全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员怨远员 耀 员怨远苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤员圆鄄园鄄园苑
抗氟喹诺酮类抗生素单抗的研制及其检测应用
吴建祥员 摇 王震成员 摇 金仁耀圆 摇 刘摇 欢员 摇 周崇盈猿 摇 张少恩猿
渊员浙江大学 农业与生物技术学院 生物技术研究所袁浙江 杭州摇 猿员园园缘愿曰圆浙江工商大学
食品与生物工程学院袁 浙江 杭州摇 猿员园园员圆曰猿杭州南开日新生物技术有限公司袁浙江 杭州摇 猿员园园圆圆冤
摘摇 要院用与牛血清白蛋白交联的环丙沙星免疫的 月粤蕴月 辕 悦 鼠脾细胞与 杂孕圆 辕 园 鼠骨髓瘤细胞融合袁经筛
选尧克隆袁获得 员 株能稳定传代并分泌抗氟喹诺酮类药物的单克隆抗体渊酝粤遭冤的杂交瘤细胞 怨匀怨袁用杂
交瘤细胞制备单克隆抗体腹水遥 单克隆抗体对环丙沙星尧恩诺沙星尧氧氟沙星尧达氟沙星尧诺氟沙星尧依
诺沙星尧麻保沙星尧洛美沙星尧沙拉沙星尧双氟沙星均有免疫反应袁且 缘园豫抑制质量浓度分别为达到 猿援
圆员尧猿援 园员尧愿援 员缘尧源援 愿缘尧苑援 苑缘尧猿援 苑园尧怨援 愿猿尧远援 圆员尧员员援 远圆尧圆园园援 苑园 灶早窑皂蕴 原员遥 利用单抗建立了检测蜂蜜尧鸡肉
组织尧牛奶中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶联免疫吸附测试渊悦陨鄄耘蕴陨杂粤冤和免疫胶体金试纸条法遥
悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法的 陨悦缘园及 陨悦员园分别为 猿援 圆员 灶早窑皂蕴 原员和 园援 源圆 灶早窑皂蕴 原员遥 添加试验和特异性分析表明袁免
疫胶体金试纸条能用于检测蜂蜜尧鸡肉组织尧牛奶中的氟喹诺酮类药物残留袁且检测上述样品中环丙沙
星残留的灵敏度分别为 缘尧圆园尧猿园 灶早窑皂蕴 原员遥
关键词院氟喹诺酮类药物曰单克隆抗体曰 悦陨鄄耘蕴陨杂粤曰免疫胶体金试纸条
收稿日期院圆园员猿鄄园缘鄄猿员摇 接受日期院圆园员猿鄄园怨鄄园猿
基金项目院浙江省科技计划资助项目渊圆园员员悦圆圆园苑愿冤
作者简介院吴建祥袁男袁教授袁主要从事应用免疫学和病毒分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 憎怎躁曾岳 扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
通讯作者院同第一作者
摇 摇 氟喹诺酮类药物渊云造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻泽袁云匝泽冤 是一类
人工合成的含 源 原喹诺酮母核的广谱尧高效抗菌药物袁
其对细菌的 阅晕粤 螺旋酶渊阅晕粤 原 早赠则葬泽藻冤具有选择性
抑制作用袁从而抑制细菌的 阅晕粤 合成袁最终导致细菌
死亡遥 氟喹诺酮类药物作为兽药和饲料添加剂而大量
用于畜牧业咱员暂 袁因而导致其在动物可食性产品中残
留遥 这些残留物可直接对人体造成危害袁如引起软骨
毒性尧关节疼痛和肿胀尧皮肤过敏反应尧对心脏尧肝脏的
毒性作用尧恶心尧呕吐尧疼痛等胃肠道反应尧头痛尧头晕尧
睡眠不良等中枢反应尧可诱发癫痫尧肾功能不全尧溶血尧
血小板减少等咱圆袁 猿暂 遥
目前氟喹诺酮类药物残留的检测手段主要有微生
物抑制分析法咱源 原 缘暂 尧仪器分析法渊包括气相色谱法 咱远暂 尧
气质联用渊郧悦冤袁液相色谱方法渊匀孕蕴悦冤咱苑 原 愿暂及液质联
用法渊蕴悦 原 酝杂冤咱怨 原员园暂 尧液相色谱 原串联质谱法 渊 匀孕蕴悦
原 酝杂 辕 酝杂冤咱员员暂 冤和免疫化学测定法咱员圆 原 员缘暂 遥 微生物抑
制分析法存在因检测灵敏度低而导致测限高于样品所
规定的最高残留限量 渊酝砸蕴泽冤袁且不能确定是何种抗
生素超标及其浓度等问题遥 仪器分析法需要昂贵的实
验仪器和专门的技术人员袁检测时间长尧费用高尧且不
能高通量检测样本袁致使其难以在基层普及而仅局限
于实验室使用遥 基于抗原抗体反应的 耘蕴陨杂粤 法及免
疫胶体金试纸条法等免疫学分析方法由于快速尧方便
已广泛地应用于临床诊断和食品安全检测领域遥 免疫
学检测法的关键是制备特异性好尧灵敏度高的抗体遥
为此袁我们制备了可用于检测多种氟喹诺酮药物残留
的特异性单克隆抗体袁并以该单抗为核心建立了食品
中检测氟喹诺酮类药物残留的 悦陨鄄耘蕴陨杂粤 方法和免疫
胶体金检测试纸条袁为保障我国食品安全起到积极作
用遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 实验材料及仪器
