全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（４）： ６００ － ６０７ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０４􀆰 ０１１
基金项目： “十二五”国家科技支撑计划（２０１５ＢＡＤ１６Ｂ０１），国家自然科学基金（３１０７１７３８），湖南省教育厅重点项目（１５Ａ０８２）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒｓ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｙｉｙｏｕｊｉｎ＠ １６３． ｃｏｍ， ｂａｉｌｉａｎｙａｎｇ２００５＠ ａｌｉｙｕｎ． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１４ － １１ － ２４
短短芽胞杆菌对植物病原真菌的抑菌活性和抑菌机理
周金伟１ 　 周红丽１ 　 易有金１∗　 柏连阳２∗　 李高阳３
（１．湖南农业大学食品科技学院， 长沙 ４１０１２８； ２．湖南省农业科学院植物保护研究所， 长沙 ４１０１２８；
３．湖南省农业科学院农产品加工研究所， 长沙 ４１０１２８）
摘要： 为探讨短短芽胞杆菌菌株 ０１１ 对植物病原真菌的防控效果，采用平皿打孔法测定菌株 ０１１
粗提液对 １４ 种植物病原真菌的抑制作用，并以番茄早疫病为研究对象，研究了其抑菌机理。 结果
显示，菌株 ０１１ 粗提液对 １４ 种病原真菌均有抑菌活性，其中对番茄早疫病菌的抑菌活性最强，抑菌
率达 ４５􀆰 ９％ ；菌株 ０１１ 粗提液能导致番茄早疫病菌菌丝生长异常，抑制孢子萌发；对番茄早疫病菌
菌丝生长的 ＥＣ５０为 ７１􀆰 ４ ｍｇ ／ ｍＬ，对孢子萌发的 ＥＣ５０和 ＭＩＣ 分别为 ０􀆰 １２ ｍｇ ／ ｍＬ 和 ０􀆰 ８ ｍｇ ／ ｍＬ；该
粗提液能引起番茄早疫病菌菌丝的脂质过氧化程度和细胞内过氧化氢含量上升，菌丝细胞膜的蛋
白质合成量下降，当粗提液浓度高于 ５０ ｍｇ ／ ｍＬ 时，菌丝细胞膜的麦角甾醇合成量下降；该粗提液
还能降低番茄早疫病菌胞外果胶酶和纤维素酶的活性。 研究表明，菌株 ０１１ 粗提液可作为生防制
剂应用于植物病原真菌的防治。
关键词： 内生菌； 发酵液； 抑菌活性； 抑菌机理； 菌丝
Ｔｈｅ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ｏｎ
ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｕｓ
Ｚｈｏｕ Ｊｉｎｗｅｉ１ 　 Ｚｈｏｕ Ｈｏｎｇｌｉ１ 　 Ｙｉ Ｙｏｕｊｉｎ１∗ 　 Ｂｏ Ｌｉａｎｙａｎｇ２∗ 　 Ｌｉ Ｇａｏｙａｎｇ３
（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８， Ｈｕｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，
Ｃｈｉｎａ； ２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｈｕｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８，
Ｈｕｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ； ３． Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｈｕｎａｎ
Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８， Ｈｕｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ０１１ ｓｔｒａｉｎ， １４ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅｉｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｐｌａｔｅ⁃ｐｅｒｆｏｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ， ａｎｄ ｔｈｅ
ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ ｗａｓ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ
ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ ０１１ ｓｔｒａｉｎ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ １４ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ， ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ， ｗｉｔｈ ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ ４５􀆰 ９％ ． Ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｒｅｓｕｌｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｍｙｃｅｌｉａ ｇｒｏｗｉｎｇ ｉｎ ａｂｎｏｒｍａｌ ｓｈａｐｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｏｒｅｓ ｗａｓ ａｌｓｏ
ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ． Ｔｈｅ ＥＣ５０ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ７１􀆰 ４ ｍｇ ／ ｍＬ． Ｔｈｅ ＥＣ５０
ａｎｄ ＭＩＣ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ ｓｐｏｒｅｓ ｗｅｒｅ ０􀆰 １２ ｍｇ ／ ｍＬ ａｎｄ ０􀆰 ８ ｍｇ ／ ｍＬ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｌｓｏ ｃａｕｓｅｄ ｄａｍａｇｅ ｔｏ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄ
ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ， ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ
ｍｙｃｅｌｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ． Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗａｓ ｏｖｅｒ ５０ ｍｇ ／ ｍＬ， ｉｔ ａｌｓｏ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｅｒｇｏｓｔｅｒｏｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ． Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｅｃｔｉｎａｓｅ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｏｆ ０１１ ｓｔｒａｉｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｂｉｏａｇｅｎｔ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｕｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ； ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ； ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ； ｍｙｃｅｌｉｕｍ
　 　 由病原真菌引起的植物病害是造成农作物品质
和产量降低的主要原因之一。 长期以来，对于植物
病原真菌的防治主要采用化学杀菌剂，化学杀菌剂
具有效价高、药效稳定、杀菌机理明确等优点，但长
期使用易造成环境污染，引起植物病原菌产生耐药
性，且农药残留危害人类健康（王剑峰等，２０１１；赵
洋等，２０１４）。 因此，为了适应绿色农业的发展，开
发出新型无公害农药势在必行。
当前，生物防治由于其防效好、对病原菌专一性
强、药剂残留少等优点，已成为植物病害防治的研究
热点之一（杨胜远等，２００４；李静等，２００７）。 利用微
生物进行生物防治已成为一种新的研究领域，并取
得了一定成效（ Ｊａｎｉｓｉｅｗｉｃｚ ＆ Ｋｏｒｓｔｅｎ，２００２；姚良辉
等，２０１０）。 我国植物资源丰富，且植物组织中存在
着大量的内生菌资源。 内生菌寄生在植物组织中，
由于受到植物组织的保护，能够得到足够的营养物
质，因此其生态环境稳定，比附生菌更易于发挥生防
作用（王芳等，２００９）。 研究表明，植物内生菌能产
生大量具有抗菌活性的抗生素（Ｙｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１０）。
例如苦楝内生菌 Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ 产生的化合
物 ｐｙｃｎｏｐｈｏｒｉｎ对枯草芽胞杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 的抑
菌作用显著（Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１４）；芒果内生菌 Ｐｅｓｔａｌｏ⁃
ｔｉｏｐｓｉｓ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ产生的酚类化合物对枯草芽胞杆
菌、绿脓假单胞菌 Ｐｅｓｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｙｏｃｙａｎｅｕｍ 等多种
病原菌具有抑菌活性（ Ｓｕｂｂａｎ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）。 这些
抗生素的抗真菌机制主要包括 ３ 个方面：一是影响
真菌细胞壁的合成，造成真菌菌丝顶端膨大、不能正
