全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（４）： ６２７ － ６３３ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０４􀆰 ０１５
基金项目：国家自然科学基金（４１３０１３３５），中国博士后科学基金（２０１４Ｍ５５１６２２），江苏高校优势学科建设工程
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｚｃｃａｉ＠ ｎｊｎｕ． ｅｄｕ． ｃｎ
收稿日期： ２０１４ － １２ － １８
土壤强还原消毒过程中产生气体
对土传病原菌的抑制作用
黄新琦１，２ 　 刘亮亮１ 　 朱　 睿１ 　 张金波１，２ 　 蔡祖聪１，２∗
（１．南京师范大学地理科学学院， 南京 ２１００２３； ２．南京师范大学， 江苏省物质循环与污染控制重点实验室，
江苏省地理信息资源开发与利用协同创新中心， 南京 ２１００２３）
摘要： 土壤强还原（ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ，ＲＳＤ）是一种高效、环保的土壤消毒方法，为明确
ＲＳＤ杀菌机理，采用气相色谱和荧光定量 ＰＣＲ 等技术研究 ＲＳＤ 过程中产生的气体对土传病原菌
的杀菌作用。 结果表明：ＲＳＤ过程中土壤能够产生 Ｈ２Ｓ 和 ＮＨ３；当在装有 ２５ ｇ 病土的三角瓶中分
别加入 ２５ ｍＬ的 Ｈ２Ｓ 和 ＮＨ３ 时，土壤中尖孢镰刀菌的数量均显著下降，其杀菌效果分别为 ９０􀆰 ３％
和 １００􀆰 ０％ ；当在病土中加入 ０􀆰 １２５％ （ｗ ／ ｗ）氨水时，尖孢镰刀菌、茄劳尔氏菌、辣椒疫霉和立枯丝
核菌的数量分别下降至对照土壤的 １􀆰 ０％ 、０􀆰 ３％ 、０􀆰 １％和 ０􀆰 ９％ ；此外，加入 １０ μＬ 氨水即可显著
抑制尖孢镰刀菌菌丝生长和孢子萌发，抑制率分别为 ５２􀆰 ８％和 １００􀆰 ０％ 。 表明 ＲＳＤ 过程中产生的
Ｈ２Ｓ和 ＮＨ３ 对 ＲＳＤ过程的杀菌效果起着一定的作用。
关键词： 氨； 硫化氢； 尖孢镰刀菌； 厌氧发酵
Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｇａｓｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ
ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ
Ｈｕａｎｇ Ｘｉｎｑｉ１，２ 　 Ｌｉｕ Ｌｉａｎｇｌｉａｎｇ１ 　 Ｚｈｕ Ｒｕｉ１ 　 Ｚｈａｎｇ Ｊｉｎｂｏ１，２ 　 Ｃａｉ Ｚｕｃｏｎｇ１，２∗
（１． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｇｅｏｇｒａｐｈｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎａｎｊｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００２３， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ
Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｃｙｃｌｉｎｇ ａｎｄ Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ
Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｎａｎｊｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００２３， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ （ＲＳＤ） ｉｓ ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ⁃ｆｒｉｅｎｄｌｙ ｗａｙ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｍｏｎｏ⁃ｃｒｏｐｐｉｎｇ ｓｏｉｌｓ． Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｌａｒｉｆｙ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ
ＲＳＤ， ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ＲＳＤ ｏｎ ｔｈｅ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ Ｈ２Ｓ ａｎｄ ＮＨ３ ｗｅｒｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ＲＳＤ ｔｒｅａｔｅｄ ｓｏｉｌｓ． Ｗｈｅｎ ２５ ｍＬ Ｈ２Ｓ ｗａｓ ａｄｄｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ
ｆｌａｓｋ， ｗｉｔｈ ２５ ｇ ｓｏｉｌｓ， ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ ９０􀆰 ３％ ， ａｎｄ ｅｑｕａｌ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ
ＮＨ３ ｃｏｕｌｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｒｅｍｏｖｅ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｏｉｌ． Ｗｈｅｎ ０􀆰 １２５％ （ｗ ／ ｗ） ａｍｍｏｎｉａ ｗａｔｅｒ ｗａｓ
ａｄｄｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ⁃ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｓｏｉｌ， ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ， Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌｏｎａｃｅａｒｕｍ，
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ ａｎｄ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｏ １􀆰 ０％ ， ０􀆰 ３％ ， ０􀆰 １％ ａｎｄ ０􀆰 ９％ ｏｆ ｔｈａｔ ｉｎ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｏｉｌ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ １０ μＬ ａｍｍｏｎｉａ ｗａｔｅｒ ｉｎ Ｐｅｔｒｉ ｄｉｓｈ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｓ ｗｅｒｅ ５２􀆰 ８％
