全 文 ：热带亚热带植物学报　2012， 20(4)： 356~364
Journal of Tropical and Subtropical Botany
收稿日期： 2011–09–08　　　　接受日期： 2011–11–26
基金项目： 天然橡胶产业技术体系基金项目(CARS-34-ZD1); 国家自然科学基金项目(30760917)资助
作者简介： 张全琪，硕士，助理研究员，主要从事橡胶树抗逆生理研究工作。E-mail: quanqizhang@163.com
* 通讯作者 Corresponding author. E-mail: gkrzshuangzhi@163.com
植物为适应和抵御各种生物和非生物胁迫，
在长期的进化过程中形成了一整套复杂而有效的
适应性机制，其中，基因表达的转录调节在植物应
答各种胁迫过程中起着十分重要的作用。转录因
巴西橡胶树HbWRKY1基因的克隆及转化烟草的
初步研究
张全琪1,2, 倪燕妹1, 朱家红2, 黄志1*
(1. 广东农垦热带作物科学研究所，广东 茂名 525140； 2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物技术重点开放实验
室，海口 571101)
摘要： 利用 RACE 结合 RT-PCR 技术，从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)总 RNA 中扩增得到长度为 1234 bp 的 WRKY 基因
cDNA 全长编码序列。通过氨基酸同源性比对，该序列推导的氨基酸序列与蓖麻、白杨的 WRKY 同源性分别为 79% 和 73%，
表明分离的 cDNA 序列为橡胶树 WRKY 基因，命名为 HbWRKY1。通过构建 pCAMBIA1304-HbWRKY1 植物表达载体，经农
杆菌 GV3101 介导，将 HbWRKY1 基因导入烟草(Nicotiana tabacum)中，对所获得的潮霉素抗性烟草株系进行 PCR 鉴定。结果
表明， HbWRKY1 基因已整合到 65 株转基因植株中。干旱胁迫试验表明，HbWRKY1 的过量表达可以明显提高转基因烟草对
干旱胁迫的耐受能力。这说明 WRKY 基因与橡胶树抗旱能力之间存在一定的关系。
关键词： 巴西橡胶树； HbWRKY1； 基因克隆； 烟草； 耐旱性
doi: 10.3969/j.issn.1005–3395.2012.04.006
Cloning of HbWRKY1 Gene from Hevea brasil iensis and Its
Transformation in Nicotiana tabacum
ZHANG Quan-qi1,2, NI Yan-mei1, ZHU Jia-hong2, HUANG Zhi1*
(1. Guangdong State Farms Tropical Crop Research Institute, Maoming 525140, China; 2. Key Laboratory of Tropical Crop Biotechnology, Ministry
of Agriculture, Institute of Tropical Biosciences and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101, China)
Abstract: Using RACE and RT-PCR techniques, a novel member of WRKY gene family, named as HbWRKY1,
was isolated from H. brasiliensis. Bioinformatics analysis showed that the full length cDNA of HbWRKY1
was 1234 bp, containing a 912 bp open reading frame and encoding 303 amino acids. The deduced amino acid
sequence was highly homologous to WRKY proteins from Ricinus communis and Populus tremula × P. alba
by 79% and 73%, respectively. The HbWRKY1 was constructed into pCAMBIA1304 expression vector, and
transformed into tobacco (Nicotiana tabacum) mediated by Agrobacterium. Sixty-five hygromycin B (Hyg)
resistant regenerated plantlets of tobacco were selected. PCR detection indicated that all the Hyg resistant tobacco
plants contained the alien HbWRKY1 gene. It confirmed that the over-expression of HbWRKY1 under drought
stress could obviously enhanced drought-tolerance of transgenic tobacco plantlets. Therefroe, it suggested that
there were relationship between WRKY gene and drought tolerance of Hevea brasiliensis.