环丙沙星渊悦蚤责则燥枣造燥曾葬糟蚤灶袁悦陨孕冤尧氧氟沙星尧麻保沙
星尧诺氟沙星尧洛美沙星尧双氟沙星尧依诺沙星尧沙拉沙
员远怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
星尧达氟沙星尧恩诺沙星尧新霉素尧庆大霉素尧链霉素尧磺
胺嘧啶尧青霉素尧四环素尧牛血清白蛋白渊月杂粤冤尧卵清蛋
白渊韵灾粤冤尧员 原乙基 原 猿 原 渊猿 原二甲基氨基丙基冤碳化
二亚胺盐酸盐渊耘阅悦冤尧柠檬酸三钠尧孕耘郧圆园 园园园尧氯金
酸尧抗体类型及亚类鉴定试剂盒及辣根过氧化物酶标
记的羊抗鼠 陨早郧均为 杂蚤早皂葬产品曰针头式过滤器尧硝酸
纤维素膜和胶体金结合垫购买于 酝陨蕴蕴陨孕韵砸耘公司袁新
生牛血清购买于杭州江滨生物技术有限公司曰其他试
剂均为国产分析纯产品遥 杂孕圆 辕 园 骨髓瘤细胞本实验室
保存曰怨远 孔细胞板和 怨远 孔酶标板均为 悦燥则灶蚤灶早 公司产
品曰愿 周龄的 月粤蕴月 辕 悦 小鼠购自中国科学院上海实验
动物中心遥 划膜机尧点金机和切条机均购买自
月陨韵阅韵栽公司遥
员援 圆摇 喹诺酮类药物环丙沙星半抗原与载体蛋白的交
联及其鉴定
因 悦陨孕本身带有羧基袁利用 耘阅悦 使 悦陨孕 与牛血清
白蛋白渊月杂粤冤或卵清蛋白渊韵灾粤冤的氨基交联袁具体参
照 阅怎葬灶 等咱员源暂的方法分别合成 悦陨孕鄄月杂粤尧悦陨孕鄄韵灾粤 偶
联产物遥 用 园援 园员 皂燥造窑蕴 原员的磷酸盐缓冲液渊责匀 值 苑援
圆冤透析后的 悦陨孕鄄月杂粤尧悦陨孕鄄韵灾粤偶联产物与 悦陨孕尧月杂粤尧
韵灾粤溶液分别进行紫外扫描袁分析比较波峰图形和计
算偶联比遥
员援 猿摇 分泌抗氟喹诺酮类药物单抗的杂交瘤细胞株获
得及其单抗腹水制备
取 远 耀 愿 周龄尧体重 员愿 耀 圆园 早 月粤蕴月 辕 悦 雌性小鼠袁
将制备的免疫原 悦陨孕鄄月杂粤 与等体积弗氏完全佐剂混
合袁充分乳化后袁经背腹部皮下多点加腹腔注射袁剂量
为 缘园 滋早 辕每只袁以后每隔 猿 周袁取抗原渊与一免等剂
量冤和等体积的弗氏不完全佐剂充分乳化后皮下和腹
腔注射加强免疫袁加强免疫共 源 次袁融合前 猿凿 加倍剂
量强化免疫一次遥 按免疫鼠脾细胞与 杂孕圆 辕 园 骨髓瘤细
胞 缘 耀 员园颐 员的比例混合细胞袁在 缘园豫 孕耘郧 下融合袁洗
涤尧沉淀后袁用 匀粤栽 培养基悬浮袁接种于 怨远 孔含有饲
养细胞的细胞板中袁猿苑益尧缘豫 悦韵圆的细胞培养箱中培
养遥 培养 猿 耀 缘 凿后袁用 匀粤栽培养基再换液一次袁第 员园
天换成 匀栽培养基培养遥 待融合细胞生长到覆盖培养
孔 员园 豫 耀 猿园豫孔底面积时袁取上清用间接 耘蕴陨杂粤 方
法筛选抗体阳性孔袁阳性孔细胞进一步用 悦陨鄄耘蕴陨杂粤 方
法进一步分析抗体的灵敏度和特异性袁选择理想的细
胞孔进行有限稀释法克隆 猿 耀源 次袁克隆好的扩大培养
的杂交瘤细胞注射入降植烷预处理的 月粤蕴月 辕 悦小鼠腹
腔袁制备单克隆抗体腹水遥 用辛酸 原硫酸铵方法纯化
单克隆抗体腹水遥 根据 圆愿园尧圆远园 灶皂的光密度用 蕴燥憎则赠
原 噪葬造燥噪葬则 公式计算 陨早郧浓度遥 根据美国 杂蚤早皂葬公司的
抗体类型和亚类鉴定试剂盒的操作说明进行实验袁判
断单抗的抗体类型及亚类遥 用间接 耘蕴陨杂粤 方法测定
单抗腹水效价遥
员援 源摇 缘园豫抑制质量浓度及单抗的交叉反应率测定
悦陨鄄耘蕴陨杂粤的抗原尧抗体最适工作浓度采用方阵试
验确定袁选择环丙沙星对抗原抗体结合反应抑制灵敏
度高且 悦陨孕空白对照的吸光度 韵阅源缘园值为 员援 园 时袁抗原
和抗体用量均较少的试验组合为试验最适工作浓度组
合遥 在最适工作浓度下以抑制率与 悦陨孕浓度的半对数
绘制标准曲线袁计算 缘园豫抑制率渊陨悦缘园冤遥 将氧氟沙星尧
麻保沙星尧诺氟沙星尧洛美沙星尧双氟沙星尧依诺沙星尧
沙拉沙星尧达氟沙星尧恩诺沙星尧新霉素尧庆大霉素尧链
霉素尧磺胺嘧啶尧青霉素尧四环素做系列稀释袁分别与单
抗混合后进行 悦陨鄄耘蕴陨杂粤遥 用抑制率与药物浓度的半
对数分别制作它们的标准曲线袁并在曲线上找出 陨悦缘园
的质量浓度袁然后计算出各种抗生素的交叉反应率遥
交叉反应率 悦砸 计算方法为 悦砸豫 越环丙沙星 陨悦缘园 辕其
它抗生素 陨悦缘园 伊 员园园遥 以单抗的交叉反应率来分析单
抗的特异性遥
员援 缘摇 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法的建立
悦陨鄄耘蕴陨杂粤的步骤参照 宰怎 等咱员远暂的方法遥 对包被
抗原尧单抗尧匀砸孕 酶标二抗进行一系列浓度的稀释后
用方阵试验确定 悦陨鄄耘蕴陨杂粤 方法的包被抗原尧单抗尧
匀砸孕酶标二抗的最适工作浓度遥 阴性尧阳性标品之间