ａｎｄ １００􀆰 ０％ ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｈ２Ｓ ａｎｄ ＮＨ３ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ＲＳＤ ｐｒｏｃｅｓｓ ｐｌａｙｅｄ
ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＲＳＤ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ａｍｍｏｎｉａ； ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ； Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ； ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
　 　 近年来，植物土传病害在世界各地普遍发生，造
成农产品产量和品质大幅下降，甚至绝收（Ｂｕｔｌｅｒ，
２０１３）。 现代农业生产中过分追求高产、优质和高
效而改变了传统种植制度，导致土壤生态失衡、土传
病害发生加剧（李世东等，２０１１）。 由于土壤复种指
数高及设施农业的单一种植，形成了适宜病原微生
物生长的土壤环境，导致其数量激增，继而引发毁灭
性的植物病害（苗建强等，２０１２）。 此外，化学农药
的大量使用会引发包括环境破坏、土壤生态失衡、食
品污染和公众健康水平下降等一系列社会问题（黄
新琦等，２０１４）。 因此，寻求高效环保的土壤消毒方
法，以降低土壤中病原菌数量并改善土壤环境，使之
不再适宜病原菌的生长显得尤为迫切 （余超等，
２０１０）。
土壤强还原法 （ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ，
ＲＳＤ）又名土壤生物杀菌法（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａ⁃
ｔｉｏｎ），在日本（Ｓｈｉｎｍｕｒａ ｅｔ ａｌ． ，１９９９）和荷兰（Ｂｌｏｋ ｅｔ
ａｌ． ，２０００）相继独立发明。 此方法具体为：向富含植
物土传病原菌的土壤中添加易分解的有机碳源，并
通过淹水或者覆盖塑料薄膜维持土壤厌氧状态，以
创造土壤强还原环境（蔡祖聪等，２０１５）。 其原理为
在强还原环境中厌氧微生物大量繁殖，通过对有机
物厌氧分解产生的大量抑菌物质，可在 ２ ～ ３ 周内杀
灭土壤中的大量病原微生物。 由于 ＲＳＤ具有高效、
环保和低成本等特点，在美国、日本和荷兰已在田间
成功推广应用，但关于 ＲＳＤ杀菌机理的研究报道仍
较少（Ｍｏｍｍａ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）。
ＲＳＤ 过程中产生的杀菌物质有乙酸、丁酸
（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ． ，２０１５）、Ｆｅ２ ＋ 、Ｍｎ２ ＋ （Ｍｏｍｍａ ｅｔ ａｌ． ，
２０１１）、异硫氰酸烯丙酯（ ａｌｌｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ，ＡＩＴＣ）
和二甲基三硫（ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｔｒｉｓｕｌｐｈｉｄｅ，ＤＭＴＳ）等（Ｈｅ⁃
ｗａｖｉｔｈａｒａｎａ ｅｔ ａｌ． ，２０１４），然而这些杀菌物质仅对
ＲＳＤ过程的杀菌效果有部分贡献，除此之外是否还
有其它杀菌物质产生仍不清楚 （ Ｍｏｍｍａ ｅｔ ａｌ． ，
２０１３）。 在 ＲＳＤ处理土壤的过程中有难闻气体产生
（Ｍｏｍｍａ，２００８），其中是否含有除上述以外的杀菌
物质值得进一步研究。 因此，本试验选取了 ４ 种
ＲＳＤ过程中产生的气体，即硫化氢 （ Ｈ２Ｓ）、甲烷
（ＣＨ４）、氧化亚氮（Ｎ２Ｏ）和氨气（ＮＨ３），采用气相色
谱和荧光定量 ＰＣＲ技术研究其杀菌效果，明确 ＲＳＤ
过程中产生的具有杀菌作用的气体，以期为 ＲＳＤ 杀
菌机理的深入研究及对 ＲＳＤ 技术的改进提供基础
依据。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试土壤及菌株：砂土采自海南省乐东县香蕉
种植园内，为香蕉枯萎病高发病地块土壤。 供试有
机物为收集采摘后的玉米秸秆地上部，充分晾干，打
碎，Ｃ ／ Ｎ为 ４５􀆰 ７。 供试菌株为尖孢镰刀菌古巴专化
型 Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｂｅｎｓｅ Ｎ２１，由本实验
室从香蕉病株中分离获得；茄劳尔氏菌 Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏ⁃
ｌａｎａｃｅａｒｕｍ ２０１０、立枯丝核菌 Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｑ１、
辣椒疫霉 Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ ＭＸＬ１ 均由南京农业
大学资源与环境科学学院提供。
供试培养基：改良 Ｋｏｍａｄａ 培养基 （ ｍｏｄｉｆｉｅｄ
Ｋｏｍａｄａ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ，Ｋ２） （Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ． ，１９７８）：Ｋ２ＨＰＯ４
１ ｇ、 ＫＣｌ ０􀆰 ５ ｇ、 ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０􀆰 ５ ｇ、 Ｆｅ⁃Ｎａ⁃ＥＤＴＡ
０􀆰 ０１ ｇ、Ｌ⁃天门冬酰胺 ２ ｇ、半乳糖 １０ ｇ、琼脂 ２０ ｇ，去
离子水定容至 ９００ ｍＬ，高压灭菌后冷却至 ６０℃，加
入 ７５％ Ｃ６Ｃｌ５ＮＯ２ ０􀆰 ９ ｇ、牛胆盐 ０􀆰 ４５ ｇ、Ｎａ２Ｂ４Ｏ７·
１０Ｈ２Ｏ ０􀆰 ５ ｇ、硫酸链霉素 ０􀆰 ３ ｇ，用 １０％磷酸调 ｐＨ
至 ３􀆰 ８ ± ０􀆰 ２。 茄劳尔氏菌土壤分离培养基（ｓｏｉｌ ｉｓｏ⁃
ｌａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ＳＭＳＡ⁃Ｅ， ＳＭＳＡ ） （ Ｆｒｅｎｃｈ ｅｔ ａｌ． ，
