全 文 ：第 １３卷第 ４期
２０１５年 ７月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １３ Ｎｏ􀆰 ４
Ｊｕｌ􀆰 ２０１５
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１５􀆰 ０４􀆰 ０１１
收稿日期：２０１４－０９－０６
基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）（２０１１ＡＡ０２Ａ２０９）
作者简介：贾义刚（１９８９—），男，山东济阳人，硕士研究生，研究方向：生物催化；胡　 燚（联系人），教授 ，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｕｙｉ＠ ｎｊｔｅｃｈ．ｅｄｕ．ｃｎ
南极假丝酵母脂肪酶 Ｂ催化 ３ （４ 氟苯基）戊二酸酐
不对称醇解
贾义刚１，杨震炯２，刘维明１，张　 洋１，黄　 和１，胡　 燚１
（１． 南京工业大学 食品与轻工学院，江苏 南京 ２１１８００；
２． 永康市质量技术监督检测中心，浙江 永康 ３２１３００）
摘　 要：采用分子模拟技术，研究了南极假丝酵母脂肪酶 Ｂ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ Ｂ，ＣＡＬＢ）催化 ３ （４ 氟苯基）
戊二酸酐（３ ＦＧＡ）不对称醇解的分子机制。 首先借助力场修改的 Ａｕｔｏｄｏｃｋ ４􀆰 ２ 软件将过渡态底物与 ＣＡＬＢ 进行
对接，根据对接自由能差异解析了 ＣＡＬＢ催化 ３ ＦＧＡ与不同醇反应的立体选择性差异，得到的 Ｓ型底物结合能小
于 Ｒ型底物；其次，基于扭转角机制分析发现，Ｓ型底物扭转角小于 Ｒ型底物，从分子水平上揭示了 ＣＡＬＢ对 Ｓ型底
物选择性优于 Ｒ型底物的机制。
关键词：南极假丝酵母；脂肪酶； ３ （４ 氟苯基）戊二酸酐；分子对接；分子动力学；对映选择性
中图分类号：Ｑ７１　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１５）０４－００５８－０５
Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ３⁃（４⁃ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｇｌｕｔａｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ
ｂｙ Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ Ｂ
ＪＩＡ Ｙｉｇａｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｚｈｅｎｊｉｏｎｇ２，ＬＩＵ Ｗｅｉｍｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｙａｎｇ１，ＨＵＡＮＧ Ｈｅ１，ＨＵ Ｙｉ１
（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ；
２． Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｙｏｎｇｋａｎｇ Ｃｉｔｙ，Ｙｏｎｇｋａｎｇ ３２１３００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ３⁃（４⁃ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ） ｇｌｕｔａｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（３⁃ＦＧＡ） ｂｙ
Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ Ｂ （ ＣＡＬＢ） ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ
ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｏｃｋｅｄ ｗｉｔｈ ＣＡＬＢ ｂｙ ｕｓｉｎｇ Ａｕｔｏｄｏｃｋ ４􀆰 ２ ｗｈｏｓｅ ｆｏｒｃｅ ｆｉｌｅ ｗａｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ． Ｔｈｅ
ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ３⁃ＦＧＡ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ａｌｃｏｈｏｌｓ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＣＡＬＢ ｗａｓ
ｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｎｅｒｇｙ． Ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｎｅｒｇｙ ｏｆ Ｓ⁃ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｗａｓ ｓｍａｌｌｅｒ ｔｈａｎ Ｒ⁃
ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ． Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｗｅ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｒｓｉｏｎａｌ ａｎｇｌｅ ｏｆ Ｓ⁃ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｗａｓ ｓｍａｌｌｅｒ ｔｈａｎ Ｒ⁃
ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｒｓｉｏｎａｌ ａｎｇｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ， ＣＡＬＢ ｓｈｏｗｅｄ ａｎ Ｓ⁃ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ
ｅｎａｎｔｉｏｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｅｖｅｌ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ； ｌｉｐａｓｅ； （ ３⁃（ ４⁃ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ） ｇｌｕｔａｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ； ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｏｃｋｉｎｇ；
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｙｎａｍｉｃｓ； ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ
　 　 手性 ３ （４ 氟苯基）戊二酸单酯是一种重要
的药物中间体，可用于合成抗抑郁药帕罗西汀以
及 Ｐ２Ｘ７ 受体抑制剂［１－３］ 。 酶法因其催化效率高、
立体选择性强和反应条件温和等优点而被广泛应
＼ ＼ＤＺ１９ ＼Ｄ ＼孙桂云 ＼生物加工 ２０１５ ＼第 ４期 ＼第 ４期．ＰＳ　 ４校样　 排版：孙桂云　 修改日期：２０１５ ／ ０７ ／ ０８
用于手性单酯的合成。 目前，酶法制备 ３ 氟苯基
戊二酸单酯的方法主要是脂肪酶催化 ３ （４ 氟苯
基）戊二酸二酯的不对称水解和 ３ （４ 氟苯基）
戊二酸酐（３ ＦＧＡ）的不对称醇解［４－６］ 。 在前期工
作中，笔者所在课题组的 Ｌｉｕ等［７］就南极假丝酵母
脂肪酶 Ｂ（ＣＡＬＢ）催化 ３ ＦＧＡ的不对称醇解反应
的工艺条件进行了系统研究，在研究中发现，当采
用不同链长和结构的醇作为酰基受体与 ３ ＦＧＡ
反应时，脂肪酶表现出不同的催化性能，如脂肪酶
活性和选择性随酰基受体链长增加而降低。 然
而，目前 ＣＡＬＢ 在采用不同链长的醇作为酰基受体
时表现出的对映选择性差异机制尚不清楚，近年
来，分子模拟作为一种辅助技术，为酶的催化机制
解析提供了强大支持［８－９］ 。
为此，从分子模拟的角度对 ３ （４ 氟苯基）戊
二酸酐的去对称醇解反应进行研究，从分子水平
解析酶催化 ３ ＦＧＡ去对称醇解的分子机制，揭示
酶与不同醇之间的相互作用，对研究醇解反应具
有重要的意义。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 分子对接
１􀆰 １􀆰 １　 受体酶分子准备
ＣＡＬＢ的 ｐｄｂ 结构从蛋白质结构数据库 ＲＣＳＢ
（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ，ＰＤＢ）获取（ＰＤＢ ＩＤ：１ＴＣＡ）。 首
先利用 Ａｕｔｏｄｏｃｋ ４􀆰 ２删除晶体结构中水分子，添加缺
省的 Ｈ及其原子的部分电荷；为了保证对接过程真
实于反应条件，笔者采用过渡态对接，将活性中心的
丝氨酸 Ｓｅｒ 质子化，删除—ＯＨ 中的 Ｈ 原子，并利用
ＲＥＳＰ 对其电荷分布重新拟合（电荷： １）。 将处理后
的结构保存为 ｐｄｂｑｔ格式，以备下一步对接工作。
１􀆰 １􀆰 ２　 配体的准备
利用 ＣｈｅｍＯｆｆｉｃｅ ３Ｄ软件构建过渡态底物。 在构
