喹乙醇属喹噁啉类药物,因其抗菌、可提高蛋白同化作用而常被用作促生长剂,但研究发现,喹乙醇过量使用会蓄积毒性,可致畸致突变,因此为了加强喹乙醇的质量安全监控,需开展其快速检技术研究。本试验中喹乙醇半抗原(OLA-HS)采用琥珀酸酐法进行合成,质谱法鉴定;喹乙醇人工抗原(OLA-HS-BSA; OLA-HS-OVA)采用活化酯法制备,SDS-PAGE电泳和紫外扫描进行结果鉴定。BALB/C鼠免疫后取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经筛选、克隆最终得到1株能稳定分泌抗喹乙醇单抗的杂交瘤细胞株2B3。经鉴定,2B3的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链为k链;制备腹水后测定其间接ELISA效价达1×10-6以上;制备的单克隆抗体特异性高,与喹乙醇结构类似物均无交叉反应。用此单抗建立的ELISA方法表明,检测灵敏度IC20值为5.36ng·mL-1;检测饲料中喹乙醇的平均添加回收率为70.7%~134.6%,准确性较好。喹乙醇单克隆抗体的研制和间接竞争ELISA分析方法的建立为下一步饲料中喹乙醇ELISA试剂盒的开发奠定了基础。
全 文 ：!核 农 学 报!"#$%!"&"# $$#A$ ($#A+
!"#$%&"()#*+&$,-$.*#/#$&0*.+%*+1
收稿日期!"#$)*#)*"A!接受日期!"#$)*$#*"$
基金项目!教育部博士点基金 ""#$",,"$"###$ # !浙江省教育厅项目 "b"#$"""&"% # !浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室开放课题
""#$$0$##"# !浙江工商大学研究生科研创新基金"$$$#cV$%$,$,+#
作者简介!桑永玉!女!主要从事水产品质量安全快速免疫分析研究% 0*1234$I289<<:=]]<"#$$;$">:71
通讯作者!金仁耀!男!助理研究员!主要从事免疫化学分析和水产品安全检测领域的研究% 0*1234$87P538;$,>:71
文章编号!$###*A%%$""#$%##*$#A$*#+
喹乙醇单克隆抗体的研制及其 0`FI.方法的建立
桑永玉$!金仁耀$!"
" $ 浙江工商大学水产品加工研究所!浙江 杭州!,$##$"&" 浙江省水产品加工技术研究联合
重点实验室!浙江 杭州!,$##$"#
摘!要!喹乙醇属喹噁啉类药物!因其抗菌"可提高蛋白同化作用而常被用作促生长剂!但研究发现!喹乙
醇过量使用会蓄积毒性!可致畸致突变!因此为了加强喹乙醇的质量安全监控!需开展其快速检技术研
究# 本试验中喹乙醇半抗原E` .*YI(采用琥珀酸酐法进行合成!质谱法鉴定$喹乙醇人工抗原 E` .*
YI*-I.$ E` .*YI*Em.(采用活化酯法制备!I/I*J.R0电泳和紫外扫描进行结果鉴定# -.` -HK鼠免
疫后取其脾细胞与 IJ"H# 细胞融合!经筛选"克隆最终得到 $ 株能稳定分泌抗喹乙醇单抗的杂交瘤细胞
株 "-,# 经鉴定!"-, 的抗体类型及亚类均为 F9R$!轻链为 N 链$制备腹水后测定其间接 0` FI.效价达
$ C$# B以上$制备的单克隆抗体特异性高!与喹乙醇结构类似物均无交叉反应# 用此单抗建立的
0` FI.方法表明!检测灵敏度 FK"#值为 %G,89&1`
B$$检测饲料中喹乙醇的平均添加回收率为 +#G+Q (
$,)GQ!准确性较好# 喹乙醇单克隆抗体的研制和间接竞争 0` FI.分析方法的建立为下一步饲料中
喹乙醇 0` FI.试剂盒的开发奠定了基础#
关键词!喹乙醇$单克隆抗体$竞争 0` FI.$饲料
/EF$$#G$$A&H5>3@@8>$##*A%%$G"#$%G#>$#A$
!!喹乙醇"742g=38P7^!E` .#是由德国 -<2X?公司研