常生长（王宇婷等，２０１３）；二是损伤细胞膜，造成细
胞内物质泄露；三是抑制真菌细胞内蛋白质和核酸
的合成（Ｆｒａｎｋｌｉｎ ＆ Ｓｎｏｗ，２００５）。
本研究从烟草中分离到 １ 株内生拮抗细菌
０１１，经 １６Ｓ ｒＤＮＡ 鉴定为短短芽胞杆菌 Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为 ＤＱ４４４２８５）。 为了明确该
菌株在植物病害防治中的实用价值，为后续生防制
剂的研发提供理论依据，本试验拟采用菌丝生长速
率法测定菌株 ０１１ 粗提液的抑菌谱，并选取对菌株
０１１ 粗提液最敏感的番茄早疫病菌作为靶标，测定
菌株 ０１１ 粗提液对靶标真菌细胞膜的结构组成、通
透性、胞外水解酶活性以及降解几丁质作用的影响，
以期明确菌株 ０１１ 粗提液对植物病原真菌的作用
机理。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试菌株及病原菌：烟草内生短短芽胞杆菌
０１１ 由本实验室分离、鉴定与保藏。 豆角炭疽病菌
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｎｕｍ、苦瓜蔓枯病菌 Ｄｉｄｙ⁃
ｍｅｌｌａ ｂｒｙｏｎｉａｅ、马铃薯白绢病菌 Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ、胡
萝卜白绢病菌 Ｓ． ｒｏｌｆｓｉｉ、柑橘炭疽病菌 Ｃ． ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉ⁃
ｏｉｄｅｓ、辣椒炭疽病菌 Ｃ． ｃａｐｓｉｃｉ、番茄早疫病菌 Ａｌｔｅｒ⁃
ｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ、黄瓜炭疽病菌 Ｃ． ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ、油菜菌核
病菌 Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ、辣椒白绢病菌 Ｓ． ｒｏｌｆｓｉｉ、
辣椒疫病菌 Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ、马铃薯晚疫病菌
Ｐ． ｉｎｆｅｓｔａｎｓ、白菜黑斑病菌 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ和柑橘
青霉 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｉｔａｌｉｃｕｍ 均由湖南农业大学食品科
技学院微生物实验室提供。
培养基：牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基（ｂｅｅｆ ｐｒｐ⁃
ｔｏｎｅ ｙｅａｓｔ，ＢＰＹ）：牛肉膏 ５０ ｇ、鱼粉蛋白胨 １０ ｇ、
ＮａＣｌ ５０ ｇ、酵母膏 ５０ ｇ、葡萄糖 ５０ ｇ、蒸馏水 １０ Ｌ，
１２１℃高压灭菌待用；马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ｐｏ⁃
ｔａｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｇａｒ，ＰＤＡ）：土豆 ２００ ｇ、葡萄糖 ２０ ｇ、琼
脂 ２０ ｇ，定容至 １ Ｌ，１２１℃高压灭菌待用；几丁质培
养基：胶状几丁质 ７􀆰 ５ ｇ、酵母膏 １􀆰 ５ ｇ、硫酸铵 ０􀆰 ５
ｇ、无水硫酸镁 ０􀆰 １５ ｇ、磷酸二氢钾 ０􀆰 ６８ ｇ、琼脂 ７􀆰 ５
ｇ、蒸馏水 ５００ ｍＬ，１２１℃高压灭菌待用。
试剂及仪器：８０％恶霉灵芸苔素（ｈｙｍｅｘａｚｏｌ）水
剂，郑州雨康生物科技公司；其它试剂均为国产分析
纯。 Ｒ⁃１００１ 旋转蒸发仪，郑州长城科工贸有限公
司；ＵＶ９１００ 紫外分光光度计，北京莱伯泰科仪器有
限公司；ＦＤ⁃１Ｂ真空冷冻干燥机，北京博医康实验仪
器有限公司；ＸＳＰ⁃６Ｃ 光学显微镜，上海兆仪光电科
技有限公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 菌株 ０１１ 粗提液的制备
将菌株 ０１１ 活化后接入 ＢＰＹ 液体培养基，
２８℃、１８０ ｒ ／ ｍｉｎ培养 ４８ ｈ，于 １０ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０
ｍｉｎ后去除菌体得原发酵液，原发酵液经 ０􀆰 ２２ μｍ
无菌过滤器过滤，得无菌发酵滤液待用。 原发酵液
用 ４ 倍体积的乙腈萃取，取上清液，５０℃旋转蒸发去
除乙腈，得粗提液待用。
１０６４ 期 周金伟等： 短短芽胞杆菌对植物病原真菌的抑菌活性和抑菌机理
１􀆰 ２􀆰 ２ 菌株 ０１１ 粗提液抑菌谱的测定
将各病原真菌分别接种于 ＰＤＡ 培养基中央，
２８℃培养 ２４ ｈ，在离菌落边缘 ２５ ｍｍ处用口径 ６ ｍｍ
打孔器打孔，每孔加 １００ μＬ 菌株 ０１１ 粗提液，以无
菌水为阴性对照，８０％恶霉灵（使用时稀释 １ ０００
倍）为阳性对照，待阴性对照长到孔径边缘时，测量
抑菌圈半径，计算抑菌率，每处理 ３ 次重复（易有金
等，２００７）。 抑菌率 ＝ （１ － Ｄｃ ／ Ｄｄ） × １００％ ，式中，Ｄｃ
为处理菌落半径，Ｄｄ为阴性对照菌落半径。