建的过渡态底物过程中，将其羰基中的 Ｏ 原子设置
成带一个单位负电荷。 进而，利用 ＭＭ２ 模块对底物
结构进行能量最小化。 用 Ｃｈｉｍｅｒａ１􀆰 ８添加缺省的氢
原子及部分原子电荷，并手动删除底物上与酰基受体
相连的羰基 Ｏ原子的 Ｈ原子，得到分子总电荷为 １，
保存为 ｍｏｌ２格式，以备下一步工作使用。
１􀆰 １􀆰 ３　 力场修改
为实现底物与受体 ＣＡＬＢ活性口袋部位的成功
对接，底物与受体必须满足四面体过渡态对接条
件。 考虑到过渡态对接时，配体分子中羰基的 Ｏ 原
子远离 Ｔｈｒ４０氧负离子，无法形成氢键，因而对配体
丝氨酸的 ＯＧ 与配体 ＣＴ 的范德华力（ｖｄＷ） 及范德
华势能 ε参数进行修正。 一方面，通过减小 ＯＧ 与
ＣＴ的间距来降低 ＯＧ 和 ＣＴ 的范德华作用，另一方
面，通过 ＯＧ 和 ＣＴ 的相互作用力提高范德华势能 ε
值，以降低对接势能。 本研究最终将丝氨酸 ＯＧ 原
子的原子类型改为非键类型，范德华参数修正：ε＝
２􀆰 ９３×１０５ Ｊ、半径 σ ＝ ０􀆰 １５ ｎｍ；对接过程中，所有配
体分子的 ＣＴ 原子范德华参数修正为 ε ＝ １􀆰 ２６×１０５
Ｊ、半径 σ ＝ ０􀆰 １５ ｎｍ；同时，受体与配体分子的 Ｏ１、
Ｏ２ 原子形成的氢键 ε值修正为 １􀆰 ２６×１０５ Ｊ［１０－１１］。
１􀆰 １􀆰 ４　 底物对接
本文采用半柔性对接方式，对接过程中配体小
分子的可旋转键由系统自动分配，但受体酶为刚性
结构。 在对接前，设置 ４􀆰 ０ ｎｍ×４􀆰 ０ ｎｍ×４􀆰 ０ ｎｍ 大
小的搜索网格，其格点步长为 ０􀆰 ０３７ ５ ｎｍ，盒子中心
为 Ｓｅｒ１０５的 ＯＧ 原子坐标（坐标：－７􀆰 ３２０，２２􀆰 ７６６，
１６􀆰 ９３８），其他参数默认。 通过拉马克（ Ｌａｍａｋｉａｎ）
遗传算法获得 １００ 个最优的对接构象。 根据文献
［１１］报道，笔者设定一个筛选条件作为构型筛选标
准：①丝氨酸的 ＯＧ原子与羰基的 ＣＴ原子之间的键
长小于 ０􀆰 ２ ｎｍ；②配体分子必须与“氧负离子洞”形
成 ２个的氢键；③配体分子与 Ｈｉｓ２２４ 的咪唑环 ＮＥ２
原子形成 １个氢键。
１􀆰 ２　 分子动力学模拟
采用 Ｇｒｏｍａｃｓ ４􀆰 ５􀆰 ４ 软件进行分子动力学模
拟，具体操作如下：采用 Ｐｒｏｄｒｇ 进行处理对接底物
力场参数［１２－１３］ 。 所有模拟过程均在 ｐＨ７􀆰 ０、温度
３００ Ｋ 下，ＧＲＯＭＯＳ９６ ５３ａ６ 力场、ＳＰＣ２１６ 水模型、
ＰＭＥ（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｍｅｓｈ Ｅｗａｌｄ） 算法处理静电作用、远
程静电截断值为 １􀆰 ２ ｎｍ、远程范德华力的截断值
为 １􀆰 ２ ｎｍ，进行 １５ ｎｓ动力学模拟。 体系采用立方
体盒子，每个模拟周围填充 １􀆰 ０ ｎｍ 的水分子，模
拟体系首先采用 １ ０００ 步的能量最小化；之后进行
压力与温度平衡模拟 ５００ ｐｓ；最后进行分子动力学
模拟，放松蛋白，进行非限制性模拟。 等压模拟体
系下，温度模拟采用 Ｖ ｒｅｓｃａｌｅ 算法，耦合常数为
０􀆰 １ ｐｓ。 动力学模拟的数据借助 ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ ８􀆰 ０ 处
理分析。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 对接结果分析　
与其他脂肪酶一样，脂肪酶 ＣＡＬＢ 活性口袋由
９５　 第 ４期 贾义刚等：南极假丝酵母脂肪酶 Ｂ催化 ３ （４ 氟苯基）戊二酸酐不对称醇解
＼ ＼ＤＺ１９ ＼Ｄ ＼孙桂云 ＼生物加工 ２０１５ ＼第 ４期 ＼第 ４期．ＰＳ　 ４校样　 排版：孙桂云　 修改日期：２０１５ ／ ０７ ／ ０８
底物酰基部分结合的疏水性口袋和醇基部分结合
的亲水性口袋两部分组成，ＣＡＬＢ 对 Ｓ 型底物选择
性与底物的醇基部分能否分布在亲水性口袋有关，
如图 １所示。
图 １　 底物（酰基受体甲醇）在活性腔中的分布
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｓｔａｔｅ（ａｃｙｌ ａｃｃｅｐｔｏｒ
ｍｅｔｈａｎｏｌ） ｉｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ
利用分子对接，分别将 ５ 种不同的手性醇过渡
态底物对接到酶的活性口袋，考察其对接结合能数
据，结果见表 １。 由表 １ 可知：ＣＡＬＢ 对不同底物的
Ｓ构型优于 Ｒ 型构象，这一现象与之前课题组实验
数据［７］报道相一致（表 １）。
表 １　 ３ ＦＧＡ与不同酰基受体的去对称作用及结合能