制开发的一种抗菌促生长剂!曾广泛应用于水产养殖
业!一度被称为-水产瘦肉精. $ B,( % 然而随着研究的
深入!喹乙醇的毒性进一步被明确!不规范用药会有明
显的遗传毒性和蓄积毒性 )( !因此国内外先后制定了
严格的使用规范和残留限量标准% 如日本规定在动物
组织和内脏中的最大残留限量 "12^31=1 ?X@3PX=
4313T! ZL` #为 ,## "9*N9B$&美国和欧盟禁止使用喹
乙醇&我国农业部在 "##$ 年发布的第 $A 号公告0饲
料药物添加剂使用规范1中规定饲料中的添加量不得
高于 %# 19*N9B$!同时规定禁止在鱼)禽及体重超过
,% N9猪的养殖过程中使用 %( &"##" 年农业部发布第
",% 号公告0动物性食品中兽药最高残留限量1规定在
猪肝和猪肉中的 ZL` 分别为 %# "9*N9B$和 ) "9*
N9B$ ( % 然而喹乙醇价格便宜!抗菌促生长效果好!违
规添加和超量添加的现象仍时有发生!因此!加强喹乙
醇的检测监督!特别是加强喹乙醇检测技术的研究极
为必要%
关于喹乙醇的残留检测方法!目前国内外现有的
研究报道主要集中在仪器分析和免疫分析法等方
面 + B$%( % 免疫分析较仪器分析具有高特异性)高灵敏
度)高通量)操作简单)检测成本低)可现场操作等优
点!已广泛应用于小分子药物残留检测中 $ B"#( % 本研
究通过杂交瘤技术筛选)制备抗喹乙醇的高特异性和
灵敏度单克隆抗体!并在此基础上建立了饲料中快速
检测喹乙醇的竞争 0` FI.方法!为下一步开发饲料及
其他动物制品中的喹乙醇 0` FI.试剂盒奠定基础%
!"材料与方法
!#!"试验材料
$G$G$!主要试剂!喹乙醇)氯霉素)青霉素)四环素)
羊抗鼠酶标二抗"F9R*YLJ#等免疫学相关试剂均购自
美国 I3912公司&卡巴氧)磺胺嘧啶)莱克多巴胺均购
$A#$
核!农!学!报 "& 卷
自上海晶纯化科技股份有限公司&细胞板和酶标板为
广州洁特生物过滤股份有限公司"V0U#产品&其它试
剂市售所得!均为分析纯%
$G$G"! 仪器设备 ! 质谱仪 "0IF*UL.J)###W型!
.SS43XP -37@<@TX1@公司!美国 #&紫外分光光度计
"M3:74XT0a74=T378 #I 型!U6X?17公司!美国#&酶标仪
"FZ.LiBA# 型!-37*?2P 公司!美国#&电泳仪"Z383*
J?7TX28 ) 型!-37*?2P 公司!美国 #&恒温恒湿培养箱
" Y`I B$%#IK型!上海一恒科学仪器有限公司#&显微
镜".0"### 型!麦克奥迪电器股份有限公司!厦门#&
台式低温高速离心机 "D?X@:7"$ 型!U6X?17公司!美
国#&电子天平 "-I.$")I*K_ 型!赛多利斯公司!德
国#&灭菌锅 " /`ecB%#i-I 型!上海申安医疗器械
厂#&二氧化碳培养箱 ",$$$ 型!U6X?17公司!美国#&
纯水仪"Z343*WLX[X?X8:X型!Z343S7?X公司!美国#&移
液枪%
$G$G,!细胞及试验动物!IJ"H# 骨髓瘤细胞由浙江
工商大学水产品加工研究所实验室传代保存&-.` -H
K雌性鼠购自浙江省医学科学研究院%
!#$"试验方法
$G"G$!半抗原的合成与鉴定!向三口圆底烧瓶中加
入 $G 9琥珀酸酐和 "G$# 9喹乙醇!加入 # 1` 吡
啶!在 $$% O下回流反应!中途进行薄层层析 "T638*
42
YK4调节 SY至 "G# (,G#!) O下放置过夜% 反应液减
压抽滤后用冰蒸馏水洗涤 , 次后抽干!淡黄色粉状的
物质即为目标合成物喹乙醇 B半琥珀酸酯" E` .*YI#
的粗产物!后进行熔点测定和质谱鉴定!其中质谱鉴定
具体条件为$乙腈为溶剂!流速为 % = *`138 B$&毛细管
喷雾电压!%G% Nm"0IFh#&离子源温度$)"%O&气帘
气!$# S@3&雾化气!"% S@3&碰撞气!$% S@3&解簇电压!%#