Key words: Hevea brasiliensis; HbWRKY1; Gene clone; Nicotiana tabacum; Drought resistance
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子是植物中最重要的一类调节因子。WRKY 是近
年来报道的一类植物特有的新型转录调控因子，
因在其 N 端含有由 WRKYGQK 的 7 个氨基酸组
成 的 高 度 保 守 序 列 而 得 名。 自 1994 年 Ishiguro
和 Nakamura 从甘薯(Ipomoea batatas)中首次克隆
得到第一个 WRKY 转录因子 SPF1 后，人们相继
在欧芹(Petroselinum sativum)、拟南芥(Arabidopsis
thaliana)、烟草和水稻(Oryza sativa)等多种植物中
分离得到 WRKY 基因[1–4]。
巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)是天然橡胶的
主要来源，在世界经济中一直占有重要的地位，是
一种非常重要的热带经济和能源作物 [5]。然而，随
着全球气候环境的日益恶化，干旱、低温等极端天
气对橡胶种植业的影响逐渐显现出来。乙烯利作
为天然橡胶生产过程中频繁使用的一类生长调节
剂，在刺激橡胶树增产及应答各种生物和非生物胁
迫信号过程中发挥重要作用。为了弄清乙烯利在
刺激橡胶树增产及应答信号转导中的分子机制，我
们构建了乙烯利诱导下的胶乳抑制性削减文库，并
获得了一批差异表达的 EST 序列[6]，其中 No. 125
EST 序列编码的蛋白和其他植物中的 WRKY 蛋白
具有较高的同源性。已有的研究发现，WRKY 基
因广泛参与植物的抗逆胁迫和衰老等生理生化过
程，干旱、病原菌侵染、机械伤害和植物激素类物
质的刺激(如乙烯利、茉莉酸、水杨酸)等均能诱导
WRKY 基因的表达[7–9]。这暗示着巴西橡胶树中相
应基因的表达可能受到乙烯利的调控，并可能参
与了乙烯利刺激橡胶树增产过程及应答某种生物
或非生物胁迫的分子调节。本研究用 RACE 结合
RT-PCR 技术从巴西橡胶树中克隆到 HbWRKY1 基
因，利用根癌农杆菌介导的叶盘法将 HbWRKY1 导
入烟草，探讨 HbWRKY1 基因的表达特性及其与橡
胶树抗逆性的关系，为进一步研究 HbWRKY1 基因
功能及深入了解乙烯利刺激橡胶树增产的分子机
制提供科学参考。
1 材料和方法
1.1 植物材料
巴 西 橡 胶 树(Hevea brasiliensis)无 性 系
RRIM600 种植在中国热带农业科学院实验农场，
选取 6 年树龄的未开割树采集胶乳并迅速置于液
氮中冷冻，–70℃下保存。胶乳总 RNA 的提取参
照张治礼等[10] 的方法进行。
1.2 HbWRKY1基因的克隆
应用抑制性消减杂交技术，我们成功构建了乙
烯利刺激下巴西橡胶树胶乳与未处理胶乳差异表
达的 cDNA 消减文库，根据在筛选削减文库时获得
的 No. 125 EST 序列设计两个 5′RACE 特异性引
物 GSP1：5′-ATCCGCAACCTTAACCGGTTC-3′、
GSP2：5′-TGGAGGCTGAGGAAATCGACG-3′，
分 别 与 通 用 引 物 UPM：5′-CTAATACGACTC-
ACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGC-
AGAGT-3′ 配 对 组 成 两 对 巢 式 引 物 进 行 5′ 端
的 克 隆。 设 计 3′RACE 特 异 性 引 物 GSP3：5′-
TCTGATGAAGCGTCCACAATTCATGG-3′ 进
行 3′ 端 的 克 隆。 具 体 操 作 参 照 CLOTECH 公 司
的 SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit 说
明 书 进 行。 将 扩 增 出 的 DNA 连 接 到 pGEM-T
载 体 上 进 行 序 列 测 定。 将 所 获 得 的 序 列 和 已
有 的 EST 序 列 进 行 拼 接，为 了 保 证 分 离 出 的
片段来自同一个基因，分别在 5′ 端起始密码子
的 上 游 和 3′ 端 终 止 密 码 子 的 下 游 设 计 特 异 引
物 F1: 5′-ATGACATGCAATACCTGC-3′, F2: 5′-
CTAATTACTCTGGGCATTACC-3′ 进行全长 cDNA
的扩增，然后将扩增的 DNA 片段连接到 pGEM-T
载 体 上 进 行 测 序，将 测 序 结 果 与 拼 接 结 果 进 行
比 较，利 用 网 上 数 据 库 进 行 BLAST 分 析，用
DNAMAN 软 件 进 行 序 列 比 对，将 测 序 正 确 的