Ｔａｂｌｅ １　 Ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｎｅｒｇｙ ａｎｄ ｄｅｓｙｍｍｅｔｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
３⁃ＦＧＡ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｃｙｌ ａｃｃｅｐｔｏｒｓ
编号酰基供体 对映体过量值（Ｓ型） ／ ％ ［７］
结合能（Ｒ型） ／
（１０４ Ｊ·ｍｏｌ－１）
结合能（Ｓ型） ／
（１０４ Ｊ·ｍｏｌ－１）
１ 甲醇 ７８ －６􀆰 ２９ －６􀆰 ９２
２ 乙醇 ７２ －６􀆰 ３７ －６􀆰 ５３
３ １ 丙醇 ６３ －６􀆰 ５４ －６􀆰 ５８
４ １ 丁醇 ５２ －６􀆰 ４４ －６􀆰 ７６
５ １ 戊醇 ４４ －３􀆰 ２３ －５􀆰 ５４
　 　 由表 １ 可知：ＣＡＬＢ 对 ３ ＦＧＡ 的 Ｓ 型构象底
物具有优先选择性。 随着碳链的增长，转化率和
对映体消旋（ ｅ􀆰 ｅ􀆰 ）值逐渐降低，这可能是由于构
成活性口袋的残基对长链底物更易形成空间位
阻，使酶不能很好地分布在活性口袋，导致转化率
和 ｅ􀆰 ｅ．值降低。 从结合能发现，酰基受体丁醇底物
小于丙醇底物，由于空间位阻，使酰基受体 １ 丁
醇的 ＣＴ原子更靠近 Ｓｅｒ１０５ 上的 ＯＧ 原子，导致氢
键 ＯＧ—ＣＴ＝ ０􀆰 １６ ｎｍ小于酰基丙醇底物形成的氢
键 ＯＧ—ＣＴ＝ ０􀆰 ２１ ｎｍ，进而结合能低于酰基丙醇
底物。 同样，林明等［１０］在研究洋葱假单胞菌脂肪
酶去对称水解 Ｎ （２ 甲基 ６ 乙基苯基） 丙氨酸
（ＮＥＭＰＡ）制备 Ｒ ＮＥＭＰＡ 时认为醇解部分相对
较窄，对底物的选择性强，而酰基部分则相对较
弱。 为了从动态上进一步研究 ＣＡＬＢ 对底物选择
性差异，笔者采用分子动力学就底物与口袋动态
结合情况进行研究。
２􀆰 ２　 动力学分析
根据文献报道，一些研究者认为底物与酶形成
复合物的扭转角对酶选择性具有很大影响（图 ２）。
如 Ｊｕｎｇ等［１４］研究 ＣＡＬＢ催化手性 ３ 苯基戊二酸二
元酯过渡态底物时发现 Ｒ 型底物与酶形成扭转角
为 ０°（Ｏ—Ｈ—Ｏ 或 Ｎ—Ｈ—Ｏ），小于 Ｓ 型底物与酶
形成的扭转角 ６０°。 因而，笔者又将对接最优构象
复合物进行了 １５ ｎｓ 的分子动力学模拟。 其中，选
取了甲醇与乙醇为代表来研究扭转角与选择性的
关系。
图 ２　 酶与配体扭转角图
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｔｏｒｓｉｏｎａｌ ａｎｇｌｅ ｆｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
首先对酰基受体甲醇和乙醇复合物进行 Ｃα均
方根偏差（ＲＭＳＤ）１５ ｎｓ 分子动力学模拟发现，整
个体系波动较小，且都在 ５ ｎｓ后达到平衡状态，见
图３ ～ ４。 由图 ３ 和 ４ 可知：甲醇的 ＲＭＳＤ 约为 ０􀆰 ２
ｎｍ，乙醇体系的 ＲＭＳＤ约为 ０􀆰 １８ ｎｍ。 通过 ＲＭＳＤ
分析说明，平衡后的复合物的结构构象已趋向稳
定、合理。 而在扭转角分析中，对于酰基受体甲
醇，体系约在 ５ ｎｓ 平衡。 模拟结果发现，Ｓ 型构象
底物与酶的扭转角度约为 ９０°，而 Ｒ 型底物则为
１１０°。 而酰基受体乙醇体系在 ５ ｎｓ 平衡后的 Ｓ 型
底物扭转角度约为 ６０°，Ｒ 型底物扭转角为 １５０°
（图 ５），基于两者发现 Ｓ型底物的扭转角度明显小
于 Ｒ 型底物。
０６ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １３卷　
＼ ＼ＤＺ１９ ＼Ｄ ＼孙桂云 ＼生物加工 ２０１５ ＼第 ４期 ＼第 ４期．ＰＳ　 ４校样　 排版：孙桂云　 修改日期：２０１５ ／ ０７ ／ ０８
图 ３　 酰基受体甲醇 ＲＭＳＤ
Ｆｉｇ􀆰 ３　 ＲＭＳＤ ｏｆ ａｃｙｌ ａｃｃｅｐｔｏｒ ｍｅｔｈａｎｏｌ
图 ４　 酰基受体乙醇 ＲＭＳＤ
Ｆｉｇ􀆰 ４　 ＲＭＳＤ ｏｆ ａｃｙｌ ａｃｃｅｐｔｏｒ ｅｔｈａｎｏｌ
图 ５　 分子动力学模拟酰基受体扭转角
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｔｈｅ ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｒｓｉｏｎａｌ ａｎｇｌｅ ｏｆ ａｃｙｌ ａｃｃｅｐｔｏｒ ｗｉｔｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｙｎａｍｉｃｓ
３　 结论
基于分子模拟技术对 ＣＡＬＢ 催化 ３ ＦＧＡ 的去
对称醇解反应研究，通过结合能差异分析了酶与不
同链长的醇去对称醇解的对映选择性差异，发现 Ｓ
型底物结合能小于 Ｒ 型底物。 同时通过分子动力
学模拟分析了扭转角与不同醇对映选择性的分子
