全 文 ：植物保护学报 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员缘袁 源圆渊员冤院 员员猿 原 员圆猿 阅韵陨院 员园郾 员猿愿园圆 辕 躁援 糟灶噪蚤援 扎憎遭澡曾遭援 圆园员缘郾 园员郾 园员苑
基金项目院 国家自然科学基金渊猿员园苑员远远苑冤
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 凿蚤灶早扎曾愿愿岳 葬造蚤赠怎灶援 糟燥皂
收稿日期院 圆园员源 原 园员 原 员猿
低剂量杀线虫剂对马铃薯腐烂茎线虫三个
热激蛋白 苑园 皂砸晕粤表达的影响
罗摇 杰员 摇 何旭峰员 摇 彭德良圆 摇 黄文坤圆 摇 刘建喜员 摇 丁摇 中员鄢
渊员援湖南农业大学植物保护学院袁 植物病虫害生物学与防控湖南重点实验室袁 长沙 源员园员圆愿曰
圆援中国农业科学院植物保护研究所袁 植物病虫害生物学国家重点实验室袁 北京 员园园员怨猿冤
摘要院 为了解马铃薯腐烂茎线虫 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则对低剂量杀线虫剂胁迫的适应机制袁采用 砸栽鄄
孕悦砸和 砸粤悦耘技术克隆了 猿 个热激蛋白 苑园 基因 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤渊运云苑怨圆猿园苑冤尧阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦渊允匝源圆圆圆苑远冤和
阅凿鄄澡泽责苑园鄄云渊允匝源圆圆圆苑苑冤袁并利用实时荧光定量 孕悦砸分别检测了 猿猿益热激及低剂量渊员园尧员尧园郾 员尧园郾 园员
和 园郾 园园员滋早 辕 皂蕴冤杀线虫剂阿维菌素尧丙溴磷和涕灭威处理对 猿 个 阅凿鄄澡泽责苑园 基因皂砸晕粤表达量的影
响遥 结果表明袁猿 个 阅凿鄄澡泽责苑园 基因在翻译区均含有内含子袁编码的氨基酸序列均包含了完整的保守
结构域和 猿 段保守的 匀杂孕苑园 家族签名序列袁且在氨基酸 悦末端具有保守的亚细胞定位基序遥 猿猿 益
热激 猿尧远 澡及 园郾 员 滋早 辕 皂蕴涕灭威浸渍处理 圆源 澡袁马铃薯腐烂茎线虫 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤基因 皂砸晕粤表达量分
别比对照显著上调 员郾 愿远缘尧源郾 员圆苑 和 员郾 远猿源 倍曰其它处理的 皂砸晕粤 表达量与对照差异均不显著遥 证
实了 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤尧阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦和 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云基因均为组成型袁其中 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 基因的响应在植物
线虫应对低剂量杀线虫剂胁迫过程中具有重要作用遥
关键词院 马铃薯腐烂茎线虫曰 热激蛋白 苑园曰 杀线虫剂曰 基因表达
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 造燥憎鄄凿燥泽藻 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻泽 燥灶 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡则藻藻 匀杂孕苑园 皂砸晕粤
蚤灶 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则
蕴怎燥 允蚤藻员 摇 匀藻 载怎枣藻灶早员 摇 孕藻灶早 阅藻造蚤葬灶早圆 摇 匀怎葬灶早 宰藻灶噪怎灶圆 摇 蕴蚤怎 允蚤葬灶曾蚤员 摇 阅蚤灶早 在澡燥灶早员鄢
渊员援 匀怎灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟蚤葬造 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿 悦燥灶贼则燥造 燥枣 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻泽 葬灶凿 陨灶泽藻糟贼 孕藻泽贼泽袁 悦燥造造藻早藻
燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 匀怎灶葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 悦澡葬灶早泽澡葬 源员园员圆愿袁 匀怎灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 月蚤燥造燥早赠 燥枣 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻泽 葬灶凿 陨灶泽藻糟贼 孕藻泽贼泽袁 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁
悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 月藻蚤躁蚤灶早 员园园员怨猿袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿 贼澡藻 皂燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 葬凿葬责贼葬遭蚤造蚤贼赠 贼燥 造燥憎鄄凿燥泽藻 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻泽 泽贼则藻泽泽 蚤灶
阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则袁 贼澡则藻藻 澡泽责苑园 早藻灶藻泽袁 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 渊 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援 运云苑怨圆猿园苑 冤袁 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦
渊葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援 允匝源圆圆圆苑远冤 葬灶凿 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 渊葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援 允匝源圆圆圆苑苑冤袁 憎藻则藻 糟造燥灶藻凿 枣则燥皂 阅援 凿藻泽贼则怎糟贼燥则
怎泽蚤灶早 砸栽鄄孕悦砸 葬灶凿 砸粤悦耘 贼藻糟澡灶蚤择怎藻泽援 栽澡藻 皂砸晕粤 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡则藻藻 澡泽责苑园 早藻灶藻泽 蚤灶 阅援 凿藻泽贼则怎糟贼燥则
藻曾责燥泽藻凿 贼燥 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 葬灶凿 造燥憎鄄凿燥泽藻泽 渊员园袁 员袁 园郾 员袁 园郾 园员袁 园郾 园园员 滋早 辕 皂蕴冤 燥枣 贼澡则藻藻 噪蚤灶凿泽 燥枣 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻泽袁
葬遭葬皂藻糟贼蚤灶袁 责则燥枣藻灶燥枣燥泽 葬灶凿 葬造凿蚤糟葬则遭袁 憎藻则藻 葬灶葬造赠扎藻凿 怎泽蚤灶早 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸援 粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽
贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 蚤灶贼则燥灶泽 藻曾蚤泽贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 贼则葬灶泽造葬贼藻凿 则藻早蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼澡则藻藻 阅凿鄄
澡泽责苑园 早藻灶藻泽袁 葬灶凿 糟燥皂责造藻贼藻 糟燥灶泽藻则增藻凿 凿燥皂葬蚤灶泽袁 贼澡则藻藻 泽蚤早灶葬贼怎则藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 匀杂孕苑园 枣葬皂蚤造赠袁 泽蚤早灶葬造
泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬贼蚤燥灶 葬贼 贼澡藻 糟葬则遭燥曾赠造 渊悦冤鄄贼藻则皂蚤灶葬造 憎藻则藻 枣燥怎灶凿 蚤灶 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻
贼澡则藻藻 阅凿鄄匀杂孕苑园泽援 栽澡藻 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造 燥枣 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 憎葬泽
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 怎责则藻早怎造葬贼藻凿 遭赠 员郾 愿远缘袁 源郾 员圆苑 葬灶凿 员郾 远猿源 枣燥造凿泽 葬枣贼藻则 藻曾责燥泽藻凿 贼燥 猿猿 益 枣燥则 猿袁 远 澡 葬灶凿 园郾 员
滋早 辕 皂蕴 葬造凿蚤糟葬则遭 枣燥则 圆源 澡袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 糟燥皂责葬则藻凿 贼燥 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造援 晕燥 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 憎葬泽 燥遭泽藻则增藻凿 蚤灶
贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼澡则藻藻 澡泽责苑园 早藻灶藻泽 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 燥贼澡藻则 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻泽 燥枣 澡藻葬贼鄄泽澡燥糟噪 葬灶凿 燥贼澡藻则
凿燥泽藻泽 燥枣 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤袁 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 葬灶凿 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 葬则藻
糟燥灶泽贼蚤贼怎贼蚤增藻造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽袁 燥枣 憎澡蚤糟澡 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 蚤灶 阅援 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 皂蚤早澡贼 责造葬赠 葬灶
蚤皂责燥则贼葬灶贼 则燥造藻 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 造燥憎鄄凿燥泽藻 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻 泽贼则藻泽泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则曰 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 苑园曰 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻曰 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
摇 摇 热激蛋白渊澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶袁匀杂孕冤是细胞或生
物体在受热或受病原体及其它理化因素等刺激后袁
所产生的一类在生物进化中最保守的蛋白渊匀泽怎 藻贼
葬造援 袁圆园园猿曰砸燥遭藻则贼袁圆园园猿冤遥 根据 匀杂孕 的分子质量和
氨基酸序列同源性和功能袁可分为 缘 个主要家族院
匀杂孕员园园 家族尧匀杂孕怨园 家族尧匀杂孕苑园 家族尧匀杂孕远园 家族
和小分子 匀杂孕家族袁其中 匀杂孕苑园 家族是最保守也是
研究最广泛的家族渊 孕葬则泽藻造造 驭 蕴蚤灶凿择怎蚤泽贼袁员怨怨猿曰月燥则鄄
噪葬灶 驭 郧怎造造葬灶泽袁圆园园圆冤遥 根据表达情况袁匀杂孕苑园 家族
分为诱导型热激蛋白 苑园 家族成员渊澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥鄄
贼藻蚤灶泽袁匀杂孕苑园泽冤和组成型热激蛋白 苑园 家族成员渊澡藻葬贼
泽澡燥糟噪 糟燥早灶葬贼藻 责则燥贼藻蚤灶泽袁 匀杂悦苑园泽冤 渊 月燥燥则泽贼藻蚤灶 藻贼 葬造援 袁
员怨怨源曰运葬则造蚤灶 驭 月则燥糟糟澡蚤藻则蚤袁员怨怨愿冤遥
自然界中袁生物在高温尧缺氧尧有毒化学物质等
环境胁迫下均能诱导 澡泽责 的表达袁从而提高机体对
不良环境的耐受性袁保护机体或细胞在随后的致死
性应激中不受或少受伤害渊月澡葬则早葬增 藻贼 葬造援 袁圆园园愿曰蒋
健等袁圆园员猿冤遥 再燥泽澡蚤皂蚤 藻贼 葬造援 渊圆园园员冤发现在受到污染
的河流中袁杀虫剂是摇蚊 悦澡蚤则燥灶燥皂怎泽 赠燥泽澡蚤皂葬贼泽怎蚤幼
虫 澡泽责苑园 表达量增加的一个潜在因素曰郭雅洁等
渊圆园员猿冤研究也表明烯啶虫胺尧毒死蜱和高效氯氰菊
酯 猿 种杀虫药剂对烟粉虱 月藻皂蚤泽蚤葬 贼葬遭葬糟蚤 澡泽责苑园 表达
的诱导具有明显的浓度尧温度和时间效应遥 在植物
线虫方面袁目前仅对大豆孢囊线虫 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠鄄
糟蚤灶藻泽渊郑雅楠等袁圆园员圆冤尧松材线虫 月怎则泽葬责澡藻造藻灶糟澡怎泽
曾赠造燥责澡蚤造怎泽渊戴素明等袁圆园园苑冤尧拟松材线虫 月援 皂怎糟则鄄
燥灶葬贼怎泽渊黄麟等袁圆园园怨冤的 匀杂孕苑园 蛋白的克隆和表达
进行了研究袁有关植物线虫 匀杂孕苑园 在应对外源化学
药剂胁迫中的作用等研究尚未见报道遥
马铃薯腐烂茎线虫 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则是我国
重要的进境植物检疫性有害生物渊丁中等袁圆园园愿冤袁
主要分布于河北尧山东尧北京等地袁是甘薯生产上重
要的病害之一遥 目前袁化学药剂防治是线虫综合防
治工作中最重要的手段之一遥 其中涕灭威尧丙溴磷
和阿维菌素分属氨基甲酸酯类尧有机磷类和大环内
脂化合物袁对植物线虫具有较好的控制作用渊陈品
三袁圆园园员冤遥 在土壤环境中袁这些具有生物活性的低
剂量非熏蒸类杀虫剂在影响线虫行为的同时也可能
影响线虫 澡泽责苑园 基因的表达遥 为此袁本研究拟从马
铃薯腐烂茎线虫中克隆 澡泽责苑园 基因袁分析在低剂量
杀线虫剂阿维菌素尧丙溴磷和涕灭威作用下袁马铃薯
腐烂茎线虫 澡泽责苑园 皂砸晕粤表达量的变化袁以期为进
一步了解植物线虫对低剂量杀线虫剂的适应机制提
供依据遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试线虫与药剂院马铃薯腐烂茎线虫由本实验室
利用半裸镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂 泽藻皂蚤贼藻糟贼怎皂 于 圆缘 益条件下
进行培养渊徐进军等袁圆园园源曰丁中等袁圆园园愿冤遥 怨缘豫阿维
菌素渊葬遭葬皂藻糟贼蚤灶冤原药和 怨园豫丙溴磷渊责则燥枣藻灶燥枣燥泽冤原药
由湖南大方农化有限公司提供曰怨愿援 远豫涕灭威渊葬造凿蚤鄄
糟葬则遭冤原药由华阳农药化工集团有限公司提供遥
试剂院 栽砸陨扎燥造尧 阅赠灶遭藻葬凿泽襆 皂砸晕粤 阅陨砸耘悦栽栽酝 运蚤贼
购自美国 陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司曰蛋白酶 运购自德国 砸燥糟澡藻
公司曰砸晕粤 孕悦砸 运蚤贼渊粤酝灾冤尧猿忆鄄云怎造造 砸粤悦耘 悦燥则藻 杂藻贼
憎蚤贼澡 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝 砸栽葬泽藻尧责酝阅襆 员愿鄄栽载体尧酝蚤灶蚤月耘杂栽
哉灶蚤增藻则泽葬造 郧藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 运蚤贼尧耘载 栽葬择 阅晕粤
聚合酶尧杂再月砸 孕则藻皂蚤则 耘载 栽葬择以及 阅晕粤 酝葬则噪藻则购于
大连宝生物工程有限公司曰琼脂糖胶回收试剂盒以
及大肠杆菌 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 阅匀缘琢 感受态细胞购于
天根生化科技渊北京冤有限公司曰其它试剂均为国产
分析纯遥
仪器院苑缘园园 云葬泽贼 实时荧光定量 孕悦砸 仪袁美国
粤责责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 澡泽责苑园 基因的克隆
收集新鲜分离的马铃薯腐烂茎线虫袁灭菌水冲
源员员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
洗 猿 次后采用 栽砸陨扎燥造法进行总 砸晕粤的提取曰基因组
阅晕粤的提取按照 酝蚤灶蚤月耘杂栽 哉灶蚤增藻则泽葬造 郧藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 运蚤贼试剂盒说明书进行曰参照 砸晕粤 孕悦砸 运蚤贼
渊粤酝灾冤试剂盒说明书进行第一链 糟阅晕粤 的合成遥
根据 晕悦月陨上公布的线虫 匀杂孕苑园 氨基酸序列进行对
比袁找出保守序列袁合成简并引物渊表 员冤袁以第一链
糟阅晕粤 为模板进行 孕悦砸 扩增袁反应体系院员园 伊 耘曾
孕悦砸 月怎枣枣藻则 缘 滋蕴尧员园皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕 酝蚤曾 源滋蕴尧员园滋皂燥造 辕
蕴上下游引物各 圆 滋蕴尧缘 哉 辕 滋蕴 耘曾 栽葬择 阅晕粤 聚合酶
园郾 缘 滋蕴尧第一链 糟阅晕粤 模板 员 滋蕴袁 凿凿匀圆韵 补足至圆缘 滋蕴遥 孕悦砸 扩增条件院怨源 益 预变性 缘 皂蚤灶曰怨源 益
猿园 泽袁澡泽责苑园鄄粤基因 缘远 益渊澡泽责苑园鄄悦基因 缘愿 益曰澡泽责苑园鄄云
基因 缘缘 益冤 猿园 泽袁 苑圆 益 员 皂蚤灶袁 猿缘 个循环曰 苑圆 益
员园 皂蚤灶袁扩增产物经 员郾 缘豫琼脂糖凝胶电泳检测后袁
回收目的条带袁经过连接尧转化袁阳性克隆经菌液
孕悦砸验证后袁送上海生工生物工程技术服务有限公
司测序遥
员援 圆援 圆 澡泽责苑园 基因的序列分析
根据马铃薯腐烂茎线虫 澡泽责苑园 核心片段序列袁
利用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 软件进行 猿忆端 砸粤悦耘 和 缘忆
端 砸粤悦耘引物的设计渊表 员冤遥 孕悦砸反应以 糟阅晕粤为
模板袁猿忆末端的 糟阅晕粤 合成参照 猿忆鄄云怎造造 砸粤悦耘 悦燥则藻
杂藻贼 憎蚤贼澡 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝 砸栽葬泽藻 试剂盒说明书袁产物回
收测序步骤同上遥 根据已得到的 澡泽责苑园 糟阅晕粤 全长
序列袁利用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 软件设计基因组全
长扩增引物渊表员冤 袁以基因组阅晕粤为模板进行孕悦砸
表 员摇 马铃薯腐烂茎线虫 澡泽责苑园 基因研究中采用的引物
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 燥枣 澡泽责苑园 早藻灶藻泽 蚤灶 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡藻 泽贼怎凿赠