１９９５）：水解络蛋白 １ ｇ、蛋白胨 １０ ｇ、甘油 ５ ｍＬ、琼
脂 ２０ ｇ，蒸馏水补足至 １ Ｌ，调节 ｐＨ 至 ６􀆰 ５，高压灭
菌后冷却至 ６０℃每升加入结晶紫 ５ ｍｇ、多粘菌素 Ｂ
硫酸盐 １００ ｍｇ、杆菌肽 ２５ ｍｇ、氯霉素 ５ ｍｇ、青霉素
５ ｍｇ、Ｃ１９Ｈ１５ＣｌＮ４ ５０ ｍｇ、放线菌酮 １００ ｍｇ。 燕麦培
养基（ｏａｔｍｅａｌ ｍｅｄｉｕｍ，ＯＭ）（朱桂宁等，２００３）：燕麦
片 ３０ ｇ、琼脂 ２０ ｇ，蒸馏水补足至 １ Ｌ，高压灭菌冷却
后加入利福平 ２０ ｍｇ、氨苄青霉素 ２００ ｍｇ、７５％
Ｃ６Ｃｌ５ＮＯ２ １００ ｍｇ。 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ｐｏｔａ⁃
ｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｇａｒ，ＰＤＡ）：马铃薯 ２００ ｇ、葡萄糖 ２０ ｇ、琼
脂 ２０ ｇ，蒸馏水补足至 １ Ｌ。 牛肉膏蛋白胨培养基：
牛肉膏 ５ ｇ、蛋白胨 １０ ｇ、ＮａＣｌ ５ ｇ、琼脂 ２０ ｇ，蒸馏水
补足至 １ Ｌ，调节 ｐＨ至 ７􀆰 ２。
试剂及仪器：本试验所用气体均由大连大特气
体有限公司生产；ＰｏｗｅｒＳｏｉｌ® ＤＮＡ提取试剂盒，美国
ＭＯ⁃ＢＩＯ公司；ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ，日本 ＴａＫａＲａ
公司。 Ｓａｎ ＋＋流动分析仪，荷兰 Ｓｋａｌａｒ 公司；７８９０Ａ
气相色谱仪，美国 Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ 公司；ＳＣＤ 检
测器，美国Ｗａｓｓｏｎ⁃ＥＣＥ公司；ＣＦＸ⁃９６ 荧光定量 ＰＣＲ
仪，美国 Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ 公司；Ｄｉｏｎｅｘ ＩＣＳ １１００ 离子色谱
８２６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
仪，美国 Ｔｈｅｒｍｏ 公司； Ｂ４００ 均质仪，瑞士 Ｂｕｃｈｉ
公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 对尖孢镰刀菌具有抑制作用气体的筛选
将 ２５ ｇ 含有尖孢镰刀菌的病土（砂土）装入
２５０ ｍＬ三角瓶中，橡胶塞密封瓶口。 用纯 Ｎ２ 置换
三角瓶中空气，反复操作 ３ 次。 用注射器抽取 ２􀆰 ５
ｍＬ或 ２５ ｍＬ瓶中 Ｎ２，再分别加入 ２􀆰 ５ ｍＬ 或 ２５ ｍＬ
Ｈ２Ｓ、ＣＨ４、Ｎ２Ｏ和 ＮＨ３。 以纯 Ｎ２ 为厌氧对照，以空
气作为好氧对照。 将三角瓶置于 ２５℃培养 ５ ｄ后用
平板稀释涂布法（Ｋ２ 培养基）测定土壤中尖孢镰刀
菌数量。 每处理 ３ 次重复。
１􀆰 ２􀆰 ２ ＲＳＤ过程中土壤无机离子浓度的变化
将 １％玉米秸秆加到病土中（ｗ ／ ｗ），充分混匀，
称取 ２００ ｇ 混匀土样装入内径 ５ ｃｍ、高 １５ ｃｍ 的圆
柱形容器，加入 １００ ｍＬ去离子水，末端密封，将土柱
置于 ３０℃的培养箱中培养 １５ ｄ。 培养结束后排水
至 ２０ ｄ。 以未混有玉米秸秆并未淹水的病土作为对
照，每处理 ３ 次重复。 定期取土样，将土样分别与水
和 ２ ｍｏｌ ／ Ｌ ＫＣｌ溶液以 １∶ ５（ｗ ∶ ｗ）的比例混匀，２００
ｒ ／ ｍｉｎ振荡 １ ｈ 后过滤。 水溶液用离子色谱测定土
壤中 ＳＯ４ ２ －的浓度；ＫＣｌ溶液用流动分析仪测定土壤
中 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ和 ＮＯ －３ ⁃Ｎ的浓度。
１􀆰 ２􀆰 ３ ＲＳＤ过程中土壤排放 Ｈ２Ｓ的测定
在上述试验处理第 １０ 天时，采集 ＲＳＤ 处理土
柱液面上部气体，使用气相色谱检测气体中是否含
有 Ｈ２Ｓ。 色谱柱为 ＣＰ８５７５ 毛细管柱（６０ ｍ × ０􀆰 ３２
ｍｍ ×０􀆰 ３９ ｍｍ），预调温度至 ４０℃，持续 １１ ｍｉｎ，以
４０℃ ／ ｍｉｎ的速率提升至 ８０℃，持续 ５ ｍｉｎ，以 ７０℃ ／
ｍｉｎ的速率提升至 １５０℃，持续 ７ ｍｉｎ。 以上条件下
６ 种含硫气体 Ｈ２Ｓ、氧硫化碳 （ ＣＯＳ）、甲基硫醇
（ＣＨ３ＳＨ）、二甲基硫（Ｃ２Ｈ６Ｓ）、二硫化碳（ＣＳ２）和二
甲基二硫（Ｃ２Ｈ６Ｓ２）可被充分分开。 通过比对相应
组分的保留时间，可以确定 ＲＳＤ处理过程中是否有
Ｈ２Ｓ的产生。
１􀆰 ２􀆰 ４ 不同浓度 ＮＨ３ 对土壤病原菌数量的影响
依据 Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１１）的方法，将真菌性病原
菌尖孢镰刀菌、立枯丝核菌和辣椒疫霉活化后转接
至液体 ＰＤＡ培养基中，２８℃静置培养 ７ ｄ，取出洗净
后放入均质仪中打碎。 将细菌性病原菌茄劳尔氏菌
活化后转接至牛肉膏蛋白胨培养基中于 ３０℃、１７０
ｒ ／ ｍｉｎ 振荡培养 ２ ｄ，菌悬液 ７ ０００ ｇ 离心 １０ ｍｉｎ，弃
去上清液，将菌体重悬于 ０􀆰 ５％生理盐水中。 最终
将真菌性病原菌以每千克土 １􀆰 ５ ｇ 菌丝鲜重的浓
度、细菌性病原菌以每克土 １０６ ＣＦＵ 的浓度均匀拌
入土中。
将 ５０ ｇ 病土装入 ２５０ ｍＬ 三角瓶中，分别加入
０、２５、１００、１７５、２５０ μＬ 的 ２５％氨水，橡胶塞密封瓶
口，置于 ２５℃培养箱中培养 ５ ｄ，每处理 ３ 次重复。
培养结束后通过平板稀释涂布计数法检测土壤中茄
劳尔氏菌（ＳＭＳＡ平板）和辣椒疫霉（ＯＭ 平板）的数
量。 采用荧光定量 ＰＣＲ 检测立枯丝核菌和尖孢镰
刀菌的数量。 土壤 ＤＮＡ 的提取采用 ＰｏｗｅｒＳｏｉｌ®
ＤＮＡ提取试剂盒。 ２０ μＬ荧光定量 ＰＣＲ 扩增体系：
土壤 ＤＮＡ模板 ２ μＬ、 ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ １０ μＬ、
正反引物各 １ μＬ、无菌去离子水 ６ μＬ。 立枯丝核菌
反应条件：９５℃ ２ ｍｉｎ；９５℃ ５ ｓ，６０℃ ３４ ｓ，４０ 个循
环；尖孢镰刀菌反应条件：９５℃ ２ ｍｉｎ；９５℃ １０ ｓ，
５８℃ １５ ｓ，７２℃ ２０ ｓ，４０ 个循环 （赵爽等，２０１０；
Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ． ，２０１１）。 在每一循环的退火阶段采集
荧光信号，实时检测并记录荧光信号的变化，反应结
束后制作扩增产物的熔解曲线。 立枯丝核菌和尖孢
镰刀菌的特异性引物分别为 ＳＴ⁃ＲＳ１ （ Ｆ）：５′⁃ＡＧＴ⁃
ＧＴＴＡＴＧＣＴＴＧＧＴＴＣＣＡＣＴ⁃３′、 ＩＴＳ４ （ Ｒ ）： ５′⁃ＴＣＣＴＣ⁃
ＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ⁃３′和 ＩＴＳ１⁃Ｆ （ Ｆ）：５′⁃ＣＴＴＧＧＴ⁃
ＣＡＴＴＴＡＧＡＧＧＡＡＧＴＡＡ⁃３′、ＡＦＰ３０８（Ｒ）：５′⁃ＣＧＡＡＴ⁃
ＴＡＡＣＧＣＧＡＧＴＣＣＣＡＡＣ⁃３′。
１􀆰 ２􀆰 ５ 不同浓度 ＮＨ３ 对尖孢镰刀菌生长的影响
将活化后的直径 ５ ｍｍ尖孢镰刀菌菌丝块转接
至含稀释 ４ 倍的 ＰＤＡ平板中间，倒置后在培养皿盖
上分别加入 ０、０􀆰 １、０􀆰 ５、１、５、１０ μＬ 的氨水，２５℃培
养 ３ ｄ后测量菌落直径。 参照 Ｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１１）方
法制备尖孢镰刀菌孢子悬液，将培养皿中培养出的
孢子用无菌水洗下，并用血球计数板测定孢子浓度，
调节使其浓度小于 １ ０００ 个 ／ ｍＬ。 在水琼脂平板上
涂布 ０􀆰 １ ｍＬ上述制备好的孢子悬液，倒置后在培养
皿盖上分别加入 ０、０􀆰 １、０􀆰 ５、１、５、１０ μＬ 的氨水，置
于培养箱中 ２５℃培养 ３ ｄ，统计平板上萌发的孢子
数。 每处理 ３ 次重复。
１􀆰 ３ 数据分析
试验数据处理使用 Ｅｘｃｅｌ ２００３、Ｏｒｉｇｉｎ ７􀆰 ５ 和
ＳＰＳＳ １３􀆰 ０ 统计分析软件进行，采用 Ｄｕｎｃａｎ 氏新复
极差法检验差异显著性。
２ 结果与分析
２􀆰 １ ＲＳＤ过程产生的气体对尖孢镰刀菌的作用
ＣＨ４ 和 Ｎ２Ｏ对于土壤中的尖孢镰刀菌数量无
显著影响；三角瓶中加入 ２５ ｍＬ Ｈ２Ｓ 可显著减少土
９２６４ 期 黄新琦等： 土壤强还原消毒过程中产生气体对土传病原菌的抑制作用
壤中尖孢镰刀菌的数量，经 Ｈ２Ｓ 处理后其数量降低
了 ９０􀆰 ３％ ；三角瓶中加入 ２􀆰 ５ ｍＬ ＮＨ３ 即可显著抑
制尖孢镰刀菌，抑制率为 ４２􀆰 ２％ ，而高浓度 ＮＨ３ 对
于尖孢镰刀菌的抑制作用更强，抑制率可达
１００􀆰 ０％ （图 １）。 表明 ＲＳＤ 过程产生的主要气体中
Ｈ２Ｓ和 ＮＨ３ 可以减少土壤中尖孢镰刀菌数量。
图 １ 不同气体对土壤中尖孢镰刀菌的抑制作用
Ｆｉｇ． １ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇａｓｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｉｌ
图中数据为平均数 ±标准差。 不同小写字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法检验差异显著（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。 ＣＫ： 好氧对照；
Ｎ２： 厌氧对照； ＣＨ４ ⁃Ｌ、Ｎ２Ｏ⁃Ｌ、Ｈ２Ｓ⁃Ｌ和 ＮＨ３ ⁃Ｌ： 三角瓶中加入 ２􀆰 ５ ｍＬ对应气体； ＣＨ４ ⁃Ｈ、Ｎ２Ｏ⁃Ｈ、Ｈ２Ｓ⁃Ｈ和 ＮＨ３ ⁃Ｈ： 三角瓶
中加入 ２５ ｍＬ对应气体。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ． ＣＫ： Ａｅｒｏｂｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ； Ｎ２： ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ； ＣＨ４ ⁃Ｌ， Ｎ２Ｏ⁃Ｌ， Ｈ２Ｓ⁃Ｌ， ＮＨ３ ⁃Ｌ ａｎｄ ＣＨ４ ⁃Ｈ， Ｎ２Ｏ⁃Ｈ， Ｈ２Ｓ⁃Ｈ，
ＮＨ３ ⁃Ｈ： ２􀆰 ５ ｍＬ ｏｒ ２５ ｍＬ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇａｓｅｓ ｗｅｒｅ ａｄｄｅｄ ｔｏ Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ ｆｌａｓｋ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
　
２􀆰 ２ ＲＳＤ过程中土壤无机离子浓度的变化
ＲＳＤ 处理过程中土壤 ＮＯ －３ ⁃Ｎ 浓度显著下降，
在处理第 ５ 天时已接近为 ０；与之相似的是土壤中
ＳＯ４ ２ －浓度也呈下降趋势，处理第 １０ 天时仅为处理
前的 ４２􀆰 ６％ ；随着处理时间的增加，土壤中 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ
浓度呈上升趋势，土壤晾干后其 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ 浓度为处
理前的 １０􀆰 ５ 倍（图 ２）。 表明 ＲＳＤ 处理过程中土壤
中的 ＳＯ４ ２ －和 ＮＯ －３ ⁃Ｎ被还原，ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ呈累积趋势。
图 ２ 土壤强还原处理过程中土壤 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ、ＮＯ －３ ⁃Ｎ
和 ＳＯ４ ２ －浓度的变化
Ｆｉｇ． ２ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ， ＮＯ －３ ⁃Ｎ ａｎｄ ＳＯ４ ２ －
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｉｌ ｄｕｒｉｎｇ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ
ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ
图中数据为平均数 ±标准差。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
　
２􀆰 ３ ＲＳＤ过程中产生 Ｈ２Ｓ的鉴定
通过对比发现，经 Ｈ２Ｓ和 ＲＳＤ处理过的土壤均
有变黑的迹象，而对照土壤仍呈现黄色，表明 ＲＳＤ
处理过程中土壤可能有 Ｈ２Ｓ产生，造成 ＲＳＤ处理后
土壤颜色的加深。 ＲＳＤ 过程中在淹水土壤液面上
部气体中含有与标准气体 Ｈ２Ｓ 相同保留时间的峰，
说明 ＲＳＤ过程中产生了 Ｈ２Ｓ气体，但并没有检测到
其它种类的含硫气体，表明 Ｈ２Ｓ是 ＲＳＤ过程中产生
的主要含硫气体（图 ３）。
２􀆰 ４ ＮＨ３ 对尖孢镰刀菌生长的抑制作用
随着 ＮＨ３ 浓度的逐渐升高，土壤中 ４ 种常见土
传病原菌数量均呈下降趋势。 当三角瓶中 ２５％氨
水加入量达到 １００ μＬ时，尖孢镰刀菌、茄劳尔氏菌、
辣椒疫霉和立枯丝核菌的数量较对照分别显著降低
了 ８０􀆰 １％ 、８９􀆰 ８％ 、６５􀆰 ７％和 ９３􀆰 ５％ （Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）；当
三角瓶中 ２５％氨水加入量达到 ２５０ μＬ时，４ 种菌的