Xm&入口电压!$# Xm%
$G"G"!人工抗原的合成与鉴定!称取 $)G%"A 19
E` .*YI 溶于 #GA 1` 二甲基甲酰胺"M!MB/31XT6<4
[7?1213PX! /ZD#中!加入 )G#, 19MB羟基琥珀的
酰亚胺 "M*Y
避光搅拌反应 $# 6 后 " ### 138 B$离心 $# 138!离心后
的上清液为 .液% 称取 "# 19牛血清白蛋白"24]=138
[?71]7a38X@X?=1! -I.#溶于 % 1` #G#$ Z磷酸盐缓
冲液"J-I!SY值 +G)#中!此为 -液% ) O下将 #G
1` .液逐滴加入到缓慢搅拌的 -液中!) O搅拌反应
过夜% 次日转入透析袋内!J-I 透析 " P!期间换透析
液 % ( 次!最后用超纯水透析 $" 6!离心弃沉淀!交联
产物命名为 E` .*YI*-I.! B"# O下贮存备用% 同样
方法合成包被原 E` .*YI*Em.%
合成的喹乙醇人工抗原分别进行紫外扫描和
I/I*J.R0测定% 紫外扫描法$E` .*YI*-I.)E` .*YI*
Em.)-I.)Em.以及 E` .*YI 溶液在 "## ()## 81波
长范围内进行扫描!通过比对扫描曲线判断是否合成
成功% I/I*J.R0法$浓缩胶体积分数为 %Q!分离胶
体积分数为 $#Q!上样量为 $#"` !浓缩胶电压 +# m!
分离胶 A% m!考马斯亮蓝染色 , 6!脱色 ) (% 次%
$G"G,!免疫方案!采用吴建祥等 "$(的方法进行动物
免疫% 取 只 ) ( 周龄 -.` -HK的雌性小鼠!将
E` .*YI*-I.加一定量的双抗后用适量的生理盐水稀
释并与等体积弗氏完全佐剂混合!注射器法进行乳化!
采用皮下多点和腹腔注射相结合的方式注射!,##
"9H只%, 周后!将免疫原与等量弗氏不完全佐剂乳化
后进行腹腔注射!)## "9H只!以后每隔 , 周免疫 $ 次!
加强免疫 , () 次% 融合前 ,P 加大剂量进行最后 $ 次
免疫!%## "9H只%
$G"G)!细胞融合及培养!参照吴建祥等 ""(的方法进
行% 脾细胞与 IJ"H# 细胞按 %l$比例混合于 %# 1` 离
心管中!用 #G+ 1` ,+ O预热的 %#QJ0R进行搅拌融
合!Y.U选择性培养基培养!铺板于 & 孔细胞培养
板!每孔 $##"` !并于 ,+ O)%QKE" 培养箱中培养!第
% 天换 Y.U培养基 $ 次!第 $# 天改换成 YU培养基%
$G"G%!杂交瘤细胞的筛选与克隆!参照吴建祥等 "$(
的方法进行% 当细胞培养板孔底面积的 $#Q (,#Q
被细胞覆盖时!进行阳性孔的 0` FI.检测!检测得到
的阳性孔上清进一步用 38P3?X:T:71SXT3T3aX0`FI.
"3:0`FI.#法检测抗体灵敏度% 对检测结果理想的细
胞克隆 , () 次!连续 " 次全阳性的克隆扩增即为目标
杂交瘤细胞株% 扩大培养后可用于腹水制备并应及时
冻存!在液氮长期保存期间应定期复苏检查细胞是否
生长良好%
$G"G!腹水的制备与纯化!参照青玲等 ",(的方法制
备腹水% 向 -.` -HK小鼠腹腔注射 #G, (#G) 1` 降植
烷!+ ($# P 后注射 $ C$# (" C$# 个单克隆细胞!%
(+ P 左右抽取腹水!离心去沉淀后上清即为小鼠腹
水% 腹水采用辛酸 B硫酸铵法进行纯化 ")( !使用 -K.
蛋白浓度测定试剂盒测定抗体浓度%
$G"G+!抗体特性测定!参照金仁耀等 "%(的方法进
行% 抗体类型及亚类采用商品化试剂盒鉴定% 腹水效
价采用间接 0` FI.法测定%
$G"GA!抗体特异性及灵敏度测定!参照 _= 等 "(的
"A#$
核!农!学!报 "& 卷
线较 E` .*YI 和 -I.发生了改变!产物紫外吸收峰既
具有 E` .*YI 的特征!又具有 -I.的紫外吸收特征!