引物名称
孕则蚤皂藻则 灶葬皂藻
序列渊缘忆鄄猿忆冤
杂藻择怎藻灶糟藻渊缘忆鄄猿忆冤
作用
云怎灶糟贼蚤燥灶
匀杂孕苑园粤鄄云 郧悦晕郧悦晕粤粤砸粤粤再悦粤砸郧栽晕郧悦晕粤栽郧 澡泽责苑园鄄粤基因核心片段扩增 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园鄄粤 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼
匀杂孕苑园粤鄄砸 粤粤砸栽郧砸栽栽晕粤悦悦粤栽晕悦运砸栽栽砸栽悦 澡泽责苑园鄄粤基因核心片段扩增 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园鄄粤 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼
杂蕴员 郧郧栽栽栽粤粤栽栽粤悦悦悦粤粤郧栽栽栽郧粤郧 糟阅晕粤 缘忆末端扩增 糟阅晕粤 缘忆砸粤悦耘
苑园鄄员缘砸员 栽栽悦郧郧悦粤郧栽栽栽悦悦栽栽悦粤栽悦栽栽郧 糟阅晕粤 缘忆末端扩增 糟阅晕粤 缘忆砸粤悦耘
苑园鄄员郧杂孕员 悦郧粤栽郧悦郧粤粤郧悦粤栽栽栽郧粤栽栽郧 糟阅晕粤 猿忆末端扩增 糟阅晕粤 猿忆砸粤悦耘
苑园鄄员郧杂孕圆 郧悦郧粤粤栽悦粤栽粤粤粤悦郧粤郧悦悦栽粤悦栽郧悦 糟阅晕粤 猿忆末端扩增 糟阅晕粤 猿忆砸粤悦耘
匀杂孕苑园员鄄云 粤悦郧粤粤粤栽郧郧悦郧粤悦郧粤粤粤悦粤悦粤粤悦 糟阅晕粤 辕基因组全长扩增 云怎造造鄄造藻灶早贼澡 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
匀杂孕苑园员鄄砸 粤栽栽郧栽悦郧郧栽悦悦粤悦悦粤悦悦粤郧栽粤郧 糟阅晕粤 辕基因组全长扩增 云怎造造鄄造藻灶早贼澡 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
匀杂孕苑园云 粤栽郧粤粤砸悦粤再栽郧郧悦悦晕栽栽再粤粤砸郧 澡泽责苑园鄄悦基因核心片段扩增 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园鄄悦 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼
匀杂孕苑园砸 悦粤栽晕悦运砸栽栽砸栽悦砸粤粤砸栽悦再栽悦 澡泽责苑园鄄悦基因核心片段扩增 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园鄄悦 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼
匀苑园悦圆砸鄄缘 栽郧郧郧悦粤栽悦粤栽栽郧粤粤郧栽粤粤郧悦粤郧 糟阅晕粤 缘忆末端扩增 糟阅晕粤 缘忆砸粤悦耘
匀杂孕鄄月杂孕员 栽郧粤悦郧粤栽栽栽悦粤粤悦郧郧栽悦栽栽栽粤悦 糟阅晕粤 猿忆末端扩增 糟阅晕粤 猿忆砸粤悦耘
匀杂孕鄄月杂孕圆 栽栽悦郧栽悦郧栽悦郧粤郧栽栽悦悦栽悦粤栽悦 糟阅晕粤 猿忆末端扩增 糟阅晕粤 猿忆砸粤悦耘
匀杂孕苑园悦鄄云 栽悦栽栽郧郧粤悦栽悦郧栽郧栽栽粤栽栽粤栽栽郧 糟阅晕粤 辕基因组全长扩增 云怎造造鄄造藻灶早贼澡 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
匀杂孕苑园悦鄄砸 粤栽郧栽悦粤悦粤粤悦粤粤悦粤粤粤悦粤粤栽粤粤悦 糟阅晕粤 辕基因组全长扩增 云怎造造鄄造藻灶早贼澡 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
匀杂孕鄄云鄄云 粤粤砸粤栽郧粤粤栽郧粤栽粤悦晕郧悦晕郧粤 澡泽责苑园鄄云基因核心片段扩增 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园鄄云 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼
匀杂孕鄄云鄄砸 悦粤栽砸栽栽再栽悦阅粤栽再栽郧砸栽悦再栽栽 澡泽责苑园鄄云基因核心片段扩增 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园鄄云 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼
匀苑园鄄云砸鄄缘 栽悦悦栽栽郧郧栽粤郧悦栽栽郧栽悦栽栽栽郧粤郧 糟阅晕粤 缘忆末端扩增 糟阅晕粤 缘忆砸粤悦耘
匀杂孕鄄粤杂孕员 悦悦粤郧栽栽栽粤悦悦郧粤郧栽郧粤郧悦粤粤栽郧 糟阅晕粤 猿忆末端扩增 糟阅晕粤 猿忆砸粤悦耘
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匀杂孕苑园云鄄云 栽郧悦悦粤郧栽栽栽粤悦悦郧粤郧栽郧粤郧悦 糟阅晕粤 辕基因组全长扩增 云怎造造鄄造藻灶早贼澡 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
匀杂孕苑园云鄄砸 栽栽栽栽郧郧悦栽悦悦栽悦悦郧栽栽郧栽郧栽 糟阅晕粤 辕基因组全长扩增 云怎造造鄄造藻灶早贼澡 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
粤糟贼蚤灶鄄云 悦粤悦悦悦粤悦粤悦栽郧栽悦悦悦悦粤栽悦栽 荧光定量 孕悦砸内标引物 择砸栽鄄砸悦砸
粤糟贼蚤灶鄄砸 郧栽悦粤悦郧郧悦悦粤郧悦悦粤粤郧栽悦 荧光定量 孕悦砸内标引物 择砸栽鄄砸悦砸
砸栽苑园粤鄄云 郧悦栽粤栽栽悦栽郧栽郧悦郧郧郧郧粤悦粤粤 澡泽责苑园鄄粤荧光定量 孕悦砸引物 择砸栽鄄砸悦砸 枣燥则 澡泽责苑园鄄粤
砸栽苑园粤鄄砸 粤悦郧栽悦悦粤粤粤粤郧悦粤郧郧粤郧郧 澡泽责苑园鄄粤荧光定量 孕悦砸引物 择砸栽鄄砸悦砸 枣燥则 澡泽责苑园鄄粤
砸栽苑园悦鄄云 悦粤悦悦郧粤郧悦悦郧栽郧悦粤粤粤粤 澡泽责苑园鄄悦荧光定量 孕悦砸引物 择砸栽鄄砸悦砸 枣燥则 澡泽责苑园鄄悦
砸栽苑园悦鄄砸 粤郧粤郧郧郧悦栽悦郧悦栽栽粤郧悦悦栽栽悦栽 澡泽责苑园鄄悦荧光定量 孕悦砸引物 择砸栽鄄砸悦砸 枣燥则 澡泽责苑园鄄悦
砸栽苑园云鄄云 栽悦郧悦郧粤粤郧粤粤郧栽悦悦粤粤悦粤粤栽栽 澡泽责苑园鄄云荧光定量 孕悦砸引物 择砸栽鄄砸悦砸 枣燥则 澡泽责苑园鄄云
砸栽苑园云鄄砸 栽郧郧栽粤悦郧悦悦粤悦粤栽悦郧粤粤郧粤栽悦 澡泽责苑园鄄云荧光定量 孕悦砸引物 择砸栽鄄砸悦砸 枣燥则 澡泽责苑园鄄云
缘员员员 期 罗摇 杰等院 低剂量杀线虫剂对马铃薯腐烂茎线虫三个热激蛋白 苑园 皂砸晕粤表达的影响
扩增袁产物回收测序步骤同上遥 使用 阅晕粤酝粤晕 缘援 圆
软件进行序列拼接尧比对曰使用 晕悦月陨 在线工具
月蕴粤杂栽和 韵砸云 枣蚤灶凿藻则进行序列比对尧开放阅读框查
找以及蛋白质翻译曰使用 酝藻早葬 缘援 园 软件中的最大似
然法进行分子系统进化树构建曰使用 耘月陨 在线软件
陨灶贼藻则孕则燥进行保守结构域分析曰使用在线 耘曾孕粤杂赠 软
件进行蛋白质分子量和等电点预测曰使用 郧杂阅杂 圆援 园
在线软件进行基因组结构分析遥
员援 圆援 猿 澡泽责苑园 皂砸晕粤表达水平的相对定量
采用 猿猿 益热激处理马铃薯腐烂茎线虫袁猿尧远 和
员圆 澡后分别检测 澡泽责苑园 基因 皂砸晕粤 的表达变化袁以
圆缘 益处理为对照遥 药剂处理中袁分别将阿维菌素原
药尧丙溴磷原药和涕灭威原药用丙酮和吐温 原 愿园 配
成 员 园园园 滋早 辕 皂蕴的母液袁再用清水稀释成 员园尧员尧园郾 员尧
园郾 园员 和 园郾 园园员 滋早 辕 皂蕴 共 缘 种浓度浸渍处理马铃薯
腐烂茎线虫 圆源 澡袁设一个清水空白对照袁每个浓度设
猿 次重复遥
采用 阅赠灶遭藻葬凿泽襆 皂砸晕粤 阅陨砸耘悦栽栽酝 运蚤贼试剂盒提
取不同处理的马铃薯腐烂茎线虫 皂砸晕粤遥 参照
砸晕粤 孕悦砸 运蚤贼渊粤酝灾冤试剂盒进行第一链 糟阅晕粤 合
成遥 根据已得到的马铃薯腐烂茎线虫 澡泽责苑园 糟阅晕粤
序列袁采用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 设计特异性引物袁以
茁鄄葬糟贼蚤灶 为看家基因袁引物序列如表 员 所示遥 参照
杂再月砸 孕则藻皂蚤则 耘载 栽葬择试剂盒操作说明进行荧光定量
孕悦砸遥 反应程序院怨缘 益预变性 猿园 泽曰怨缘 益 猿 泽袁缘猿 益
员缘 泽袁苑圆 益 员缘 泽袁源园 个循环曰最后在 远园 耀 怨缘 益之间检
测产物的解链曲线袁以确保反应的特异性遥 采用
圆 原 驻驻悦贼相对定量法计算 澡泽责苑园 基因的相对表达量袁将
对照组的 糟阅晕粤模板进行 员园 倍梯度稀释袁按照上述
荧光定量 孕悦砸 反应条件进行袁每个浓度 猿 次重复袁
取平均值为该处理样品的 悦贼值遥
员援 猿 数据分析
用 阅孕杂 怨援 缘园 软件进行数据处理袁同一基因在相
同处理时间或药剂浓度条件下处理组与对照组
澡泽责苑园 相对表达水平差异进行 贼检验曰相同药剂不同
浓度处理组基因表达量差异应用最小显著差异法
渊蕴杂阅冤进行检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 马铃薯腐烂茎线虫 澡泽责苑园 基因的克隆
圆援 员援 员 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤基因的克隆
使用简并引物进行 孕悦砸 扩增袁得到长度为
缘远源 遭责的序列渊图 员鄄葬冤袁通过 猿忆砸粤悦耘 和 缘忆砸粤悦耘 扩
增后分别得到 员 愿远源 遭责渊图 员鄄遭冤和 源缘苑 遭责渊图 员鄄糟冤的
序列袁拼接获得该基因 糟阅晕粤 全长渊图 员鄄凿冤遥 设计
特异性引物验证拼接序列的正确性袁得到一条 员 怨圆苑
遭责的片段袁与拼接序列完全一致遥 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 基因
糟阅晕粤全长为 圆 园愿员 遭责袁该序列包含 员 个长度为 员 怨猿愿
遭责的开放阅读框渊韵砸云冤袁编码 远源缘 个氨基酸袁缘忆端
起始密码子 野粤栽郧冶 前存在 源缘 遭责 的非编码区
渊哉栽砸冤袁猿忆端终止密码子野栽粤粤冶后存在 怨愿 遭责的非编
码区渊哉栽砸冤遥 悦末端包含 员圆 遭责的 责燥造赠渊粤冤尾巴袁其
图 员 马铃薯腐烂茎线虫 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤基因克隆及基因组结构图