机制，证实 Ｓ型底物与酶形成的复合物扭转角小于
Ｒ型底物。 但是目前的模拟研究并不能证实哪几个
氨基酸在选择性中起关键性作用，有必要在今后的
研究中引入量子力学及 ＭＭ ＧＢＳＡ，对氨基酸的能
量效应进行分析，确定对映选择性的关键氨基酸，
理性指导优化酶的性能。
参考文献：
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１６　 第 ４期 贾义刚等：南极假丝酵母脂肪酶 Ｂ催化 ３ （４ 氟苯基）戊二酸酐不对称醇解
＼ ＼ＤＺ１９ ＼Ｄ ＼孙桂云 ＼生物加工 ２０１５ ＼第 ４期 ＼第 ４期．ＰＳ　 ４校样　 排版：孙桂云　 修改日期：２０１５ ／ ０７ ／ ０８
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ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ ｕｓｉｎｇ ＰＬＥ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ［ Ｊ］ ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，２０００，４１
（３０）：５６４７⁃５６５１．
［ ５ ］ 　 Ｈｕａｎｇ Ｘ Ｊ，Ｚｈｕ Ｊ，Ｂｒｏａｄｂｅｎｔ Ｓ．Ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ
４⁃ａｒｙｌｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ５⁃ｃａｒｂｏｘｙ⁃３， ４⁃ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎ⁃２⁃ｏｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ
［Ｊ］ ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，２０１０，５１（１２）：１５５４⁃１５５７．
［ ６ ］ 　 Ｆｒｙｓｚｋｏｗｓｋａ Ａ， Ｋｏｍａｒ Ｍ， Ｋｏｓｚｅｌｅｗｓｋｉ Ｄ， ｅｔ ａｌ． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ
ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｈｉｒａｌ ｎｏｎ⁃ｒａｃｅｍｉｃ ３⁃ａｒｙｌｇｌｕｔａｒｉｃ ａｃｉｄ
ｍｏｎｏｅｓｔｅｒｓ［Ｊ］ ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，２００６，１７（６）：９６１⁃９６６．
［ ７ ］ 　 Ｌｉｕ Ｗｅｉｍｉｎｇ， Ｈｕ Ｙｉ， Ｚｈａｎｇ Ｙａｎｇ， ｅｔ ａｌ． Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ
ｄｅｓｙｍｍｅｔｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ３⁃（４⁃ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｇｌｕｔａｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｔｈｒｏｕｇｈ
ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ［ Ｊ］ ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
Ｂｉｏｅｎｇ，２０１４，１９（３）：４４９⁃４５５．
［ ８ ］ 　 Ｋｏｆｋｅ Ｄ Ａ，Ｍｉｈａｌｉｃｋ Ｂ Ｃ． Ｗｅｂ⁃ｂａｓｅｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｅａｃｈｉｎｇ
ａｎｄ ｕｓｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ［ Ｊ］ ． Ｆｌｕｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｅｑｕｉｌｉｂ，２００２，
１９４⁃１９７：３２７⁃３３５．
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（责任编辑　 荀志金）
２６ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １３卷　
＼ ＼ＤＺ１９ ＼Ｄ ＼孙桂云 ＼生物加工 ２０１５ ＼第 ４期 ＼第 ４期．ＰＳ　 ４校样　 排版：孙桂云　 修改日期：２０１５ ／ ０７ ／ ０８