全 文 ：BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH
第 16 卷　第 1 期 1996 年　1 月
Vol.16　No.1 Jan., 　1996
雨堡组织培养的研究①
朱　虹　云希和　朱　泳　崔占武
THE TISSUS CULTURE OF REGENSBERG
Zhu Hong　Yun Xi-he　Zhu Yong　Cui Zhan-wu
　　〔摘　要〕　取雨堡当年生的枝条上饱满的未萌发的侧芽为外植体 ,培养于
MS培养基上 ,其中附加各种不同种类及浓度的激素。在附加 6—BA1.0mg/ l的
MS培养基上 ,诱导芽的效果最好;在附加 6—BA1.0+NAA0.05+ZT0.1mg/ l的
MS培养基上 ,芽的增殖效果最佳;在附加 KT0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/ l或 6—
BA0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/ l的 MS 培养基上 ,最有利于壮苗;在 1/2MS 培养
基中 ,附加 IBA0.5+NAA0.3ml/ l或 IAA0.5+NAA0.3mg/ l的培养基中 ,生根效
果最佳 。试管苗高 2—3cm ,且具有 4—8条短根时 ,开瓶煅炼 3—5天 ,移入培养土
中生长的效果好 ,种植在保温保湿环境中 ,试管苗成活率高 。
关键词　雨堡;细胞分裂素;生长素
雨堡(Rosa chinensis var.f loribunda)属蔷薇科蔷薇属丰花月季品系中的一个品种 ,具
有花色艳丽 ,花型好 ,花期长 ,枝叶繁茂 ,抗寒 ,抗旱 ,适应性强 ,易管理等各种优点 。最适宜
于街道和花坛栽培 ,美化城市环境 。亦可做盆栽 ,点缀家庭居室环境 。由于其常规繁殖系数
低 ,目前种苗供不应求。通过组培可以加速提高繁殖。目前对此进行组培研究单位很少 ,并
未见有公开详细报道〔1〕 。本实验通过对芽的诱导 ,分化培养及生根培养基的筛选 ,选出其
最佳培养基 ,对利用组培手段 ,提高繁殖系数做了探讨 。
一 、材料和方法
1 、材料:
选择田间或盆栽的优良植株 ,取当年生健壮的中部枝条上饱满未萌发的侧芽作外植体。
2 、操作方法:
8—10月份把采回的枝条剥去叶及皮刺 ,利用利刀切成 1—2cm 长小段 ,每段至少有一
个侧芽 ,然后在流水下冲洗 ,至少 30分钟。在超净工作台上 ,用 70%酒精灭 菌 15秒 ,用无
菌水冲洗 后 ,再用 0.1%升汞溶液浸泡 15—20分钟 ,用无菌水冲洗至少 5 遍。按无菌操作
① 本文作者单位:黑龙江 ,哈尔滨 ,东北林业大学(Northeast Forest ry University , Harbin 150040 Heilongjiang)　1995年 11月收到本文。
要求 ,将茎段接种至培养基上 ,置于 22℃—25℃恒温 ,光照强度 1500lux 的培养室 ,光照时间
每天 12小时。当一周左右 ,芽开始萌发 ,待芽伸长至 1.0cm 左右时 ,把芽从茎段上切下来 ,
接种于分化培养基中 ,当茎尖分化形成新芽时 ,则分别继代于新鲜分化培养基上 ,共断代三
次 ,把较大的分化芽转按入壮苗培养基 。当小苗茎伸长 ,茎叶健壮时 ,转入生根培养 基 ,待
苗基部长出数条洁白短根时 ,开瓶煅炼 2—3天 ,再移入灭菌后的混合土中栽培 ,湿度要求保
持 90%以上 ,3—4月 份 ,移栽于温室花盆中 。
3 、培养基:整个培养过程 ,主要采用 MS 培养基 ,其中附加不同种类和浓度的细胞分裂
素(6 —BA ,KT ,ZT)和生长素(IAA ,NAA , IBA),组成各种培养基 , PH 值调至 5.5—5.8 的
固体培养基 。诱导及分化培养基中加 3%蔗糖 ,生根培养基加 2%蔗糖 ,并采用 1/2M S培养
基。
二 、结　　果
1 、诱导芽萌发
图 1　雨堡芽的诱导
以当年生枝条上未萌发的饱满的带芽茎段为材料 ,茎段长 1.0cm
左右 ,利用 MS基本培养基 ,附加不同浓度的 6—BA ,0.1 , 0.5 , 1.0 ,