的 韵阅源缘园值差距最大袁且阴性孔 韵阅源缘园值为 员援 园 左右的
组合袁即为抗原尧抗体的最佳工作浓度遥
工作浓度的 悦陨孕鄄韵灾粤 抗原包被酶标板袁于 源益过
夜或 猿苑益 圆 澡袁孕月杂栽 洗涤 猿 次后袁每孔加入系列稀释
浓度的 悦陨孕标样和工作浓度的单抗各 缘园 滋蕴袁振荡 员
皂蚤灶后 猿苑益下温育 员 澡袁每浓度 猿 孔重复袁设不加 悦陨孕
对照和溶剂空白对照袁孕月杂栽 洗涤 源 次后袁再每孔加入
工作浓度的酶标二抗 员园园 滋蕴 每孔袁猿苑益下温育 员 澡曰
孕月杂栽洗涤 源 次袁加入 栽酝月 底物溶液 渊员园园 滋蕴 辕孔冤袁
猿苑益温育 员缘 皂蚤灶袁加入 圆 皂燥造窑蕴 原员硫酸终止液渊缘园 滋蕴 辕
孔冤袁用酶标仪测定各孔的 韵阅源缘园值遥 以抑制率与 悦陨孕
浓度的半对数绘制标准曲线遥 抑制率 陨悦 计算公式如
下院
陨悦 豫 越 渊韵阅皂葬曾 原 韵阅曾冤 辕 渊韵阅皂葬曾 原 韵阅皂蚤灶 冤 伊 员园园遥韵阅皂葬曾为不加 悦陨孕 时的吸光值袁韵阅曾为 悦陨孕 浓度为 曾 时
的吸光值袁韵阅皂蚤灶为空白对照孔的吸光值遥 在优化的耘蕴陨杂粤分析条件下袁对 悦陨孕建立标准曲线袁以考察其在
最优化的反应体系中的检测灵敏度遥 以 陨悦员园作为耘蕴陨杂粤方法的检测灵敏度遥
员援 远摇 悦陨鄄耘蕴杂粤方法样品添加回收率分析
圆远怨员
摇 员圆 期 抗氟喹诺酮类抗生素单抗的研制及其检测应用
为了确证所建立的 陨悦 原 耘蕴杂粤 方法在实际样品中
检测 悦陨孕残留的正确性袁以经 匀孕蕴悦方法确认不含 悦陨孕
的原奶尧蜂蜜及鸡肉组织做为阴性样本袁对阴性样本添
加不同浓度的 悦陨孕袁用建立的 悦陨鄄耘蕴杂粤 方法进行分析
测定遥
样本处理方法院 渊员冤原奶的处理方法是院取 员园园
滋蕴的原奶袁用 源园园 滋蕴 园援 园员 皂燥造窑蕴 原员 孕月杂栽 稀释袁待
检遥 渊圆冤蜂蜜的处理方法是院称取 源 早 待检蜂蜜于 员缘
皂蕴刻度离心管中袁加入 员 皂蕴 园援 园员 皂燥造窑蕴 原员 孕月杂和 员
皂蕴 园援 员 皂燥造窑蕴 原员 晕葬韵匀 溶液袁 振荡溶解蜂蜜袁再先后
加入 源 皂蕴乙酸乙酯和 远 皂蕴 二氯甲烷袁上下翻转振荡
约 愿 皂蚤灶曰静置至上层澄清袁转移 缘 皂蕴上层澄清溶剂于
离心管中袁远缘益加热条件下空渊氮冤气吹干曰加入 源园园
滋蕴 孕月杂栽 缓冲液于离心管中袁充分溶解壁上残留袁待
检遥 渊猿冤鸡肉组织的处理方法院 称取 圆 早 鸡肉组织于
离心管曰加入 猿 皂蕴乙酸乙酯袁剧烈振荡 缘 皂蚤灶袁静置分
层曰移取上层液体 员援 缘 皂蕴于离心管中袁远缘益加热条件
下用空 渊氮冤 气吹干曰加入 缘园园 滋蕴 孕月杂栽 缓冲液于离
心管中袁用刻度滴管润洗管内壁袁待检遥 样本稀释或浓
缩倍数院原奶稀释 缘 倍袁蜂蜜浓缩 缘 倍袁组织样本浓缩
圆 倍遥 以抑制率与 悦陨孕 浓度的半对数绘制标准曲线遥
根据抑制率从标准曲线上读出样本所对应的浓度袁该
浓度还需要乘上或除以样本的稀释或浓缩倍数袁即为
样品中氟喹诺酮类药物的实际浓度遥
员援 苑摇 氟喹诺酮类药物免疫胶体金试纸条的研制
在 员园园 皂蕴 去离子水中加入 员 豫柠檬酸三钠 员
皂蕴袁煮沸后迅速加入 员 豫 氯金酸 员 皂蕴袁继续煮沸 员缘
皂蚤灶袁冷却后袁用 园援 员 皂燥造窑蕴 原员碳酸钾溶液调胶体金溶
液的 责匀值到 愿援 园袁边搅拌边加入 怨匀怨 单抗 圆 皂早袁搅拌
员缘 皂蚤灶袁再逐滴加入 圆援 缘 皂蕴 圆缘 皂早窑皂蕴 原员聚乙二醇
圆园 园园园渊孕耘郧 圆园 园园园冤袁搅拌 圆园 皂蚤灶遥 圆园 园园园 则窑皂蚤灶 原员
离心 圆园 皂蚤灶袁弃上清液袁加入 员园 皂蕴孕月杂缓冲液渊责匀 值
苑援 源袁含 园援 源 皂早窑皂蕴 原员 孕耘郧冤清洗 圆 次遥 将沉淀用 缘 皂造
含 圆 豫 月杂粤 的 孕月杂 缓冲液渊责匀值 苑援 源冤溶解袁用 园援 圆圆
滋皂 无菌过滤器过滤后获得胶体金标记的单抗遥 用划
膜机把适当浓度的 悦陨孕鄄月杂粤 抗原及羊抗鼠 陨早郧 喷在
晕悦膜上袁分别作为检测线渊栽冤和控制线渊悦冤袁在 猿苑益
烘箱干燥 员圆 澡遥 以同样方法袁将制备好的胶体金标记
的单抗袁用点金机点在胶体金结合垫上遥 将不同浓度
的 悦陨孕鄄月杂粤 和不同 韵阅圆愿园 值的环丙沙星单克隆抗体
胶体金复合物分别点在硝酸纤维素膜和胶体金结合垫
上袁反复调试袁使最终的灵敏度达到所需的要求遥 将贴
好的板切割成 源 皂皂 伊远园 皂皂渊宽 伊长冤的条袁装入模具
中制成检测试剂板袁避光尧密闭尧常温保存备用遥
检测时用滴管吸取待检样品溶液袁滴加 猿 滴渊约
员园园 滋蕴冤于上述试纸条的加样孔中袁在 猿 耀 缘 皂蚤灶 内观