云蚤早援 员 悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 早藻灶燥皂蚤糟 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 早藻灶藻
摇 摇 酝院 阅圆园园园 辕 阅缘园园园 阅晕粤标准分子量曰 葬院 核心片段扩增曰 遭院 猿忆砸粤悦耘扩增曰 糟院 缘忆砸粤悦耘扩增曰 凿院 糟阅晕粤全长扩增曰 藻院 基因组全长扩
增遥 酝院 阅圆园园园 辕 阅缘园园园 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 葬院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼曰 遭院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 猿忆砸粤悦耘曰 糟院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 缘忆砸粤悦耘曰 凿院 孕悦砸
责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 贼澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤曰 藻院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤援
远员员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
上游含有一段加尾信号野粤粤栽粤粤粤冶遥 表明克隆的马
铃薯腐烂茎线虫 澡泽责苑园 基因为一个完整基因袁将 糟阅鄄
晕粤 序列命名为 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤袁 郧藻灶月葬灶噪 登录号为
运云苑怨圆猿园苑遥 孕悦砸 扩增尧回收尧测序后获得长度为
猿 远源苑 遭责的基因组全长序列渊图 员鄄藻冤遥 通过 郧杂阅杂 在
线软件进行基因组结构分析袁表明 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 基因
组由 员员 个外显子和 员园 个内含子组成袁符合 郧栽 辕 粤郧
剪切规律遥
圆援 员援 圆 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦基因克隆
使用简并引物进行 孕悦砸 扩增袁得到长度为
源缘园 遭责的序列渊图 圆鄄葬冤袁猿忆砸粤悦耘 和 缘忆砸粤悦耘 扩增
后分别得到 圆 员猿愿 遭责渊图 圆鄄遭冤和 远园园 遭责渊图 圆鄄糟冤的
序列袁拼接获得该基因 糟阅晕粤全长遥 设计特异性引
物验证拼接序列的正确性袁得到一条 圆 猿远园 遭责 的片
段渊图 圆鄄凿冤袁与拼接序列完全一致遥 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 基
因 糟阅晕粤全长为 圆 源猿远 遭责袁该序列包含 员 个长度为
圆 园员怨 遭责的开放阅读框 渊 韵砸云冤袁编码 远苑圆 个氨基
酸袁缘忆端起始密码子野粤栽郧冶前存在 圆圆 遭责 的非编码
区渊哉栽砸冤袁猿忆端终止密码子野 栽郧粤冶后存在 猿怨缘 遭责
的非编码区渊哉栽砸冤遥 悦 末端包含 员员 遭责的 责燥造赠渊粤冤
尾巴袁其上游含有一段加尾信号野粤粤栽粤粤粤冶遥 表
明克隆的马铃薯腐烂茎线虫 澡泽责苑园 基因为一个完
整基因袁将其命名为 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦袁郧藻灶月葬灶噪 登录号
为 允匝源圆圆圆苑远遥 孕悦砸 扩增回收尧测序后获得了长度
为 源 园苑缘 遭责的基因组全长序列渊图 圆鄄藻冤遥 通过 郧杂鄄
阅杂在线软件进行基因组结构分析袁表明 阅凿鄄澡泽责苑园鄄
悦基因组由 员猿 个外显子和 员圆 个内含子组成袁符合
郧栽 辕 粤郧 剪切规律遥
图 圆 马铃薯腐烂茎线虫 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦基因克隆及基因组结构图
云蚤早援 圆 悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 早藻灶燥皂蚤糟 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 早藻灶藻
摇 摇 酝院 阅圆园园园 辕 阅缘园园园 阅晕粤 标准分子量曰 葬院 核心片段扩增曰 遭院 猿忆砸粤悦耘扩增曰 糟院 缘忆砸粤悦耘扩增曰 凿院 糟阅晕粤全长扩增曰 藻院 基因
组全长扩增遥 酝院 阅圆园园园 辕 阅缘园园园 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 葬院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼曰 遭院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 猿忆砸粤悦耘曰 糟院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣
缘忆砸粤悦耘曰 凿院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 贼澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤曰 藻院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤援
圆援 员援 猿 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云基因克隆
使用简并引物进行 孕悦砸 扩增袁得到长度为
源缘园 遭责的序列渊图 猿鄄葬冤袁猿忆砸粤悦耘和 缘忆砸粤悦耘扩增后分
别得到 员愿缘远 遭责渊图 猿鄄遭冤和 缘怨猿 遭责渊图 猿鄄糟冤的序列袁拼
接获得该基因 糟阅晕粤 全长遥 设计特异性引物验证拼
接序列的正确性袁得到一条 员怨愿远 遭责的片段渊图 猿鄄凿冤袁
与拼接序列完全一致遥 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 基因 糟阅晕粤 全长
为 圆 园怨圆 遭责袁该序列包含 员 个长度为 员 怨缘怨 遭责 的开放
阅读框渊韵砸云冤袁编码 远缘圆 个氨基酸袁缘忆端起始密码子
野粤栽郧冶前存在 缘源 遭责的非编码区渊哉栽砸冤袁猿忆端终止密
码子野栽粤郧冶后存在 苑怨 遭责 的非编码区渊哉栽砸冤遥 悦 末
端包含 员员 遭责 的 责燥造赠渊粤冤尾巴遥 将此 糟阅晕粤 序列命
名为 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云袁 郧藻灶月葬灶噪 登录号为 允匝源圆圆圆苑苑遥
孕悦砸扩增尧回收尧测序后获得长度为 源 猿圆猿 遭责的基因
组全长序列渊图 猿鄄藻冤遥 通过 郧杂阅杂 在线软件进行基
因组结构分析袁表明 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 基因组由 员员 个外
显子和 员园 个内含子组成袁符合 郧栽 辕 粤郧剪切规律遥
圆援 圆 澡泽责苑园 基因的序列分析
马铃薯腐烂茎线虫 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤尧阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 和
阅凿鄄澡泽责苑园鄄云预测蛋白分别是由 远源缘尧远苑圆 和 远缘圆 个氨
基酸残基组成的多肽袁预测分子量分别为 苑园郾 源尧
苑猿郾 愿和 苑园郾 远 噪阅袁等电点分别为 缘郾 猿缘尧缘郾 员猿 和 缘郾 苑愿遥
阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤推导的氨基酸序列包含 匀杂孕苑园 家族 猿
个完整的典型基序渊皂燥贼蚤枣冤院员园 耀 员苑 渊 陨阅蕴郧栽栽再杂冤尧
苑员员员 期 罗摇 杰等院 低剂量杀线虫剂对马铃薯腐烂茎线虫三个热激蛋白 苑园 皂砸晕粤表达的影响
摇 摇 摇
图 猿 马铃薯腐烂茎线虫 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云基因克隆及基因组结构图
云蚤早援 猿 悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 早藻灶燥皂蚤糟 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 早藻灶藻
摇 摇 酝院 阅圆园园园 辕 阅缘园园园 阅晕粤标准分子量曰 葬院 核心片段扩增曰 遭院 猿忆砸粤悦耘扩增曰 糟院 缘忆砸粤悦耘扩增曰 凿院 糟阅晕粤全长扩增曰 藻院 基因
组全长扩增遥 酝院 阅圆园园园 辕 阅缘园园园 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 葬院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 糟燥则藻 枣则葬早皂藻灶贼曰 遭院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 猿忆砸粤悦耘曰 糟院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣
缘忆砸粤悦耘曰 凿院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 贼澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤曰 藻院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤援
员怨怨 耀 圆员圆 渊 陨云阅蕴郧郧郧栽云阅灾杂陨蕴冤 和 猿猿远 耀 猿源苑 渊 陨灾鄄
蕴灾郧郧杂栽砸陨孕运冤遥 杂宰陨杂杂鄄酝韵阅耘蕴蛋白三维结构预测
显示该 匀杂孕苑园 在 晕 端形成 粤栽孕 酶结构域渊苑 耀 员愿怨