1.5 , 2.0mg/ l ,接种 15天后 ,其结果如表—1所示 ,观察发现 , 6—BA
浓度过高过低都不利于芽 的诱导萌发 ,当 6 —BA(2.0mg/l)浓度过高
时 ,芽基部膨大 ,芽不易伸长展叶 ,并推迟芽萌发时间 。说明高浓度的
6—BA 对芽的诱导萌发有一定的抑制作用 。当 6—BA(0.1mg/ l)浓
度太低时 ,也推迟了芽的萌发时间 。从观察结果看6—BA各浓度 ,只
是影响芽萌发的迟早 , 6 —BA0.1—2.0mg/l 对芽 诱导都有效 。当
6—BA1.0时 ,芽被启动萌发时间最短 ,且芽显示健壮式态 ,因此可以
选择 6—BA1.0mg/ l为雨堡诱导芽的最佳浓度(图 1)。
　　表 1 6-BA对芽诱导的影响
6—BA浓度(mg/ l) 外植体数(个) 芽萌发天数(天) 芽长(cm)
0.1 30 7 0.60
0.5 30 8 0.63
1.0 30 5 0.70
1.5 30 9 0.55
2.0 30 11 0.5
2 、芽的分化培养
当芽长 1.0cm左右 ,从原茎段上切下 ,接入分化培养基。根据资料表明〔2〕,在切口处
产生适量愈伤组织 ,有利于分化 。在实验中利用 6—BA0.5 , 1.0mg/l与 NAA0.05 , 0.1 , 0.
2mg/l分别组合 ,结果表明:NAA 超过 0.1mg/l时 ,则在切口处产生大量愈伤组织 ,使茎尖
愈伤组织化 ,影响芽的分化和生长;而当 NAA0.05时 ,切口处产生适量愈伤组织。因此采
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用 NAA0.05mg/ l与不同浓度的 6 —BA相组合 ,调查不同水平 6—BA对芽分化的影响 。
2.1 6—BA的不同浓度对芽分化的影响;
利用 NAA0.05mg/ l和 ZT0.1mg/ l浓度不变与 6 —BA0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0mg/ l四个浓
度 ,在 MS 培养基中进行配比 ,接种 25 天后 ,从表-2 中可以看出 ,当 6—BA 浓度超过 0.
5mg/l时 ,则分化率升高。增殖倍数也随之增大 ,但随着 6—BA 浓度的增加 ,茎却逐渐缩
短 ,当 6—BA浓度达到 2.0mg/ l时 ,表现尤为明显 。切口附近膨大 ,芽增殖倍数最高 ,但叶
极不易伸展 ,并且茎极短 ,这种分化芽在以后的壮苗培养过程中 ,茎 、叶也不易伸长(图-2),
从而影响以后的生根培养和栽植。因此 ,6—BA浓度过高 ,对芽的生长有强烈的抑制作用 ,
上述结果表明 ,即能达到繁殖目的 ,又能得到优良壮苗 ,选择 6 —BA1.0mg/ l时 ,效果最佳
(图 3)。
　　表 2 6—BA对芽分化的影响
激素浓度(mg/ l) 外植体(个) 分化芽数(个) 分化率% 芽增殖数(个) 增殖倍数
6—BA0.5+NAA
0.05+ZT0.1 20 10 50 36 1.8
6—BA1.0+NAA0.05
+ZT0.1 20 16 80 62 3.1
6—BA1.5+NAA0.05
+ZT0.1 20 18 90 66 3.3
6—BA2.0+NAA0.05
+ZT0.1 20 18 90 82 4.1
2.2 KT 不同浓度对芽分化的影响
采用 ZT0.1mg/l和 NAA0.05mg/ l浓度不变 ,与 K T0.5 ,1.0 ,1.5mg/ l相组合。
　　表 3 K T 对芽分化的影响
激素浓度(mg/ l) 外植体(个) 分化芽数(个) 分化率% 增殖芽数(个) 增殖倍数
KT1.5+ZT0.1+NAA
0.05 20 7 35.0 36 1.8
KT1.0+ZT0.1+NAA
0.05 22 8 40.0 33 1.5
KT0.5+ZT0.1+NAA
0.05 23 7 30.4 25 1.1
25天后调查生长情况 ,结果从表-3 中可以看出:芽的分化率及增殖倍数都较低 ,当
KT 超过 1.0mg/ l时 ,茎 、叶迅速生长 ,木质化程度却极低;而当 KT 浓度较低时 ,即 KT0.