１􀆰 ２􀆰 ３ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌的抑菌活性
将菌株 ０１１ 粗提液冷冻干燥，配成 １００、５０、２５、
１２􀆰 ５、６􀆰 ２５ ｍｇ ／ ｍＬ 系列浓度的粗提液，采用 １􀆰 ２􀆰 ２
中的方法测定不同浓度的粗提液对番茄早疫病菌的
抑菌效果，以无菌水为阴性对照，８０％恶霉灵为阳性
对照，计算抑菌率。 将抑菌率转化成几率值，浓度转
化成对数值，通过回归分析求得其抑菌中浓
度 ＥＣ５０。
挑取抑菌活性测定中抑菌圈边缘的番茄早疫病
菌菌丝，在光学显微镜下观察菌丝形态（王美琴等，
２０１０）。 将番茄早疫病菌接种于 ＰＤＡ 培养基上，
２８℃培养 ７ ～ １２ ｄ，用带有无菌水的玻璃珠洗下孢
子，加无菌水稀释到 ４０ 倍物镜下每个视野中约 ４０
个孢子。 取孢子悬浮液 ２０ μＬ与等体积不同浓度的
粗提液混匀，取 １０ μＬ混合液于凹玻片上，２８℃保湿
培养 ２４ ｈ，显微镜观察孢子形态，计算孢子萌发抑制
率，求得最低抑菌浓度 ＭＩＣ和抑菌中浓度 ＥＣ５０。 以
无菌水为阴性对照，８０％恶霉灵为阳性对照，每处理
３ 次重复。 孢子萌发抑制率 ＝ （镜检孢子总数 －孢
子萌发数） ／镜检孢子总数 × １００％ 。
１􀆰 ２􀆰 ４ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌的抑菌机理
对细胞膜脂质过氧化的影响：采用硫代巴比妥
酸法（张志良和瞿伟菁，２００３）测定菌丝中的丙二醛
（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量。 将番茄早疫病菌的
１０６ 个 ／ ｍＬ孢子悬浮液（采用血球计数板计数）接种
于 ５０ ｍＬ ＰＤＡ培养液中，２８℃、１８０ ｒ ／ ｍｉｎ 培养 ５ ｄ，
过滤收取菌丝，用 ０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ ７􀆰 ２）
冲洗数次，加入 １００、５０、２５、１２􀆰 ５、６􀆰 ２５ ｍｇ ／ ｍＬ 粗提
液各 ４ ｍＬ处理 ０、６、１２、２４ ｈ 后，过滤，用磷酸缓冲
液洗涤各处理菌丝，６ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎ，收集
菌丝体。 以无菌水处理作为对照组，每种浓度不同
处理时各称取 ２ ｇ加液氮研磨至粉末，计算 ＭＤＡ含
量。 ＭＤＡ ＝ ［６􀆰 ４５ （Ｄ５３２ － Ｄ６００ ） － ０􀆰 ５６Ｄ４５０ ］ × Ｖｔ ／
（Ｖｓ ×Ｗ），式中，Ｖｔ 为提取液总体积，Ｖｓ 为测定用提
取液体积，Ｗ为样品鲜重。
对菌丝内 Ｈ２Ｏ２ 的影响：采用 Ｓａｇｉｓａｋａ（１９７６）方
法测定 Ｈ２Ｏ２ 含量。 取上述各处理菌丝 ０􀆰 ５ ｇ，加入
４ ｍＬ 磷酸缓冲液冰浴研磨后，加入 ５％ 三氯乙酸
２􀆰 ８ ｍＬ，于 １０ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ下离心 １０ ｍｉｎ。 取 １􀆰 ６ ｍＬ
上清液，加入 ５０％三氯乙酸 ０􀆰 ４ ｍＬ、１０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 硫
酸亚铁铵 ０􀆰 ４ ｍＬ和 ２􀆰 ５ ｍｏｌ ／ Ｌ硫氰酸钾 ０􀆰 ２ ｍＬ混
合，于 ４８０ ｎｍ 下测定上清液的吸光值 ＯＤ４８０，由
Ｈ２Ｏ２测定的标准曲线计算 Ｈ２Ｏ２ 含量。
对菌丝麦角甾醇的影响：取摇床培养 ５ ｄ 的菌
丝体，加入 １００、５０、２５、１２􀆰 ５、６􀆰 ２５ ｍｇ ／ ｍＬ 粗提液 ５
ｍＬ处理 ３ ｄ，用蒸馏水反复冲洗菌丝体，抽干，称取
不同处理菌丝体各 ０􀆰 ５ ｇ，参考吴学宏等（２００５）、韩
平等（２００６）的方法萃取麦角甾醇，取萃取好的麦角
甾醇在 ２８２ ｎｍ下用 １ ｃｍ石英比色杯测定各处理的
ＯＤ值（王芳等， ２００９）。
对菌丝蛋白含量的影响：取培养 ５ ｄ 的菌丝体，
加入 １００、５０、２５、１２􀆰 ５、６􀆰 ２５ ｍｇ ／ ｍＬ 粗提液 ５ ｍＬ 处
理 ３ ｄ，用蒸馏水反复冲洗菌丝体，抽干，称取不同处
理菌丝体各 ０􀆰 ２５ ｇ，预冷后用 ０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ Ｔｒｉｓ⁃ＨＣｌ
缓冲液提取菌丝蛋白，采用考马斯亮蓝法测定蛋白
含量（王芳等，２００９）。
对胞外水解酶活性的影响：采用刘西莉（２００４）
方法提取酶液，ＤＮＳ 法测定水解酶的活性。 以单位
体积（ｍＬ）酶液每分钟产生 １ μｇ葡萄糖为 １ 个酶活
力单位。
发酵液降解几丁质的作用测定：参照陈三凤等
（１９９２）方法测定胶状几丁质。 在几丁质培养基中
央打孔，在孔中央注入 １００ μＬ 无菌发酵滤液，２８℃
培养 ３ ｄ，观察孔周围是否有透明圈产生。
１􀆰 ３ 数据分析
采用 Ｅｘｃｅｌ ２００３ 和 ＳＰＳＳ １８􀆰 ０ 软件对试验数据
进行统计分析，ＬＳＤ法进行差异显著性检验。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 菌株 ０１１ 粗提液抑菌谱
菌株 ０１１粗提液对多种植物病原真菌具有抑制
作用，其中对番茄早疫病菌的抑制作用最强，抑菌率
为 ４５􀆰 ９％，对柑橘炭疽病菌的抑制作用最弱，抑菌率
为 ９􀆰 １％。 菌株 ０１１ 粗提液对豆角炭疽病菌、苦瓜蔓