察结果遥 根据观察区的 栽尧悦 线的颜色比对来确定结
果袁栽线显色渊测试线袁靠近加样孔一端冤比 悦 线渊对照
线冤显色深或一样深袁表明样品中浓度低于检测极限
或无氟喹诺酮类药物残留袁样品检测结果为阴性曰栽 线
无显色袁表明样品中氟喹诺酮类药物浓度高于检测极
限曰栽线显色相比 悦线越浅袁表明样品中氟喹诺酮类药
物浓度越高袁样品检测为阳性曰未出现 悦 线袁可能操作
不当或试纸条已失效袁则检测结果无效遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 悦陨孕鄄月杂粤和 悦陨孕鄄韵灾粤人工抗原的合成
以最后一次的透析液为空白对照袁分别对偶联物尧
半抗原尧载体蛋白的溶液进行紫外分光光度计扫描袁结
果发现 悦陨孕鄄月杂粤偶联产物的紫外扫描图形与 月杂粤尧悦陨孕
的扫描图形明显不同袁而 悦陨孕鄄韵灾粤 偶联产物的紫外扫
描图形与 韵灾粤尧悦陨孕的扫描图形明显不同渊如图 员冤袁说
明 悦陨孕已与 月杂粤尧韵灾粤偶联成功遥 根据杨利国介绍的
方法咱员苑暂计算其偶联比率袁计算结果为半抗原 悦陨孕 与
月杂粤尧韵灾粤的结合比分别为 员员颐 员尧缘颐 员遥 偶联产物分装
后于 原 猿园益冰箱保存袁用于单抗制备及检测食品中喹
诺酮类药物残留的免疫学方法遥
圆援 圆摇 杂交瘤细胞的获得及其单抗制备
用杂交瘤技术获得 员 株能分泌高特异性尧高灵敏
度的 悦陨孕单抗的杂交瘤细胞 怨匀怨遥 经 猿 个月以上体外
传代和多次冻存复苏后袁该细胞株均能良好生长袁并稳
定分泌抗 悦陨孕单抗遥 制备其腹水单抗尧纯化腹水中的
陨早郧遥 用间接 耘蕴陨杂粤方法检测发现 怨匀怨 杂交瘤细胞的
腹水单抗的效价为 员颐 缘园园园园园袁间接竞争 耘蕴陨杂粤分析发
现 怨匀怨 单抗的半数抑制率 陨悦缘园及 圆园豫的抑制率 陨悦圆 园
分别为 猿援 圆员 灶早窑皂蕴 原员和 园援 远怨 灶早窑皂蕴 原员袁单抗的抗体
类型为 陨早郧员尧噩链遥 腹水纯化后的抗体浓度为 源援 猿员 灶早
窑皂蕴 原员遥
圆援 猿摇 单抗的特异性鉴定
用 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法评价 怨匀怨 单抗的特异性袁单抗
与用于评价的各类抗生素的 陨悦缘园和交叉反应率如表 员
所示袁单抗与实验的氟喹诺酮类药物的的交叉反应率
在 员援 远园豫 耀 员园远援 远源豫之间袁但与新霉素尧庆大霉素尧卡
那霉素尧磺胺嘧啶尧青霉素 郧尧四环素的交叉反应率均
小于 园援 园员豫 袁 说明 怨匀怨 单抗对氟喹诺酮类药物具有
很好的特异性遥
猿远怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
注院悦陨孕为环丙沙星溶液曰月杂粤为牛血清白蛋白曰悦陨孕鄄月杂粤为环丙沙星与 月杂粤偶联产物曰
韵灾粤为卵清蛋白溶液曰悦陨孕鄄韵灾粤为环丙沙星与 韵灾粤偶联产物遥
晕燥贼藻院 悦陨孕院 糟蚤责则燥枣造燥曾葬糟蚤灶曰 月杂粤院 遭燥增蚤灶藻 泽藻则怎皂 葬造遭怎皂蚤灶曰 悦陨孕鄄月杂粤院悦陨孕 糟燥灶躁怎早葬贼藻凿 憎蚤贼澡 月杂粤曰
韵灾粤院 韵增葬造遭怎皂蚤灶 枣则燥皂 耘早早 宰澡蚤贼藻曰 悦陨孕鄄韵灾粤院悦陨孕 糟燥灶躁怎早葬贼藻凿 憎蚤贼澡 韵灾粤援
图 员摇 悦陨孕鄄月杂粤 渊葬冤 和 悦陨孕鄄韵灾粤 渊遭冤人工合成抗原的紫外扫描分析
云蚤早援 员摇 哉造贼则葬增蚤燥造藻贼 泽糟葬灶 葬灶葬造赠泽藻泽 燥枣 悦陨孕鄄月杂粤 渊葬冤 葬灶凿 悦陨孕鄄韵灾粤 渊遭冤 糟燥灶躁怎早葬贼藻泽
表 员摇 单克隆抗体的特异性分析
栽葬遭造藻 员摇 杂责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠
抗生素
粤灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟泽
缘园豫抑制浓度
陨悦缘园 辕 灶早窑皂蕴 原员
交叉反应率
悦则燥泽泽鄄则藻葬糟贼蚤增蚤贼赠 辕 豫
环丙沙星 悦蚤责则燥枣造燥曾葬糟蚤灶 猿援 圆员 员园园援 园园
恩诺沙星 耘灶则燥枣造燥曾葬糟蚤灶 猿援 园员 员园远援 远源
氧氟沙星 韵枣造燥曾葬糟蚤灶 愿援 员缘 猿怨援 猿怨
达氟沙星 阅葬灶燥枣造燥曾葬蚤灶 源援 愿缘 远远援 员怨
诺氟沙星 晕燥则枣造燥曾葬糟蚤灶 苑援 苑缘 源员援 源圆
依诺沙星 耘灶燥曾葬糟蚤灶 猿援 苑园 愿远援 苑远
麻保沙星 酝葬则遭燥枣造燥曾葬糟蚤灶 怨援 愿猿 猿圆援 远远
洛美沙星 蕴燥皂藻枣造燥曾葬糟蚤灶 远援 圆员 缘员援 远怨
沙拉沙星 杂葬则葬枣造燥曾葬糟蚤灶 员员援 远圆 圆苑援 远圆
双氟沙星 阅蚤枣造燥曾葬糟蚤灶 圆园园援 苑园 员援 远园