残基冤袁在近 悦端形成底物肽结合结构域渊猿愿愿 耀 缘源缘
残基冤以及 悦 端结构域渊缘源园 耀 远圆员 残基冤遥 在 悦 末
端含有一段基序渊耘耘灾阅冤袁这是胞质型 匀杂孕苑园 所特
有的袁说明该蛋白存在于细胞质中遥
阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 推导的氨基酸序列包含 匀杂孕苑园 家
族 猿 个完整的典型基序 渊皂燥贼蚤枣冤院源远 耀 缘猿 渊 陨阅蕴郧栽鄄
栽再杂冤尧圆猿缘 耀 圆源愿渊灾云阅蕴郧郧郧栽云阅灾杂蕴蕴冤和 猿苑员 耀 猿愿圆
渊陨灾蕴灾郧郧杂栽砸陨孕运冤遥 杂宰陨杂杂鄄酝韵阅耘蕴 蛋白三维结构
预测显示该 匀杂孕苑园 在 晕 端形成 粤栽孕 酶结构域
渊源园 耀 源员怨 残基冤袁在近 悦 端形成底物肽结合结构域
渊源圆园 耀 缘苑愿 残基冤以及 悦 端结构域渊缘苑圆 耀 远缘远 残
基冤遥 在 悦末端含有一段基序渊运阅耘蕴冤袁这是内质网
型 匀杂孕苑园 所特有的袁说明该蛋白存在于内质网中遥
阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 推导的氨基酸序列包含 匀杂孕苑园 家
族 猿 个完整的典型基序渊皂燥贼蚤枣冤院猿员 耀 猿愿 渊 陨阅蕴郧栽栽鄄
晕杂冤尧圆员缘 耀 圆圆愿 渊 灾再阅蕴郧郧郧栽云阅陨杂陨蕴冤 和 猿缘缘 耀 猿远远
渊灾蕴蕴灾郧郧酝栽砸酝孕运冤遥 杂宰陨杂杂鄄酝韵阅耘蕴 蛋白三维结
构预测显示该 匀杂孕苑园 在 晕 端形成 粤栽孕 酶结构域
渊圆愿 耀 源园员 残基冤袁在近 悦 端形成底物肽结合结构域
渊源园猿 耀 缘缘怨 残基冤以及 悦 端结构域渊缘缘猿 耀 远圆愿 残
基冤遥 氨基酸序列含有被作为线粒体 匀杂孕苑园 标志的
一个保守基序 郧阅粤宰渊员圆猿 耀 员圆远 残基冤袁该基序是线
粒体和变形细菌特有的袁因此推断该蛋白存在于线
粒体中遥
同源性分析表明袁阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤基因的氨基酸序列
与拟松材线虫 月援 皂怎糟则燥灶葬贼怎泽尧松材线虫 月援 曾赠造燥责澡蚤造怎泽
的 澡泽责苑园 相似度均为 愿苑豫 袁 与大豆孢囊线虫
匀援 早造赠糟蚤灶藻泽 澡泽责苑园尧秀丽隐杆线虫 悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻鄄
早葬灶泽 澡泽责鄄员尧班氏线虫 宰怎糟澡藻则藻则蚤葬 遭葬灶糟则燥枣贼蚤 澡泽责苑园 的相
似度分别为 愿远豫 尧愿缘豫和 愿缘豫 遥 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 基因的
氨基酸序列与大豆孢囊线虫 匀援 早造赠糟蚤灶藻泽 澡泽责苑园鄄悦尧腐
生线虫 孕葬灶葬早则藻造造怎泽 则藻凿蚤增蚤增怎泽 澡泽责苑园鄄悦尧猪蛔虫 粤泽糟葬则蚤泽
泽怎怎皂 澡泽责苑园鄄悦以及秀丽隐杆线虫 悦援 藻造藻早葬灶泽 澡泽责苑园鄄猿
的氨基酸序列同源性分别为 怨圆豫 尧怨员豫 尧愿远豫 和
愿源豫 遥 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 基因的氨基酸序列与马来丝虫
月则怎早蚤葬 皂葬造葬赠蚤 澡泽责苑园鄄云尧秀丽隐杆线虫 悦援 藻造藻早葬灶泽
澡泽责苑园鄄远尧蒙古裸腹溞 酝燥蚤灶葬 皂燥灶早燥造蚤糟葬 澡泽责苑园 以及肩
突硬蜱 陨曾燥凿藻泽 泽糟葬责怎造葬则蚤泽 澡泽责苑园 的氨基酸序列同源性
分别为 苑苑豫 尧苑远豫 尧苑缘豫和 苑缘豫 遥 将获得的马铃薯
腐烂茎线虫 猿 个 澡泽责苑园 基因与相对应的同源性最高
的模式生物秀丽隐杆线虫的 澡泽责苑园 基因件进行氨基
酸序列比对袁结果如图 源 所示遥
圆援 猿 系统发育树分析
阅阅鄄匀杂孕苑园鄄粤与秀丽隐杆线虫 悦耘鄄匀杂孕鄄员尧班氏
丝虫 宰月鄄匀杂孕苑园尧大豆孢囊线虫 匀郧鄄匀杂孕苑园尧珠鸡
晕酝鄄匀杂孕鄄粤愿 聚在同一分支中袁均属于胞质型 匀杂孕苑园
家族曰阅阅鄄匀杂孕苑园鄄悦 与大豆孢囊线虫 匀郧鄄匀杂孕鄄悦尧秀
丽隐杆线虫 悦耘鄄匀杂孕鄄猿尧金齿复活线虫 孕砸鄄匀杂孕苑园鄄悦尧
黄鳝 酝粤鄄匀杂孕苑园鄄缘 聚在同一分支中袁均属于内质网
愿员员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
摇 摇 摇
图 源 马铃薯腐烂茎线虫与秀丽隐杆线虫的热激蛋白氨基酸序列比对结果
云蚤早援 源 栽澡藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 憎蚤贼澡 匀杂孕 责则燥贼藻蚤灶泽 燥枣 悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻早葬灶泽
摇 摇 横线院 猿 段保守的 匀杂孕苑园 家族签名序列曰 方框院 胞质型尧内质网型和线粒体型 匀杂孕苑园 悦末端标志性滞留信号基序渊耘耘灾阅尧
运阅耘蕴和 郧阅粤宰冤曰 黑色区域院 线虫高度保守的氨基酸曰 阅阅院 马铃薯腐烂茎线虫曰 悦耘院 秀丽隐杆线虫遥 哉灶凿藻则造蚤灶藻凿院 栽澡则藻藻 糟燥灶鄄
泽藻则增藻凿 皂燥贼蚤枣泽 燥枣 贼澡藻 匀杂孕苑园 枣葬皂蚤造赠曰 月燥曾院 贼澡藻 糟赠贼燥责造葬泽皂蚤糟 匀杂孕苑园 糟葬则遭燥曾赠造 贼藻则皂蚤灶葬造 则藻早蚤燥灶 渊耘耘灾阅冤袁 贼澡藻 藻灶凿燥责造葬泽皂蚤糟 则藻贼蚤糟怎造怎皂 匀杂孕苑园 糟葬则遭燥曾鄄
赠造 贼藻则皂蚤灶葬造 则藻早蚤燥灶 渊运阅耘蕴冤袁 糟燥灶泽藻则增藻凿 皂燥贼蚤枣 燥枣 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 匀杂孕苑园 渊郧阅粤宰冤曰 月造葬糟噪 遭造燥糟噪泽院 糟燥灶泽藻则增藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽 葬糟则燥泽泽 葬造造 灶藻皂葬贼燥凿藻曰
阅阅院 阅援 凿藻泽贼则怎糟贼燥则曰 悦耘院 悦援 藻造藻早葬灶泽援
型 匀杂孕苑园 家族曰 阅阅鄄匀杂孕苑园鄄云 与马来丝虫 月酝鄄
匀杂孕苑园鄄云尧秀丽隐杆线虫 悦耘鄄匀杂孕鄄远尧肩突硬蜱 陨杂鄄
匀杂孕苑园尧蒙古裸腹溞 酝酝鄄匀杂孕苑园 聚在同一分支中袁均
属于线粒体型 匀杂孕苑园 家族渊图 缘冤遥
怨员员员 期 罗摇 杰等院 低剂量杀线虫剂对马铃薯腐烂茎线虫三个热激蛋白 苑园 皂砸晕粤表达的影响
图 缘 基于最大似然法构建的 员缘 种 匀杂孕苑园 系统发育树
云蚤早援 缘 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 匀杂孕苑园 遭葬泽藻凿 燥灶 皂葬曾蚤皂怎皂 造蚤噪藻造蚤澡燥燥凿 葬灶葬造赠泽蚤泽
圆援 源 马铃薯腐烂茎线虫 猿 个 澡泽责苑园 基因表达量分析
圆援 源援 员 解链曲线和标准曲线的建立
马铃薯腐烂茎线虫 猿 个 澡泽责苑园 基因 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤尧
阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦尧阅凿鄄澡泽责苑园鄄云和内标基因 茁鄄葬糟贼蚤灶 的解链
曲线分别在 愿远郾 源尧愿远郾 愿尧愿圆郾 员 和 愿缘郾 猿 益处形成单一
主峰袁解链温度均一遥 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤尧阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦尧阅凿鄄
澡泽责苑园鄄云 以及 茁鄄葬糟贼蚤灶 的 砸圆 分别为 园郾 怨怨怨尧园郾 怨怨愿尧
园郾 怨怨远 和 园郾 怨怨怨袁扩增效率均在 怨园豫 耀 员员园豫之间遥
表明该标准曲线可以在较宽的范围内用于马铃薯
摇 摇 摇
腐烂茎线虫 澡泽责苑园 的相对定量检测遥
圆援 源援 圆 热激胁迫下 猿 个 澡泽责苑园 皂砸晕粤的相对表达
猿猿 益热激处理 猿尧远 和 员圆 澡 后袁阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 基因
的 皂砸晕粤 表达量分别上调表达 员郾 愿远缘尧源郾 员圆苑 和
员郾 源苑猿 倍袁其中热激处理 猿尧远 澡后 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤基因的
皂砸晕粤表达量与对照相比差异显著曰阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 和
阅凿鄄澡泽责苑园鄄云基因的 皂砸晕粤表达量均下调袁但幅度均
小于 园郾 源 倍袁且与对照无显著差异渊图 远冤遥
图 远 马铃薯腐烂茎线虫热激处理后 澡泽责苑园 基因 皂砸晕粤的相对表达量
云蚤早援 远 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园 皂砸晕粤 燥枣 阅蚤贼赠藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则 葬枣贼藻则 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 贼则藻葬贼皂藻灶贼
摇 摇 图中数据为平均数 依标准误遥 不同小写字母表示经 蕴杂阅法检验在 孕 约 园援 园缘 水平差异显著曰鄢表示该处理组与对照组经 贼
检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂耘援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造
遭赠 蕴杂阅 贼藻泽贼援 栽澡藻 葬泽贼藻则蚤泽噪 葬遭燥增藻 遭葬则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶 贼则藻葬贼皂藻灶贼 葬灶凿 糟燥灶贼则燥造 遭赠 贼 贼藻泽贼 渊孕 约 园援 园缘冤援
园圆员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
圆援 源援 猿 药剂胁迫下 猿 个 澡泽责苑园 皂砸晕粤的相对表达
马铃薯烂茎线虫经 员园尧园郾 员 和 园郾 园园员 滋早 辕 皂蕴 阿