说明 E` .*YI*-I.偶联成功% 同理!E` .*YI*Em.的
紫外最大吸收波长也发生了位移改变!证明偶联成功%
图 %"UX2人工抗原紫外扫描图
/*01%"HE:+4I.5GA -;UX265.*;*I*6,69.*049698M6+.49
I/I*J.R0电泳结果见图 )% 免疫原 " E` .*YI*
-I.#和包被原 " E` .*YI*Em.#电泳条带与 -I.和
Em.相比有滞后和拖尾现象!这说明蛋白经合成反应
偶联上了一定数量的半抗原!使得偶联物的分子量大
于载体的分子量!初步证明偶联成功%
图 <"D@D(S2&电泳图谱
/*01<"D@D(S2&4,4I.5-+M-54:*:-;UX2
65.*;*I*6,69.*049
$#%"杂交瘤细胞融合$筛选和克隆
细胞融合后第 $% 天!采用间接非竞争 0` FI.法筛
选细胞上清中喹乙醇抗体!共筛选出 % 个强阳性孔!
进一步进行灵敏度分析测定!最终获得 $ 株能稳定分
泌抗喹乙醇的杂交瘤细胞株 "-,% 经鉴定!目的细胞
株分泌的单抗仅与喹乙醇有特异性反应!经体外多次
传代和冻存复苏试验!表明该细胞株生长良好并能稳
定分泌抗喹乙醇抗体!说明所筛选的杂交瘤细胞比较
理想%
$#<"腹水制备和抗体特性测定
小鼠用降植烷处理后腹腔注射 "-, 细胞!% (+ P
后采集腹水% 腹水纯化经测定抗体浓度为 ,G%
19*1` B$%抗体类型及亚类鉴定结果表明!"-, 细胞株
分泌的单克隆抗体类型及亚类为 F9R$!轻链类型为 )
链!经 0` FI.测定其腹水效价达 $ C$# B以上%
$#="*IXOD2方法的建立和灵敏度测定
经方 阵 试 验 测 定! 包 被 原 最 佳 浓 度 为 #G%
"9*1` B$!抗体最佳浓度为 #G% "9*1` B$% 用 3:0`FI.
法测定喹乙醇的竞争抑制率!并绘制竞争抑制曲线
"图 %#!线性回归方程为
需的喹乙醇浓度分别为 +"G"A 89*1` B$和 %G, 89*
1` B$!因此以 FK"#值为该抗体的检测灵敏度%
图 ="间接竞争 XOD2的抑制率反应曲线
/*01="O9M*)*.*-9546I.*-9IG534-;*98*54I.I-A+4.*.*34XOD2
$#>"单克隆抗体特异性鉴定
用 3:0`FI.方法检测该单抗对卡巴氧)磺胺嘧啶)
莱克多巴胺)氯霉素)青霉素和四环素等 %#Q抑制率
下的浓度并计算出相应的交叉反应率"表 $#% 除与卡
巴氧的交叉反应率达到 ,GQ外!该单抗对磺胺嘧啶)
氯霉素)青霉素和四环素等其他结构类似物的交叉反
应率均小于 #G$AQ!表明所制备的单克隆抗体对喹乙
醇具有高度特异性%
$#?"添加回收率试验
对饲料中添加终浓度为 "#)%# 和 $## 89*1` B$的
喹乙醇进行添加回收率试验发现"表 "#!喹乙醇的平
均添加回收率为 +#G+Q ($,)GQ! 变化范围为
%G,Q ($,&G"Q% 对饲料样品进行零添加测定本底
发现!饲料稀释倍数越高!背景本底值有升高的现象!