数量依次仅为对照土壤中的 １􀆰 ０％ 、０􀆰 ３％ 、０􀆰 １％和
０􀆰 ９％ （图 ４）。 表明 ＮＨ３ 对土壤病原菌具有广谱性
的抑制作用。
ＮＨ３ 可以有效抑制尖孢镰刀菌的菌丝生长和
孢子萌发，随着 ＮＨ３ 浓度的增加，其抑制效果逐渐
增强。 当在培养皿里加入 ０􀆰 ５ μＬ ２５％氨水时，尖孢
镰刀菌的孢子萌发即受到显著抑制；２５％氨水加入
０３６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
图 ３ 气相色谱测定土壤强还原过程中产生的含硫气体图谱
Ｆｉｇ． ３ Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｌｆｕｒｏｕｓ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ａ： 标准品，峰依次为 Ｈ２Ｓ、ＣＯＳ、ＣＨ３ＳＨ、Ｃ２Ｈ６Ｓ、ＣＳ２ 和 Ｃ２Ｈ６Ｓ２； Ｂ： 样品。 Ａ： Ｓｔａｎｄａｒｄ； ｔｈｅ ｇａｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅ
Ｈ２Ｓ， ＣＯＳ， ＣＨ３ＳＨ， Ｃ２Ｈ６Ｓ， ＣＳ２， Ｃ２Ｈ６Ｓ２ ｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ； Ｂ： ｓａｍｐｌｅ．
　
图 ４ 不同浓度 ＮＨ３ 对土壤中 ４ 种常见病原菌数量的影响
Ｆｉｇ． ４ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＮＨ３ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｃｏｍｍｏｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｉｌ
　 图中数据为平均数 ±标准差。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
　
量提高至 ５ μＬ，尖孢镰刀菌的菌丝生长受到显著抑
制（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５），而加入 １０ μＬ氨水时，对尖孢镰刀菌
菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别为 ５２􀆰 ８％ 和
１００􀆰 ０％ 。 表明较低浓度的 ＮＨ３ 即可有效抑制土壤
中尖孢镰刀菌的活性（图 ５）。
３ 讨论
长期淹水土壤产生了大量的 ＣＨ４ 和 Ｎ２Ｏ（Ａｈｎ
ｅｔ ａｌ． ，２０１４），本试验结果表明 ＣＨ４ 和 Ｎ２Ｏ 对土壤
中的病原菌数量无显著影响，而 Ｈ２Ｓ 和 ＮＨ３ 对其具
有显著抑制作用。 然而，这并不能证明土壤在 ＲＳＤ
处理过程中发出的难闻气味中含有 Ｈ２Ｓ 和 ＮＨ３。
ＲＳＤ处理显著降低了土壤中 ＳＯ４ ２ －浓度，应是硫酸
盐还原细菌在厌氧状态下大量繁殖，还原硫酸盐为
含硫气体（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ⁃Ｋａｂａｎａ ｅｔ ａｌ． ，１９６５），如 Ｈ２Ｓ。
在某些集约化的设施蔬菜地土壤中积累了大量的
ＳＯ４ ２ － （ ＞ ７００ ｍｇ ／ ｋｇ）（朱同彬等，２０１３），而 ＲＳＤ 处
理后土壤 ＳＯ４ ２ －浓度下降到 ８０ ｍｇ ／ ｋｇ，在此种情况
下应该有大量的含硫气体产生，Ｈ２Ｓ 可能是 ＲＳＤ 处
理过程中土壤产生恶臭气味的主要成分之一。 此
外，ＲＳＤ 处理后的土壤呈现黑褐色，与经纯 Ｈ２Ｓ 气
体处理的土壤呈相似的颜色，这可能是土壤中产生
１３６４ 期 黄新琦等： 土壤强还原消毒过程中产生气体对土传病原菌的抑制作用
图 ５ 不同浓度的 ＮＨ３ 对 １ ／ ４ ＰＤＡ培养基中尖孢镰刀菌菌丝生长和孢子萌发的影响
Ｆｉｇ． ５ Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＮＨ３ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＦＯＣ ｉｎ １ ／ ４ ＰＤＡ ｍｅｄｉｕｍ
图中数据为平均数 ±标准差。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
　
的 Ｈ２Ｓ 还原 Ｆｅ３ ＋成 ＦｅＳ 所致，也是 ＲＳＤ 过程中有
Ｈ２Ｓ气体产生的另一证据。 ＲＳＤ处理过程中土壤上
层气体的气相色谱测定结果表明，ＲＳＤ 处理过程中
确实有 Ｈ２Ｓ 气体的产生。 Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ⁃Ｋａｂａｎａ ｅｔ ａｌ．
（１９６５）指出在长期淹水的稻田土壤中分离到硫酸
盐还原细菌—脱硫弧菌 Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｃａｎｓ 并
检测出 Ｈ２Ｓ气体，且 Ｈ２Ｓ对土壤线虫具有极强的杀
灭作用，这与本试验结果相符。 但由于 Ｈ２Ｓ 吸附性
较强，对于 ＲＳＤ处理过程中土壤微环境中产生 Ｈ２Ｓ
的准确定量较为困难，仍有待进一步研究。
本研究同时检测了在 ＲＳＤ 过程中土壤 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ
和 ＮＯ －３ ⁃Ｎ 浓度的变化， ＮＯ －３ ⁃Ｎ 浓度显著下降，
ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ浓度显著上升，并且 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ 浓度上升幅度
大于 ＮＯ －３ ⁃Ｎ 浓度下降的幅度。 因此，ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ 含量
的增加并不仅仅来源于异化性硝酸盐还原成铵
（ｄｉｓｓｉｍｉｌａｔｏｒｙ ｎｉｔｒａｔｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ａｍｍｏｎｉｕｍ，ＤＮＲＡ）
途径，大部分增加的 ＮＨ ＋４ ⁃Ｎ 来源于有机氮的矿化
作用。 而在一些设施蔬菜地土壤中，由于长期大量
的氮肥投入，土壤中的硝态氮严重累积，其含量往往
大于 １００ ｍｇ Ｎ ／ ｋｇ，在此类型土壤中采用 ＲＳＤ处理，
相较于有机氮的矿化，ＤＮＲＡ途径对于土壤中 ＮＨ ＋４ ⁃
Ｎ含量的增加可能会起到更大的作用（朱同彬等，
２０１３）。 不论来源于哪种途径，在 ＲＳＤ 处理过程中
有 ＮＨ３ 的产生。 有报道指出施用氮肥的土壤中大
丽轮枝菌 Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ 数量显著降低，且这种