维菌素处理后袁阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 基因 皂砸晕粤 下调表达
园郾 圆猿远尧园郾 园员愿 和 园郾 猿员缘 倍袁其它处理均呈上调表达
趋势渊图 苑鄄粤冤袁以 园郾 员 滋早 辕 皂蕴 涕灭威处理 圆源 澡 后上
调表达最明显达 员郾 远猿源 倍袁与对照差异显著渊孕 约
园郾 园缘冤遥 其余处理中 阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 渊图 苑鄄月冤 与 阅凿鄄
澡泽责苑园鄄云渊图 苑鄄悦冤基因 皂砸晕粤 的相对表达量均呈下
调表达趋势袁幅度小于 园郾 缘 倍袁且与对照无显著
差异遥
图 苑 不同药剂处理后马铃薯腐烂茎线虫 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤渊粤冤尧
阅凿鄄澡泽责鄄悦渊月冤尧阅凿鄄澡泽责鄄云渊悦冤皂砸晕粤的相对表达量
云蚤早援 苑 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 猿 澡泽责苑园 皂砸晕粤 燥枣 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽
凿藻泽贼则怎糟贼燥则 葬枣贼藻则 藻曾责燥泽怎则藻 贼燥 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻泽
摇 摇 表中数据为平均数 依标准误遥 不同小写字母表示相
同药剂不同浓度处理后 澡泽责苑园 表达量经 蕴杂阅法检验在 孕 约
园援 园缘 水平差异显著曰鄢表示经 贼检验该处理组与对照组差
异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂耘援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶
贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约园援 园缘 造藻增鄄
藻造 遭赠 蕴杂阅 贼藻泽贼援 栽澡藻 葬泽贼藻则蚤泽噪 葬遭燥增藻 遭葬则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼
凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶 贼则藻葬贼皂藻灶贼 葬灶凿 糟燥灶贼则燥造 遭赠 贼 贼藻泽贼 渊孕 约园援 园缘冤援
摇
猿 讨论
热激蛋白 苑园 家族存在于所有的细胞区室和器
官渊酝糟运葬赠 藻贼 葬造援 袁员怨怨源冤袁是分子伴侣中最重要的一
类蛋白袁其主要生物学功能包括协助相关蛋白质的
折叠尧跨膜转运尧复性尧降解及胁迫反应的调节等袁以
保护生物体细胞免受内外不良因素的损害渊酝葬赠藻则
驭 月怎噪葬怎袁圆园园缘曰 月怎噪葬怎 藻贼 葬造援 袁圆园园远冤遥 目前已知袁包
括与 匀杂孕苑园 结构和功能相似的 匀杂孕员员园 在内袁秀丽
隐杆线虫有 员猿 个 匀杂孕苑园 成员袁其中 澡泽责鄄苑尧澡泽责鄄愿 和
澡泽责鄄怨 为诱导型基因袁定位于胞质袁其它 澡泽责 基因均
为组成型袁定位于内质网和线粒体渊杂灶怎贼糟澡 藻贼 葬造援 袁
员怨愿愿曰 匀藻泽糟澡造 驭 月葬蚤造造蚤藻袁 员怨怨园曰 晕蚤噪燥造葬蚤凿蚤泽 驭 晕藻蚤袁
圆园园源冤遥 在组成型基因中也有部分 澡泽责 基因为适度
热诱导基因袁如定位于胞质的秀丽隐杆线虫 澡泽责鄄员
虽为组成型袁但在外界因子胁迫下可表现为适度的
上调渊晕蚤噪燥造葬蚤凿蚤泽 驭 晕藻蚤袁圆园园源冤遥 大多数生物的诱导
型 匀杂孕苑园 基因组的基因不含内含子袁转录后不需要
经过剪切加工袁在应激条件下可优先表达袁起着保护
机体的分子伴侣作用渊砸藻扎葬蚤藻 藻贼 葬造援 袁圆园园园冤遥 也有研
究表明真核生物细胞质 匀杂孕苑园 在靠近 悦 端具有一
段简并重复的 源 肽序列 郧郧酝孕袁且该重复序列存在
与否可用于区分 匀杂孕苑园 的诱导型和组成型 渊 阅藻鄄
皂葬灶凿 藻贼 葬造援 袁员怨怨愿曰运蚤葬灶早 驭 栽泽燥噪燥泽袁员怨怨愿冤遥 本研究中
猿 个 澡泽责苑园 基因均存在内含子袁且 阅凿鄄匀杂孕苑园鄄粤 蛋白
序列具有 员 个短肽 郧郧酝孕渊远圆员 耀 远圆源 残基冤袁而 阅凿鄄
匀杂孕苑园鄄悦 与 阅凿鄄匀杂孕苑园鄄云 的蛋白序列则缺失该短
肽遥 为进一步区分 猿 个基因的类型袁本研究采用
猿猿 益热胁迫处理马铃薯腐烂茎线虫袁其中 阅凿鄄澡泽责苑园鄄
粤 皂砸晕粤热激处理 猿尧远 和 员圆 澡后表达适度上调袁阅凿鄄
澡泽责苑园鄄悦与 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 皂砸晕粤 表达则变化不大袁据
此可判断 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤尧阅凿鄄澡泽责苑园鄄悦 与 阅凿鄄澡泽责苑园鄄云 基
因均为组成型表达遥 此外袁本研究还发现线虫
匀杂孕苑园 的基因组结构以及 悦 末端氨基酸保守蛋白
序列是有别于其它生物的遥 与大多数真核生物
匀杂孕苑园 的 悦鄄末端的保守基序 匀阅耘蕴 不同的是袁马铃
薯腐烂茎线虫与秀丽隐杆线虫 匀杂孕鄄猿 其内质网保
守基序均为 运阅耘蕴渊晕蚤噪燥造葬蚤凿蚤泽 驭 晕藻蚤袁圆园园源冤遥
线虫对环境变化具有很高的敏感性渊云葬遭蚤葬灶燥 驭
阅葬灶燥增葬则燥袁员怨怨怨冤袁能对环境的各种变化包括低剂量
化合物做出较迅速的反应 渊梁文举和闻大中袁
圆园园员冤袁并可能会导致适应性响应袁即生物体如果预
先经低剂量的胁迫或毒物处理后袁生物体再暴露于
更高程度或剂量的同一胁迫或毒物处理时袁其诱发
员圆员员 期 罗摇 杰等院 低剂量杀线虫剂对马铃薯腐烂茎线虫三个热激蛋白 苑园 皂砸晕粤表达的影响
的毒性会得到一定程度的抑制渊 杂葬皂泽燥灶 驭 杂澡憎葬贼扎袁
员怨愿园曰阅藻皂责造 驭 匀葬造遭则燥燥噪袁员怨愿猿曰韵造蚤增蚤藻则蚤 藻贼 葬造援 袁员怨愿源冤遥
悦赠责泽藻则 驭 允燥澡灶泽燥灶渊圆园园圆冤尧悦赠责泽藻则 藻贼 葬造援 渊圆园园远冤发现袁
预先给予秀丽线虫微弱毒性的热激尧高氧或诱发产
生活性氧的胡桃醌处理可以导致其出现对于更高剂
量的热激尧高氧或胡桃醌处理诱发毒性的抗性遥 郭
雅洁等渊圆园员猿冤认为杀虫剂诱导的 澡泽责苑园 表达量增加
可能会增强烟粉虱地中海隐种对杀虫剂和高温的耐
受能力遥 但不同生物对不同药剂的适应性响应具有
差异袁不同的药剂尧处理时间尧剂量或生物对药剂的
敏感性均可影响其适应性响应的形成渊范孟雪和王
大勇袁圆园员员冤遥 匀藻造皂糟噪藻 驭 粤泽糟澡灶藻则渊圆园员园冤证明了热
激蛋白尧谷胱甘肽和金属硫在秀丽线虫适应性响应
形成中具有重要作用遥 本研究发现马铃薯腐烂茎线
虫经低剂量的涕灭威处理后袁阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 皂砸晕粤 的
表达量较对照明显上调袁反映出 阅凿鄄澡泽责苑园鄄粤 对涕灭
威的响应较为敏感袁对阿维菌素的响应则较低遥 低
剂量的涕灭威处理是否会导致马铃薯腐烂茎线虫增
强对涕灭威等药剂的耐受能力进而影响其防治效
果袁其机制如何均有待于进一步深入研究遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
月澡葬则早葬增 阅袁 孕则葬贼葬责 杂酝袁 酝怎则贼澡赠 砸悦袁 酝葬贼澡怎则 晕袁 酝蚤泽则葬 阅袁 杂葬曾藻灶葬
阅运援 圆园园愿援 栽燥曾蚤糟 责燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 皂怎灶蚤糟蚤责葬造 泽燥造蚤凿 憎葬泽贼藻 造藻葬糟澡葬贼藻泽 蚤灶
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 阅则燥泽燥责澡蚤造葬 皂藻造葬灶燥早葬泽贼藻则 渊澡泽责苑园鄄造葬糟在冤院 澡泽责苑园 葬泽 葬
皂葬则噪藻则 燥枣 糟藻造造怎造葬则 凿葬皂葬早藻援 耘糟燥贼燥曾蚤糟燥造燥早赠 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造
杂葬枣藻贼赠袁 远怨渊圆冤院 圆猿猿 原 圆源缘
月燥燥则泽贼藻蚤灶 宰砸袁 在蚤藻早藻造澡燥枣枣藻则 栽袁 悦则葬蚤早 耘粤援 员怨怨源援 酝燥造藻糟怎造葬则 藻增燥造怎贼蚤燥灶
燥枣 贼澡藻 匀杂孕苑园 皂怎造贼蚤早藻灶藻 枣葬皂蚤造赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝燥造藻糟怎造葬则 耘增燥造怎贼蚤燥灶袁
猿愿渊员冤院 造 原 员苑
月燥则噪葬灶 杂悦袁 郧怎造造葬灶泽 杂砸援 圆园园圆援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟澡葬责藻则燥灶藻泽 蚤灶 贼澡藻 噪蚤凿灶藻赠援
粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 远源院 缘园猿 原 缘圆苑
月怎噪葬怎 月袁 宰藻蚤泽泽皂葬灶 允袁 匀燥则憎蚤糟澡 粤援 圆园园远援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟澡葬责藻则燥灶藻泽
葬灶凿 责则燥贼藻蚤灶 择怎葬造蚤贼赠 糟燥灶贼则燥造援 悦藻造造袁 员圆缘渊猿冤院 源源猿 原 源缘员
悦澡藻灶 杂孕援 圆园园员援 栽澡藻 皂葬蚤灶 贼赠责藻泽袁 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 葬灶凿 葬糟贼蚤燥灶 皂藻糟澡葬鄄
灶蚤泽皂泽 燥枣 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿藻泽援 孕藻泽贼蚤糟蚤凿藻 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁 圆圆
渊圆冤院 猿猿 原 猿缘 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱陈品三援 圆园园员援 杀线虫剂主要类
型尧特性及其作用机制援 农药科学与管理袁 圆圆渊圆冤院 猿猿 原 猿缘暂
悦赠责泽藻则 允砸袁 允燥澡灶泽燥灶 栽耘援 圆园园圆援 酝怎造贼蚤责造藻 泽贼则藻泽泽燥则泽 蚤灶 悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽
藻造藻早葬灶泽 蚤灶凿怎糟藻泽 泽贼则藻泽泽 澡燥则皂藻泽蚤泽 葬灶凿 藻曾贼藻灶凿藻凿 造燥灶早藻增蚤贼赠援 栽澡藻
允燥怎则灶葬造泽 燥枣 郧藻则燥灶贼燥造燥早赠 杂藻则蚤藻泽 粤院 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 葬灶凿 酝藻凿蚤鄄
糟葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 缘苑渊猿冤院 月员园怨 原 月员员源
悦赠责泽藻则 允砸袁 栽藻凿藻泽糟燥 孕袁 允燥澡灶泽燥灶 栽耘援 圆园园远援 匀燥则皂藻泽蚤泽 葬灶凿 葬早蚤灶早 蚤灶
悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻早葬灶泽援 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 郧藻则燥灶贼燥造燥早赠袁 源员 渊员园 冤院
怨猿缘 原 怨猿怨
阅葬蚤 杂酝袁 悦澡藻灶早 载再袁 载蚤葬燥 匝酝袁 载蚤藻 月再援 圆园园苑援 悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 责则燥鄄
噪葬则赠燥贼蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 匀泽责苑园 枣则燥皂 责蚤灶藻 憎燥燥凿 灶藻皂葬贼燥凿藻 渊月怎则鄄
泽葬责澡藻造藻灶糟澡怎泽 曾赠造燥责澡蚤造怎泽 冤援 粤糟贼葬 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬 杂蚤灶蚤糟葬袁 猿苑
渊缘冤院 缘员圆 原 缘员怨 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱戴素明袁 成新跃袁肖启明袁 谢
丙炎援 圆园园苑援 松材线虫 匀泽责苑园基因的克隆与原核表达援 植物
病理学报袁 猿苑渊缘冤院 缘员圆 原 缘员怨暂
阅藻皂葬灶凿 允袁 蕴怎凿藻则泽 允袁 匀觟澡枣藻造凿 允援 员怨怨愿援 栽澡藻 糟葬则遭燥曾赠鄄贼藻则皂蚤灶葬造 凿燥皂葬蚤灶
燥枣 匀杂悦苑园 责则燥增蚤凿藻泽 遭蚤灶凿蚤灶早 泽蚤贼藻泽 枣燥则 葬 凿蚤泽贼蚤灶糟贼 泽藻贼 燥枣 糟澡葬责藻则燥灶藻
糟燥枣葬糟贼燥则泽援 酝燥造藻糟怎造葬则 葬灶凿 悦藻造造怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员愿渊源冤院 圆园圆猿 原圆园圆愿
阅藻皂责造 月袁 匀葬造遭则燥燥噪 允援 员怨愿猿援 陨灶凿怎糟蚤遭造藻 则藻责葬蚤则 燥枣 燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 阅晕粤
凿葬皂葬早藻 蚤灶 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤援 晕葬贼怎则藻袁 猿园源渊缘怨圆缘冤院 源远远 原 源远愿
阅蚤灶早 在袁 孕藻灶早 阅蕴袁 郧葬燥 月阅袁 匀怎葬灶早 宰运袁 匀藻 宰栽援 圆园园愿援 悦造燥灶蚤灶早
葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 葬 灶藻憎 葬糟藻贼赠造糟澡燥造蚤灶藻泽贼藻则葬泽藻 早藻灶藻 葬糟藻鄄猿
枣则燥皂 阅蚤贼赠造藻灶糟澡怎泽 凿藻泽贼则怎糟贼燥则援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥鄄
早赠袁 员远渊圆冤院 猿圆远 原 猿猿员 渊 蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱丁中袁 彭德良袁 高必
达袁 黄文坤袁 贺文婷援 圆园园愿援 甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因
葬糟藻鄄猿全长 糟阅晕粤的克隆和序列分析援 农业生物技术学报袁
员远渊圆冤院 猿圆远 原 猿猿员暂
云葬遭蚤葬灶燥 酝袁 阅葬灶燥增葬则燥 砸援 员怨怨怨援 酝藻蚤燥枣葬怎灶葬 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 葬灶凿 皂藻鄄
泽燥泽糟葬造藻 增葬则蚤葬遭蚤造蚤贼赠 蚤灶 贼憎燥 泽蚤贼藻泽 燥枣 贼澡藻 砸燥泽泽 杂藻葬 渊粤灶贼葬则糟贼蚤糟葬冤 憎蚤贼澡
糟燥灶贼则葬泽贼蚤灶早 枣燥燥凿 泽怎责责造赠援 孕燥造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆圆渊圆冤院 员员缘 原 员圆猿
云葬灶 酝载袁 宰葬灶早 阅再援 圆园员员援 云燥则皂葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣
葬凿葬责贼蚤增藻 则藻泽责燥灶泽藻 蚤灶 灶藻皂葬贼燥凿藻 悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻早葬灶泽援 粤泽蚤葬灶
允燥怎则灶葬造 燥枣 耘糟燥贼燥曾蚤糟燥造燥早袁 远渊远冤院 缘苑员 原 缘苑远 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱范孟
雪袁 王大勇援 圆园员员援 秀丽线虫适应响应的形成与调控机理援
生态毒理学报袁 远渊远冤院 缘苑员 原 缘苑远暂
郧怎燥 再允袁 蕴蚤葬灶早 孕袁 郧葬燥 载宰援 圆园员猿援 陨灶凿怎糟藻凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 澡泽责苑园 皂砸鄄
晕粤 遭赠 灶蚤贼藻灶责赠则葬皂袁 糟澡造燥则责赠则蚤枣燥泽 葬灶凿 遭藻贼葬鄄糟赠责藻则皂藻贼澡则蚤灶 蚤灶 月藻皂蚤鄄
泽蚤葬 贼葬遭葬糟蚤 酝藻凿蚤贼藻则则葬灶藻葬灶 渊匀藻皂蚤责贼藻则葬院 粤造藻赠则燥凿蚤凿葬藻冤 援 粤糟贼葬 耘灶鄄
贼燥皂燥造燥早蚤糟葬 杂蚤灶蚤糟葬袁 缘远渊员冤院 圆怨 原 猿愿 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱郭雅洁袁 梁
沛袁 高希武援 圆园员猿援 烯啶虫胺尧毒死蜱和高效氯氰菊酯对烟
粉虱地中海隐种 澡泽责苑园 皂砸晕粤 的诱导表达援 昆虫学报袁 缘远
渊员冤院 圆怨 原 猿愿暂
匀藻造皂糟噪藻 运允袁 粤泽糟澡灶藻则 酝援 圆园员园援 匀燥则皂藻贼蚤糟 藻枣枣藻糟贼 燥枣 皂藻贼澡赠造皂藻则糟怎则赠
燥灶 悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻早葬灶泽援 栽燥曾蚤糟燥造燥早赠 葬灶凿 粤责责造蚤藻凿 孕澡葬则皂葬糟燥造燥鄄
早赠袁 圆源愿渊圆冤院 员缘远 原 员远源
匀藻泽糟澡造 酝云袁 月葬蚤造造蚤藻 阅蕴援 员怨怨园援 栽澡藻 匀杂孕苑园 皂怎造贼蚤早藻灶藻 枣葬皂蚤造赠 燥枣 悦葬藻鄄
灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻早葬灶泽援 悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 葬灶凿 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠
孕葬则贼 月院 悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 怨远渊源冤院 远猿猿 原 远猿苑
匀泽怎 粤蕴袁 酝怎则责澡赠 悦栽袁 运藻灶赠燥灶 悦援 圆园园猿援 砸藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 葬早蚤灶早 葬灶凿
葬早藻鄄则藻造葬贼藻凿 凿蚤泽藻葬泽藻 遭赠 阅粤云鄄员远 葬灶凿 澡藻葬贼鄄泽澡燥糟噪 枣葬糟贼燥则援 杂糟蚤藻灶糟藻袁
猿园园渊缘远圆圆冤院 员员源圆 原 员员源缘
匀怎葬灶早 蕴袁 在澡藻灶早 宰允袁 宰怎 载匝袁 再藻 允砸援 圆园园怨援 悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 葬灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 贼憎燥 匀杂孕 早藻灶藻泽 枣则燥皂 月怎则泽葬责澡藻造藻灶糟澡怎泽 皂怎糟则燥灶葬贼怎泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣
晕葬灶躁蚤灶早 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 渊晕葬贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽冤袁 猿猿渊圆冤院 员 原 源
渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱黄麟袁 郑维佳袁 吴小芹袁 叶建仁援 圆园园怨援 拟松
材线虫两个 匀杂孕 基因的克隆与分析援 南京林业大学学报
渊自然科学版冤袁 猿猿渊圆冤院 员 原 源暂
允蚤葬灶早 允袁 蕴蚤 载砸袁 在澡葬灶早 再匀袁 郧怎燥 宰悦袁 悦澡藻灶早 阅云袁 郧怎燥 匝再援 圆园员猿援
糟阅晕粤 糟造燥灶蚤灶早 燥枣 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 怨园 渊蕴凿鄄澡泽责怨园冤 蚤灶 蕴藻责贼蚤灶燥鄄
贼葬则泽葬 凿藻糟藻皂造蚤灶藻葬贼葬 渊悦燥造藻燥责贼藻则葬院 悦澡则赠泽燥皂藻造蚤凿葬藻冤 葬灶凿 蚤贼泽 藻曾责则藻泽鄄
泽蚤燥灶 怎灶凿藻则 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 泽贼则藻泽泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 源园
圆圆员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
渊缘冤院 猿怨怨 原 源园远 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱蒋健袁 李祥瑞袁张云慧袁 郭文