加入 "), 和 ) 1` 缓冲液进行振荡离心后测定本底值
分别为 +G%)$,G" 和 $%G+ 89*1` B$% 造成这一现象的
原因可能是!在缓冲液体积较少的情况下!饲料旋涡混
)A#$
! 期 喹乙醇单克隆抗体的研制及其 0` FI.方法的建立
表 !"单克隆抗体特异性
L6),4!"D+4I*;*I*.7 -;.M4A-9-I,-96,69.*)-87
化合物
K71S7=8P@
半数抑制浓度
FK%# H" 89*1`
B$ #
交叉反应率
K?7@@?X2:T3a3T
E42g=38P7^
+"G"A $##
卡巴氧
K2?]2P7^
x" ### p,G
胺嘧啶
I=4[2P32d38X x) C$#
) p#G$A
莱克多巴胺
L2:T7S2138X x) C$#
) p#G$A
青霉素
JX83:3438 x) C$#
) p#G$A
氯霉素
K647?721S6X83:74 x) C$#
) p#G$A
四环素
UXT?2:<:438X x) C$#
) p#G$A
合不充分!缓冲液对饲料中的杂蛋白提取不充分!随着
缓冲液体积的增加!杂蛋白提取效率提高!从而出现本
底升高的趋势% 由添加浓度试验可知!检测结果的变
异系数为 "G%Q ($#G,Q!说明在高特异性和灵敏度
喹乙醇单克隆抗体基础上建立的 0` FI.方法具有较
好的准确度和稳定性%
%"讨论
%#!"优质抗原的制备和鉴定是制备理想目标抗体的
前提和基础
优质理想抗体的研制是建立免疫检测技术的基础
和关键!而抗原质量的好坏极大程度上影响着能否获
得理想的抗体!因此高质量抗原的制备是获得优异抗
体的前提% 喹乙醇是小分子化合物!只有反应原性!没
有免疫原性!因此!要制备抗喹乙醇的单克隆抗体!就
!!!
表 $"饲料添加喹乙醇的回收率
L6),4$"T4I-3457 -;-,6RG*98-W :+*Q48;5-A;448:.G;;
添加浓度
K78:X8T?2T378H" 89*1` B$ #
稀释倍数
/34=T378 ?2T37
平均回收率
ZX28 ?X:7aX?
L289X7[a2?32T378
变异系数
KmHQ
"# " $,)> $,$> ($,&>" ">%
, $#+>) &&>" ($$+>" A>
) +#>+ %>, (+A> A>"
%# " A%>, +&>A (&#>, >$
, $$)>+ &A>+ ($"">% &>
) $#%>& &&>, ($$$>" )>
$## " $#+>+ &$> ($$%>" $#>,
, &%>$ A&>, (&A>$ )>"
) A,>) +%>" (&$>% &>,
平均 .aX?29X $##>% B +>#
必须与大分子的载体蛋白"如 -I.)Em.等#偶联后才
具备免疫原性!方可作为免疫原进行免疫% 此外!喹乙
醇自身没有能与载体蛋白直接相连的活性功能基团!
可将其结构上的羟基修饰成羧基!再与载体蛋白 -I.
偶联制备完全抗原%
%#$"单克隆抗体技术是制备优质抗体的关键
目前!单抗作为小分子药物残留免疫分析技术中
的主要抗体!得到广大科研人员的认同!而如何制备优
质的单克隆抗体则是一项技术要求高)条件要求严的
工作% 前人在如何进一步提高单克隆抗体的制备效率
方面开展了大量研究!如对细胞融合效果与骨髓瘤细
胞)免疫小鼠脾细胞)融合剂以及操作过程等因素之间
关系的研究 ,#( % 目前已有 $# 余种小鼠骨髓瘤细胞系
可用于细胞杂交! 其中 IJ"H# 细胞使用最广泛!IJ"H#
细胞生长状况对细胞融合效果影响非常大!因此!通常
取生长良好且处于对数生长期的细胞进行融合% 细胞
融合剂 J0R浓度对细胞融合效果影响明显!浓度越
高!细胞毒性越大&浓度偏低!融合效果不理想% 因此
一般选择 %#Q的浓度作为较理想的融合含量% 由于
细胞铺板后的细胞培养孔中存在多个阳性或阴性克
隆!且往往阴性细胞克隆生长比阳性细胞克隆生长更
旺盛!容易导致阳性细胞被阴性细胞覆盖!不容易筛选
%A#$
核!农!学!报 "& 卷
获得所需的阳性细胞!因此需及时进行克隆和筛选%
杂交瘤细胞筛选后!需进行大量抗体的制备!目前
腹水制备法是最常用的大量制备单克隆抗体的技术之
一!得到广泛应用% 小鼠的选择对制备腹水的产量有
一定的影响!一般建议选用 $" 周以上的健康活泼雌
鼠!周龄过小或过大均不利于腹水的大量收集% 注射
杂交瘤细胞后待腹部隆起可收集腹水!小鼠应采取多
次抽取法!可有效提高小鼠腹水产量%
%#%"本研究的先进性及存在的不足
目前!已有喹乙醇单克隆抗体相关方面的文献报
道!如宋春美等 "A(开展了对喹乙醇单克隆抗体制备方
面的研究!但他们侧重于喹乙醇单抗的制备及特性鉴
定!并未开展后续的方法试验% 赵春保等 "&(建立了饲
料中喹乙醇代谢物喹啉类药物的 0` FI.分析方法!