抑制作用是由土壤中增加的氨和亚硝酸盐造成的
（Ｔｅｎｕｔａ ＆ Ｌａｚａｒｏｖｉｔｓ，２００２）。 本研究结果表明，较
低浓度的 ＮＨ３ 即可对尖孢镰刀菌具有显著的抑制
作用，然而并未能准确测定 ＲＳＤ过程中产生的 ＮＨ３
浓度，但在某些有机氮源和硝态氮含量较高的微环
境中产生了较高浓度的 ＮＨ３ （Ｋａｔａｓｅ ｅｔ ａｌ． ，２００９），
因此 ＮＨ３ 可能对 ＲＳＤ的杀菌效果起到一定的作用。
本研究结合前人报道（Ｍｏｍｍａ ｅｔ ａｌ． ，２０１１；Ｈｅ⁃
ｗａｖｉｔｈａｒａｎａ ｅｔ ａｌ． ，２０１４；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ． ，２０１５），发现
ＲＳＤ过程中并不是某一种物质起到全部的杀菌作
用，而是多种杀菌物质联合参与的结果。 除 Ｆｅ２ ＋ 、
Ｍｎ２ ＋ 、乙酸、丁酸、ＡＩＴＣ 和 ＤＭＴＳ 之外，ＲＳＤ 过程中
还产生了 ＮＨ３ 和 Ｈ２Ｓ，并且其对 ＲＳＤ的杀菌效果也
起到一定的作用。 然而在不同类型的土壤中实施
ＲＳＤ处理，不同杀菌物质对于 ＲＳＤ杀菌效果所占的
比重可能不尽相同，如在硝态氮严重累积的土壤中，
ＮＨ３ 占主导作用；而在硫酸盐累积的土壤中，Ｈ２Ｓ 所
起的杀菌效果可能更强。 此外，以不同有机碳源的
ＲＳＤ处理过程中产生的杀菌物质也不尽相同（Ｈｅ⁃
ｗａｖｉｔｈａｒａｎａ ｅｔ ａｌ． ，２０１４），有待进一步研究。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ａｈｎ ＪＨ， Ｃｈｏｉ ＭＹ， Ｋｉｍ ＢＹ， Ｌｅｅ ＪＳ， Ｓｏｎｇ Ｊ， Ｋｉｍ ＧＹ， Ｗｅｏｎ ＨＹ．
２０１４． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ⁃ｓａｖｉｎｇ ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ ｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｇｒｅｅｎ⁃
ｈｏｕｓｅ ｇａｓｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｐａｄｄｙ ｓｏｉｌ． Ｍｉ⁃
ｃｒｏｂｉａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ， ６８（２）： ２７１ － ２８３
Ｂｌｏｋ ＷＪ， Ｌａｍｅｒｓ ＪＧ， Ｔｅｒｍｏｒｓｈｕｉｚｅｎ ＡＪ， Ｂｏｌｌｅｎ ＧＪ． ２０００． Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｏｆ ｓｏｉｌｂｏｒｎｅ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｂｙ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ ｆｒｅｓｈ ｏｒｇａｎｉｃ ａ⁃
ｍｅｎｄｍｅｎｔｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｔａｒｐｉｎｇ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ９０（３）： ２５３ －
２５９
Ｂｕｔｌｅｒ Ｄ． ２０１３． Ｆｕｎｇｕｓ ｔｈｒｅａｔｅｎｓ ｔｏｐ ｂａｎａｎａ． Ｎａｔｕｒｅ， ５０４（７４７９）：
１９５ － １９６
Ｃａｉ ＺＣ， Ｚｈａｎｇ ＪＢ， Ｈｕａｎｇ ＸＱ， Ｚｈｕ ＴＢ， Ｗｅｎ Ｔ． ２０１５． Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．
Ａｃｔａ Ｐｅｄｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ， ５２（３）： ４６９ － ４７６ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［蔡
祖聪， 张金波， 黄新琦， 朱同斌， 温腾． ２０１５． 强还原土壤
灭菌防控作物土传病的应用研究． 土壤学报， ５２ （３）：
２３６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
４６９ － ４７６］
Ｆｒｅｎｃｈ ＥＲ， Ｇｕｔａｒｒａ Ｌ， Ａｌｅｙ Ｐ， Ｅｌｐｈｉｎｓｔｏｎｅ Ｊ． １９９５． Ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ
ｆｏｒ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅ⁃
ｎａｎｃｅ． Ｆｉｔｏｐａｔｏｌｇｉａ， ３０（３）： １２６ － １３０
Ｈｅｗａｖｉｔｈａｒａｎａ ＳＳ， Ｒｕｄｄｅｌｌ Ｄ， Ｍａｚｚｏｌａ Ｍ． ２０１４． Ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ⁃
ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｎｄ ｎｅｍａｔｉｃｉｄａｌ ｖｏｌａｔｉｌｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｕｒｉｎｇ
ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏ⁃
ｇｙ， １４０（１）： ３９ － ５２
Ｈｕａｎｇ ＸＱ， Ｗｅｎ Ｔ， Ｍｅｎｇ Ｌ， Ｚｈａｎｇ ＪＢ， Ｚｈｕ ＴＢ， Ｃａｉ ＺＣ． ２０１４．
Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｑｕｉｃｋｌｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅｌｙ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｏｎ
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ． Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ， ３４（１６）： ４５２６ －
４５３４ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［黄新琦， 温腾， 孟磊， 张金波， 朱同彬，
蔡祖聪． ２０１４． 土壤快速强烈还原对于尖孢镰刀菌的抑制
作用． 生态学报， ３４（１６）： ４５２６ － ４５３４］
Ｈｕａｎｇ ＸＱ， Ｗｅｎ Ｔ， Ｚｈａｎｇ ＪＢ， Ｍｅｎｇ Ｌ， Ｚｈｕ ＢＴ， Ｃａｉ ＺＣ． ２０１５．