枯病菌、马铃薯白绢病菌、胡萝卜白绢病菌、柑橘炭疽
病菌的抑菌活性较弱，且抑菌活性小于农药恶霉灵；
而菌株 ０１１粗提液对其余 ９ 种植物病原真菌的抑菌
活性较强，且活性高于恶霉灵。 表明菌株 ０１１ 粗提液
对植物病原真菌具有选择性抑制作用（表 １）。
２０６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
表 １ 菌株 ０１１ 粗提液对植物病原真菌的抑制作用
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ０１１ ｏｎ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ％
供试菌
Ｐａｔｈｏｇｅｎ
抑菌率 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ
粗提液
Ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ
恶霉灵
Ｅｍｅｉｌｉｎｇ
供试菌
Ｐａｔｈｏｇｅｎ
抑菌率 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ
粗提液
Ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ
恶霉灵
Ｅｍｅｉｌｉｎｇ
豆角炭疽病菌
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｎｕｍ
１０􀆰 ９ ± １􀆰 ０ ａ ３９􀆰 ５ ± ０􀆰 ８ ａ 番茄早疫病菌
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ
４５􀆰 ９ ± ０􀆰 ６ ｆ ２７􀆰 ７ ± ０􀆰 ３ ｃ
苦瓜蔓枯病菌
Ｄｉｄｙｍｅｌｌａ ｂｒｙｏｎｉａｅ
１０􀆰 ０ ± １􀆰 １ ａ ２０􀆰 ９ ± ０􀆰 ７ ｂ 黄瓜炭疽病菌
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ
３６􀆰 ４ ± ０􀆰 ５ ｄ ３３􀆰 ６ ± ０􀆰 ３ ｄ
马铃薯白绢病菌
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ
１５􀆰 ０ ± １􀆰 ２ ｂ ２３􀆰 ２ ± １􀆰 ０ ｂ 油菜菌核病菌
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
３６􀆰 ８ ± ０􀆰 ８ ｄ ２５􀆰 ０ ± ０􀆰 ９ ｃ
胡萝卜白绢病菌
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ
１４􀆰 ５ ± ０􀆰 ５ ｂ ２７􀆰 ３ ± ０􀆰 ４ ｃ 辣椒白绢病菌
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ
３９􀆰 ５ ± １􀆰 ０ ｄ ３０􀆰 ０ ± ０􀆰 ９ ｄ
柑橘炭疽病菌
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ
９􀆰 １ ± ０􀆰 ８ ｃ ３１􀆰 ４ ± ０􀆰 ５ ｄ 辣椒疫霉菌
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ
３３􀆰 ６ ± ０􀆰 ９ ｅ １６􀆰 ４ ± ０􀆰 ４ ｆ
辣椒炭疽病菌
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｐｓｉｃｉ
３７􀆰 ３ ± ０􀆰 ９ ｄ １９􀆰 ５ ± １􀆰 ０ ｅ 马铃薯晚疫病菌
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ
３４􀆰 １ ± ０􀆰 ５ ｅ ２９􀆰 ５ ± １􀆰 ６ ｃ
白菜黑斑病菌
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ
３２􀆰 ３ ± ０􀆰 ６ ｅ ２８􀆰 ６ ± ０􀆰 ９ ｃ 柑橘青霉菌
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｉｔａｌｉｃｕｍ
２９􀆰 １ ± ０􀆰 ６ ｇ １１􀆰 ８ ± ０􀆰 ７ ｇ
　 　 表中数据为平均数 ±标准差。 同列中不同小写字母表示经 ＬＳＤ 法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ＬＳＤ ｔｅｓｔ．
２􀆰 ２ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌的抑菌活性
２􀆰 ２􀆰 １ 对番茄早疫病菌的抑制作用
随着浓度增加菌株 ０１１ 粗提液和恶霉灵的抑菌
活性均显著增强（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。 通过回归分析得出菌
株 ０１１ 粗提液和恶霉灵的毒力学方程分别为 ｙ ＝
１􀆰 ０６３５ｘ ＋ ３􀆰 ０２８７，Ｒ２ ＝ ０􀆰 ９９８４；ｙ ＝ １􀆰 １１０２ｘ ＋ ２􀆰 ８４，
Ｒ２ ＝ ０􀆰 ９９８７。 菌株 ０１１ 粗提液和恶霉灵对番茄早疫
病菌的 ＥＣ５０分别为 ７１􀆰 ４ ｍｇ ／ ｍＬ 和 ８８􀆰 ２ ｍｇ ／ ｍＬ。
因此，菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌具有较好的