5mg/l ,对茎 、叶生长有利 ,但分化率及增殖倍数都极低。因此 , KT 不利于进行芽的分化培
养。
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图 2　芽分化后 ,茎叶不易伸长　　图 3　20天后得到分化芽同时茎叶　　图 4　在壮苗培养基中 20天的试管苗
　　　　　　　　　　　　　　　　　　伸展的试管苗
　　表 4 激素对壮苗的影响
激素浓度(mg/ l) 苗高　　(cm) 苗质量
KT0.3+NAA0.05+ZT0.1 2.0 壮
KT0.1+NAA0.05+ZT0.1 1.6 较壮
6—BA0.3+NAA0.05+ZT0.1 2.3 壮
6—BA0.1+NAA0.05+ZT0.1 1.1 较弱
5　生出健壮短根的试管苗
3.壮苗培养
据有关文献介绍〔3〕 ,如果苗木质化程度过低 ,则不利于生根培养 ,
所以在达到分化增殖倍数的目的后 ,在生根培养之前需要有一个壮苗
过程 ,以使小苗茎伸长 ,茎 、叶健壮 ,以利于生根和移栽成活 。
把在分化培养基上得到的分化苗 ,切割下来 ,接入壮苗培养基 ,以
MS为基本培养基 ,采用 NAA0.05mg/ l和 ZT0.1mg/ l浓度不变与
KT0.1 , 0.3mg/ l ,6—BA0.3 ,0.1mg/l分别组合。20天时观察各种不
同浓度激素对雨堡壮苗生长的影响。从表-4中可以看出:当 KT 浓
度为 0.3mg/l时 ,茎叶生长正常 、叶显深绿色 ,苗挺拔 ,显健壮势(图-
4)。当 KT0.1mg/ l时 ,茎叶生长慢 ,只是叶子生长 ,茎不伸长拔节 ,不
利于壮苗;6—BA0.3mg/ l时 ,茎 、叶生长健壮 , 叶深绿色;6—BA0.
1mg/l时 ,茎 、叶生长慢 ,苗显衰弱趋势 ,老叶有发黄现象 ,这时应及时更换培养基 ,否则易造
成死苗。
4.生根培养
以 1/2M S为基本培养基 ,附加不同浓度的 NAA 和 IAA , IBA ,20天时观察发现:IBA0.