新霉素 晕藻燥皂赠糟蚤灶 跃 源园园园园 约 园援 园员
庆大霉素 郧藻灶贼葬皂蚤糟蚤灶 跃 源园园园园 约 园援 园员
卡那霉素 运葬灶葬皂赠糟蚤灶 跃 源园园园园 约 园援 园员
磺胺嘧啶 杂怎造枣葬凿蚤葬扎蚤灶藻 跃 源园园园园 约 园援 园员
青霉素 郧责藻灶蚤糟蚤造造蚤灶 跃 源园园园园 约 园援 园员
四环素 栽藻贼则葬糟赠糟造蚤灶藻 跃 源园园园园 约 园援 园员
圆援 源摇 检测 悦陨孕 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法的建立
圆援 源援 员摇 工作浓度及标准曲线的确定摇 用方阵试验确
定 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法的包被抗原尧单抗尧匀砸孕 标记的羊抗
鼠 陨早郧二抗的工作浓度分别为 圆援 园园滋早窑皂蕴 原员尧园援 缘远
灶早窑皂蕴 原员和 园援 员圆 灶早窑皂蕴 原员遥 在优化的条件下建立了
悦陨孕标准曲线渊图 圆冤遥 由图可知袁悦陨孕 的 悦陨鄄 耘蕴陨杂粤 反
应标准曲线线性回归方程为 再 越 员怨援 缘缘苑造灶载 垣 圆苑援 员怨圆袁
砸圆 越 园援 怨怨园远袁 陨悦缘园 为 猿援 圆员 灶早 窑 皂蕴 原员袁 陨悦员园 为 园援 源圆
灶早窑皂蕴 原员袁线性范围为 园援 远怨 耀 圆源援 愿源 灶早窑皂蕴 原员遥
图 圆摇 环丙沙星 悦陨鄄耘蕴陨杂粤标准曲线
云蚤早援 圆摇 悦陨鄄耘蕴陨杂粤 泽贼葬灶凿葬则凿 糟怎则增藻 枣燥则 悦陨孕 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶
圆援 源援 圆摇 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法的 悦陨孕添加回收率摇 根据建立的
悦陨鄄耘蕴陨杂粤分析方法袁进行 悦陨孕添加回收率试验袁结果如
表 圆所示遥 原奶尧蜂蜜尧鸡肉三样品的 悦陨孕 添加浓度为
缘尧员园和 缘园 灶早窑皂蕴 原员三个浓度袁平均回收率在 愿圆援 园豫 耀
员园愿援 园豫之间袁说明建立的 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法对原奶尧蜂蜜尧
鸡肉样品中的 悦陨孕残留检测具有较高的可靠性袁能满足
源远怨员
摇 员圆 期 抗氟喹诺酮类抗生素单抗的研制及其检测应用
该三种食物中 悦陨孕残留的检测要求遥
表 圆摇 悦陨鄄耘蕴陨杂粤方法的环丙沙星样品添加回收率分析
栽葬遭造藻 圆摇 砸藻糟燥增藻则赠 葬灶葬造赠泽藻泽 燥枣 悦陨孕 枣则燥皂 泽责蚤噪藻凿 皂蚤造噪袁
澡燥灶藻赠 葬灶凿 糟澡蚤糟噪藻灶 贼蚤泽泽怎藻泽 渊灶 越愿冤
样品
杂葬皂责造藻
添加浓度
粤凿凿藻凿 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕
渊灶早窑皂蕴 原员 冤
检测值
阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 增葬造怎藻 辕
渊灶早窑皂蕴 原员冤
回收率
酝藻葬灶
则藻糟燥增藻则赠 辕 豫
原奶 缘 源援 远 依 猿援 猿 怨圆援 园
酝蚤造噪 员园 员园援 愿 依 猿援 员 员园愿援 园
缘园 源远援 员 依 源援 员 怨圆援 圆
蜂蜜 缘 源援 猿 依 圆援 苑 愿远援 园
匀燥灶藻赠 员园 愿援 猿 依 圆援 源 愿猿援 园
缘园 源源援 员 依 源援 愿 愿愿援 圆
鸡肉 缘 源援 员 依 圆援 愿 愿圆援 园
悦澡蚤糟噪藻灶 员园 愿援 苑员 依 源援 园 愿苑援 园
缘园 源员援 愿 依 圆援 怨 愿猿援 远
图 猿摇 胶体金试纸条特异性分析
云蚤早援 猿摇 杂责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 泽贼则蚤责
图 源摇 添加样本试纸条检测结果
云蚤早援 源摇 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽藻泽 燥枣 悦陨孕 蚤灶 贼澡藻 泽责蚤噪藻凿 泽葬皂责造藻泽 遭赠贼澡藻 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 泽贼则蚤责
圆援 缘摇 氟喹诺酮类药物试纸条的建立
以 怨匀怨 单抗为核心利用竞争法测半抗原的原理
成功研制成检测氟喹诺酮类药物的免疫试纸条袁并对
其的特异性和检测灵敏度进行分析遥
圆援 缘援 员摇 试纸条的特异性试验摇 将不含氟喹诺酮类药
物的牛奶渊阴性对照冤尧新霉素尧庆大霉素尧卡那霉素尧
磺胺嘧啶尧青霉素 郧尧四环素标准品稀释至 员园园园