抑菌活性（图 １）。
２􀆰 ２􀆰 ２ 对番茄早疫病菌菌丝的影响
培养 ４８ ～ ７２ ｈ后，菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫
病菌菌丝的生长和形态均有影响。 正常生长的菌丝
表面光滑、透明，菌丝体粗细均匀，原生质分布均匀
（图 ２⁃ａ）。 菌株 ０１１ 菌粗提液处理后，菌丝生长异
常，形态畸形（图 ２⁃ｂ ～ ｄ），节间变短变粗，粗细不
均，细胞原生质收缩，出现空泡（图 ２⁃ｅ）。 随着粗提
液浓度的增加，菌丝断裂、解体（图 ２⁃ｆ）。
２􀆰 ２􀆰 ３ 对番茄早疫病菌孢子萌发的影响
培养 １２ ｈ 后，无菌水对照组孢子全部正常萌
发，芽管细长、均匀，菌丝光滑、透明，粗细均匀。 经
浓度为 ０􀆰 ８ ～ １２􀆰 ５ ｍｇ ／ ｍＬ 菌株 ０１１ 粗提液处理后，
孢子的芽管畸形，顶端或中间膨大，形成串珠状囊
泡，菌丝粗细不均，表面有囊状突起，原生质不透明。
图 １ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌的抑制作用
Ｆｉｇ． １ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ
图中数据为平均数 ±标准差。 不同字母表示经 ＬＳＤ
法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ
Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ＬＳＤ ｔｅｓｔ．
　
　 　 　 　
浓度高于 １２􀆰 ５ ｍｇ ／ ｍＬ 菌株 ０１１ 粗提液处理后，孢子
萎缩变形，孢子萌发完全受到抑制。 恶霉灵的抑制效
果与菌株 ０１１ 粗提液相似。 菌株 ０１１ 粗提液和恶霉
灵对番茄早疫病菌孢子萌发的 ＭＩＣ分别为 ０􀆰 ８、６􀆰 ２５
ｍｇ ／ ｍＬ。 菌株 ０１１ 粗提液的毒力回归方程为 ｙ ＝
２􀆰 ６８１９ｘ ＋７􀆰 ５０８５，Ｒ２ ＝ ０􀆰 ９９７，ＥＣ５０为 ０􀆰 １２ ｍｇ ／ ｍＬ，低
于恶霉灵的 ２􀆰 ０２ ｍｇ ／ ｍＬ。 表明菌株 ０１１ 粗提液对番
茄早疫病菌孢子萌发的抑制作用显著（表 ２）。
３０６４ 期 周金伟等： 短短芽胞杆菌对植物病原真菌的抑菌活性和抑菌机理
图 ２ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌菌丝的影响（４０ × ）
Ｆｉｇ． ２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ ｍｙｃｅｌｉａ （４０ × ）
ａ： ＣＫ； ｂ ～ ｆ： 粗提液的浓度分别为 ６􀆰 ２５、１２􀆰 ５、２５、５０ 和 １００ ｍｇ ／ ｍＬ。 ａ： ＣＫ； ｂ － ｆ： ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｃｏｎ⁃
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６􀆰 ２５， １２􀆰 ５， ２５， ５０ ａｎｄ １００ ｍｇ ／ ｍＬ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
　
图 ３ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌菌丝膜脂质过氧化（Ａ）及菌丝膜 Ｈ２Ｏ２（Ｂ）的影响
Ｆｉｇ． ３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ （Ａ） ａｎｄ Ｈ２Ｏ２（Ｂ） ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｉｎ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ
图中数据为平均数 ±标准差。 Ｄａｔａ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
表 ２ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌孢子萌发的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏ⁃
ｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
浓度 （ｍｇ ／ ｍＬ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
抑菌率 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ （％ ）
粗提液 Ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ 恶霉灵 Ｅｍｅｉｌｉｎｇ
１００􀆰 ０ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ
５０􀆰 ０ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ
２５􀆰 ０ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ
１２􀆰 ５ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ
６􀆰 ３ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ
３􀆰 １ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ ７１􀆰 ４ ± ４􀆰 ２ ｂ
１􀆰 ６ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ ３８􀆰 ５ ± １􀆰 ５ ｃ
０􀆰 ８ １００􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ａ １１􀆰 １ ± ２􀆰 ６ ｄ
０􀆰 ４ ９２􀆰 ０ ± ５􀆰 ６ ｂ ０􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ｅ
０􀆰 ２ ７６􀆰 ３ ± ６􀆰 １ ｃ ０􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ｅ
０􀆰 １ ４１􀆰 ７ ± ３􀆰 ８ ｄ ０􀆰 ０ ± ０􀆰 ０ ｅ
　 　 表中数据为平均数 ± 标准差。 同列不同字母表示经
ＬＳＤ法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ．
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒ⁃
ｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ＬＳＤ ｔｅｓｔ．
２􀆰 ３ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌的作用机理
２􀆰 ３􀆰 １ 对细胞膜脂质过氧化的影响
对照组在试验期间其细胞内 ＭＤＡ 含量变化不
显著。 经菌株 ０１１ 粗提液处理后，番茄早疫病菌细
胞内 ＭＤＡ含量均显著高于对照，且随粗提液浓度
增加 ＭＤＡ 含量显著上升。 在 ０ ～ １２ ｈ 处理期，
６􀆰 ２５、１２􀆰 ５、２５ ｍｇ ／ ｍＬ粗提液处理组其细胞内 ＭＤＡ
含量显著上升，１２ ｈ 后上升幅度减小。 而 ５０、１００
ｍｇ ／ ｍＬ粗提液处理组其细胞内 ＭＤＡ 含量上升时间
延迟，到 １８ ｈ后上升幅度开始变缓。 １００ ｍｇ ／ ｍＬ 粗
提液处理 ２４ ｈ 后，病原菌细胞膜内 ＭＤＡ 含量达到
０􀆰 ８４ μｍｏｌ ／ Ｌ，比对照组高出 ３７５􀆰 ５％ 。 表明菌株
０１１ 粗提液的浓度越高，病原菌细胞膜受到的损害
程度越大（图 ３⁃Ａ）。
４０６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
２􀆰 ３􀆰 ２ 对番茄早疫病菌菌丝膜 Ｈ２Ｏ２ 的影响
随着处理时间增长菌丝细胞膜内 Ｈ２Ｏ２ 含量均
呈上升趋势，对照组在处理期间 Ｈ２Ｏ２ 含量变化平
缓，涨幅较小，变化不显著。 而处理组随着时间延长
Ｈ２Ｏ２ 含量显著上升，且浓度越高，膜内 Ｈ２Ｏ２ 含量
上升越快。 不同处理之间其膜内 Ｈ２Ｏ２ 含量差异显
著。 处理 ２４ ｈ 后，６􀆰 ２５、１２􀆰 ５、２５、５０ 和 １００ ｍｇ ／ ｍＬ
粗提液组的 ＯＤ 值分别为 ０􀆰 ４１、０􀆰 ５２、０􀆰 ６４、０􀆰 ７９ 和
０􀆰 ９１， 分 别 比 对 照 组 高 出 ８１􀆰 ９％ 、 １３０􀆰 ４％ 、
１８５􀆰 ７％ 、２５２􀆰 ６％和 ３０８􀆰 ５％ （图 ３⁃Ｂ）。
２􀆰 ３􀆰 ３ 对番茄早疫病菌菌丝麦角甾醇的影响
使用浓度为 ６􀆰 ２５、１２􀆰 ５、２５ ｍｇ ／ ｍＬ 的菌株 ０１１
粗提液处理菌丝，菌丝细胞膜上的麦角甾醇含量与
对照组差异不显著。 当粗提液浓度为 ５０、１００ ｍｇ ／
ｍＬ时，其 ＯＤ值分别为 ０􀆰 ４３ 和 ０􀆰 ３３，与对照组相比
较存在显著差异（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５），分别下降了 ２５􀆰 ４％和
４２􀆰 ８％ 。 表明低浓度的菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫
病菌菌丝细胞膜的麦角甾醇的合成影响较小，而高
浓度的菌株 ０１１ 粗提液能显著抑制菌丝细胞膜麦角
甾醇的合成（图 ４⁃Ａ）。
图 ４ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌菌丝麦角甾醇（Ａ）、蛋白质（Ｂ）含量、胞外果胶酶（Ｃ）和纤维素酶（Ｄ）活性的影响
Ｆｉｇ． ４ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｅｒｇｏｓｔｅｒｏｌ （Ａ）， ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔｓ （Ｂ），
ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｅｃｔｉｎａｓｅ （Ｃ） ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ （Ｄ） ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