超袁 程登发袁 郭青云援 圆园员猿援 马铃薯甲虫热激蛋白基因 蕴凿鄄
澡泽责怨园的克隆及温度胁迫下的表达援 植物保护学报袁 源园渊缘冤院
猿怨怨 原 源园远暂
运葬则造蚤灶 杂袁 月则燥糟糟澡蚤藻则蚤 蕴援 员怨怨愿援 匀藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 苑园 枣葬皂蚤造赠院 皂怎造贼蚤鄄
责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶泽袁 枣怎灶糟贼蚤燥灶袁 葬灶凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶援 允燥怎则灶葬造 燥枣
酝燥造藻糟怎造葬则 耘增燥造怎贼蚤燥灶袁 源苑渊缘冤院 缘远缘 原 缘苑苑
运蚤葬灶早 允郧袁 栽泽燥噪燥泽 郧悦援 员怨怨愿援 匀藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 苑园 噪阅葬院 皂燥造藻糟怎造葬则
遭蚤燥造燥早赠袁 遭蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 葬灶凿 责澡赠泽蚤燥造燥早赠援 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠 驭 栽澡藻则葬鄄
责藻怎贼蚤糟泽袁 愿园渊圆冤院 员愿猿 原 圆园员
蕴蚤葬灶早 宰允袁 宰藻灶 阅在援 圆园园员援 杂燥蚤造 遭蚤燥贼葬 葬灶凿 蚤贼泽 则燥造藻 蚤灶 泽燥蚤造 藻糟燥造燥早赠援
悦澡蚤灶藻泽藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤责责造蚤藻凿 耘糟燥造燥早赠袁 员圆 渊员冤院 员猿苑 原 员源园 渊 蚤灶
悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱梁文举袁 闻大中援 圆园园员援 土壤生物及其对土壤生
态学发展的影响援 应用生态学报袁 员圆渊员冤院 员猿苑 原 员源园暂
酝葬赠藻则 酝孕袁 月怎噪葬怎 月援 圆园园缘援 匀泽责苑园 糟澡葬责藻则燥灶藻泽院 糟藻造造怎造葬则 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽
葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂援 悦藻造造怎造葬则 葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 蕴蚤枣藻 杂糟蚤鄄
藻灶糟藻泽袁 远圆渊远冤院 远苑园 原 远愿源
酝糟运葬赠 阅月袁 宰蚤遭葬灶噪泽 杂酝袁 云造葬澡藻则贼赠 运酝袁 匀葬 允匀袁 韵忆 月则蚤藻灶 酝悦袁
杂澡蚤则增葬灶藻藻 蕴蕴援 员怨怨源援 杂贼则藻泽泽鄄苑园 责则燥贼藻蚤灶泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶
憎蚤贼澡 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽援 辕 辕 酝燥则蚤皂燥贼燥 砸陨袁 栽蚤泽泽蚤藻则藻泽 粤袁 郧藻燥则早燥责燥怎造燥怎泽
悦援 栽澡藻 遭蚤燥造燥早赠 燥枣 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶泽 葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则 糟澡葬责藻则鄄
燥灶藻泽援 晕藻憎 再燥则噪院 悦燥造凿 杂责则蚤灶早 匀葬则遭燥则 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 孕则藻泽泽袁 责责援
员缘猿 原 员苑苑
晕蚤噪燥造葬蚤凿蚤泽 晕袁 晕藻蚤 酝援 圆园园源援 悦燥灶糟藻则贼藻凿 葬灶凿 灶燥灶糟燥灶糟藻则贼藻凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶
燥枣 贼澡藻 匀泽责苑园 早藻灶藻 泽怎责藻则枣葬皂蚤造赠 蚤灶 贼憎燥 泽蚤遭造蚤灶早 泽责藻糟蚤藻泽 燥枣 灶藻皂葬鄄
贼燥凿藻泽援 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿 耘增燥造怎贼蚤燥灶袁 圆员渊猿冤院 源怨愿 原 缘园缘
韵造蚤增蚤藻则蚤 郧袁 月燥赠糟燥贼藻 允袁 宰燥造枣枣 杂援 员怨愿源援 粤凿葬责贼蚤增藻 则藻泽责燥灶泽藻 燥枣 澡怎皂葬灶
造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽 贼燥 造燥憎 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 贼澡赠皂蚤凿蚤灶藻援 杂糟蚤鄄
藻灶糟藻袁 圆圆猿渊源远猿远冤院 缘远源 原 缘怨苑
孕葬则泽藻造造 阅粤袁 蕴蚤灶凿择怎蚤泽贼 杂援 员怨怨猿援 栽澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶泽
蚤灶 泽贼则藻泽泽 贼燥造藻则葬灶糟藻院 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 凿葬皂葬早藻凿
责则燥贼藻蚤灶援 粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 圆苑院 源猿苑 原 源怨远
砸藻扎葬蚤藻 杂袁 月葬灶 允袁 酝蚤造凿灶藻则 酝袁 孕燥蚤贼泽糟澡藻噪 悦袁 月则灶葬 悦袁 栽泽糟澡葬糟澡造藻则 耘援
圆园园园援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 糟阅晕粤 糟造燥灶藻袁 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 苑园 噪阅葬
澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 枣则燥皂 贼澡藻 凿藻则皂葬贼燥责澡赠贼藻 责葬贼澡燥早藻灶 栽则蚤糟澡燥责澡赠贼燥灶
则怎遭则怎皂援 郧藻灶藻袁 圆源员渊员冤院 圆苑 原 猿猿
砸燥遭藻则贼 允援 圆园园猿援 耘增燥造怎贼蚤燥灶 燥枣 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶泽 葬灶凿 蚤皂皂怎灶蚤贼赠援 阅藻鄄
增藻造燥责皂藻灶贼葬造 葬灶凿 悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻 陨皂皂怎灶燥造燥早赠袁 圆苑渊远 辕 苑冤院 源源怨 原源远源
杂葬皂泽燥灶 蕴袁 杂澡憎葬贼扎 允蕴援 员怨愿园援 耘增蚤凿藻灶糟藻 枣燥则 葬灶 葬凿葬责贼蚤增藻 阅晕粤 则藻责葬蚤则
责葬贼澡憎葬赠 蚤灶 悦匀韵 葬灶凿 澡怎皂葬灶 泽噪蚤灶 枣蚤遭则燥遭造葬泽贼 糟藻造造 造蚤灶藻泽援 晕葬贼怎则藻袁
圆愿苑渊缘苑愿缘冤院 愿远员 原 愿远猿
杂灶怎贼糟澡 栽孕袁 匀藻泽糟澡造 酝云袁 月葬蚤造造蚤藻 阅蕴援 员怨愿愿援 栽澡藻 悦葬藻灶燥则澡葬遭凿蚤贼蚤泽 藻造藻鄄
早葬灶泽 澡泽责苑园 早藻灶藻 枣葬皂蚤造赠院 葬 皂燥造藻糟怎造葬则 早藻灶藻贼蚤糟 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶援
郧藻灶藻袁 远源渊圆冤院 圆源员 原 圆缘缘
载怎 允允袁 蕴蚤 杂阅袁 再葬灶早 在宰援 圆园园源援 悦怎造贼怎则藻 燥枣 责燥贼葬贼燥 则燥贼 灶藻皂葬贼燥凿藻援 粤糟鄄
贼葬 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬藻 月燥则藻葬造蚤鄄燥糟糟蚤凿藻灶贼葬造蚤泽 杂蚤灶蚤糟葬袁 员猿渊源冤院 苑苑 原 愿园 渊蚤灶
悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱徐进军袁 李世东袁 杨之为援 圆园园源援 马铃薯茎线虫
的培养援 西北农林学报袁 员猿渊源冤院 苑苑 原 愿园暂
再燥泽澡蚤皂蚤 栽袁 酝蚤灶燥憎葬 运袁 运葬则燥怎灶葬鄄砸藻灶蚤藻则 晕运袁 宰葬贼葬灶葬遭藻 悦袁 杂怎早葬赠葬
再袁 酝蚤怎则葬 栽援 圆园园员援 粤糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 泽贼则藻泽泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 早藻灶藻 遭赠 蚤灶鄄
泽藻糟贼蚤糟蚤凿藻泽 蚤灶 贼澡藻 皂蚤凿早藻袁 悦澡蚤则燥灶燥皂怎泽 赠燥泽澡蚤皂葬贼泽怎蚤援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤鄄
燥糟澡藻皂蚤糟葬造 葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 栽燥曾蚤糟燥造燥早赠袁 员远渊员冤院 员园 原 员苑
在澡藻灶早 再晕袁 宰葬灶早 再再袁 悦澡藻灶 允杂袁 在澡怎 载云袁 悦澡藻灶 蕴允袁 阅怎葬灶 再载援 圆园员圆援
悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 责则燥噪葬则赠燥贼蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 匀泽责苑园 枣则燥皂 泽燥赠遭藻葬灶 糟赠泽贼
灶藻皂葬贼燥凿藻 渊 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽 冤援 杂燥赠遭藻葬灶 杂糟蚤藻灶糟藻袁 猿员 渊圆冤院
员怨愿 原圆园圆 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱郑雅楠袁 王媛媛袁 陈井生袁 朱晓峰袁
陈立杰袁 段玉玺援 圆园员圆援 大豆胞囊线虫热激蛋白基因 匀泽责苑园
的克隆与原核表达援 大豆科学袁 猿员渊圆冤院 员怨愿 原圆园圆暂
渊责任编辑院李美娟冤
猿圆员员 期 罗摇 杰等院 低剂量杀线虫剂对马铃薯腐烂茎线虫三个热激蛋白 苑园 皂砸晕粤表达的影响