灶早窑皂蕴 原员的终浓度袁用制备的试纸条进行检测袁检测
结果发现当新霉素尧庆大霉素尧卡那霉素尧磺胺嘧啶尧青
霉素 郧尧四环素的浓度是 员园园园 灶早窑皂蕴 原员时袁该试纸条
的检测结果仍是阴性袁而检测 员园园 灶早窑皂蕴 原员浓度的环
丙沙星尧恩诺沙星尧氧氟沙星尧达氟沙星尧诺氟沙星尧依
诺沙星尧麻保沙星尧沙拉沙星时 栽 线完全消失袁员园园
灶早窑皂蕴 原员浓度双氟沙星时可明显见到 栽 线袁但明显弱
于 悦线袁即呈阳性渊图 猿冤遥 说明该试纸条对 怨 种氟喹
诺酮类药物有特异性反应袁而与新霉素尧庆大霉素尧卡
那霉素尧磺胺嘧啶尧青霉素 郧尧氯霉素没有任何交叉反
应袁能很好地用于食品中这 怨 种氟喹诺酮类药物残留
的检测遥
圆援 缘援 圆摇 添加样本试纸条检测及灵敏度摇 对 匀孕蕴悦 确
认阴性的原奶尧蜂蜜尧鸡肉组织分别按 园尧 圆援 缘尧 缘尧 员园尧
缘远怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
圆园尧猿园 灶早窑皂蕴 原员的 悦陨孕 进行添加袁然后用制备的试纸
条进行检测袁结果发现袁在蜂蜜中添加 缘 灶早窑皂蕴 原员尧组
织中添加 圆园 灶早窑皂蕴 原员尧牛奶中添加 猿园 灶早窑皂蕴 原员时袁栽
线明显弱于 悦线渊图 源冤袁即该试纸条检测这 猿 种动物
源性食品中 悦陨孕 残留的检测灵敏度分别是 缘尧圆园尧猿园
灶早窑皂蕴 原员袁表明制备的该免疫试纸条具有很高的检测
灵敏度袁可以应用于动物源性食品中 悦陨孕残留的检测遥
猿摇 讨论
随着研究的不断深入袁氟喹诺酮类药物的毒副作
用越来越受到重视袁目前世界上很多国家规定畜产品
中氟喹诺酮类药物的最高残留限量渊酝砸蕴冤袁如我国规
定达氟沙星在牛尧羊尧家禽肌肉中的最高残留限量为
圆园园 滋早窑噪早 原员袁二氟沙星在牛尧羊尧猪肌肉中最高残留
限量为 源园园 滋早窑噪早 原员袁在家禽的最高残留限量为 猿园园
滋早窑噪早 原员袁恩诺沙星在牛尧羊尧猪尧家禽肌肉中的最高残
留限量均为 员园园 滋早窑噪早 原员袁奶中达氟沙星的最高残留
限量为 猿园 滋早窑噪早 原员 咱员愿暂 曰欧美家畜产品中达氟沙星尧二
氟沙星尧恩诺沙星尧麻保沙星尧沙拉沙星等的最高残留
限量为 员园 耀 员怨园 滋早窑噪早 原员之间咱员怨 原 圆园暂 遥
本研究通过抗原的合成尧动物免疫尧细胞融合尧筛
选尧克隆和腹水制备袁获得了 员 株杂交瘤细胞株 怨匀怨袁
并根据酶联免疫吸附试验的竞争抑制 耘蕴陨杂粤 原理袁以
其分泌的单克隆抗体为核心建立检测环丙沙星残留的
竞争抑制 耘蕴陨杂粤 方法袁并根据免疫胶体金的原理袁以
胶体金标记环丙沙星特异性单克隆抗体为核心试剂研
制环丙沙星残留快速检测的高灵敏度的免疫试纸条袁
且因制备的抗原及单抗对喹诺酮类药物中的其他药
物袁如恩诺沙星尧氧氟沙星尧达氟沙星尧诺氟沙星尧依诺
沙星尧麻保沙星和沙拉沙星等药物具有良好的识别性
能渊表 圆冤曰因此袁制备的酶标试剂盒和胶体金试纸条也
同样可用于检测上述药物的残留情况袁能够满足中国尧
欧盟尧日本等地区对氟喹诺酮类药物残留的检测要求遥
国内外已抗有氟喹诺酮类药物抗体制备的报道袁如顾
黎等咱圆员暂采用碳二亚胺法合成环丙沙星的人工抗原袁并
免疫小鼠袁获得 员 株分泌环丙沙星的单克隆抗体细胞
株袁该抗体 陨悦缘园为 远愿援 猿员 灶早窑皂蕴 原员袁胡鲲等咱圆圆暂制备了 远
株分泌环丙沙星单克隆抗体的细胞株袁其中 员悦怨 细胞
株产生的抗体的 陨悦缘园为 圆源缘援 愿远 灶早窑皂蕴 原员袁最低检测限
为 源缘援 圆缘 灶早窑皂蕴 原员袁魏东等咱员圆暂以沙拉沙星为半抗原袁
制备了抗沙拉沙星的多克隆抗体袁最低检测限达到
员怨援 猿员怨 灶早窑皂蕴 原员袁用抗体建立了检测动物源性食品中
氟喹诺酮类药物残留的免疫学方法咱员圆 原 员缘袁 圆猿暂 袁如 阅怎葬灶
等咱员源暂建立了动物可食产品中的 悦陨孕 的 耘蕴陨杂粤 分析方
法袁郑晶则建立了鳗鱼中恩诺沙星残留量的酶联免疫
检测方法遥 虽然目前已有相关沙拉沙星单克隆抗体的
制备报道袁但从报道结果来看袁所制备的抗体的灵敏度
均没有本实验所制备的抗体的灵敏度理想袁而且本试
验制备的单克隆隆抗体具有很好的宽普检测特性袁对
于喹诺酮类抗生素药物面临多残留检测的大背景下袁
本试验制备的单克隆抗体具有更好的应用价值遥
源摇 结论
本研究利用杂交瘤技术制备了一株抗多种氟喹诺
酮类药物尧高灵敏度的单克隆抗体袁并用制备的单抗建
立了检测氟喹诺酮类药物的 悦陨鄄耘蕴陨杂粤 和免疫胶体金
试纸条方法遥 添加回收试验和特异性分析表明袁建立
的 圆 种方法能用于检测蜂蜜尧鸡肉组织尧牛奶中的氟喹