图中数据为平均数 ±标准差。 不同小写字母表示经 ＬＳＤ法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒ⁃
ｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ＬＳＤ ｔｅｓｔ．
　
２􀆰 ３􀆰 ４ 对番茄早疫病菌菌丝蛋白质含量的影响
不同浓度的菌株 ０１１ 粗提液处理后，番茄早疫
病菌菌丝体的蛋白质含量与对照组相比显著下降
（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５），分别比对照组降低 １０􀆰 ６％ 、２６􀆰 ４％ 、
３４􀆰 ３％ 、３９􀆰 ９％和 ４８􀆰 ８％ 。 粗提液浓度越高，其菌
丝体内蛋白质含量越低，且不同浓度粗提液之间存
在显著差异（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。 表明菌株 ０１１ 粗提液可抑
制番茄早疫病菌菌丝蛋白的合成，从而抑制菌丝的
生长（图 ４⁃Ｂ）。
２􀆰 ３􀆰 ５ 对番茄早疫病菌胞外果胶酶活性的影响
不同浓度的菌株 ０１１ 粗提液处理后，番茄早疫
病菌在离体条件下合成的胞外果胶酶活性受到抑
制，其果胶酶活性与对照组相比分别显著下降了
７􀆰 ２％ 、 １４􀆰 ０％ 、 １９􀆰 ８％ 、 ２４􀆰 ５％ 和 ３５􀆰 ９％ （ Ｐ ＜
０􀆰 ０５），且不同处理之间存在显著差异（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。
表明菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌胞外果胶酶活
性具有显著抑制作用（图 ４⁃Ｃ）。
２􀆰 ３􀆰 ６ 对番茄早疫病菌胞外纤维素酶活性的影响
不同浓度的菌株 ０１１ 粗提液处理番茄早疫病菌
菌丝后，其合成的胞外纤维素酶活性均显著下降
（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５），粗提液浓度越高，纤维素酶的活性越
低。 与对照组相比分别显著下降了 ３􀆰 ０％ 、５􀆰 ０％ 、
６􀆰 ９％ 、８􀆰 ４％和 １１􀆰 ９％ ，且不同浓度处理组之间存
在显著差异（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。 说明菌株 ０１１ 粗提液能够
抑制番茄早疫病菌的胞外纤维素酶活性（图 ４⁃Ｄ）。
２􀆰 ３􀆰 ７ 发酵滤液对几丁质的降解作用
菌株 ０１１ 发酵滤液处理 ３ ｄ 后，在培养基中央
孔周围未出现透明的水解圈。 表明发酵滤液中不含
５０６４ 期 周金伟等： 短短芽胞杆菌对植物病原真菌的抑菌活性和抑菌机理
有几丁质酶，因此推测菌株 ０１１ 代谢产物不能降解
番茄早疫病菌细胞壁中的几丁质。
３ 讨论
目前，筛选微生物资源主要集中在土壤、植物根
际和海洋，但植物组织内部也存在着对人类有益的
微生物，这些微生物与植物组织协同进化，是植物微
生态结构的重要组成部分（薛鹏琦等，２０１１；冯志珍
等，２０１２）。 短短芽胞杆菌是存在于植物微生态的
重要微生物，具有很强的抗逆能力，芽胞杆菌能产生
脂肽类、肽类、多烯类、磷脂类等多种化合物，对多种
植物病原真菌具有抑菌活性，如抑制棉花立枯病菌、
枯萎病菌和黄萎病菌菌丝的生长（陈莉等， ２００７），
抑制番茄枯萎病菌孢子的萌发（郝晓娟等，２００７）。
本研究显示，短短芽胞杆菌 ０１１ 对 １４ 种植物病原真
菌均有不同程度的抑菌活性，其中对番茄早疫病菌
的抑制作用显著，表明其在番茄早疫病的生物防治
中具有潜在的应用价值。
短短芽胞杆菌 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌菌丝
和孢子萌发均有强烈抑制作用，造成菌丝生长畸形，
产孢能力下降，芽管长度和孢子萌发率下降。 蒋细
良等（１９９７）和刘爱媛（２００１）报道的杀稻瘟菌素⁃Ｓ
对孢子和菌丝的抑制作用结果与本研究结果一致，
杀稻瘟菌素⁃Ｓ 主要是通过抑制孢子和菌丝的呼吸
作用而实现的，因此推测菌株 ０１１ 粗提液中可能含
有能抑制孢子和菌丝呼吸作用的活性化合物。 此
外，菌株 ０１１ 粗提液处理导致细胞膜脂质过氧化程
度增强，菌丝细胞膜内的 Ｈ２Ｏ２ 含量上升，菌丝细胞
膜的组成成分麦角甾醇和蛋白质的合成量减少。 根
据蒋细良和谢德龄（１９９４）报道，这主要是由于菌株
０１１ 粗提液中的活性物质损伤病原菌的细胞质膜，
造成细胞内物质泄漏引起的。
病原真菌在侵染植物组织时，其分泌的胞外水
解酶起到重要作用。 果胶酶和纤维素酶是降解植物
细胞壁的 ２ 个关键酶，因此，抑制病原菌产生胞外水
解酶也是防治植物病害的一条重要途径（林孔勋，
１９９２）。 本研究表明，菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病
菌合成的果胶酶和纤维素酶均有抑制作用。 因此，
菌株 ０１１ 粗提液对于防止病原真菌侵染宿主植物发
挥着重要作用。 对于菌株 ０１１ 粗提液抑制番茄早疫
病菌的作用靶点还有待于进一步深入研究。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
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（责任编辑：高　 峰）
７０６４ 期 周金伟等： 短短芽胞杆菌对植物病原真菌的抑菌活性和抑菌机理