶剂从新疆伊犁蜂胶中提
取槲皮素和白杨素。结果表明，伊犁蜂胶中与槲皮
素相比白杨素的含量较高 ；对槲皮素而言，与乙醇
提取剂相比，以甲醇为提取溶剂时蜂胶中槲皮素的
含量较高、样品提取率高、提取效果好 ；而对白杨
素而言，与未经脱脂的甲醇提取液相比未经脱脂的
乙醇提取液里样品中白杨素的含量较高。经过 HPLC
分析，活性成分槲皮素和白杨素从新疆伊梨蜂胶样
品中可被检测出，而二者在本研究的色谱条件下，
分离度、重现性、稳定性好等优点，并且峰形对称，
无拖尾现象，杂质也无干扰。通过稳定性及回收率
试验，显示本方法操作简便，重现性好。用不同的
方法提取的蜂胶中槲皮素和白杨素的含量也不同，
即分别将乙醇和甲醇提取液直接注入 HPLC 色谱仪
进行分析，样品中槲皮素和白杨素含量较低，但经
采用石油醚萃取、脱脂、除去脂溶性杂质，此时样
品中槲皮素和白杨素含量都比未经脱脂的高，分离
效果最佳，并缩短了出现槲皮素峰和白杨素峰的保
169.03，RSD 为 1.89% ；白杨素峰的平均峰面积值为
1631.73，RSD 为 1.11%。试验结果表明，本品溶液
在 24 h 内基本稳定，其峰面积基本不变。
3 讨论
蜂胶的化学成分复杂，迄今已发现 300 多种成
2013年第2期 171布威海丽且姆·阿巴拜科日等 ：新疆蜂胶提取物抗氧化活性及槲皮素和白杨素含量测定
留时间。
新疆具有丰富的蜂胶资源，蜂胶的生物学活性
与化学成分受生态系统和气候条件的影响。蜂胶成
分主要取决于其收集产地，对新疆产蜂胶抗氧化活
性及活性成分槲皮素和白杨素的含量分析研究，以
及开发具有医疗营养保健功能的蜂胶产品及其制品，
尽快实现新疆蜂胶产品产业化、标准化，将具有理
论意义和现实意义。
4 结论
通过对蜂胶中活性物质的提取与其抗氧化作用
的初步研究表明，采用超声波提取的蜂胶各溶剂提
取物具有比较强的抗氧化能力，能明显清除 DPPH
自由基 ；蜂胶的采样地点和提取溶剂不同，其抗氧
化能力也有所不同，待进一步进行新疆蜂胶新活性
成分的分离纯化和产业化。测定波长分别为 370 nm
和 268 nm 时，经过 HPLC 分析活性成分槲皮素和白
杨素从新疆伊犁蜂胶样品中可被检测出 ；槲皮素和
白杨素浓度分别在 1.91-19.11 μg/mL 和 37.24-372.40
μg/mL 范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系，其
相应的 R2 值为 0.9994 和 1。
参 考 文 献
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（责任编辑 马鑫）