WRKY-cDNA 序列命名为 HbWRKY1。
1.3 HbWRKY1的生物信息学分析
蛋 白 质 特 性 分 析　　 利 用 ProtParam 软 件
(http://us.expasy.org/tools/ProtParam.html)对 推 导 的
HbWRKY1 氨基酸序列进行理化特性分析，同时
利用 NCBI CD-Search service 工具和 Expasy 软件
(http://us.expasy.org/prosite/)对 HbWRKY1 的 结 构
域分析。
系 统 进 化 树 分 析　　 将 巴 西 橡 胶 树
HbWRKY1 与其他植物的 WRKY 转录因子进行
氨基酸水平的聚类分析。系统进化树包括 18 个
WRKY 蛋 白，分 别 为 巴 西 橡 胶 树 的 GU372969；
拟 南 芥 的 AF331713、AF224698、AF418309、
AF509499、AF426253、AF224700 和 AF421157；
水 稻 的 DQ298180、BK005035、DQ298181、
DQ298182、DQ298183、DQ298184、DQ298185、
DQ298186 和 AF193802 以 及 欧 芹 (Petroselinum
sativum) 的 U48831。
张全琪等：巴西橡胶树HbWRKY1基因的克隆及转化烟草的初步研究
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亚 细 胞 定 位 及 功 能 分 类　　 用 Psort 软 件
(http://www.psort.org)分析 HbWRKY1 转录因子的
亚细胞定位。用 Protfun 在线工具(http://www.cbs.
dtu.dk/services/ProtFun/)预测 HbWRKY1 蛋白的功
能分类。
1.4 根癌农杆菌介导HbWRKY1转化烟草
植 物 表 达 载 体 的 构 建　　 根 据 HbWRKY1
基 因 的 编 码 区 序 列 设 计 引 物 EWRKYa: 5′-
ATCCATGGGCTATGGAAGGGAAAGAAGAGGT-
3′(含酶切位点 NcoI)和 EWRKYb: 5′-CGACTAGT-
TCTACTCCTCGTTTAGCATATGGGA-3′(含 酶 切
位 点 SpeI)，将 扩 增 的 HbWRKY1 基 因 ORF 片 段
经 NcoI、SpeI 双酶切后连入载体 pCAMBIA1304，
构建植物表达载体 pCAMBIA1304-HbWRKY1，取
适量 pCAMBIA1304-HbWRKY1 质粒导入根癌农
杆 菌 (Agrobacterium tumefaciens) GV3101 感 受 态
细胞 , 获得工程农杆菌 GV3101 (pCAMBIA1304-
HbWRKY1)。
转 HbWRKY1 基 因 烟 草 的 获 得　　 农 杆 菌
GV3101 (pCAMBIA1304-HbWRKY1)在 附 加 利 福
平 50 μg m L-1、卡那霉素 50 μg mL-1 的 YEB 液体
培养基中常规活化，培养至 OD600 约为 0.6~0.8。
将烟草(Nicotiana tabacum)无菌苗叶片的边缘和叶
脉剪去，切成 0.4 cm×0.6 cm 大小，在准备好的农
杆菌菌液中浸泡 5 min。用无菌滤纸吸干植物材料
表面的菌液，转入表面铺一层滤纸的 MS 固体培养
基上，于 28℃下暗培养，以转化空载体作为对照。
3 d 后将叶片转到附加 20 mg L-1 潮霉素、300 mg L-1
头孢霉素的 MS 分化培养基上，进行光照培养，每 3
周继代培养 1 次。约 1~2 月后，将约 2 cm 高的幼
苗转到 1/2MS 生根培养基上生根。待根系发育良
好后，移栽到土壤中。
转基因烟草 PCR 检测　　采用 SDS 法[11–12] 提
取转基因烟草的基因组 DNA，按照 pCAMBIA1304
载体上连接目的基因位点两侧的序列合成 PR-F 和
PR-R 引 物，并 以 pCAMBIA1304-HbWRKY1 质 粒
DNA 为阳性对照，以野生型烟草植株为阴性对照，
进行 PCR 扩增，检测转基因烟草中的 HbWRKY1
基因。
干旱胁迫实验　　将经 PCR 检测筛选出的阳
性转基因植株移栽至装有旱地耕作层干土的盆中，
缓苗 10 d 左右植株进入正常生长期后即可进行干
旱胁迫实验，胁迫实验开始前 1 d 每盆植株浇透水，
使土壤含水量达到田间持水量水平，次日开始胁迫
实验后停止供水使其自然下降 , 当达到预定的胁迫
强度下限后 , 每天称重浇水使其土壤含水量维持在
胁迫水平，于植株干旱胁迫 15 d 后复水，观察处理
植株恢复情况。
2 结果和分析
2.1 巴西橡胶树WRKY基因的克隆
通过对巴西橡胶树已有的 No. 125 EST 序列进