其研究所用抗体为多克隆抗体!抗体的来源和特性不
稳定!且 0` FI.方法的线性范围为 #G" ("G%19*N9B$
检测灵敏度不理想% 本试验采用喹乙醇单克隆抗体为
原料!建立了 0` FI.免疫分析方法和饲料中的添加回
收率试验!结果较理想% 但本试验还存在以下不足%
首先!在制备抗喹乙醇单克隆抗体的基础上开展了饲
料中的添加回收率试验!虽然回收率结果达到预期目
标!但还缺少在其他动物性样品中的检测&其次!免疫
分析方法需要进一步优化!包括缓冲体系)标记物的选
择等!以建立灵敏度更高)分析方法更稳定的免疫分析
技术&再次!由于喹乙醇在动物体内代谢后形成新的代
谢产物 , B甲基 B喹恶啉 B" B羟酸!因此!在开展喹
乙醇免疫分析研究的同时!也要对其代谢产物开展研
究!以便更好地监测喹乙醇在动物性样品中的残留
情况%
<"结论
本论文以喹乙醇为研究对象!通过对喹乙醇的羟
基进行修饰和改造!制备了喹乙醇半抗原" E` .*YI#!
并分别与 -I.和 Em.偶联制备人工抗原% 免疫小鼠
后!无菌状态下取其脾细胞与 IJ"H$# 细胞进行杂交瘤
细胞的融合与筛选!制备得到高特异性和灵敏度的抗
喹乙醇单克隆抗体!并在此基础上建立 0` FI.分析方
法!其线性回归方程为 9k$$G%,% 8`";# h#G"))"?"
k#G&&#A#!检测灵敏度 FK"#为 %G, 89*1`
B$%开展饲
料添加回收率试验!从添加回收率试验结果可知!添加
浓度为 "# ($## 89*1` B$ 时!平均添加回收率为
+#G+Q ($,)GQ!结果较理想且稳定性较好% 本研究
建立的喹乙醇 0` FI.分析方法适合于饲料样品的残
留检测!具有很好的推广应用价值!下一步将重点开展
其对其他动物性样品的分析检测以及相关 0` FI.检
测试剂盒的研究%
参考文献!
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草鱼组织中喹乙醇代谢物的残留 V(>中国渔业质量与标准!
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B串联质谱法快速检测水产品中喹乙醇及其代谢物 , B甲基 B
喹恶啉 B" B羟酸的残留V(>现代食品科技!"#$,!"&""# $)$, B
)$%
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杂志!"##A!)" "$## $," B,)
$#(!Z327cI! L2<178P 0Z! K6?3@/Z>.T28PX112@@@SX:T?71XT?3:
@T=P<7[T6XM*7^3PX@!g=387438XM*7^3PX@!:2?]2P7^ 28P 742g=38P7^!
:2??3XP 7=T2T6396 12@@2::=?2:<=@389X4X:T?7@S?2<3783d2T378V(>
F8TX?82T37824V7=?8247[Z2@@ISX:T?71XT?$$(!ZX?7= .! i2N421287@R! U6X7P7?3P3@R>/XTX?1382T378 7[K2?]2P7^
28P 1XT2]743TX@7[K2?]2P7^ 28P E42g=38P7^ 38 1=@:4XT3@@=X=@389
6396 SX?[7?128:X43g=3P :6?712T79?2S6<*T28PX1 12@@@SX:T?71XT?<
V(GV7=?8247[K6?712T79?2S6<-!"#$"!AA$ HAA"$&# B&%
$"(!I3T= K!0437TKUGI31=4T28X7=@28P ?2S3P PXTX:T378 7[[3aX]288XP
28T3]37T3:9?7\T6 S?717TX?@]<311=872@@2
$,(!朱学家!陈金兰!何计国>喹乙醇人工抗原的合成与鉴定V(>食
品科学!"##A!"&"%# $$,#
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抗体的制备及其免疫学特性的鉴定 V(>核农学报!"#$#!")
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