Ｔｏｘｉｃ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ
ｍａｉｎｌｙ ｃａｕｓｅｄ ｔｈｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ．
ｃｕｂｅｎｓｅ． ＢｉｏＣｏｎｔｒｏｌ， ６０（１）： １１３ － １２４
Ｈｕａｎｇ ＸＱ， Ｚｈａｎｇ Ｎ， Ｙｏｎｇ ＸＹ， Ｙａｎｇ ＸＭ， Ｓｈｅｎ ＱＲ． ２０１１． Ｂｉｏ⁃
ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｄａｍｐｉｎｇ⁃ｏｆｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ
ｗｉｔｈ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ ＳＱＲ⁃Ｎ４３． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １６７
（３）： １３５ － １４３
Ｋａｔａｓｅ Ｍ， Ｋｕｂｏ Ｃ， Ｕｓｈｉｏ Ｓ， Ｏｏｔｓｕｋａ Ｅ， Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｔ， Ｍｉｚｕｋｕｂｏ Ｔ．
２００９． Ｎｅｍａｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ
ｗｈｅａｔ ｂｒａｎ ｉｎ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ． Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ
Ｒｅａｓｅａｒｃｈ， ３９（２）： ５３ － ６２
Ｌｉ ＳＤ， Ｍｉａｏ ＺＱ， Ｇａｏ ＷＤ． ２０１１． Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ， ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｏｂ⁃
ｌｉｇａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｉｌｂｏｒｎｅ ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ．
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ， ２７（４）： ４３３ － ４４０ （ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李世东， 缪作清， 高卫东． ２０１１． 我国农林园艺
作物土传病害发生和防治现状及对策分析． 中国生物防治
学报， ２７（４）： ４３３ － ４４０］
Ｌｉｎｇ Ｎ， Ｈｕａｎｇ ＱＷ， Ｇｕｏ ＳＷ， Ｓｈｅｎ ＱＲ． ２０１１． Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙ⁃
ｍｙｘａ ＳＱＲ⁃２１ ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｒｏｏｔ ｅｘｕｄａｔｅｓ ｏｆ ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｔｏ
ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｃｏｎｉｄｉａｌ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ．
ｎｉｖｅｕｍ． Ｐｌａｎｔ Ｓｏｉｌ， ３４１（１ ／ ２）： ４８５ － ４９３
Ｍｉａｏ ＪＱ， Ｗａｎｇ Ｍ， Ｌｉ ＸＨ， Ｙａｎｇ ＦＨ， Ｌｉｕ Ｆ． ２０１２． Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｎｄ
ｎｅｍａｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｆｉｖｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｇａｉｎｓｔ ｓｏｉｌ⁃
ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｎｅｍａｔｏｄｅｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃ⁃
ｔｉｏｎ， ３９（６）： ５６１ － ５６６ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［苗建强， 王猛， 李秀
环， 杨法辉， 刘峰． ２０１２． 五种挥发性化合物对土传病原真
菌及线虫的生物活性． 植物保护学报， ３９（６）： ５６１ － ５６６］
Ｍｏｍｍａ Ｎ． ２００８． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ （ＢＳＤ） ｏｆ ｓｏｉｌｂｏｒｎｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｊａｐａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅ⁃
ｓｅａｒｃｈ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ， ４２（１）： ７ － １２
Ｍｏｍｍａ Ｎ， Ｋｏｂａｒａ Ｙ， Ｍｏｍｍａ Ｍ． ２０１１． Ｆｅ２ ＋ ａｎｄ Ｍｎ２ ＋ ， ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ａｇｅｎｔｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉ⁃
ｃａｌ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ７７
（６）： ３３１ － ３３５
Ｍｏｍｍａ Ｎ， Ｋｏｂａｒａ Ｙ， Ｕｅｍａｔｓｕ Ｓ， Ｋｉｔａ Ｎ， Ｓｈｉｎｍｕｒａ Ａ． ２０１３． Ｄｅ⁃
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｏｉｌ ｄｉｓｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｊａｐａｎ． Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ９７（９）： ３８０１ － ３８０９
Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ⁃Ｋａｂａｎａ Ｒ， Ｊｏｒｄａｎ ＪＷ， Ｈｏｌｌｉｓ ＪＰ． １９６５． Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ： ｂｉｏ⁃
ｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｒｉｃｅ ｆｉｅｌｄｓ： ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ． Ｓｃｉｅｎｃｅ，
１４８（３６６９）： ５２４ － ５２６
Ｓｈｉｎｍｕｒａ Ａ， Ｓａｋａｍｏｔｏ Ｎ， Ａｂｅ Ｈ． １９９９． Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｏｏｔ
ｒｏｔ ｏｆ ｗｅｌｓｈ ｏｎｉｏｎ ｂｙ ｓｏｉｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ． Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｔｏ⁃
ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ６５（３）： ３５２ － ３５３
Ｓｕｎ ＥＪ， Ｓｕ ＨＪ， Ｋｏ ＷＨ． １９７８． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏ⁃
ｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｂｅｎｓｅ ｒａｃｅ ４ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ｏｒ ｈｏｓｔ ｔｉｓｓｕｅ ｂｙ ｃｕｌｔｕｒａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ６８： １６７２ － １６７３
Ｔｅｎｕｔａ Ｍ， Ｌａｚａｒｏｖｉｔｓ Ｇ． ２００２． Ａｍｍｏｎｉａ ａｎｄ ｎｉｔｒｏｕｓ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ ｎｉ⁃
ｔｒｏｇｅｎｏｕｓ ａｍｅｎｄｍｅｎｔｓ ｋｉｌｌ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉａ ｏｆ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｄａｈｌｉａｅ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ９２： ２５５ － ２６４
Ｙｕ Ｃ， Ｘｉａｏ ＲＦ， Ｌｉｕ Ｂ， Ｌｉｎ ＮＱ， Ｃｈｅｎ Ｌ． ２０１０． Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｃｏｌｏｎｉ⁃
ｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＦＪＡＴ⁃３４６⁃ＰＡ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ａ⁃
ｇａｉｎｓｔ ｂａｎａｎａ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ． Ｊｏｕｒａｎｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ３７
（６）： ４９３ － ４９８ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［余超， 肖荣风， 刘波， 林乃
铨， 陈璐． ２０１０． 生防菌 ＦＪＡＴ⁃３４６⁃ＰＡ的内生定殖特性及对
香蕉 枯 萎 病 的 防 治 效 果． 植 物 保 护 学 报， ３７
（６）： ４９３ － ４９８］
Ｚｈａｏ Ｓ， Ｌｕｏ Ｊ， Ｌｉｎｇ Ｎ， Ｘｕ ＤＢ， Ｌａｎｇ ＪＪ， Ｈｕ Ｊ， Ｓｈｅｎ ＱＲ． ２０１０．
Ｑｕｉｃｋ ｃｈｅｃｋ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｐｓｐｏｒｕｍ ｉｎ ｓｏｉｌ
ｗｉｔｈ ｍａｃｒｏａｒｒａｙ ａｎｄ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ． Ａｃｔａ Ｐｅｄｏｌｏｇｉｃａ
Ｓｉｎｉｃａ， ４７（４）： ７０３ － ７０８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［赵爽， 罗佳， 凌宁，
徐大兵， 朗娇娇， 胡江， 沈其荣． ２０１０． 基因宏阵列和荧光
定量 ＰＣＲ方法对西瓜枯萎病害土壤中尖孢镰刀菌的快速检
测和定量． 土壤学报， ４７（４）： ７０３ － ７０８］
Ｚｈｕ ＧＮ， Ｈｕａｎｇ ＦＸ， Ｑｉｎ ＢＸ， Ｌｉｕ ＺＭ， Ｃａｉ ＪＨ． ２００３． Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ． Ｃｈｉｎａ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ，
（６）： ４１ － ４２ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［朱桂宁， 黄福新， 秦碧霞， 刘志
明， 蔡健和． ２００３． 致病疫霉的分离培养和单孢纯化方法．
中国蔬菜， （６）： ４１ － ４２］
Ｚｈｕ ＴＢ， Ｍｅｎｇ ＴＺ， Ｚｈａｎｇ ＪＢ， Ｃａｉ ＺＣ． ２０１３． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｔｒｏｎｇ ｒｅ⁃
ｄｕｃｔｉｖｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｏｎ ｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｆａｃｉｌｉｔｙ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ
ｓｏｉｌ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ， ２４（９）： ２６１９ － ２６２４
（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［朱同彬， 孟天竹， 张金波， 蔡祖聪． ２０１３． 强
还原方法对退化设施蔬菜地土壤的修复． 应用生态学报，
２４（９）： ２６１９ － ２６２４］
（责任编辑：李美娟）
３３６４ 期 黄新琦等： 土壤强还原消毒过程中产生气体对土传病原菌的抑制作用