行分析，结果表明，该序列与其他植物中的 WRKY
一致性较高，表明该 EST 序列可能为巴西橡胶树
胶乳 WRKY 基因片段。在此基础上设计 5′ RACE
和 3′ RACE 引物对其 5′ 和 3′ 端进行扩增，结果获
得了约 480 bp 的 5′ 端片段和 300 bp 的 3′ 端片段。
经回收、克隆和测序后证实，5′ 端片段有 479 bp，3′
端片段有 296 bp。利用 DNAMAN 软件，将 3′、5′
端序列与同 HbEST 125 序列进行拼接，得到了一条
长度为 1234 bp 的 cDNA 序列。根据拼接好的序
列 设 计 引 物 EWRKY1 和 EWRKY2 对 HbWRKY1
编码区进行扩增，得到一条约 900 bp 的特异带，与
预期结果一致。回收目的条带，插入 pMD18-T 克
隆载体，转化大肠杆菌 DH5α，获得阳性重组质粒，
经 BamHI、XhoI 双酶切鉴定，与扩增特异条带大
小一致。测序结果表明该编码区序列长 912 bp，与
拼接结果序列完全一致，证明了克隆的 3 个片段确
实来自于同一个基因。用ORF finder软件分析表明，
该基因 cDNA 全长为 1234 bp，包含 1 个 912 bp 的
完整开放阅读框序列(ORF)，编码 1 个含有 303 个
氨基酸残基的多肽；以及 178 bp 的 5′ 非编码区和
145 bp 的 3′ 非编码区；用巴西橡胶树基因组 DNA
为模板进行扩增，结果表明该基因含有两个内含
子 (图 1)。在 NCBI 网站进行序列比对，该 cDNA
序 列 与 其 他 植 物 的 WRKY 基 因 具 有 较 高 的 相
似 性，与 蓖 麻 (Ricinus communis)、杨 树 [(Populus
tomentosa × P. bolleana) × P. tomentosa] 和 大 豆
(Glycine max) WRKY 基 因 (EEF47235、GQ377433
和 ABC26920)的核苷酸序列相似性分别达 81%、
78% 和 75%，氨 基 酸 序 列 相 似 性 分 别 达 79%、
73% 和 59%。 这 表 明，我 们 分 离 的 cDNA 序 列
为 橡 胶 树 WRKY 基 因，将 其 命 名 为 HbWRKY1，
这是首次公开报道从热带产胶植物巴西橡胶树
中 克 隆 获 得 WRKY 基 因，GenBank 登 录 号 为
GU372969。
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2.2 HbWRKY1的生物信息学分析
利 用 ProtParam 软 件 对 推 导 的 HbWRKY1
氨 基 酸 序 列 进 行 理 化 特 性 分 析 , 结 果 表 明，
HbWRKY1 的分子量为 33.87 kD，理论等电点为
5.87。其中极性氨基酸(W, Y, S, C, M, N, E, T, D, Q,
K, R, H)占 61.7% , 极性氨基酸的带电氨基酸(D, E,
H, K, R)占 25.8%；酸性氨基酸(D, E)占 12.6%，碱性
氨基酸(H, K, R) 占 13.2%；疏水性氨基酸(A, F, I, L,
M, P, V, W, Y)占 39%。蛋白质不稳定指数估算值
为 59.33, 属于不稳定蛋白质。
利 用 NCBI CD-Search service 工 具 和 Expasy
软 件 对 HbWRKY1 的 结 构 域 进 行 分 析 表 明，
HbWRKY1 含 有 1 个 WRKY 结 构 域 和 1 个
FLYWCH 锌指结构域(图 2)。应用 DNAMAN 5.2
软件将 HbWRKY1 与其他植物已知的 WRKY 蛋
白进行多序列比较，结果表明，HbWRKY1与拟南
芥 (NP_182248)、大豆(ABC26920)、蓖麻(EEF47235)
和马铃薯(Solanum tuberosum, ABU49723)的 WRKY
蛋白具有较高的同源性，都具有一个典型的 WRKY
结构域和一个 FLYWCH 锌指结构域(图 3)。
图 1　HbWRKY1 核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。划线部分为两个内含子，阴影部分为 WRKY 家族 7 个绝对保守的氨基酸残基及 C2H2
锌指结构。
Fig. 1 Nucleotide sequence of HbWRKY1 and deduced amino acid sequence. Two introns are signaled by underline, a conserved WRKYGQR amino
acids sequences and a C2H2 zinc finger domain are shaded in gray.