5mg/l和 IAA0.5mg/ l与 NAA0.3mg/ l相配比时 ,对雨堡的试管苗生根有利(表-5);7 天
1431 期　　　　　　　　　　　朱虹等:雨堡组织培养的研究
时 ,基部出现少量淡黄色愈伤组织;10—12天时 ,有白色突起;20天时 ,有 4—8 条白色短根
伸出(图-5)。但高浓度的 IAA1.0mg/ l和 IBA1.0mg/ l与 NAA0.3mg/ l相配比时 ,则根部
产生大量黄色愈伤组织 ,且质地较软 ,8天即有短根出现 ,但根条数少(2—3条),根生长快 ,
细长 ,显淡灰色 ,卷曲 ,在栽培过程中发现 ,具有这种根的试管苗不易成活 ,这就为以后的繁
殖栽培造成困难 ,因此不易采用 。较适宜的生根激素浓度为 IBA0.5+NAA0.3mg/ l和
IAA0.5+NAA0.3mg/ l ,其生根率均达到 80%以上(表-5),苗质量为健壮型 ,对以后的生
长有利。
　　表 5 激素对生根培养的影响
激素浓度
(mg/ l) 接种株数(个) 生根率% 根数(条) 根长(cm) 根生长情况
IAA1.0+NAA0.3 21 90.5 1—3 1.5—1.7 细长
IAA0.5+NAA0.3 22 82.0 4—5 0.3—0.5 短粗
IBA1.0+NAA0.3 23 70.0 2—3 1.5—2.0 细长
IBA0.5+NAA0.3 21 85.7 5—8 0.4—0.6 短粗
5.试管苗的移栽
图 6　移栽于土中的雨堡幼苗
当试管苗根长度达 1.0cm 左右 ,根数达 4—8条 ,苗高 2—
3cm时 ,在培养室中打开瓶盖锻炼 3 —5天 。然后移栽易成活。
移栽的基质需要消毒。生根小苗从试管中取出 ,用清水轻轻冲
洗干净根部培养基 ,栽于混合土中(图-6),浇透水 ,最后用塑
料薄膜覆盖 ,保持小苗周围空气湿度为 90%,温度 18 —240C ,
较强的散光照射 ,一周后浇 1/2MS 培养液 ,以提高营养 ,试管
苗在保温保湿环境下易成活 。
结　　论
　　1.以带芽茎段为材料 ,在附加 6—BA1.0mg/l的 MS培养
基上 ,诱导芽的效果最佳。
　　2.在6 —BA1.0+NAA0.05+ZT0.1mg/ l的 MS 培养基上 ,芽分化率及增殖倍数最佳 ,
且苗质量亦壮。
　　3.在 KT0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/ l或 6—BA0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/ lMS 培养
基上 ,能得到生长健壮的试管苗。
　　4.在 1/2 M S 培养基中附加 IBA0.5+NAA0.3mg/ l或 IAA0.5+NAA0.3mg/ l ,生根
效果最佳 ,并利于下一步的试管苗的移栽。
　　5.当苗高 2—3cm ,每株根数达 4—8条 ,根长达 1.0cm 左右时 ,采用灭菌后的混合土栽
培 ,试管苗易移栽成活。
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ABSTRACT
The tissue culture of Regensberg wi th the tip of shoo ts as the explants w as experimnented
in MS medium w ith addition of dif ferent content ration and kinds of multiplication.The results
show that sprouting of bud was best on M S medium w ith addition of 6-BA 1.0mg/ l;and the
multiplication of adventitious buds w as best on MS medium with the addi tion of 6-BAl.o +
NAA0.05mg/ l;and vigorous and healthy bud was best on M S mdeuim w ith addition of KT0.3
+NAA 0.05+ZT0.1mg/ lo r6-BA0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/ l;and the grow th of roots
w as best on 1/2 MS medium w ith the addition IBA0.5+NAA0.3mg/ lor IAA0.5+NAA0.
3mg/l.It w as bet ter to t ransplant f rom test-tube grew to 2-3 cm high and 4-8roots and af-
ter the plantlets stayed 3 or 5 days wi thout cap of test-tube in the experimental.The plant lets
had bet ter percentage of survival w hen it had the situation w ith deeping degree of temperature
and humidity .
Key words　 Regensberg;Cy tokinin;Auxin
参　考　文　献
〔1〕 宫本馥等 , 1992:丰花月季组织培养和快速繁殖 ,植物生理通讯 , 28(2):129—134.
〔2〕 陈正华 , 1986:《木本植物组织培养及其应用》 ,高等教育出版社 , 304—308.
〔3〕 谭文澄等 , 1991:《观赏植物组织培养技术》 ,中国林业出版社 , 147—165.
〔4〕王国良等 , 1994:花月季试度苗无土高产栽培研究 ,南京林业大学学报 , 18(1):37—41.
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