诺酮类药物残留袁具有很好的应用推广价值遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 灾葬灶糟怎贼泽藻皂 孕 酝袁 月葬遭蚤泽澡 允 郧袁 杂糟澡憎葬则噪 宰 杂援 栽澡藻 枣造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻
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灾藻贼藻则蚤灶葬则蚤葬灶袁 员怨怨园袁 愿园院员苑猿 原 员愿远援
咱 圆 暂摇 柏干荣援 环丙沙星的不良反应 咱 允暂援 中国新药杂志袁 员怨怨源袁 猿
渊猿冤院 源苑 原 源怨
咱 猿 暂摇 陈晓红袁 赵志刚袁 王慧媛援 洛美沙星不良反应分析咱 允暂 援中国医
院用药评价与分析袁 圆园园愿袁 愿 渊员圆冤院 怨源缘 原 怨源苑
咱 源 暂 摇 韵噪藻则皂葬灶 蕴袁 灾葬灶 匀燥燥枣 允袁 阅藻遭藻怎糟噪藻造葬藻则藻 宰援 耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻
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员怨怨愿袁 愿员 渊员冤 院 缘员 原 缘远 援
咱 缘 暂摇 黄晓蓉袁 郑晶袁 李寿崧袁 李耀平袁 郑俊超袁 翁国柱援 鳗鱼及其制
品中喹诺酮类药物残留的微生物快速检测方法研究咱 允暂 援 淡水
渔业袁 圆园园缘袁 猿缘 渊源冤 院 猿 原 远
咱 远 暂摇 姚如心袁 许庆琴袁 杜黎明援衍生化气相色谱法测定药物制剂中的
培氟沙星咱允暂 援 分析实验室袁 圆园园缘袁 渊圆源冤院 缘怨 原 远园
咱 苑 暂摇 杜黎明袁 刘靖靖袁 林黎明袁 江志刚袁 宫庆礼袁 梁增辉援高效液相
色谱法同时检测 愿 种喹诺酮类兽药残留量 咱 允暂 援 分析实验室袁
圆园园苑袁 圆远 渊愿冤 院 缘 原 怨
咱 愿 暂摇 刘媛袁 谢孟峡袁 丁岚袁 单吉浩袁 杨清峰袁 刘素英援 高效液相色谱
同时测定鸡蛋中 源 种氟喹诺酮类药物的残留咱 允暂 援 分析化学袁
圆园园源袁 猿圆 渊猿冤 院 猿缘圆 原 猿缘缘
咱 怨 暂摇 栽燥怎泽泽葬蚤灶贼 月袁 月燥则凿蚤灶 郧袁 允葬灶燥泽蚤 粤袁 砸燥凿则蚤早怎藻扎 粤 砸援 灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 葬
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原 圆园远援
咱员园暂摇 饶勇袁曾振灵袁杨桂香援液相色谱 原质谱联用检测牛奶中氟喹诺
酮类药物残留的确证方法咱 允暂 援 中国农业科学袁 圆园园苑袁源园渊缘冤院
员园猿猿 原 员园源员
咱员员暂摇 岳振峰袁 林秀云袁 唐少冰袁陈小霞袁 吉彩霓袁 华红慧袁 刘昱援高效
远远怨员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员怨远员 耀 员怨远苑
液相色谱 原串联质谱法测定动物组织中的 员远 种喹诺酮类药物
残留咱允暂援色谱袁 圆园园苑袁 圆缘 渊源冤 院 源怨员 原 源怨缘
咱员圆暂摇 魏东袁 杨正涛袁 李颖袁 郭昌明袁 刘辉袁 张乃生援氟喹诺酮类药物
残留免疫学检测方法的研究 咱 允暂援 中国兽医学报袁 圆园园怨袁 圆怨
渊员圆冤院 员缘怨猿 原 员缘怨愿
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员园愿怨援
咱员缘暂 摇 郑晶袁 黄晓蓉袁 李耀平袁 李小晶袁 林杰援鳗鱼中恩诺沙星残留量
的酶联免疫检测方法咱允暂 援食品科学袁 圆园园源袁 圆缘 渊员园冤 院 圆源苑 原 圆缘园
咱员远暂 摇 宰怎 允 载袁 在澡葬灶早 杂 耘袁 在澡燥怎 载 孕援 酝燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 原 遭葬泽藻凿
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咱员苑暂 摇 杨利国援酶免疫测定技术咱酝暂援南京院南京大学出版社袁员怨怨愿袁圆苑怨
原 圆愿员
咱员愿暂摇 中华人民共和国农业部袁第 圆猿缘 号公告院动物性食品中曾药最高
残留限量咱耘月 辕 韵蕴暂袁圆园园圆 原 员圆 原 圆源曰澡贼贼责院椅憎憎憎援 皂燥葬援 早燥增援 糟灶 辕
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憎憎憎援 枣凿葬援 早燥增 辕 晕藻憎泽耘增藻灶贼泽 辕 晕藻憎泽则燥燥皂 辕 孕则藻泽泽粤灶灶燥怎灶糟藻皂藻灶贼泽 辕 圆园园缘 辕