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将 巴 西 橡 胶 树 HbWRKY1与 其 他 植 物 的
WRKY 转 录 因 子 进 行 氨 基 酸 水 平 的 聚 类 分 析
(图 4)，结果表明，巴西橡胶树 HbWRKY1与属于
WRKY 家族中第 II 类的 AtWRKY6、AtWRKY18、
OsWRKY62、OsWRKY76、OsWRKY32 的亲缘关
系相近，说明 HbWRKY1 也属于 WRKY 家族中的
第 II 类，它们具有类似的功能与结构。
用 Psort 软件(http://www.psort.org)对 HbWRKY1
转录因子进行亚细胞定位，结果表明，该蛋白最终
定位于细胞核的可能性最大，为 30%。用 Protfun
在 线 工 具 (http://www.cbs.dtu.dk/services/ProtFun/)
预测 HbWRKY1 蛋白的功能分类，结果表明该蛋白
图 2　巴西橡胶树 HbWRKY1 转录因子结构图
Fig. 2 Sketch map of HbWRKY1 transcription factor domain
图 3　植物 WRKY 基因编码的氨基酸序列比较
Fig. 3 Comparison of deduced amino acid sequences of WRKY among plants
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具有转录、转录调控、信号传导和逆境应答的可能
性分别达到 0.537、0.363、0.064 和 0.025，其可能
性远高于其他功能。植物 WRKY 转录因子在转录、
转录调控、信号传导和逆境应答中的功能已经得到
证实，因此推测 HbWRKY1 蛋白在橡胶树中可能具
有转录、转录调控、信号传导和逆境应答的功能。
2.3 HbWRKY1的遗传转化
应 用 根 癌 农 杆 菌 GV3101 (pCAMBIA1304-
HbWRKY1)植物转化系统对烟草进行遗传转化，初
步获得了 65 株潮霉素抗性烟草再生株系(图 5)。
转 基 因 烟 草 植 株 PCR 检 测　　 以 野 生 型
植 株 及 转 基 因 苗 的 基 因 组 DNA 为 模 板，按 照
pCAMBIA1304 载体上连接的目的基因两侧的序列
分别合成 PR-F 和 PR-R 引物，并以 pCAMBIA1304-
HbWRKY1质粒 DNA 为阳性对照，以野生型烟草
植株为阴性对照，进行 PCR 扩增。结果表明，野
生型植株基因组没有出现扩增信号，在 72 株含
HbWRKY1基因的抗性烟草植株中，有 65 株的基因
组 DNA 可以扩增出与 pCAMBIA1304-HbWRKY1
质 粒 扩 增 产 物 大 小 一 致 的 特 异 条 带，阳 性 率 为
90.3%(图 6)，证明这些植株为转HbWRKY1基因的
烟草植株。由于 PCR 高敏感性导致的高污染率，
其阳性结果并不能完全说明目的基因已转化进入
受体中，因此还需要进一步验证。
HbWRKY1 过量表达对干旱胁迫的响应　　
利 用 RT-PCR 技 术 对HbWRKY1的 表 达 特 性 进 行
分析，结果表明，ABA 和 PEG6000 处理能够诱导
HbWRKY1基因表达(数据未发表)。ABA 作为一种
重要的植物激素，在植物对干旱、高盐等胁迫反应
图 4 WRKY 蛋白的系统发育树
Fig. 4 Phylogenetic tree of WRKY
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中起重要作用。本研究设计了干旱胁迫实验，分析
HbWRKY1 过量表达对干旱胁迫的反应。干旱实
验结果表明，干旱处理 15 d 后，HbWRKY1 过量表
达植株的生长基本正常，而对照植株则大部分萎蔫
(图 7a)；恢复浇水 20 d 后，HbWRKY1 过量表达植
株生长更加茁壮，对照植株虽然也恢复了生长，但
其长势较弱，且老叶边缘枯黄(图 7b)。这些实验结
果表明，HbWRKY1 过量表达能够增强烟草对干旱
图 5　转基因烟草再生植株。A,B: 转基因组织的抗性筛选 ; C,D: 转化植株培养。
Fig. 5 Transgenic tobacco plantlets. A,B. Hyg-resistant selection of transgenic callus and buds; C,D. Culture of transgenic plantlets.
图 6　转 HbWRKY1 基因烟草植株的 PCR 检测。M. Marker 2000; 1. 阴性对照 ; 2. 阳性对照 ; 3~10: 转化植株。
Fig. 6 PCR identification of transgenic HbWRKY1 tobacco plantlets. M. Marker 2000; 1. Negative control; 2. Positive control; 3–10. Transgenic plants.
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胁迫的抗性。
3 讨论
通过 RACE 技术，利用巴西橡胶树 SSH 文库，
克隆得到 1 个编码 WRKY 转录因子的基因，该基
因编码的氨基酸序列与蓖麻、杨树的相应氨基酸
序列具有较高的相似性。同时，该蛋白包含 1 个
WRKY 家 族 特 有 的 WRKY 结 构 域 及 1 个 C2H2
类型的锌指结构，这是首次公开报道从热带产胶植
物巴西橡胶树中克隆到 WRKY基因，故将其命名为
HbWRKY1。本研究利用农杆菌介导的叶圆盘法将
克隆到的 HbWRKY1基因导入烟草，经 PCR 检测表
明有 65 株转基因烟草中 HbWRKY1基因已经成功
整合到烟草基因组中。还有 7 株为假阳性植株，这
可能是外植体在筛选过程中，选择压加得太迟或加
得太少，致使未转化细胞能正常分裂分化，或者外
植体的某些表层细胞稳定表达外源抗性基因，降低
了其周围培养基中的 Kan 浓度，而一些非转化细胞
在较低的选择压力下继续分化。另外，T-DNA 进
入细胞后并没有整合到受体基因组中，而是以游离
状态存在，这也将导致 PCR 的结果呈阳性。
植物在漫长的进化史中，形成了一套有效的防
御系统来抵御各种外界伤害，其中通过乙烯、茉莉
酸和水杨酸等信号分子激活植物体内一系列防御
基因的表达 , 从而使植物表现出对生物胁迫的抗性
反应是植物应答各种伤害的主要途径之一。WRKY
转录因子基因受各种生物和非生物胁迫诱导，在
植物遭受各种胁迫时，WRKY 基因能迅速表达，通
过与下游靶基因启动子中的顺式作用元件特异性
结合，从而调控基因的转录和表达，最终开启植物
自身防御系统进行防卫应答 [13]。本研究利用乙烯
利刺激条件下处理与未处理胶乳差异表达构建的
cDNA 消减文库克隆得到 HbWRKY1基因，推测该
基因可能参与了橡胶树乙烯信号的传递过程，其表
达受乙烯诱导，通过利用乙烯信号转导途径调节自
身转录水平，从而对巴西橡胶树防御反应的激活起
着重要作用。另外，我们对筛选出的阳性植株进行
干旱胁迫处理，结果表明转基因植株与野生型植株
相比，表现出较明显的耐旱性，初步说明 HbWRKY1
过量表达能够增强烟草对干旱胁迫的抗性，暗示
图 7　干旱胁迫对 HbWRKY1 过表达烟草的影响。a: 干旱处理 15 d; b: 恢复浇水 20 d。
Fig. 7 Effect of drought stress on over-expression of HbWRKY1 tobacco plants. a. Drought stress for 15 days; b. After re-water 20 days.
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HbWRKY1基因可能在橡胶树适应干旱胁迫的过程
中扮演至关重要的角色。
目前，对 WRKY 转录因子的功能还了解得不
很透彻，如对其表达特性进行分析及下游靶基因的
筛选与功能鉴定等，还需要进行更加深入的研究。
此外，对转基因株系进行深入的生理实验也是必须
的，尤其是抗逆、抗病相关的生理实验，这将为橡胶
树抗逆机理的研究提供科学依据。
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