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咱圆员暂摇 顾黎袁孔蕴袁刘围袁郜海涛袁郗日沫袁王鹏援环丙沙星单克隆抗体的
制备和性质鉴定咱允暂 援 科技通报袁 圆园员园袁 圆远渊员冤院 苑圆 原 苑远
咱圆圆暂摇 胡鲲袁黄宣运袁姜有声袁方伟袁杨先乐援 环丙沙星单克隆抗体的制
备及其免疫学特性分析咱允暂 援中国免疫学杂志袁圆园员园袁圆远渊远冤袁缘猿愿
原 缘源猿
咱圆猿暂摇 姜金庆袁杨雪峰袁王自良袁常新耀袁王三虎袁刘兴友援氟喹诺酮类药
物多残留间接竞争 耘蕴陨杂粤 检测方法的建立咱 允暂 援 中国预防兽医
学报袁圆园员员袁猿猿渊员员冤院愿愿苑 原 愿怨圆
阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 酝燥灶燥糟造燥灶葬造
粤灶贼蚤遭燥凿赠 粤早葬蚤灶泽贼 云造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻
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在匀韵哉 悦燥灶早鄄赠蚤灶早摇 在匀粤晕郧 杂澡葬燥鄄藻灶圆
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圆 杂糟澡燥燥造 燥枣 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 在澡藻躁蚤葬灶早 郧燥灶早泽澡葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园员圆曰
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藻灶则燥枣造燥曾葬糟蚤灶袁 燥枣造燥曾葬糟蚤灶袁 凿葬灶燥枣造燥曾葬蚤灶袁 灶燥则枣造燥曾葬糟蚤灶袁 藻灶燥曾葬糟蚤灶袁 皂葬则遭燥枣造燥曾葬糟蚤灶袁 造燥皂藻枣造燥曾葬糟蚤灶袁 泽葬则葬枣造燥曾葬糟蚤灶 葬灶凿 凿蚤枣造燥曾葬糟蚤灶袁
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圆员袁 员员援 远圆袁 葬灶凿 圆园园援 苑园 灶早窑皂蕴 原员袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 哉泽蚤灶早 贼澡藻 酝粤遭袁 葬灶 蚤灶凿蚤则藻糟贼 糟燥皂责藻贼蚤贼蚤增藻 耘蕴陨杂粤 渊悦陨鄄耘蕴陨杂粤冤 葬灶凿 葬
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燥枣 园援 源圆 灶早 窑 皂蕴 原员 渊 员园豫 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 冤援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 泽责蚤噪藻凿 葬灶凿 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬灶葬造赠泽藻泽 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻
蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 泽贼则蚤责 糟葬灶 遭藻 葬责责造蚤藻凿 贼燥 泽糟则藻藻灶蚤灶早 枣造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻 则藻泽蚤凿怎藻泽 蚤灶 澡燥灶藻赠袁 糟澡蚤糟噪藻灶 贼蚤泽泽怎藻泽 葬灶凿 皂蚤造噪
泽葬皂责造藻泽援 栽澡藻 悦陨孕 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 泽贼则蚤责泽 枣燥则 澡燥灶藻赠袁 糟澡蚤糟噪藻灶 贼蚤泽泽怎藻泽 葬灶凿 皂蚤造噪 泽葬皂责造藻泽
憎藻则藻 缘袁 圆园袁 猿园 灶早 辕 皂蕴袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
运藻赠 憎燥则凿泽院云造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻曰酝燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠曰 悦陨鄄耘蕴陨杂粤曰 陨皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 泽贼则蚤责
苑远怨员